LIFE Qubit dsDNA HS Assay Kit货号Q32851Q32854

LIFE Qubit dsDNA HS Assay Kit货号Q32851

  • 产品型号:  Q32854
  • 简单描述
  • LIFE Qubit dsDNA HS Assay Kit货号Q32851规格:100次,500次现货供应Qubit® (早期称为Quant-iT™) dsDNA HS分析试剂盒(Qubit® dsDNA HS Assay Kit) 专门设计用于在Qubit® 2.0 荧光仪 (Q32866), 但也可以在任何荧光计或荧光酶标仪中使用
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LIFE Qubit dsDNA HS Assay Kit货号Q32851

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Q32851

100 assays

 
Q32854

500 assays

 

LIFE Qubit dsDNA HS Assay Kit货号Q32851

描述

Qubit® (早期称为Quant-iT™) dsDNA HS分析试剂盒(Qubit® dsDNA HS Assay Kit) 专门设计用于在Qubit® 2.0 荧光仪 (Q32866), 但也可以在任何荧光计或荧光酶标仪中使用。该试剂盒对双链DNA(dsDNA)有高度的选择性,不会定量RNA,可以定量浓度为10 pg/µl 到100 ng/µl的样品。试剂盒提供了浓缩的分析试剂,稀释缓冲液和预制的DNA标准。您只需用提供的缓冲液稀释试剂,添加样品(体积在 1 µL 到 20 µL 范围内), 然后使用Qubit® 2.0荧光仪读取浓度。该试剂盒对于常见污染物,如盐,游离的核苷酸,溶剂,去污剂,蛋白质的耐受性*。

注意: 所有的 Qubit® 分析试剂盒同样适用于Qubit® 1.0 荧光仪。

规格

Sample Type (General): dsDNA
For Use With (Equipment): Qubit® Fluorometer
Quantitation Range: 0.2-100 ng
Product Size: 100,500 assays
Number of Reactions: 500 Reactions
Shipping Condition: Room Temperature

Promega ONE-Glo Luciferase Assay System 萤光素酶检测系统E6110

Promega ONE-Glo Luciferase Assay System 萤光素酶检测系统

  • 产品型号:  E6110
  • 简单描述
  • Promega ONE-Glo Luciferase Assay System 萤光素酶检测系统别名:报告基因检测试剂盒规格:10mlStorage Conditions将 ONE-Glo™ Luciferase 检测试剂盒的组分储存于 -20℃
详细介绍

Promega ONE-Glo Luciferase Assay System 萤光素酶检测系统

ONE-Glo™ Luciferase Assay System(ONE-Glo™ 萤光素酶检测系统)是为萤火虫萤光素酶报告基因在哺乳动物细胞中的表达提供高灵敏度、稳定、均质的检测方法。尤其适用于高通量和超高通量的检测。ONE-Glo™ Assay 含有一种新的萤光素酶底物,使得反应更稳定,对样品组分耐受性更强,比标准的萤光素酶检测试剂产生的异味更少。这些特点使得 ONE-Glo™ Assay 的表现更强劲,并减少了高通量条件时使用其他报告基因检测试剂盒带来的操作不便。

 

Promega ONE-Glo Luciferase Assay System 萤光素酶检测系统

订购信息:

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ONE-Glo™ Luciferase Assay System

10ml E6110 Please Enquire    
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ONE-Glo™ Luciferase Assay System

100ml E6120 Please Enquire    
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ONE-Glo™ Luciferase Assay System

1L E6130 Please Enquire

 

Pierce BCA蛋白浓度测定试剂盒BCA Protein Assay KitPierce 23227 23225

Pierce BCA蛋白浓度测定试剂盒BCA Protein Assay Kit

  • 产品型号:  Pierce 23227 23225
  • 简单描述
  • 此产品属于Thermo旗下品牌Pierce产品,Pierce BCA蛋白浓度监测试剂盒有两种规格:23227 500ml 23225 1L 咨询!
详细介绍
Used in more labs than any other detergent-compatible protein assay, Pierce BCA Reagents provide accurate determination of protein concentration with most sample types encountered in protein research. The Pierce BCA Assay can be used to assess yields in whole cell lysates and affinity-column fractions, as well as to monitor protein contamination in industrial applications. Compared to most dye-binding methods, the BCA Assay is affected much less by protein compositional differences, providing greater protein-to-protein uniformity.
Highlights:

 

  • Colorimetric – estimate visually or measure with a standard spectrophotometer or plate reader (562nm)
  • Excellent uniformity – exhibits less protein-to-protein variation than dye-binding methods
  • Compatible – unaffected by typical concentrations of most ionic and nonionic detergents
  • Moderay fast – much easier and four times faster than the classical Lowry method
  • High linearity – linear working range for BSA equals 20 to 2000µg/mL
  • Sensitive – detect down to 5µg/mL with the enhanced protocol
Includes: Kits contain BCA Reagent A, BCA Reagent B, and 10 ampules of Albumin Standard (2mg/mL)

 

細胞毒性測定キット Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST 同仁化学研究所

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品,欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

細胞毒性測定キット Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST 同仁化学研究所Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST

細胞毒性測定キット Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST 同仁化学研究所

  • 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
  • 細胞機能解析
  • 細胞毒性

細胞毒性測定キット

  • 優れたコストパフォーマンス
  • 冷蔵で6ヶ月保存可能なWorking Solution
  • 1つのキットで、ホモジニアス測定、ノンホモジニアス測定の選択が可能
  • 製品コード
    CK12  Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST
容 量 メーカー希望
小売価格
富士フイルム
和光純薬
100 tests ¥11,200 347-91751
500 tests ¥29,700 343-91753
2000 tests ¥44,400 341-91754

<お知らせ>
 取扱説明書を改訂しました。(2022/01/18)

キット内容
100 tests ・Dye Mixture
・Assay Buffer
・lysis Buffer
・Stop Solution
×1
11 ml×1
1.1 ml×1
5.5 ml×1
500 tests ・Dye Mixture
・Assay Buffer
・lysis Buffer
・Stop Solution
×1
55 ml×1
5.5 ml×1
27.5 ml×1
2000 tests ・Dye Mixture
・Assay Buffer
・lysis Buffer
・Stop Solution
×4
55 ml×4
5.5 ml×4
27.5 ml×4

  • 細胞毒性測定キット Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST 同仁化学研究所
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マニュアル

  • 取扱説明書 日本語
    細胞毒性測定キット Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST 同仁化学研究所
  • Manual English
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  • 細胞傷害性試験(ADCC) 日本語:Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST を用いた抗体依存性細胞障害測定用
    細胞毒性測定キット Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST 同仁化学研究所
  • 細胞傷害性試験(ADCC)英語 English:Antibody Dependent Cellular Cytotoxicity Supporting manual
    細胞毒性測定キット Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST 同仁化学研究所

技術情報

測定原理

本キットは、生細胞と反応せず、かつ、細胞にダメージを与えないため、生細胞と死細胞が混在する細胞培養液中に直接試薬を加えても細胞傷害を測定することが可能である(ホモジニアスアッセイ)。なお、一般的に用いられる細胞培養液を取り出してLDH活性を測定する方法も可能である(ノンホモジニアスアッセイ)。また、安定性の高い試薬を用いているため、調製した溶液は長期間保存でき、用時調製する必要がない。そのため、多検体アッセイから、少ない検体数の測定にも対応することができる。

細胞毒性測定キット Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST 同仁化学研究所

実験例 生細胞測定と死細胞測定の併用した細胞毒性試験

HeLa 細胞にMitomycin C を添加した際の細胞毒性をCell Counting Kit-8とCytotoxicity LDH Assay Kit-WST(本製品)を用いて測定しました。Cell Counting Kit-8による細胞内代謝活性を指標とした方法とCytotoxicity LDH Assay Kit-WSTを用いた細胞膜損傷による遊離LDHを指標とした方法では各々の指標が異なるため、細胞毒性が現れる薬剤濃度に違いがあることが確認されました。

細胞毒性測定キット Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST 同仁化学研究所

試験物質 Mitomycin C
細胞 HeLa
使用培地 MEM, 10% FBS
インキュベート 37℃, 5% CO2, 48時間
検出波長

Cell Counting Kit-8 (450 nm), Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST (490 nm)

生細胞・死細胞の測定をお得なセットで! Viability/Cytotoxicity Multiplex Assay Kit
生細胞測定:Cell Counting Kit-8と、死細胞測定:Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST(各500 tests)のお得なセットです。

技術や使用製品に関する補足

  • 細胞毒性測定キット Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST 同仁化学研究所

    細胞増殖/細胞毒性アッセイキット
    Cell Counting Kit-8

  • 細胞毒性測定キット Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST 同仁化学研究所

    生細胞・死細胞測定キットセット
    Viability/Cytotoxicity Multiplex Assay Kit

抗がん剤ドキソルビシン(DOX)による細胞毒性メカニズム

近年、細胞毒性評価の際に併せて抗酸化能に関与する指標 (NADP+/NADPHやGSSG/GSH等)を測定するケースが増えています。
本項目では抗酸化能の低下が細胞毒性発現に関与するDOXの例をご紹介します。

細胞毒性測定キット Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST 同仁化学研究所

細胞毒性測定キット Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST 同仁化学研究所

技術や使用製品に関する補足

  • 細胞毒性測定キット Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST 同仁化学研究所

    細胞内代謝測定キット

    NADP/NADPH Assay Kit-WST

  • 細胞毒性測定キット Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST 同仁化学研究所

    グルタチオン測定キット

    GSSG/GSH Quantification Kit

  • 細胞毒性測定キット Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST 同仁化学研究所

    代謝と疾患の関連性を示した報告例

    これからはじめる細胞内代謝

参考文献

参考文献を表示する
文献No. 対象サンプル 引用(リンク)
1) 細胞
(C3H10T1/2)
S. F. Jin, H. L. Ma, Z. L. Liu, S. T. Fu, C. P Zhang, Y. He, "XL413, a cell division cycle 7 kinase inhibitor enhanced the anti-fibrotic effect of pirfenidone on TGF-β1-stimulated C3H10T1/2 cells via Smad2/4.", Exp Cell Res., 2015, 339, (2), 289.
2) 細胞
(HepG2)
S. Watanabe, C. S. Moniaga, S. Nielsen, M. Hara-Chikuma, "Aquaporin-9 facilitates membrane transport of hydrogen peroxide in mammalian cells.", Biochem Biophys Res Commun ., 2016, 471, 191.
3) 細胞
(HEECs, Human Esophageal Epithelial Cells)
L. Wu, T. Oshima, J. Shan, H. Sei, T. Tomita, Y. Ohda, H. Fukui, J. Watari, H. Miwa , "PAR-2 activation enhances weak acid-induced ATP release through TRPV1 and ASIC sensitization in human esophageal epithelial cells.", Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol ., 2015, 309, G695.
4) 細胞
(Human L02 Hepatocyte)
D. Zhou, B-H Li, J. Wang, Y-N Ding, Y. Dong, Y-W Chen and J-G Fan, "Prolyl Oligopeptidase Inhibition Attenuates Steatosis in the L02 Human Liver Cell Line.", PloS ONE., 2016, 11, (10), e0165224.
5) 細胞
(Human primary Hepatocyte)
T. Fukami, A. Iida, K. Konishi, M. Nakajima , "Human arylacetamide deacetylase hydrolyzes ketoconazole to trigger hepatocellular toxicity", Biochem. Pharmacol., 2016, 116, 153.
6) 細胞
(Mouse embryonic fibroblast:MEF)
Y. Takanezawa, R. Nakamura, Y. Sone, S. Uraguchi and M. Kiyono, "Atg5-dependent autophagy plays a protective role against methylmercury-induced cytotoxicity", Toxicol. Lett., 2016, 262, 135.
7) 細胞
(neural stem/progenitor cells)
M. Tanaka, M. Yoneyama, T. Shiba, T. Yamaguchi, K. Ogita, "Protease-activated receptor-1 negatively regulates proliferation of neural stem/progenitor cells derived from the hippocampal dentate gyrus of the adult mouse ", J Pharmacol Sci., 2016, 131, (3), 162
8) 細胞
(Primary cultured cortical neurons)
S. Wakatsuki, A. Furuno, M. Ohshima, and T. Araki, "Oxidative stress-dependent phosphorylation activates ZNRF1 to induce neuronal/axonal degeneration", J Cell Biol., 2015, 211, (4), 881.
9) 細胞
(DLD1 and AGS cells)
A. Ishijima, K. Minamihata, S. Yamaguchi, S. Yamahira, R. Ichikawa, E. Kobayashi, M. Iijima, Y. Shibasaki, T. Azuma, T. Nagamune & I. Sakuma, "Selective intracellular vaporisation of antibody-conjugated phase-change nano-droplets in vitro", Scientific Reports ., 2017, DOI:10.1038/srep44077.
10) 細胞
(U87, HUVEC cell)
N. Li, W. Zhang, M. Khan, L. Lin, JM. Lin, "MoS2-LA-PEI nanocomposite carrier for real-time imaging of ATP metabolism in glioma stem cells co-cultured with endothelial cells on a microfluidic system", Biosens Bioelectron., 2017, 99, (2018), 142.
11) 組織
(マウス肝臓)
Y. Sakurai, W. Mizumura, M. Murata, T. Hada, S. Yamamoto, K. Ito, K. Iwasaki, T. Katoh, Y. Goto, A. Takagi, M. Kohara, H. Suga, and H. Harashima, "Efficient siRNA delivery by lipid nanoparticles modified with a non-standard macrocyclic peptide for EpCAM-targeting", Mol. Pharm.., 2017,10.1021/acs.molpharmaceut.7b00362.
12) 細胞
(Human pleural mesothelial cell)
K. Hattori, K. Nakadate, A. Morii, T. Noguchi, Y. Ogasawara, K. Ishii., "Exposure to nano-size titanium dioxide causes oxidative damages in human mesothelial cells: The crystal form rather than size of particle contributes to cytotoxicity.", Biochem. Biophys. Res. Commun.., 2017,10.1016/j.bbrc.2017.08.054.
13) 組織
(murine distal colon)
H. Sakai, S. Tabata, M. Kimura, S. Yabe, Y. Isa, Y. Kai, F. Sato, T. Yumoto, K. Miyano, M. Narita and Y. Uezono, "Active Ingredients of Hange-shashin-to, Baicalelin and 6-Gingerol, Inhibit 5-Fluorouracil-Induced Upregulation of CXCL1 in the Colon to Attenuate Diarrhea Development", Biol. Pharm.Bull.., 2017, 40, (12), 2134.
14) 細胞
(SH-SY5Y cell)
R. Watanabe, T. Kurose, Y. Morishige and K. Fujimori, "Protective Effects of Fisetin Against 6-OHDA-Induced Apoptosis by Activation of PI3K-Akt Signaling in Human Neuroblastoma SH-SY5Y Cells.", Neurochem. Res.., 2018, 43, (2), 488-499.
15) 細胞
(MC3T3-E1[マウス頭蓋冠由来])
A. Oyane, M. Nakamura, I. Sakamaki, Y. Shimizu, S. Miyata and H. Miyaji, "Laser-assisted wet coating of calcium phosphate for surface-functionalization of PEEK", PLoS ONE ., 2018, doi:10.1371/journal.pone.0206524.
16) 細胞
CRC細胞 [大腸がん]、HT29細胞[ヒト結腸腺癌]
T. Fuji, Y. Umeda, A. Nyuya, F. Taniguchi, T. Kawai, K. Yasui, T. Toshima, K. Yoshida, T. Fujiwara, A. Goel and T.Nagasaka, "Detection of Circulating MicroRNAs with Ago2 Complexes to Monitor the Tumor Dynamics of Colorectal Cancer Patients during Chemotherapy.", Int. J. Cancer., 2018, doi: 10.1002/ijc.31960 .
17) 細胞
(SFXN2ノックアウトHEK293)
E. E. Mon, F. Y. Wei, R. N. R. Ahmad, T. Yamamoto, T. Moroishi and K. Tomizawa, "Regulation of mitochondrial iron homeostasis by siderofexin 2 ", J Physiol Sci., 2018, doi:10.1007/s12576-018-0652-2.
18) 細胞
(Human umbilical vein cell line [EA.Hy926])
Y. Xu, C. Huang, M. Liu, N. Chen, W. Chen, C. Yang, Y. Zhao, X. Li, J. Duan, S. Liu and S. Yang, "Survivin regulated by autophagy mediates hyperglycemia-induced vascular endothelial cell dysfunction", Exp. Cell Res.., 2018, doi: 10.1016/j.yexcr.2018.01.037.
19) 細胞
(MIAPaCa-2[ヒト膵臓がん])
M. Akimoto, R. Maruyama, Y. Kawabata, Y. Tajima and K. Takenaga, "Antidiabetic adiponectin receptor agonist AdipoRon suppresses tumour growth of pancreatic cancer by inducing RIPK1/ERKdependent necroptosis", Cell Death Dis., 2018, 9, 804.
20) 細胞
(Fibro adipogenic progenitor cells:FAPs)
Y. Saito, T. Chikenji, T. Matsumura, M. Nakano and M. Fujimiya, "Exercise enhances skeletal muscle regeneration by promoting senescence in fibro-adipogenic progenitors", Nat. Commun., 2020, doi:10.1038/s41467-020-14734-x.
21) 細胞
(HEK-293EBNA)
M. Suzuki, A. Urabe, S. Sasaki, R. Tsugawa, S. Nishio, H. Mukaiyama, Y. Murata, H. Masuda, M. Aung, A. Mera, M. Takeuchi, K. Fukushima, M. Kanaki, K. Kobayashi, Y. Chiba, B. Shrestha, H. Nakanishi, T. Watanabe, A. Nakayama, H. Fujino, T. Kobayashi, K. Tanino, N. Nishizawa and K. Namba., "Development of a mugineic acid family phytosiderophore analog as an iron fertilizer", Nat. Commun., 2021, doi:10.1038/s41467-021-21837-6.

よくある質問

Q

490 nm以外の吸収フィルターで測定できますか?

A

弊社では490 nmを推奨していますが、490±2-3 nm程度の違いは問題ありません。490 nm以外では、450 nmのフィルターは弊社でも使用実績があり、使用可能です。但し、吸光度値は490 nmと比較し高くなります。

Q

毒性試験でCell Counting Kit-8との相関性はありますか?

A

Cytotoxicity LDH Assay Kit-WSTとCell Counting Kit-8では、測定原理が異なるために必ずしも相関性は得られません。そのため、細胞毒性試験の場合には、遊離LDH測定法とCell Counting Kit-8など数種の指標で測定いただくことをお勧めします。
・Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST:細胞膜の損傷により培地中に漏れ出したLDH活性を測定(細胞膜損傷が指標)
・Cell Counting Kit-8:細胞内の代謝活性(デヒドロゲナーゼ)を測定(代謝活性が指標)

Q

LD50値が過去の測定値と大きく異なります。なにか対処法はありますか?

A

・細胞の状態によって、被験物質による影響の受け方が変わりLD50値に影響します。ご使用になる細胞は、継代条件や継代回数をコントロールし、可能な限り同じ状態の細胞をお使い下さい。
・被験物質の希釈系列を調製する際の希釈倍率を狭くすることで、より信頼性の高いLD50値を導き出すことができます。
下記の要領で、使用する被験物質濃度を設定されることをおすすめします。

検討の流れ

① 被検物質が利用できる最高濃度を基準に10倍希釈を繰り返し、5-6桁程度の広い検体濃度域で毒性試験を実施する。[図①]
(①の操作で、毒性が現れる濃度域の予測最高濃度の目安をつける)
② ①の結果から、その被検物質の濃度が現れる濃度の予測最高濃度(100%致死を生じる最低濃度)を基準に2倍希釈を繰り返し、2-3桁をカバーする濃度域で毒性試験をする。[図②]
③ ②の手順を繰り返し、最終的に細胞毒性が20-80%の間に少なくとも検体濃度が3点以上プロットできる濃度域を設定する。[図③]

細胞毒性測定キット Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST 同仁化学研究所

Q

LDHのアイソザイムの測り分けはできますか?

A

本製品は、トータルのLDH活性を指標とした細胞毒性測定用となりますので、LDH1, LDH2, LDH3等の活性の測り分けはできません。

Q

サンプルの保存は可能ですか?

A

冷蔵保存では約1週間保存可能です1)
常温2)や冷凍での保存は、LDHが失活するためお薦め致しません。

<参考文献>
(1) M. Allen, P. Millett, E. Dawes, N. Rushton., "Lactate dehydrogenase activity as a rapid and sensitive test for the quantification of cell numbers in vitro.", Clin Mater. 1994; 16, (4), 189.
(2) A. Wagner, A. Marc, JM. Engasser, A. Einsele, "The use of lactate dehydrogenase (LDH) release kinetics for the evaluation of death and growth of mammalian cells in perfusion reactors.", Biotechnol Bioeng. 1992; 39, (3), :320..

※安定性は評価条件等により変化する可能性があります。ご理解の上、上記論文をご参考ください。
 

Q

Cytotoxicity LDH Assay Kit-WSTにLDH標準品は入っていますか?

A

細胞毒性試験用のため、LDH標準品は同梱しておりません。LDH活性も測定する場合は、別途、お買い求めください。

Q

Stop solution添加後すぐに測定する必要はありますか?

A

Stop solution添加後、3時間以内に測定してください。その場合は、プレートを遮光してください。

Q

ウェル間でバラツキが多いのですが何が原因でしょうか?

A

以下の要因が考えられますので、ご確認ください。

①培地の表面に気泡が発生している。

以下の方法で気泡を除去してください。
・シリンジや注射針の先端で、気泡を除去してください。
・(96wellプレート用遠心機をお持ちの場合)1,000 x g, 1分間遠心してください。

②インキュベーション中に培地の水分が蒸発して試薬濃度が変化している。

マイクロプレートの一番外側のウェルは、インキュベーション中の水分蒸発が起こりやすいため、長時間インキュベーションする場合は、一番外側のウェルは測定には利用せず、培地のみを入れて使用してください。

③試薬を添加する際に、最初と最後に添加するウェルの時間差が大きい。

全てのウェルに添加するWorking Solution、Stop Solutionについては、マルチチャンネルピペットのご使用をお勧めします。

④添加した試薬がよく混合されていない。

Lysis Buffer, Working Solution およびStop Solutionを添加した際、プレートミキサーで混合するか、または、プレートの側面を指で軽く叩いて添加した試薬と培地を混和してください。
特に、Lysis Bufferは添加量が少なく、高コントロールの値に影響を与えるため、ご注意ください。
なお、プレートを叩く際は、ウェル中の培地が漏れ出さない程度にしてください。

⑤使用する(マルチチャンネル)ピペットの秤量が正確ではない。

ピペットの秤量が正確か確認してください。

Q

バックグラウンドが高くなりました。原因や対策を教えてください。

A

以下の原因が考えられます。
①培地中の血清に含まれるLDHはバックグラウンドを上げます。無血清培地または血清量を5%以下となるように調製した培地をご使用下さい。
②被検物質や培地中に強い還元性を持つ物質が含まれていると、色素WSTが誤発色してバックグラウンドを上げます。試薬ブランクを測定して確認してください。
(なお、一般的なDMEM、RPMI、F-12等の培地には、通常、還元物質は含まれていません)

Q

細胞数最適化時の高コントロールと低コントロールの吸光度の差が小さい

A

①バックグラウンドが高いために低コントロールの吸光度が高くなっている可能性があります。以下を確認してください。

・培地中の血清に含まれるLDHはバックグラウンドを上げます。無血清培地または血清量を5%以下となるように調製した培地をご使用下さい。
・被検物質や培地中に強い還元性を持つ物質が含まれていると、色素WSTが誤発色してバックグラウンドを上げます。試薬ブランクを測定して確認してください。

②高コントロールに生細胞が残っている可能性があります。

Lysis Bufferがウェル内で均一になり細胞が全て死細胞となるように、Lysis Buffer添加後にプレートを軽く振りLysis Bufferが十分に混ざるようにしてください。

細胞毒性測定キット Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST 同仁化学研究所 細胞毒性測定キット Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST 同仁化学研究所

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷蔵,遮光
危険・有害
シンボルマーク
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細胞増殖/細胞毒性アッセイキット Viability/Cytotoxicity Multiplex Assay Kit 同仁化学研究所

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細胞増殖/細胞毒性アッセイキット Viability/Cytotoxicity Multiplex Assay Kit 同仁化学研究所Viability/Cytotoxicity Multiplex Assay Kit

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

Viability/Cytotoxicity Multiplex Assay Kit

細胞増殖/細胞毒性アッセイキット Viability/Cytotoxicity Multiplex Assay Kit 同仁化学研究所

  • 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
  • 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
  • 細胞機能解析
  • 細胞毒性

細胞増殖/細胞毒性アッセイキット

生細胞測定 Cell Counting Kit-8と、死細胞測定 Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST (各500 tests) のセット

  • 製品コード
    CK17  Viability/Cytotoxicity Multiplex Assay Kit
容 量 メーカー希望
小売価格
富士フイルム
和光純薬
500 tests ¥33,900 346-09271
キット内容
500 tests Cell Counting Kit-8
[500 回用]
・WST-8, 1-Methoxy PMSの混合溶液

Cytotoxicity lDH Assay Kit-WST
[500 tests]
・Dye Mixture      
・Assay Buffer
・lysis Buffer
・Stop Solution

5ml x1

x1
55 ml x1
5.5 ml x1
27.5 ml x1

  • 細胞増殖/細胞毒性アッセイキット Viability/Cytotoxicity Multiplex Assay Kit 同仁化学研究所
試験成績書

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  • お問い合わせ

マニュアル

  • 取扱説明書 日本語
    細胞増殖/細胞毒性アッセイキット Viability/Cytotoxicity Multiplex Assay Kit 同仁化学研究所
  • Manual English
    細胞増殖/細胞毒性アッセイキット Viability/Cytotoxicity Multiplex Assay Kit 同仁化学研究所
  • プロトコル 細胞増殖/細胞毒性アッセイキット Viability/Cytotoxicity Multiplex Assay Kit 同仁化学研究所 生細胞数を測りたい(吸光測定)
    細胞増殖/細胞毒性アッセイキット Viability/Cytotoxicity Multiplex Assay Kit 同仁化学研究所

技術情報

2つの指標で評価する理由

細胞傷害性を確認する際、生細胞のみ又は死細胞のみを指標とした評価では、データの信頼性が十分でない場合もあることから、測定原理の異なる複数の指標で評価することで実験の裏付けを行うケースが増えています。

1つの指標(生細胞)だけでの評価では…
生細胞:代謝活性(CCK-8、MTT、MTS、XTT等)

細胞増殖/細胞毒性アッセイキット Viability/Cytotoxicity Multiplex Assay Kit 同仁化学研究所

2つの指標(生細胞と死細胞)で評価すると…
生細胞:代謝活性(CCK-8、MTT、MTS、XTT等)
死細胞:細胞膜損傷(LDH Assay Kit)
細胞増殖/細胞毒性アッセイキット Viability/Cytotoxicity Multiplex Assay Kit 同仁化学研究所

参考文献

参考文献を表示する

1) R. Watanabe, T. Kurose, Y. Morishige and K. Fujimori, "Protective Effects of Fisetin Against 6-OHDA-Induced Apoptosis by Activation of PI3K-Akt Signaling in Human Neuroblastoma SH-SY5Y Cells.", Neurochem. Res.., 2018, 43, (2), 488-499.

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷蔵,遮光
危険・有害
シンボルマーク
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    オートファジー(オートリソソーム)の検出試薬

    DALGreen – Autophagy Detection

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    老化細胞検出キット

    Cellular Senescence Detection Kit – SPiDER-βGal

老化細胞検出キット(マイクロプレート用) Cellular Senescence Plate Assay Kit – SPiDER-βGal 同仁化学研究所

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品,欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

老化細胞検出キット(マイクロプレート用) Cellular Senescence Plate Assay Kit - SPiDER-βGal 同仁化学研究所Cellular Senescence Plate Assay Kit – SPiDER-βGal

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

Cellular Senescence Plate Assay Kit – SPiDER-βGal

老化細胞検出キット(マイクロプレート用) Cellular Senescence Plate Assay Kit - SPiDER-βGal 同仁化学研究所

  • 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
  • 細胞機能解析
  • 細胞老化

老化細胞検出キット(マイクロプレート用)

  • 製品コード
    SG05  Cellular Senescence Plate Assay Kit – SPiDER-βGal
容 量 メーカー希望
小売価格
富士フイルム
和光純薬
20 tests ¥12,200 345-09501
100 tests ¥35,300 341-09503
キット内容
20 tests SPiDER-βGal
lysis Buffer
Assay Buffer
Stop Solution
×1
40 ml×1
1.5 ml×1
3 ml×1
100 tests SPiDER-βGal
lysis Buffer
Assay Buffer
Stop Solution
×5
100 ml×2
7.5 ml×1
15 ml×1

  • 老化細胞検出キット(マイクロプレート用) Cellular Senescence Plate Assay Kit - SPiDER-βGal 同仁化学研究所
試験成績書

SDSダウンロード

  • ご購入方法
  • お問い合わせ

マニュアル

  • 取扱説明書 日本語
    老化細胞検出キット(マイクロプレート用) Cellular Senescence Plate Assay Kit - SPiDER-βGal 同仁化学研究所
  • Manual English
    老化細胞検出キット(マイクロプレート用) Cellular Senescence Plate Assay Kit - SPiDER-βGal 同仁化学研究所
  • 細胞数補正キットとの併用プロトコル 日本語
    老化細胞検出キット(マイクロプレート用) Cellular Senescence Plate Assay Kit - SPiDER-βGal 同仁化学研究所
  • Protocol for a Combined Analysis with Cell Count Normalization Kit [English]
    老化細胞検出キット(マイクロプレート用) Cellular Senescence Plate Assay Kit - SPiDER-βGal 同仁化学研究所

技術情報

簡便に老化細胞を数値化

準備した細胞をキット同梱のBuffer で溶解し、蛍光基質(SPiDER-βGal)を添加するだけで、SA-β-gal の活性に応じた蛍光強度が得られます。
なおディッシュ(100 mm dish)等で細胞を準備した場合でも、細胞溶解後に96 ウェルプレートに移して頂くだけで評価頂けます。
老化細胞検出キット(マイクロプレート用) Cellular Senescence Plate Assay Kit - SPiDER-βGal 同仁化学研究所

実験例:薬剤添加による評価

ROS発生剤であるDoxorubicinを添加し培養したWI-38 細胞を用い、本キットによるプレートアッセイを行いました。結果、Doxorubicinを添加した細胞では、 SA-β-gal の亢進が確認されました。

老化細胞検出キット(マイクロプレート用) Cellular Senescence Plate Assay Kit - SPiDER-βGal 同仁化学研究所
<検出条件>
Ex. 535 nm / Em. 580 nm

技術や使用製品に関する補足

本キット使用時の注意点:細胞数の補正をお勧めします。

マイクロプレートを用いた細胞の解析では、得られる結果がウェル中の細胞数によって変化する場合があります。その際には、細胞数のカウントやトータルタンパク質量の確認により、得られた測定値の補正(ノーマライゼーション)が必要となります。本キットでは、試薬を細胞培養液に添加するだけで、細胞内の核を染色し得られる蛍光強度から、細胞数を簡便に評価することができます。
細胞数ノーマライゼーションキットは、
こちらから

老化細胞検出キット(マイクロプレート用) Cellular Senescence Plate Assay Kit - SPiDER-βGal 同仁化学研究所

 

 

参考文献

参考文献を表示する
文献No. 対象サンプル 装置 引用(リンク)
1 細胞
(MRC-5)
プレートリーダー Y. Takenaka, I. Inoue, T. Nakano, M. Ikeda and Y. Kakinuma, "Prolonged disturbance of proteostasis induces cellular senescence via temporal mitochondrial dysfunction and subsequent mitochondrial accumulation in human fibroblasts", 2021, doi:10.1111/febs.16249.
2 細胞
(ヒト網膜色素上皮細胞)
プレートリーダー H. Yamamoto-Imoto, S. Minami, T. Shioda, Y. Yamashita, S. Sakai, S. Maeda, T. Yamamoto, S. Oki, M. Takashima, T. Yamamuro, K. Yanagawa, R. Edahiro, M. Iwatani, M. So, A. Tokumura, T. Abe, R. Imamura, N. Nonomura, Y. Okada, D. E. Ayer, H. Ogawa, E. Hara, Y. Takabatake, Y. Isaka, S. Nakamura and T. Yoshimori, "Age-associated decline of MondoA drives cellular senescence through impaired autophagy and mitochondrial homeostasis", Cell Rep.2022, doi:10.1016/j.celrep.2022.110444.
3 細胞
(U251MG)
プレートリーダー A. Saito, Y. Kamikawa, T. Ito, K. Matsuhisa, M. Kaneko T. Okamoto, T. Yoshimaru, Y. Matsushita, T. Katagiri and K. Imizumi, "p53-independent tumor suppression by cell-cycle arrest via CREB/ATF transcription factor OASIS", 2023, doi:10.1016/j.celrep.2023.112479.

よくある質問

Q

1キットあたりの測定可能なサンプル数を教えてください。

A

測定可能なサンプル数の目安は以下の通りです。

  20 tests 100 tests
測定可能なwell数 96 wellプレート
20 well分
96 wellプレート
1 枚分
測定可能なサンプル数
(n=3 にて測定した場合)
6 サンプル 30 サンプル
Q

96 wellプレートで細胞を老化誘導をして測定することは可能ですか?

A

老化誘導はディッシュ等で行い、その後、細胞を96 wellプレートに移して測定することを推奨します。
同一プレート内に老化誘導しない細胞(コントロール)と老化誘導する細胞(サンプル)を配置して比較を行いますが、96 wellプレートで老化誘導を行うと、(老化誘導の日数に依りますが)コントロール細胞は増殖しすぎてコンフルエントの状態を招く可能性があります。
また、コンフルエントを回避するために予め細胞数を少なく播種した場合にも、老化誘導処理した老化細胞はプレートアッセイに必要な感度(細胞数)が得られない可能性があります。

Q

96 wellプレートに播種する細胞数の目安はどれくらいですか?

A

至適細胞数は細胞種によって異なります。
弊社では、1×104 cellsの WI-38細胞を各 wellに播種し、実験した実績がございます。

詳しい操作については、取扱説明書内の「実験例2」をご参照ください。
 

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取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷蔵,遮光
危険・有害
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グルコース取り込み検出キットBlue Glucose Uptake Assay Kit-Blue 同仁化学研究所

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グルコース取り込み検出キットBlue Glucose Uptake Assay Kit-Blue 同仁化学研究所Glucose Uptake Assay Kit-Blue

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

Glucose Uptake Assay Kit-Blue

グルコース取り込み検出キットBlue Glucose Uptake Assay Kit-Blue 同仁化学研究所

  • 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
  • 細胞機能解析
  • 細胞老化
  • 細胞内代謝
  • 蛍光色素
  • 顕微鏡
  • FCM

グルコース取り込み検出キットBlue

  • グルコース取り込み能力を高感度かつ簡便に測定できる
  • 蛍光顕微鏡やフローサイトメーターで測定が可能
  • 取り込まれた色素の漏れ出しを抑制し、再現性の高いデータを取得できる
  • 製品コード
    UP01  Glucose Uptake Assay Kit-Blue
容 量 メーカー希望
小売価格
富士フイルム
和光純薬
1 set ¥42,800 342-09871

使用回数の目安
1 set あたり、35 mm dish 12 枚、96-well microplate 1 枚

キット内容
1 set Glucose Uptake Probe-Blue
WI Solution (50×)
×1
5 ml ×1

  • グルコース取り込み検出キットBlue Glucose Uptake Assay Kit-Blue 同仁化学研究所
試験成績書

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  • ご購入方法
  • お問い合わせ

マニュアル

  • 取扱説明書 日本語
    グルコース取り込み検出キットBlue Glucose Uptake Assay Kit-Blue 同仁化学研究所
  • Manual English
    グルコース取り込み検出キットBlue Glucose Uptake Assay Kit-Blue 同仁化学研究所

技術情報

既存法よりココが良い!4つの特徴

Glucose Uptake Probe-Blueは青色蛍光を発するため、蛍光顕微鏡やフローサイトメーターの多重染色の際に緑色蛍光以外の試薬としてご利用頂けます。また、高輝度の色素と細胞からの漏出を抑えるバッファーを採用したことで、既存法(2-NBDG)よりも短時間での測定が可能となりました。

よくある質問

Q

Glucose Uptake Probe-Blueはどのグルコーストランスポーターを介して取り込まれるのでしょうか?

A

複数のトランスポーターを介して細胞内へ取り込まれていると推測されますが、各グルコーストランスポーターに対する特異性や親和性に関する詳細なデータはございません。

Q

使用実績のある細胞種を教えてください。

A

下記の細胞においてプローブの使用実績があります。

細胞
ヒト肺胞基底上皮腺癌細胞 A549
ヒト肝癌由来細胞 HepG2
前駆脂肪細胞 preadipocyte(3T3-L1)
脂肪細胞 adipocyte(3T3-L1)
ルイス肺がん由来細胞 3LL
T細胞 CD4+ T cell
Q

阻害剤や取り込み能力を変化させる実験の実績を教えて下さい。

A

下記の細胞において阻害剤や取り込み能力を変化させる実験の実績があります。

グルコース取り込み検出キットBlue Glucose Uptake Assay Kit-Blue 同仁化学研究所

Q

グルコースでの競合阻害ができない場合の対処法はありますか?

A

細胞ごとのグルコーストランスポーターの発現量や種類により、競合阻害がかからない場合があります。(例:HepG2細胞)

グルコース取り込み検出キットBlue Glucose Uptake Assay Kit-Blue 同仁化学研究所

その場合には、2-deoxyglucose(2-DG)による前処理(Pretreatment)を行うことでglucose競合阻害の差が得られる
可能性があります。Glucose Uptake Assay Kit-Green(製品コード:UP02)での実施例を参考にご検討ください。

 

2-DG前処理とグルコースによる競合阻害を組み合わせた Glucose Uptake Probe の取り込み阻害(HepG2 細胞)

1. 細胞をディッシュまたはマイクロプレートに播種し、5% CO2 インキュベーター(37℃)内で一晩培養した。
2. Medium [DMEM (10% FBS, High-glucose) ]を除去した後、50 mmol/l 2-DG/Mediumを添加し、5% CO2
   インキュベーター(37℃)内で二時間培養した。

3. 加温したDMEM (Glucose-free, serum-free)で2 回洗浄した。
4. 加温したDMEM (Glucose-free, serum-free)を添加し、5% CO2 インキュベーター(37℃)内で15 分間静置した。
5. 上清を除去した後、加温したProbe solutionを添加し、5% CO2 インキュベーター(37℃)内で15 分間静置した。
6. 上清を除去した後、冷却したWI Solution (1x) で2 回洗浄した。
7. 上清を除去した後、冷却したWI Solution (1x) を添加し、室温で5 分間静置した。 
8. 上清を除去した後、冷却したWI Solution (1x) を添加した。
9. 蛍光顕微鏡で観察した。

 

グルコース取り込み検出キットBlue Glucose Uptake Assay Kit-Blue 同仁化学研究所

Q

Glucose Uptake Probe-Blueは細胞内に取り込まれた後、分解・代謝されるのでしょうか?

A

蛍光色素部位は安定な構造を有しているため、実験操作内において分解されることはございません。グルコース部位は、構造上ヘキソキナーゼによるリン酸化を受けることが考えられますが、それ以降の代謝は行われないと考えられます。

Q

Glucose Uptake Probe-Blueを生細胞へ取り込ませた後、固定することは可能でしょうか?

A

プローブが細胞内から漏出するため、染色後の細胞を固定することはできません。

Q

Probe solutionは保存可能でしょうか?

A

Probe solutionは保存できません。Probe stock solutionは一か月間冷凍保存が可能です。

Q

バックグラウンドが高い場合、どうすればいいですか?

A

細胞に取り込まれなかったプローブが残存している可能性があります。再度WI solutionによる洗浄操作を一度行ってください。

Q

蛍光シグナルの変化が観察されない場合、どうすればいいですか?

A

初期検討としてプローブ濃度(x250~x1,000)や染色時間(15分~1時間程度)をご検討下さい。

Q

WI solutionを用いて洗浄した後、プローブはどのくらいの時間細胞内に保持されますか?

A

室温で約1時間程度は細胞内に保持されます。ただし、細胞の種類によって異なることが考えられます。

Q

取り込まれた色素の定量はできますか?

A

取り込まれた色素の定量を行う事はできません。本色素は、グルコース取り込み能力の増減を確認するための色素となります。

Q

グルコースの定量はできますか?

A

本製品を用いてグルコースを定量することはできません。

培地中のグルコース消費量や細胞内のグルコース量を定量したい場合は、弊社 グルコース代謝測定キット Glucose Assay Kit-WST (G264) をご使用下さい。

グルコース取り込み検出キットBlue Glucose Uptake Assay Kit-Blue 同仁化学研究所 グルコース取り込み検出キットBlue Glucose Uptake Assay Kit-Blue 同仁化学研究所

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷蔵
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グルコース取り込み検出キットBlue Glucose Uptake Assay Kit-Blue 同仁化学研究所

関連製品

この製品に関連する研究では、下記の関連製品も使われています。

  • グルコース取り込み検出キットBlue Glucose Uptake Assay Kit-Blue 同仁化学研究所

    グルコース取り込み検出キットGreen

    Glucose Uptake Assay Kit-Green

  • グルコース取り込み検出キットBlue Glucose Uptake Assay Kit-Blue 同仁化学研究所

    グルコース取り込み検出キットRed

    Glucose Uptake Assay Kit-Red

  • グルコース取り込み検出キットBlue Glucose Uptake Assay Kit-Blue 同仁化学研究所

    グルコース測定キット

    Glucose Assay Kit-WST

  • グルコース取り込み検出キットBlue Glucose Uptake Assay Kit-Blue 同仁化学研究所

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  • グルコース取り込み検出キットBlue Glucose Uptake Assay Kit-Blue 同仁化学研究所

    トータルROS検出キット

    ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA-

グルコース取り込み検出キットGreen Glucose Uptake Assay Kit-Green 同仁化学研究所

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品,欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

グルコース取り込み検出キットGreen Glucose Uptake Assay Kit-Green 同仁化学研究所Glucose Uptake Assay Kit-Green

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

Glucose Uptake Assay Kit-Green

グルコース取り込み検出キットGreen Glucose Uptake Assay Kit-Green 同仁化学研究所

  • 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
  • 細胞機能解析
  • 細胞老化
  • 細胞内代謝
  • 蛍光色素
  • 顕微鏡
  • FCM

グルコース取り込み検出キットGreen

  • グルコース取り込み能力を高感度かつ簡便に測定できる
  • プレートリーダーを用いて測定が可能
  • 取り込まれた色素の漏れ出しを抑制し、再現性の高いデータを取得できる
  • 製品コード
    UP02  Glucose Uptake Assay Kit-Green
容 量 メーカー希望
小売価格
富士フイルム
和光純薬
1 set ¥40,700 347-09821

使用回数の目安
1 set あたり、35 mm dish 12 枚、96-well plate 1 枚

キット内容
1 set Glucose Uptake Probe-Green
WI Solution (50×)
×1
5 ml ×1

  • グルコース取り込み検出キットGreen Glucose Uptake Assay Kit-Green 同仁化学研究所
試験成績書

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  • ご購入方法
  • お問い合わせ

マニュアル

  • 取扱説明書 日本語
    グルコース取り込み検出キットGreen Glucose Uptake Assay Kit-Green 同仁化学研究所
  • Manual English
    グルコース取り込み検出キットGreen Glucose Uptake Assay Kit-Green 同仁化学研究所

技術情報

既存法よりココが良い!4つの特徴

高輝度の色素を採用したことにより、既存法(2-NBDG)よりも高感度かつ短時間での測定が可能となりました。

参考文献

参考文献を表示する

 

No. Sample Publication
1) 細胞
(HeLa)
W. Islam, Y. Matsumoto, J. Fang, A. Harada, T. Niidome, K. Ono, H. Tsutsuki, T. Sawa, T. Imamura, K. Sakurai, N. Fukumitsu, H. Yamamoto, H. Maeda., "Polymer-conjugated glucosamine complexed with boric acid shows tumor-selective accumulation and simultaneous inhibition of glycolysis ", Biomaterials., 2021, 269, (-), 120631.
2)
(B. licheniformis; P. stutzeri)
M. Jiang, Q. Li, S. Hu, P. He, Y. Chen, D. Cai, Y. Wu, S. Chen, "Enhanced aerobic denitrification performance with Bacillus licheniformis via secreting lipopeptide biosurfactant lichenysin", 2022, doi:10.1016/j.cej.2022.134686.
3) 細胞
(分化した3T3-L1脂肪細胞)
Y. Liu, Y. Le, M. Xu, W. Wang, H. Chen, Q. Zhang, C. Wang, " Remodeling on adipocytic physiology of organophosphorus esters in mature adipocytes", Environ. Pollut.2022, doi:10.1016/j.envpol.2022.119287.

 

 

よくある質問

Q

Glucose Uptake Probe-Greenはどのグルコーストランスポーターを介して取り込まれるのでしょうか?

A

複数のトランスポーターを介して細胞内へ取り込まれていると推測されますが、各グルコーストランスポーターに対する特異性や親和性に関する詳細なデータはございません。

Q

使用実績のある細胞種を教えてください。

A

下記の細胞においてプローブの使用実績があります。

細胞
ヒト肺胞基底上皮腺癌細胞 A549
ヒト肝癌由来細胞 HepG2
前駆脂肪細胞 preadipocyte(3T3-L1)
脂肪細胞 adipocyte(3T3-L1)
悪性黒色腫 MO5
マウス筋芽細胞(未分化) C2C12
マウス筋管 C2C12
アストロサイト―マ U-251 MG
ヒト子宮頸癌由来細胞 HeLa
ルイス肺がん由来細胞 3LL
T細胞 CD4+ T cell
マウスマクロファージ様株化細胞 J774.1
線虫 N2

 

Q

阻害剤や取り込み能力を変化させる実験の実績を教えて下さい。

A

下記の細胞において阻害剤や取り込み能力を変化させる実験の実績があります。

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Q

グルコースでの競合阻害ができない場合の対処法はありますか?

A

細胞ごとのグルコーストランスポーターの発現量や種類により、競合阻害がかからない場合があります。(例:HepG2細胞)

グルコース取り込み検出キットGreen Glucose Uptake Assay Kit-Green 同仁化学研究所

その場合には、2-deoxyglucose(2-DG)による前処理(Pretreatment)を行うことでglucose競合阻害の差が得られる
可能性があります。下記例を参考にご検討ください。

2-DG前処理とグルコースによる競合阻害を組み合わせた Glucose Uptake Probe の取り込み阻害(HepG2 細胞)

1. 細胞をディッシュまたはマイクロプレートに播種し、5% CO2 インキュベーター(37℃)内で一晩培養した。
2. Medium [DMEM (10% FBS, High-glucose) ]を除去した後、50 mmol/l 2-DG/Mediumを添加し、
   5% CO2 インキュベーター(37℃)内で二時間培養した。

3. 加温したDMEM (Glucose-free, serum-free)で2 回洗浄した。
4. 加温したDMEM (Glucose-free, serum-free)を添加し、5% CO2 インキュベーター(37℃)内で15 分間静置した。
5. 上清を除去した後、加温したProbe solutionを添加し、5% CO2 インキュベーター(37℃)内で15 分間静置した。
6. 上清を除去した後、冷却したWI Solution (1x) で2 回洗浄した。
7. 上清を除去した後、冷却したWI Solution (1x) を添加し、室温で5 分間静置した。 
8. 上清を除去した後、冷却したWI Solution (1x) を添加した。
9. 蛍光顕微鏡で観察した。

グルコース取り込み検出キットGreen Glucose Uptake Assay Kit-Green 同仁化学研究所

Q

Glucose Uptake Probe-Greenは細胞内に取り込まれた後、分解・代謝されるのでしょうか?

A

蛍光色素部位は安定な構造を有しているため、実験操作内において分解されることはございません。グルコース部位は、構造上ヘキソキナーゼによるリン酸化を受けることが考えられますが、それ以降の代謝は行われないと考えられます。

Q

Glucose Uptake Probe-Greenを生細胞へ取り込ませた後、固定することは可能でしょうか?

A

プローブが細胞内から漏出するため、染色後の細胞を固定することはできません。

Q

プレートリーダーで測定する場合、どのプレートを使用すればよいでしょうか?

A

蛍光検出のため細胞培養用のブラックマイクロプレートをご使用ください。

Q

Probe working solutionは保存可能でしょうか?

A

Probe working solutionは保存できません。Probe stock solutionは冷凍保存が一か月間可能です。

Q

蛍光シグナルの変化が観察されない場合、どうすればいいですか?

A

初期検討としてプローブ濃度(x250~x1,000)や染色時間(15分~1時間程度)をご検討下さい。

Q

バックグラウンドが高い場合、どうすればいいですか?

A

細胞に取り込まれなかったプローブが残存している可能性があります。マニュアルの洗浄操作6-7を繰り返してください。

Q

Glucose Uptake Probe-Greenに細胞毒性はありますか?

A

弊社製品のCell Counting Kit-8 (CK04)を用いてA549細胞におけるプローブの細胞毒性を調査した結果、細胞毒性は確認されませんでした。

Q

WI solutionを用いて洗浄した後、プローブはどのくらいの時間細胞内に保持されますか?

A

室温で約1時間程度は細胞内に保持されます。ただし、細胞の種類によって異なることが考えられます。

Q

グルコースの定量はできますか?

A

本製品を用いてグルコースを定量することはできません。

培地中のグルコース消費量や細胞内のグルコース量を定量したい場合は、弊社 グルコース代謝測定キット Glucose Assay Kit-WST (G264) をご使用下さい。

Q

取り込まれた色素の定量はできますか?

A

取り込まれた色素の定量を行う事はできません。本色素は、グルコース取り込み能力の増減を確認するための色素となります。

グルコース取り込み検出キットGreen Glucose Uptake Assay Kit-Green 同仁化学研究所 グルコース取り込み検出キットGreen Glucose Uptake Assay Kit-Green 同仁化学研究所

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷蔵
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関連製品

この製品に関連する研究では、下記の関連製品も使われています。

  • グルコース取り込み検出キットGreen Glucose Uptake Assay Kit-Green 同仁化学研究所

    グルコース測定キット

    Glucose Assay Kit-WST

  • グルコース取り込み検出キットGreen Glucose Uptake Assay Kit-Green 同仁化学研究所

    乳酸測定キット

    Lactate Assay Kit-WST

  • グルコース取り込み検出キットGreen Glucose Uptake Assay Kit-Green 同仁化学研究所

    α-ケトグルタル酸測定キット

    α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric

  • グルコース取り込み検出キットGreen Glucose Uptake Assay Kit-Green 同仁化学研究所

    MT-1ミトコンドリア膜電位検出キット

    MT-1 MitoMP Detection Kit

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    トータルROS検出キット

    ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA-

グルコース取り込み検出キットRed Glucose Uptake Assay Kit-Red 同仁化学研究所

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グルコース取り込み検出キットRed Glucose Uptake Assay Kit-Red 同仁化学研究所Glucose Uptake Assay Kit-Red

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

Glucose Uptake Assay Kit-Red

グルコース取り込み検出キットRed Glucose Uptake Assay Kit-Red 同仁化学研究所

  • 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
  • 細胞機能解析
  • 細胞老化
  • 細胞内代謝
  • 蛍光色素
  • 顕微鏡
  • FCM

グルコース取り込み検出キットRed

  • グルコース取り込み能力を高感度かつ簡便に測定できる
  • プレートリーダーやフローサイトメーターでも測定が可能
  • 取り込まれた色素の漏れ出しを抑制し、再現性の高いデータを取得できる
  • 製品コード
    UP03  Glucose Uptake Assay Kit-Red
容 量 メーカー希望
小売価格
富士フイルム
和光純薬
1 set ¥42,800 349-09881

使用回数の目安
1 set あたり、35 mm dish 12 枚、96-well microplate 1 枚

キット内容
1 set Glucose Uptake Probe-Red
WI Solution (50×)
×1
5 ml ×1

  • グルコース取り込み検出キットRed Glucose Uptake Assay Kit-Red 同仁化学研究所
試験成績書

SDSダウンロード

  • ご購入方法
  • お問い合わせ

マニュアル

  • 取扱説明書 日本語
    グルコース取り込み検出キットRed Glucose Uptake Assay Kit-Red 同仁化学研究所
  • Manual English
    グルコース取り込み検出キットRed Glucose Uptake Assay Kit-Red 同仁化学研究所

技術情報

既存法よりココが良い!4つの特徴

Glucose Uptake Probe-Redは赤色蛍光を発するため、蛍光顕微鏡やフローサイトメーターの多重染色の際に緑色蛍光以外の試薬としてご利用頂けます。
また、高輝度の色素と細胞からの漏出を抑えるバッファーを採用したことで、既存法(2-NBDG)よりも短時間での測定が可能となりました。

参考文献

参考文献を表示する

 

No. Sample Publication
1)
(OP50-1)
Y. Suzuki, K. Kikuchi, K. Numayama-Tsuruta and T. Ishikawa, "Reciprocating intestinal flows enhance glucose uptake in C. elegans", Sci. Rep.2022, doi:10.1038/s41598-022-18968-1.

よくある質問

Q

Glucose Uptake Probe-Redはどのグルコーストランスポーターを介して取り込まれるのでしょうか?

A

複数のトランスポーターを介して細胞内へ取り込まれていると推測されますが、各グルコーストランスポーターに対する特異性や親和性に関する詳細なデータはございません。

Q

使用実績のある細胞種を教えてください。

A

下記の細胞においてプローブの使用実績があります。

細胞
ヒト肺胞基底上皮腺癌細胞 A549
ヒト肝癌由来細胞 HepG2
前駆脂肪細胞 preadipocyte(3T3-L1)
脂肪細胞 adipocyte(3T3-L1)
ルイス肺がん由来細胞 3LL
T細胞 CD4+ T cell
Q

阻害剤や取り込み能力を変化させる実験の実績を教えて下さい。

A

下記の細胞において阻害剤や取り込み能力を変化させる実験の実績があります。

グルコース取り込み検出キットRed Glucose Uptake Assay Kit-Red 同仁化学研究所

Q

グルコースでの競合阻害ができない場合の対処法はありますか?

A

細胞ごとのグルコーストランスポーターの発現量や種類により、競合阻害がかからない場合があります。(例:HepG2細胞)

グルコース取り込み検出キットRed Glucose Uptake Assay Kit-Red 同仁化学研究所

その場合には、2-deoxyglucose(2-DG)による前処理(Pretreatment)を行うことでglucose競合阻害の差が得られる
可能性があります。Glucose Uptake Assay Kit-Green(製品コード:UP02)での実施例を参考にご検討ください。

 

2-DG前処理とグルコースによる競合阻害を組み合わせた Glucose Uptake Probe の取り込み阻害(HepG2 細胞)

1. 細胞をディッシュまたはマイクロプレートに播種し、5% CO2 インキュベーター(37℃)内で一晩培養した。
2. Medium [DMEM (10% FBS, High-glucose) ]を除去した後、50 mmol/l 2-DG/Mediumを添加し、5% CO2
   インキュベーター(37℃)内で二時間培養した。

3. 加温したDMEM (Glucose-free, serum-free)で2 回洗浄した。
4. 加温したDMEM (Glucose-free, serum-free)を添加し、5% CO2 インキュベーター(37℃)内で15 分間静置した。
5. 上清を除去した後、加温したProbe solutionを添加し、5% CO2 インキュベーター(37℃)内で15 分間静置した。
6. 上清を除去した後、冷却したWI Solution (1x) で2 回洗浄した。
7. 上清を除去した後、冷却したWI Solution (1x) を添加し、室温で5 分間静置した。 
8. 上清を除去した後、冷却したWI Solution (1x) を添加した。
9. 蛍光顕微鏡で観察した。

 

グルコース取り込み検出キットRed Glucose Uptake Assay Kit-Red 同仁化学研究所

Q

Glucose Uptake Probe-Redは細胞内に取り込まれた後、分解・代謝されるのでしょうか?

A

蛍光色素部位は安定な構造を有しているため、実験操作内において分解されることはございません。グルコース部位は、構造上ヘキソキナーゼによるリン酸化を受けることが考えられますが、それ以降の代謝は行われないと考えられます。

Q

Glucose Uptake Probe-Redを生細胞へ取り込ませた後、固定することは可能でしょうか?

A

プローブが細胞内から漏出するため、染色後の細胞を固定することはできません。

Q

プレートリーダーで測定する場合、どのプレートを使用すればよいでしょうか?

A

蛍光検出のため細胞培養用のブラックマイクロプレートをご使用ください。

Q

Probe working solutionは保存可能でしょうか?

A

Probe solutionは保存できません。Probe stock solutionは一か月間冷凍保存が可能です。

Q

蛍光シグナルの変化が観察されない場合、どうすればいいですか?

A

初期検討としてプローブ濃度(x250~x1,000)や染色時間(15分~1時間程度)をご検討下さい。

Q

バックグラウンドが高い場合、どうすればいいですか?

A

細胞に取り込まれなかったプローブが残存している可能性があります。再度WI solutionによる洗浄操作を行ってください。

Q

WI solutionを用いて洗浄した後、プローブはどのくらいの時間細胞内に保持されますか?

A

室温で約1時間程度は細胞内に保持されます。ただし、細胞の種類によって異なることが考えられます。

Q

グルコースの定量はできますか?

A

本製品を用いてグルコースを定量することはできません。

培地中のグルコース消費量や細胞内のグルコース量を定量したい場合は、弊社 グルコース代謝測定キット Glucose Assay Kit-WST (G264) をご使用下さい。

Q

取り込まれた色素の定量はできますか?

A

取り込まれた色素の定量を行う事はできません。本色素は、グルコース取り込み能力の増減を確認するための色素となります。

グルコース取り込み検出キットRed Glucose Uptake Assay Kit-Red 同仁化学研究所 グルコース取り込み検出キットRed Glucose Uptake Assay Kit-Red 同仁化学研究所

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷蔵
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グルコース取り込み検出キットRed Glucose Uptake Assay Kit-Red 同仁化学研究所

関連製品

この製品に関連する研究では、下記の関連製品も使われています。

  • グルコース取り込み検出キットRed Glucose Uptake Assay Kit-Red 同仁化学研究所

    グルコース取り込み検出キットBlue

    Glucose Uptake Assay Kit-Blue

  • グルコース取り込み検出キットRed Glucose Uptake Assay Kit-Red 同仁化学研究所

    グルコース取り込み検出キットGreen

    Glucose Uptake Assay Kit-Green

  • グルコース取り込み検出キットRed Glucose Uptake Assay Kit-Red 同仁化学研究所

    グルコース測定キット

    Glucose Assay Kit-WST

  • グルコース取り込み検出キットRed Glucose Uptake Assay Kit-Red 同仁化学研究所

    MT-1ミトコンドリア膜電位検出キット

    MT-1 MitoMP Detection Kit

  • グルコース取り込み検出キットRed Glucose Uptake Assay Kit-Red 同仁化学研究所

    トータルROS検出キット

    ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA-

アミノ酸取り込み検出キット Amino Acid Uptake Assay Kit 同仁化学研究所

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品,欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

アミノ酸取り込み検出キット Amino Acid Uptake Assay Kit 同仁化学研究所Amino Acid Uptake Assay Kit

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

Amino Acid Uptake Assay Kit

アミノ酸取り込み検出キット Amino Acid Uptake Assay Kit 同仁化学研究所

  • 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
  • 細胞機能解析
  • 細胞老化
  • 細胞内代謝
  • 蛍光色素
  • 顕微鏡
  • FCM

アミノ酸取り込み検出キット

  • アミノ酸取り込み能力を簡便に検出できる
  • 蛍光顕微鏡、プレートリーダー、フローサイトメーターを用いて検出が可能
  • 製品コード
    UP04  Amino Acid Uptake Assay Kit
容 量 メーカー希望
小売価格
富士フイルム
和光純薬
20 tests ¥17,100 346-09891
100 tests ¥48,200 342-09893

<使用回数の目安> 100 testsあたり、35 mm dish 10枚、96-well plate 1枚

アミノ酸取り込み検出キット Amino Acid Uptake Assay Kit 同仁化学研究所 使用するマイクロプレートの種類によっては測定できない場合があります。
推奨のマイクロプレートの種類と、 結果への影響については FAQ をご参照ください。

キット内容
20 tests BPA Solution
BPA Dilution Buffer
Probe Solution 
35 ×l×1
35 ×l×1
15 ×l×1
100 tests BPA Solution
BPA Dilution Buffer
Probe Solution 
175 ×l×1
175 ×l×1
75 ×l×1

  • アミノ酸取り込み検出キット Amino Acid Uptake Assay Kit 同仁化学研究所
試験成績書

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  • ご購入方法
  • お問い合わせ

マニュアル

  • 取扱説明書 日本語
    アミノ酸取り込み検出キット Amino Acid Uptake Assay Kit 同仁化学研究所
  • Manual English
    アミノ酸取り込み検出キット Amino Acid Uptake Assay Kit 同仁化学研究所

技術情報

この製品でできること

アミノ酸の取り込みを阻害する薬剤を抗がん剤としてスクリーニングしたり、正常細胞とがん細胞の取り込み能力を比較することができます。

アミノ酸取り込み検出キット Amino Acid Uptake Assay Kit 同仁化学研究所

参考文献

参考文献を表示する

 

文献No. 対象サンプル 装置    引用(リンク)
1 細胞
SCC7 Cell (マウス扁平上皮癌細胞)
フローサイトメーター

T. Watanabe, Y. Sanada, Y. Hattori, and M. Suzuki, "Correlation between the expression of LAT1 in cancer cells and the potential efficacy of boron neutron capture therapy", 2022, J. Radiat. Res., doi:10.1093/jrr/rrac077.

2 細胞
CD4+ Cells
フローサイトメーター

W. Zhang, X. Cao, X. Zhong, H. Wu, Y. Shi, M. Feng, Y.C. Wang, D. Ann, Y. Gwack, Y.C. Yuan, W. Shang and Z. Sun , "SRC2 controls CD4+ T cell activation via stimulating c-Myc-mediated upregulation of amino acid transporter Slc7a5", 2023, PNAS, doi:10.1073/pnas.2221352120.

よくある質問

Q

推奨する蛍光測定用のマイクロプレートを教えてください。

A

推奨するマイクロプレートは下記の通りです。

社名 製品名 Cat No.
ibidi μPlate 96 well ibiTreat black S 15 ib89626
AGC techno glass EZVIEW Glass Bottom Culture Plate LB 96well 5866-096
Thermo Fisher 96 Well Black/Clear Bottom Plate, TC Surface, Pack of 10 165305

※プレートの種類による結果への影響は、FAQ マイクロプレートの種類は結果に影響しますか? をご参照ください。

Q

マイクロプレートの種類は結果に影響しますか?

A

はい。マイクロプレートの種類によっては測定できない場合があります(参考データ参照)。本キットの使用には、下記のプレートを推奨します。

社名 製品名 Cat No.
ibidi μPlate 96 well ibiTreat black S 15 ib89626
AGC techno glass EZVIEW Glass Bottom Culture Plate LB 96well 5866-096
Thermo Fisher 96 Well Black/Clear Bottom Plate, TC Surface, Pack of 10 165305

<参考:プレート間の比較>

Ibidi 製のプレートと他社メーカーのプレートを用い、アミノ酸トランスポーター阻害剤である、BCH(2-Aminobicyclo[2.2.1]heptane-2-carboxylic acid)存在下で、 HeLa細胞のアミノ酸取り込み能力を検出しました。この結果、推奨するIbidi製の プレートよりも、他メーカーの プレートはバックグラウンドが高く、BCHによる取り込みの阻害を確認することができませんでした。

 

蛍光顕微鏡観察
 アミノ酸取り込み検出キット Amino Acid Uptake Assay Kit 同仁化学研究所

プレートリーダーよる検出

 アミノ酸取り込み検出キット Amino Acid Uptake Assay Kit 同仁化学研究所

Q

BPAはどのトランスポーターを介して取り込まれるのでしょうか?

A

BPAは、LAT1, LAT2, ATB0,+を介して取り込まれることが報告されています(Wongthai P et al., “Boronophenylalanine, a boron delivery agent for boron neutron capture therapy, is transported by ATB0,+, LAT1 and LAT2”, Cancer Sci., 2015, Mar;106(3):279-86)。また、小社では、LAT1の阻害剤BCHや、LAT1の基質であるleucineなどの競合阻害実験でBPAの取り込みが阻害されることを確認しています。

Q

使用実績のある細胞種を教えて下さい。

A

付着細胞(HeLa, A549, HepG2, MCF-7, C2C12, MEF, U251), 浮遊細胞(MOLT4)

Q

BPAは細胞内に取り込まれた後、分解・代謝されるのでしょうか?

A

BPAは安定な構造を有しているため、実験操作内において分解されることはございません。

Q

BPAを生細胞へ取り込ませた後、細胞を固定することは可能でしょうか?

A

プローブが細胞内から漏出するため、染色後の細胞を固定することはできません。

Q

蛍光シグナルの変化が観察されない場合、どうすればいいですか?

A

2点原因が考えられるため、以下のようにすると改善される可能性があります。
①BPA uptake solutionの取り込み量が少ない可能性があります。その場合は、BPA Solutionの希釈倍率を下げてご検討ください。(5~50倍希釈)
②Working solutionが劣化している可能性があります。再度、Working solutionを調製してください。

Q

BPAは細胞内での局在性はありますか?

A

取り込まれたBPAは細胞内に均一に存在します。

Q

BPA uptake solution, Working solutionは保存可能でしょうか?

A

BPA uptake solution, Working solutionは保存できません。

Q

バックグラウンドが高い場合、どうすればいいですか?

A

細胞に取り込まれなかったBPAがウェル内に残存している可能性があります。
HBSSによる洗浄を繰り返してください。

Q

BPAの定量はできますか?

A

取り込まれたBPAの定量を行う事はできません。本キットは、アミノ酸取り込み能力の増減を確認するためのキットとなります。

アミノ酸取り込み検出キット Amino Acid Uptake Assay Kit 同仁化学研究所 アミノ酸取り込み検出キット Amino Acid Uptake Assay Kit 同仁化学研究所

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷凍
危険・有害
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アミノ酸取り込み検出キット Amino Acid Uptake Assay Kit 同仁化学研究所
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アミノ酸取り込み検出キット Amino Acid Uptake Assay Kit 同仁化学研究所

関連製品

この製品に関連する研究では、下記の関連製品も使われています。

  • アミノ酸取り込み検出キット Amino Acid Uptake Assay Kit 同仁化学研究所

    グルコース取り込み検出キットGreen

    Glucose Uptake Assay Kit-Green

  • アミノ酸取り込み検出キット Amino Acid Uptake Assay Kit 同仁化学研究所

    グルコース測定キット

    Glucose Assay Kit-WST

  • アミノ酸取り込み検出キット Amino Acid Uptake Assay Kit 同仁化学研究所

    乳酸測定キット

    Lactate Assay Kit-WST

  • アミノ酸取り込み検出キット Amino Acid Uptake Assay Kit 同仁化学研究所

    α-ケトグルタル酸測定キット

    α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric

  • アミノ酸取り込み検出キット Amino Acid Uptake Assay Kit 同仁化学研究所

    老化細胞検出キット(マイクロプレート用)

    Cellular Senescence Plate Assay Kit – SPiDER-βGal

シスチン取り込み検出キット Cystine Uptake Assay Kit 同仁化学研究所

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品,欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

シスチン取り込み検出キット Cystine Uptake Assay Kit 同仁化学研究所Cystine Uptake Assay Kit

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

Cystine Uptake Assay Kit

シスチン取り込み検出キット Cystine Uptake Assay Kit 同仁化学研究所

  • 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
  • 細胞内代謝

シスチン取り込み検出キット

  • シスチン取り込み能力を簡便に検出できる
  • プレートリーダーを用いて検出が可能
  • 製品コード
    UP05  Cystine Uptake Assay Kit
容 量 メーカー希望
小売価格
富士フイルム
和光純薬
20 tests ¥19,300 344-09951
100 tests ¥53,500 340-09953

<使用回数の目安> 100 testsあたり、96-well plate 1 枚

キット内容
20 tests Cystine Analog Solution
Fluorescent Probe
Reducing Agent
Assay Buffer
45 μl×1
×1
×1
5 ml×1
100 tests Cystine Analog Solution
Fluorescent Probe
Reducing Agent
Assay Buffer
225 μl×1
×1
×2
25 ml×1

  • シスチン取り込み検出キット Cystine Uptake Assay Kit 同仁化学研究所
  • シスチン取り込み検出キット Cystine Uptake Assay Kit 同仁化学研究所
  • シスチン取り込み検出キット Cystine Uptake Assay Kit 同仁化学研究所
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マニュアル

  • 取扱説明書 日本語
    シスチン取り込み検出キット Cystine Uptake Assay Kit 同仁化学研究所
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    シスチン取り込み検出キット Cystine Uptake Assay Kit 同仁化学研究所

技術情報

この製品でできること

本キットはCystine Analog (CA)としてSelenocystineを用いており、細胞のシスチン取り込み能力を短時間の操作で簡便にプレートリーダーにて測定することが可能です。

シスチン取り込み検出キット Cystine Uptake Assay Kit 同仁化学研究所

参考文献

参考文献を表示する
文献No. 対象サンプル 装置 引用(リンク)
1) 細胞
(A172; LN229)
プレートリーダー K. Hayashima, H. Katoh, "Expression of gamma-glutamyltransferase 1 in glioblastoma cells confers resistance to cystine deprivation-induced ferroptosis", J. Biol. Chem.2022, doi:10.1016/j.jbc.2022.101703.
2) 細胞
(HK2; 293T)
プレートリーダー H. Chen, L. Cao, K. Han, H. Zhang, J. Cui, X. Ma, S. Zhao, C. Zhao, S. Yin, L. Fan, H. Hu, "Patulin disrupts SLC7A11-cystine-cysteine-GSH antioxidant system and promotes renal cell ferroptosis both in vitro and in vivo", 2022Food Chem. Toxicol., doi: 10.1016/j.fct.2022.113255.
3) 細胞
(Hep 3B)
プレートリーダー X. Hu, Y. He, Z. Han, W. Liu, D. Liu, X. Zhang, L. Chen, L. Qi, L. Chen, Y. Luo, Q. Li, P. Chen, Q. Wu, X. Zhu and H. Guo, "PNO1 inhibits autophagy-mediated ferroptosis by GSH metabolic reprogramming in hepatocellular carcinoma ", 2022, Cell Death Dis., doi:10.1038/s41419-022-05448-7.

 

よくある質問

Q

蛍光測定用のマイクロプレートはどのようなものが使えますか?

A

使用実績のあるマイクロプレートは下記の通りです。

社名 製品名 Cat No.
ibidi μPlate 96 well ibiTreat black S 15 ib89626
AGC techno glass EZVIEW Glass Bottom Culture Plate LB 96well 5866-096
Thermo Fisher 96 Well Black/Clear Bottom Plate, TC Surface, Pack of 10 165305

Q

Cystine Analogはどのトランスポーターを介して取り込まれるのでしょうか?

A

Cystine Analogはシスチン・グルタミン酸トランスポーター(xCT)を介して細胞内へ取り込まれます。

Q

細胞種の実績を教えて下さい。

A

下記の細胞において使用実績があります。

由来 細胞名
ヒト神経膠芽腫由来細胞 A172
ヒト肺胞基底上皮腺癌細胞 A549
ヒト悪性黒色種 A375
ヒト結腸腺癌 HCT116
ヒト子宮頸癌由来細胞 HepG2
白血病細胞 HL60
ヒトサルコーマ細胞 HT1080
マウス胚性線維芽細胞 MEF
ヒト肺小細胞​癌 SBC-5
アストロサイト―マ U-251 MG

 

 

 

Q

Cystine Analogは細胞内に取り込まれた後、分解・代謝されるのでしょうか?

A

Cystine Analogは安定な構造を有しているため、実験操作内において分解されることはございません。

Q

Cystine uptake solutionは保存可能でしょうか?

A

Cystine uptake solutionは保存できません。添加前に必要量のCystine uptake solutionを調製して下さい。

Q

シスチンを定量することはできますか?

A

本製品を用いてシスチンを定量することはできません。

Q

細胞内に取り込まれたCystine Analogを定量することはできますか?

A

細胞内に取り込まれたCystine Analogを定量することはできません。本製品は、シスチン取り込み能力を数値化するためのキットです。

Q

サンプル間またはブランクとの蛍光強度差が無い場合、何を確認すればよいですか?

A

以下5点をご確認ください。

1.細胞数が変化している。 
   
測定値(蛍光強度)を細胞数やタンパク質量で補正してください。
 詳細はよくある質問[測定値(蛍光強度)を細胞数やタンパク質濃度で補正する方法を教えてください。]をご参照ください。

2. 細胞へCystine Analogが十分取り込まれていない。
   マニュアルの各操作の時間を以下を目安にご検討ください。
   ・シスチン不含培地での培養時間 (接着細胞 操作3, 浮遊細胞 操作4 ):5 – 30分間 
   ・Cystine Analogの取り込み時間 (接着細胞 操作4, 浮遊細胞 操作5 ) : 30 – 60分間

3. 細胞に取り込まれなかったCystine Analogがウェル内に残存することでバックグラウンドが上昇している。 
   PBSによる洗浄(接着細胞:操作5, 浮遊細胞:操作6)を繰り返してください。

4. Working solutionが分解しており、バックグラウンドが上昇している。
   Working solutionを調製後、時間をおくと溶液に含まれる蛍光色素が分解し、蛍光強度が 高くなる可能性があります。
   Working Solution調製後、時間をおかずに添加してください。

5. 細胞種の影響
   細胞種ごとにシスチンの取り込み能は大きく異なっており、取り込み能が低い細胞種では相対的にバックグラウンドが高く見えることがあります。下図は異なるがん細胞のシスチン取り込み能の違いを示しています。上記記載の対処法でもバックグラウンドが解決できない場合には、よくある質問記載の実績のある細胞種でまずご検討いただくことをおすすめいたします。 

   シスチン取り込み検出キット Cystine Uptake Assay Kit 同仁化学研究所

Q

シスチン不含無血清培地以外にCA Uptake solutionの調製に使用できるバッファーはありますか?

A

HeLa細胞においてHBSSや0.1%Glucoseを含むPBS(+)を使用して測定した実績がございます。

Q

測定値(蛍光強度)を細胞数やタンパク質濃度で補正する方法を教えてください。

A

小社では下記表に記載する方法を推奨しております。使用する細胞(接着細胞・浮遊細胞)により補正方法とタイミングが異なるため、下記表を参照し[UP05による測定値]を補正してください。

細胞 接着細胞 浮遊細胞

補正方法

核染色(蛍光)

タンパク質定量法: BCA法 (比色)

製品

Cell Count Normalization Kit [Code:C544]

Sodium bicinchoninate [Code:B037]
市販のキット

補正のタイミング

シスチン取り込み検出キット Cystine Uptake Assay Kit 同仁化学研究所取扱説明書 接着細胞の操作10(UP05の測定)後の溶液を用いる。

取扱説明書 浮遊細胞の操作9で使用した溶液の残りを使用する。

補正の操作

シスチン取り込み検出キット Cystine Uptake Assay Kit 同仁化学研究所Cell count Normalization Kit [Code:C544]
の取扱説明書 [培地交換法]をご参照ください。

取扱説明書 の下記 実験例をご参照ください。
[xCT阻害剤エラスチンによるシスチントランスポーター活性阻害(HL60)]

[UP05による測定値]を [補正方法による測定値]で補正蛍光強度を計算してください。
補正蛍光強度=[UP05による測定値]/[補正方法による測定値]

※[UP05による測定値] = (サンプルの測定値) – (ブランクの測定値)
※[補正方法による測定値] = (サンプルウェルの測定値) – (細胞なしのウェルの測定値)

シスチン取り込み検出キット Cystine Uptake Assay Kit 同仁化学研究所 シスチン取り込み検出キット Cystine Uptake Assay Kit 同仁化学研究所

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷凍
危険・有害
シンボルマーク
シスチン取り込み検出キット Cystine Uptake Assay Kit 同仁化学研究所シスチン取り込み検出キット Cystine Uptake Assay Kit 同仁化学研究所シスチン取り込み検出キット Cystine Uptake Assay Kit 同仁化学研究所シスチン取り込み検出キット Cystine Uptake Assay Kit 同仁化学研究所
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シスチン取り込み検出キット Cystine Uptake Assay Kit 同仁化学研究所

関連製品

この製品に関連する研究では、下記の関連製品も使われています。

  • シスチン取り込み検出キット Cystine Uptake Assay Kit 同仁化学研究所

    グルコース取り込み検出キットGreen

    Glucose Uptake Assay Kit-Green

  • シスチン取り込み検出キット Cystine Uptake Assay Kit 同仁化学研究所

    アミノ酸取り込み検出キット

    Amino Acid Uptake Assay Kit

  • シスチン取り込み検出キット Cystine Uptake Assay Kit 同仁化学研究所

    グルタチオン定量キット

    GSSG/GSH Quantification Kit

  • シスチン取り込み検出キット Cystine Uptake Assay Kit 同仁化学研究所

    トータルROS検出キット

    ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA-

  • シスチン取り込み検出キット Cystine Uptake Assay Kit 同仁化学研究所

    細胞内鉄イオン測定試薬

    FerroOrange

脂肪酸取り込み検出キット Fatty Acid Uptake Assay Kit 同仁化学研究所

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品,欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

脂肪酸取り込み検出キット Fatty Acid Uptake Assay Kit 同仁化学研究所Fatty Acid Uptake Assay Kit

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

Fatty Acid Uptake Assay Kit

脂肪酸取り込み検出キット Fatty Acid Uptake Assay Kit 同仁化学研究所

  • 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
  • 細胞機能解析
  • 細胞内代謝
  • 顕微鏡
  • FCM

脂肪酸取り込み検出キット

  • 脂肪酸取り込み能力を高感度かつ簡便に測定できる
  • 3 ステップの簡便操作
  • Quenching Buffer(同梱)で洗浄不要
  • 製品コード
    UP07  Fatty Acid Uptake Assay Kit
容 量 メーカー希望
小売価格
富士フイルム
和光純薬
100 tests ¥32,000 343-10031

使用回数の目安
1 set あたり96-well plate 1 枚

キット内容
100 tests ・Fatty Acid Uptake Probe
・Quenching Buffer
・Washing Buffer (10X)
×1
11 ml×1
11 ml×1

  • 脂肪酸取り込み検出キット Fatty Acid Uptake Assay Kit 同仁化学研究所
試験成績書

SDSダウンロード

  • ご購入方法
  • お問い合わせ

マニュアル

  • 取扱説明書 日本語
    脂肪酸取り込み検出キット Fatty Acid Uptake Assay Kit 同仁化学研究所
  • Manual English
    脂肪酸取り込み検出キット Fatty Acid Uptake Assay Kit 同仁化学研究所

技術情報

なぜ、脂肪酸取り込み能力が注目されているのか?

脂肪酸は、生体がエネルギーを得るために重要な物質です。脂肪酸取り込み能は肥満や糖尿病などの疾患に関わるだけでなく、がん細胞における代謝指標の 1 つでもあります(左図)。細胞増殖が活発ながん細胞は多くの脂質を必要とするため、細胞内における脂肪酸合成や細胞外からの脂肪酸取り込みが活発に行われています(右図)。そのため、がん細胞の脂肪酸代謝経路をターゲットとした多くの薬剤が開発されています。

脂肪酸取り込み検出キット Fatty Acid Uptake Assay Kit 同仁化学研究所脂肪酸取り込み検出キット Fatty Acid Uptake Assay Kit 同仁化学研究所

よくある質問

Q

使用実績のある細胞種を教えてください。

A

下記の細胞において使用実績がございます。

細胞名 由来

A549

ヒト肺胞基底上皮腺癌細胞

HepG2

ヒト肝癌由来細胞

HeLa

ヒト子宮頸癌由来細胞

Jurkat

ヒト白血病T細胞

MOLT-4

ヒト急性リンパ芽球性白血病細胞

3T3-L1 (preadipocyte)

前駆脂肪細胞

3T3-L1 (adipocyte)

脂肪細胞

 

Q

Fatty Acid Uptake Probeを生細胞へ取り込ませた後、細胞を固定することは可能でしょうか?

A

4% PFAを用いて染色後の細胞を固定した実績がございます。

〈プロトコル〉
-付着細胞-
1. ディッシュまたはマイクロプレートに播種した細胞を準備した。
2. 培地を除去し、無血清培地で2回洗浄した。
3. 無血清培地を添加し、インキュベーター(37℃、5%CO2存在下)で15分間静置した。
4. 上清を除去した後、Fatty Acid Uptake Probe working solutionを添加し、インキュベーター(37℃、5%CO2存在下)で15分間静置した。
5. 上清を除去した後、Washing Buffer solutionで1回洗浄した。
6. 4% PFA/PBSを細胞へ添加し、室温で5分間インキュベートした。
7. PBSで細胞を3回洗浄後、蛍光顕微鏡で観察、プレートリーダーで測定した。

脂肪酸取り込み検出キット Fatty Acid Uptake Assay Kit 同仁化学研究所

脂肪酸取り込み検出キット Fatty Acid Uptake Assay Kit 同仁化学研究所

※固定化により蛍光強度は低下します。

-浮遊細胞-
1. マイクロチューブに細胞を準備した。
2. 300×gで5分間遠心し、上清を除去した。
3. 無血清培地を加え、ピペッティングにより懸濁後、300×gで5分間遠心し、上清を除去した。この操作を2回繰り返した。
4. 無血清培地を添加し、ピペッティングにより懸濁後、インキュベーター(37℃、5%CO2存在下)で15分間静置した。
5. 300×gで5分間遠心し、上清を除去した。
6. Fatty Acid Uptake Probe working solutionを添加し、ピペッティングにより懸濁後、インキュベーター(37℃、5%CO2存在下)で15分間静置した。
7. 300×gで5分間遠心し、上清を除去した。
8. Washing Buffer solutionで1回洗浄した。
9. 4% PFA/PBSを添加し、ピペッティングにより懸濁後、室温で5分間インキュベートした。
10. 300×gで5分間遠心し、上清を除去した。
11. PBSを加え、ピペッティングにより懸濁後、300×gで5分間遠心し、上清を除去した。この操作を2回繰り返した。
12. 蛍光顕微鏡で観察、フローサイトメーターで測定した。

 脂肪酸取り込み検出キット Fatty Acid Uptake Assay Kit 同仁化学研究所

Q

プレートリーダーで測定する場合、どのプレートを使用すればよいでしょうか?

A

蛍光検出のため細胞培養用のブラックマイクロプレートをご使用ください。

〇: 使用可、×: 使用不可、△: 注釈参照

 

付着細胞

浮遊細胞

 

不透明底

プレート

透明底

プレート

不透明底

プレート

透明底

プレート

Washing Buffer (10×)

使用時

Top Reading

Bottom Reading

×

×

Quenching Buffer

使用時

Top Reading

×

×

Bottom Reading

×

×

※細胞がプレートの底を覆う程度に播種し、しばらく静置させて細胞をプレートの底に沈めることで測定することは可能です。

〈Quenching Buffer使用時、浮遊細胞のデータ〉

 脂肪酸取り込み検出キット Fatty Acid Uptake Assay Kit 同仁化学研究所

また、使用実績のあるマイクロプレートは下記の通りです。

メーカー名

製品名

Cat No.

ibidi

µPlate 96 well ibiTreat black S 15

ib89626

Thermo Fisher

96 Well Black/Clear Bottom Plate, TC Surface, Pack of 10

165305

 

Q

Fatty Acid Uptake Probe working solutionは保存可能でしょうか?

A

Fatty Acid Uptake Probe working solutionは保存できません。

Q

バックグラウンドが高い場合、どうすればいいですか?

A

細胞に取り込まれなかったFatty Acid Uptake Probeがウェル内に残存している可能性があります。Washing Buffer solutionによる洗浄を繰り返すか、Quenching Bufferの使用をご検討ください。

Q

1キットあたり測定可能なサンプル数を教えてください。

A

下記表をご参照ください。

 

付着細胞

浮遊細胞

培養器材

(添加量)

6-well

(1.5 ml/well)

24-well

(0.3 ml/well)

96-well

(0.1 ml/well)

35-mm dish

(1.5 ml/well)

1.5-ml microtube

(0.5 ml/tube)

測定可能

サンプル数

7 sample

34 sample

100 sample

7 sample

20 sample

 

Q

Quenching Bufferを使用して共焦点レーザー顕微鏡で透過光観察を行ったのですが、透過光観察ができません。どうすればいいですか?

A

Quenching Bufferを使用して共焦点レーザー顕微鏡で透過光観察を行う場合は、QuenchingBufferをWashing Buffer solutionで10倍希釈してご使用いただくか、640 nmレーザーを用いて透過光観察を行ってください。

〈共焦点レーザー顕微鏡で透過光観察を行う場合に見られる現象〉

脂肪酸取り込み検出キット Fatty Acid Uptake Assay Kit 同仁化学研究所

Q

脂肪酸を定量することはできますか?

A

本製品を用いて脂肪酸を定量することはできません。

Q

細胞内に取り込まれた色素(Fatty Acid Uptake Probe)を定量することはできますか?

A

取り込まれた色素(Fatty Acid Uptake Probe)を定量することはできません。本製品は、脂肪酸取り込み能力の増減を確認するためのキットとなります。

Q

他の蛍光色素との共染色を行うことはできますか?

A

Fatty Acid Uptake Probeは赤色蛍光への漏れ込みが僅かに観察されます。そのため、緑色および赤色蛍光検出以外の色素を用いて共染色を行って下さい。

弊社ミトコンドリア染色用色素MitoBright LT Deep Red (MT12)との共染色を行った実績がございます。

〈赤色蛍光への漏れ込み〉

脂肪酸取り込み検出キット Fatty Acid Uptake Assay Kit 同仁化学研究所

〈MitoBright LT Deep Redとの共染色プロトコル〉
1. ディッシュまたはマイクロプレートに播種した細胞を準備した。
2. 培地を除去し、無血清培地で2回洗浄した。
3. 無血清培地を添加し、インキュベーター(37℃、5%CO2存在下)で15分間静置した。
4. 上清を除去した後、Fatty Acid Uptake Probe working solutionを添加し、インキュベーター(37℃、5%CO2存在下)で15分間静置した。
5. 上清を除去した後、0.1 µmol/l MitoBright LT working solutionを添加し、インキュベーター(37℃、5%CO2存在下)で30分間静置した。
6. 上清を除去した後、HBSSを用いて2回洗浄した。
7. HBSSを添加し、蛍光顕微鏡で観察した。

 脂肪酸取り込み検出キット Fatty Acid Uptake Assay Kit 同仁化学研究所

Q

蛍光顕微鏡観察時の注意点はありますか?

A

蛍光顕微鏡観察時、励起光を照射し続けるとFatty Acid Uptake Probe由来の蛍光が退色する可能性があります。連続した励起光の照射は控えてください。

脂肪酸取り込み検出キット Fatty Acid Uptake Assay Kit 同仁化学研究所

 

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取扱条件

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保存条件: 冷蔵
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ATP測定キット ATP Assay Kit-Luminescence 同仁化学研究所

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ATP測定キット ATP Assay Kit-Luminescence 同仁化学研究所ATP Assay Kit-Luminescence

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

ATP Assay Kit-Luminescence

ATP測定キット ATP Assay Kit-Luminescence 同仁化学研究所

  • 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
  • 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
  • ミトコンドリア関連
  • 細胞内代謝

ATP測定キット

  • 安定した発光による高感度検出
  • 標準品の同梱で、不安定なATPの秤量が不要
  • 試薬を加えるだけの簡単な操作
  • 製品コード
    A550  ATP Assay Kit-Luminescence
容 量 メーカー希望
小売価格
富士フイルム
和光純薬
50 tests ¥26,800 346-09793
200 tests ¥48,200 340-09791
キット内容
50 tests ・Enzyme Solution
・Substrate
・Assay Buffer
・ATP Standard
10 μl×1
×1
5.5 ml×1
×1
200 tests ・Enzyme Solution
・Substrate
・Assay Buffer
・ATP Standard
20 μl×2
×2
11 ml×2
×1

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技術情報

ATPの測定原理

ATP Assay Kit-Luminescenceは、培養細胞中のアデノシン三リン酸(ATP)量をホタル・ルシフェラーゼ発光法で定量するキットです。
本キットではマイクロプレートを用いた多検体測定が可能です。

ATP測定キット ATP Assay Kit-Luminescence 同仁化学研究所

参考文献

参考文献を表示する

 

文献No. 対象サンプル 装置    引用(リンク)
1) 細胞
DLD-1 (ヒト結腸腺癌)
プレートリーダー

G. Enkhbat, A. Nakanishi, Y. Miki, "The BRCA2 missense mutation K2497R suppressed self-degradation and increased ATP production and cell proliferation", 2021, doi:10.1016/j.bbrc.2021.12.073.

よくある質問

Q

1キットで測定可能なサンプル数を教えて下さい

A

検量線の作成およびサンプルの測定をそれぞれn=3で行った場合、以下のサンプル数を測定できます。
96ウェルプレートのレイアウト例については、取扱説明書をご参照ください。
 ・50 tests :8サンプル
 ・200 tests:48サンプル(96 ウェルプレート2枚で検量線を2回測定した場合)

Q

発光シグナルはどの程度安定ですか?

A

発光シグナルは3時間安定です。ただし、温度と光が発光に影響しますので、すぐに測定できない場合は、遮光し温度を一定(25℃付近)に保てる場所で静置してください。

Q

測定用のプレートは白色以外のプレートを使用できますか?

A

測定はできますが、ブラックプレートや透明プレートを用いた場合、発光強度が下がります。
また、透明プレートの場合はブランクが高くなりますので、白色プレートを推奨しております。

Q

測定試料は保存できますか?

A

ATPが不安定なため保存できません。実験後は直ぐにWorking solutionを添加し、3時間以内に測定してください。

Q

Working solutionは保存できますか?

A

冷凍(-20℃)で30日間の保存が可能です。
凍結融解を繰り返すことは試薬の劣化を招く恐れがありますので、その場合はあらかじめ小分けしてから保存することをお勧めします。

Q

組織を用いた実験例はありますか?

A

マウス肝臓組織を用いてATPおよびNAD/NADH量を測定した事例がございます。
実験操作の詳細は下記をご参照ください。

アルカリ抽出法による肝臓サンプルからの代謝指標の抽出

1. マウス肝臓100 mgあたり500 µlの冷えた0.5 mol/l KOH水溶液を入れる。
 *使用する組織は必ず灌流操作等で十分に脱血してください。血液の残存は測定に影響を与えます。

2. ダウンス型ホモジナイザーで組織を破砕する。
 *氷浴上で行ってください。

3. サンプルを回収し、サンプルチューブに移す。破砕に使用した容器を500 µlの冷えた0.5 mol/l KOH水溶液で共洗いし、チューブ内のサンプルと合わせる。
 (全量 1 ml)

4. 冷えた超純水 1 mlをサンプルチューブに加え、よく混合し氷上で5分間静置する。(全量 2 ml)
 *溶液の粘性が高いと、次操作の遠心後の分離が困難になる場合があります。その際は、シリンジに25 G(針のゲージ数)程度の細い針を付け、サンプル溶液をシリンジでスムーズに出し入れができるまで(20-30回)混合してください。

5. 12,000 x g , 4℃で5分間遠心し、上清を900 µlずつ二つのサンプルチューブに回収する。
 *1本をATP測定、もう1本をNAD/NADH測定に使用。ATPのみを測定する場合は900 μlx1本のみで構いません。

 

ATP測定用サンプルの調製
6. 上記5. で調製した900 µlのサンプルに200 µl の1 mol/l KH2PO4水溶液を入れ中和し、よく混合後氷上で5分間静置する。

7. 12,000 x g , 4℃で5分間遠心し、上清1 mlをサンプルチューブに回収し測定用サンプルとする。

 

<測定時の注意点>
*操作5、7で得たサンプルは保存できません。その日のうちに測定してください。
*スタンダード、サンプルの希釈には希釈用溶液として0.5 mol/l KOH水溶液と1 mol/l KH2PO4水溶液を9:5の比率で混合したものを使用してください。

<測定例>
NASH誘導マウス肝臓組織におけるATP量の変化

ATP測定キット ATP Assay Kit-Luminescence 同仁化学研究所

ATP測定キット ATP Assay Kit-Luminescence 同仁化学研究所

 

Q

発光測定の波長を教えてください。

A

本キットには、ホタルルシフェリンを使用しているため、発光測定の波長は556nmとなります。

ATP測定キット ATP Assay Kit-Luminescence 同仁化学研究所 ATP測定キット ATP Assay Kit-Luminescence 同仁化学研究所

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷凍 , 取扱条件: 吸湿注意
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ATP測定キット ATP Assay Kit-Luminescence 同仁化学研究所

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    ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA-

ADP/ATP比測定キット ADP/ATP Ratio Assay Kit-Luminescence 同仁化学研究所

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ADP/ATP比測定キット ADP/ATP Ratio Assay Kit-Luminescence 同仁化学研究所ADP/ATP Ratio Assay Kit-Luminescence

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

ADP/ATP Ratio Assay Kit-Luminescence

ADP/ATP比測定キット ADP/ATP Ratio Assay Kit-Luminescence 同仁化学研究所

  • 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
  • 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
  • ミトコンドリア関連
  • 細胞内代謝
  • 細胞毒性

ADP/ATP比測定キット

  • 安定したADP/ATPの値が取得可能
  • 調液後、保存可能
  • 冷蔵保存(凍結融解不要)
  • 製品コード
    A552  ADP/ATP Ratio Assay Kit-Luminescence
容 量 メーカー希望
小売価格
富士フイルム
和光純薬
100 tests ¥53,500 346-09911

<使用回数の目安> 96-well plate 1枚

アプリケーションデータ追加してます!
アポトーシス誘導におけるADP/ATP比の変動
老化誘導におけるADP/ATP比の変動

キット内容
100 tests ・ATP Enzyme Solution
・ATP Substrate
・Assay Buffer
・ADP Enzyme Solution
・ADP Substrate
・ADP Dilution Buffer
20 ×l×1
×1
11 ml×1
25 ×l×1
×1
250 ×l×1

  • ADP/ATP比測定キット ADP/ATP Ratio Assay Kit-Luminescence 同仁化学研究所
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マニュアル

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技術情報

既存品との比較

他社既存品との比較を下記表にまとめます。

ADP/ATP比測定キット ADP/ATP Ratio Assay Kit-Luminescence 同仁化学研究所

本キットは、既存品に比べATPとADPの総量に依存せず、比率を安定的に測定することが可能です。

ADP/ATP比測定キット ADP/ATP Ratio Assay Kit-Luminescence 同仁化学研究所

よくある質問

Q

1キットあたり測定可能なサンプル数を教えて下さい。

A

サンプルの測定をn=3で行った場合、32サンプルの測定が可能です。96ウェルプレートのレイアウト例については、取扱説明書をご参照下さい。

Q

測定用のプレートは白色以外のプレートを使用できますか?

A

ブラックプレートや透明プレートを用いた場合、発光強度が下がります。また、透明プレートの場合はブランクが高くなります。よって、白色プレートを推奨致します。

Q

working solutionは保存できますか?

A

本キットには4種類のworking solutionがございます。ADP working solutionは保存できないため、用時調製して下さい。その他の3種類に関して、保存条件と保存可能期間は以下の通りです。

 

保存条件

保存期間

ATP working solution

冷凍(-20℃)

30日間

ADP Substrate working solution

冷蔵(0-5℃)

30日間

ADP Enzyme working solution

冷蔵(0-5℃)

30日間

ADP working solution

保存不可

保存不可

Q

細胞数の最適化の方法を教えて下さい。

A

段階希釈した細胞をプレートに播種し、目的実験と同様の条件で培養します。その後、本キットを用いて検量線(図1参照)を作成しその結果、直線性がある範囲であり、ADP/ATP 比率(図2参照)が一定となる細胞数範囲内で測定を行って下さい。下記の例の場合、細胞数範囲は2,000~4,000 cellsとなります。

ADP/ATP比測定キット ADP/ATP Ratio Assay Kit-Luminescence 同仁化学研究所ADP/ATP比測定キット ADP/ATP Ratio Assay Kit-Luminescence 同仁化学研究所

ADP/ATP比測定キット ADP/ATP Ratio Assay Kit-Luminescence 同仁化学研究所 ADP/ATP比測定キット ADP/ATP Ratio Assay Kit-Luminescence 同仁化学研究所

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷蔵 , 取扱条件: 吸湿注意
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細胞周期測定試薬 Cell Cycle Assay Solution Deep Red 同仁化学研究所

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細胞周期測定試薬 Cell Cycle Assay Solution Deep Red 同仁化学研究所Cell Cycle Assay Solution Deep Red

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

Cell Cycle Assay Solution Deep Red

細胞周期測定試薬 Cell Cycle Assay Solution Deep Red 同仁化学研究所

  • 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
  • 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
  • 細胞機能解析
  • 細胞周期

細胞周期測定試薬

  • 細胞の固定化、RNase 処理が不要、試薬を添加するだけ
  • 633 nm のレーザーで励起が可能
  • 製品コード
    C548  Cell Cycle Assay Solution Deep Red
容 量 メーカー希望
小売価格
富士フイルム
和光純薬
50 tests ¥13,900 348-09591
キット内容
50 tests Cell Cycle Assay Solution Deep Red 250 ×l×1

  • 細胞周期測定試薬 Cell Cycle Assay Solution Deep Red 同仁化学研究所
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マニュアル

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技術情報

測定の手間を大幅に削減

フローサイトメーターでの細胞周期測定で一般的に使用されるPropidium Iodide (PI) を用いた手法と比較して、本製品は細胞膜透過性があり、かつDNA 選択性が高い色素を使用しているため、細胞懸濁液に試薬を添加するだけで測定が可能です。また、633 nm のレーザーで測定可能なため、汎用性の高い488 nm のレーザーを用いた実験と併用することが可能です。

細胞周期測定試薬 Cell Cycle Assay Solution Deep Red 同仁化学研究所

実験例:抗がん剤による細胞機能の変化

細胞周期のG2/M 期に作用して細胞増殖を停止させ、細胞老化を誘導することが知られているDoxorubicin(DOX) をA549 細胞へ添加後、本製品でA549 細胞における細胞周期の変化と、Cellular Senescence Detection Kit – SPiDER-βGal(製品コード:SG03)で細胞老化、JC-1 MitoMP Detection Kit (製品コード:MT09)でミトコンドリア膜電位の変化を確認しました。

細胞周期測定試薬 Cell Cycle Assay Solution Deep Red 同仁化学研究所
細胞周期測定試薬 Cell Cycle Assay Solution Deep Red 同仁化学研究所 細胞周期測定試薬 Cell Cycle Assay Solution Deep Red 同仁化学研究所
細胞周期測定試薬 Cell Cycle Assay Solution Deep Red 同仁化学研究所

技術や使用製品に関する補足

  • 細胞周期測定試薬 Cell Cycle Assay Solution Deep Red 同仁化学研究所

    ミトコンドリア膜電位検出キット

    JC-1 MitoMP Detection Kit

  • 細胞周期測定試薬 Cell Cycle Assay Solution Deep Red 同仁化学研究所

    老化細胞検出キット

    Cellular Senescence Detection Kit – SPiDER-βGal

参考文献

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文献No. 対象サンプル 引用(リンク)
1) 細胞
(HCAECs)
N. Sasaki, Y. Itakura and M. Toyoda, "Rapamycin promotes endothelial-mesenchymal transition during stress-induced premature senescence through the activation of autophagy”, Cell Commun. Signal, 2020, 18(1), 43
2) 細胞
(ARPE-19)
T. Yamazaki, H. Suzuki, S. Yamada, K. Ohshio, M. Sugamata, T. Yamada and Y. Morita, "Lactobacillus paracasei KW3110 Suppresses Inflammatory Stress-Induced Premature Cellular Senescence of Human Retinal Pigment Epithelium Cells and Reduces Ocular Disorders in Healthy Humans”, Int J Mol Sci, 2020, 21(14), 5091
3) 細胞
(MIA PaCa-2)
N. Sasaki, F. Gomi, F. Hasegawa, K. Hirano, M. Fujiwara, M. Toyoda and T. Ishiwata, "Characterization of the metastatic potential of the floating cell component of MIA PaCa-2, a human pancreatic cancer cell line”, Biochem. biophys. res. commun, 2020, 522(4), 881-888
4) 細胞
(ヒト小気道上皮細胞)
M. Komura, T. Sata, H. Yoshikawa, N. A. Nitta, Y. Suzuki, K KOike, Y. Kodama, K. Seyama and K. Takahashi, "Propylene glycol, a component of electronic cigarette liquid, damages epithelial cells in human small airways", 2022,  Respir. Res., doi:10.1186/s12931-022-02142-2.

よくある質問

Q

浮遊細胞と接着細胞のどちらも測定できますか?

A

浮遊細胞、接着細胞の両方で使用可能です。

Q

トリプシンは測定に影響しますか?

A

トリプシンが残存すると測定に影響します。
トリプシンを用いた細胞の回収後は、プロトコルに従い染色前の洗浄操作を確実に行ってください。

トリプシンの影響を確認した実験例を以下に掲載します。
細胞周期測定試薬 Cell Cycle Assay Solution Deep Red 同仁化学研究所

Q

細胞表面抗原の免疫染色とCell Cycle Assay Solutionの共染色はできますか?

A

Cell Cycle Assay Solution中の添加剤が免疫検出系に影響するため、共染色は出来ません。

Q

細胞の固定化は必要ですか?

A

 未固定および固定化した細胞の両方に使用できます。

Q

固定化細胞を保存して測定する場合、染色は保存する前と後のどちらが良いですか?

A

どちらも染色できます。小社では以下の条件で染色した実績がございます。
固定化細胞を保存する前後で染色した各サンプルをフローサイトメトリーで測定したところ、結果に変化は見られませんでした。

・固定化細胞を冷蔵(4℃)で1週間保存し、取扱説明書に従って細胞を染色した。
・固定化細胞を取扱説明書に従って染色し、細胞を冷蔵(4℃)で1週間保存した。

冷凍で細胞を保存すると不溶物が析出する可能性があるため、冷凍での保存はお勧めできません。
 

Q

Cell Cycle Assay Solutonで染色後、過剰な試薬を除くために細胞を洗浄してもいいですか?

A

染色後の洗浄はお勧めしません。
洗浄時の遠心操作により、細胞周期解析に適切なヒストグラムが得られない可能性があります。

Q

フローサイトメトリーを行う際は、どのような点に注意すべきでしょうか?

A

フローサイトメトリーを行う際は、最適な条件で測定を行う必要があります。
以下で実際にお客様から寄せられた測定時の失敗例をご紹介します。

 

①フィルターが測定条件に合っていない。
例えばフローサイトメーターでの細胞周期測定で一般的に使用されるPropidium Iodide (PI)法で使用するフィルターを用いた場合、
電圧の設定に関わらず、良好なヒストグラムが得られません。

測定には以下のフィルターをご利用下さい。

細胞周期測定試薬 Cell Cycle Assay Solution Deep Red 同仁化学研究所

細胞周期測定試薬 Cell Cycle Assay Solution Deep Red 同仁化学研究所

 

②測定電圧が適切でない。
例えばフローサイトメーターの電圧が高すぎる(または低すぎる)場合、良好なヒストグラムが得られません。
ヒストグラムでG0/G1期、S期、G2/M期が明瞭となる測定電圧に調整してください。
細胞周期測定試薬 Cell Cycle Assay Solution Deep Red 同仁化学研究所

 

③細胞のゲーティングが適切でない。
例えば解析時のゲーティングが不適切な場合、良好なヒストグラムが得られません。
解析時には細胞全体をゲーティングするようにしてください。
細胞周期測定試薬 Cell Cycle Assay Solution Deep Red 同仁化学研究所

Q

試薬添加後に凝集物が見られました。どうすればよいですか?

A

細胞によっては、細胞数が多いと下記のような凝集物が見られる場合があります。
その場合、細胞数を減らして(目安:0.25-1×105 cells/ml)試薬を添加し、速やかに測定を行ってください。
細胞周期測定試薬 Cell Cycle Assay Solution Deep Red 同仁化学研究所

*写真下の細胞数は、取扱説明書の操作1における細胞数を示しています。

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取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷凍,遮光
危険・有害
シンボルマーク
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    老化細胞検出キット

    Cellular Senescence Detection Kit – SPiDER-βGal

  • 細胞周期測定試薬 Cell Cycle Assay Solution Deep Red 同仁化学研究所

    DNAダメージ検出抗体

    DNA Damage Detection Kit – γH2AX - Green

  • 細胞周期測定試薬 Cell Cycle Assay Solution Deep Red 同仁化学研究所

    グルタチオン定量キット

    GSSG/GSH Quantification Kit

細胞周期測定試薬 Cell Cycle Assay Solution Blue 同仁化学研究所

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品,欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

細胞周期測定試薬 Cell Cycle Assay Solution Blue 同仁化学研究所Cell Cycle Assay Solution Blue

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

Cell Cycle Assay Solution Blue

細胞周期測定試薬 Cell Cycle Assay Solution Blue 同仁化学研究所

  • 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
  • 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
  • 細胞機能解析
  • 細胞周期

細胞周期測定試薬

  • 細胞の固定化、RNase 処理が不要、試薬を添加するだけ
  • 405 nm のレーザーで励起が可能
  • 製品コード
    C549  Cell Cycle Assay Solution Blue
容 量 メーカー希望
小売価格
富士フイルム
和光純薬
50 tests ¥13,900 341-09601
キット内容
50 tests Cell Cycle Assay Solution Blue 250 μl×1

  • 細胞周期測定試薬 Cell Cycle Assay Solution Blue 同仁化学研究所
試験成績書

SDSダウンロード

  • ご購入方法
  • お問い合わせ

マニュアル

  • 取扱説明書 日本語
    細胞周期測定試薬 Cell Cycle Assay Solution Blue 同仁化学研究所
  • Manual English
    細胞周期測定試薬 Cell Cycle Assay Solution Blue 同仁化学研究所

技術情報

測定の手間を大幅に削減

フローサイトメーターでの細胞周期測定で一般的に使用されるPropidium Iodide (PI) を用いた手法と比較して、本製品は細胞膜透過性があり、かつDNA 選択性が高い色素を使用しているため、細胞懸濁液に試薬を添加するだけで測定が可能です。また、405 nm のレーザーで測定可能なため、汎用性の高い488 nm のレーザーを用いた実験と併用することが可能です。

細胞周期測定試薬 Cell Cycle Assay Solution Blue 同仁化学研究所

実験例:抗がん剤による細胞機能の変化

細胞周期のG2/M 期に作用して細胞増殖を停止させ、細胞老化を誘導することが知られているDoxorubicin(DOX) をA549 細胞へ添加後、本製品でA549 細胞における細胞周期の変化と、Cellular Senescence Detection Kit – SPiDER-βGal(製品コード:SG03)で細胞老化、JC-1 MitoMP Detection Kit (製品コード:MT09)でミトコンドリア膜電位の変化を確認しました。

細胞周期測定試薬 Cell Cycle Assay Solution Blue 同仁化学研究所
細胞周期測定試薬 Cell Cycle Assay Solution Blue 同仁化学研究所 細胞周期測定試薬 Cell Cycle Assay Solution Blue 同仁化学研究所
細胞周期測定試薬 Cell Cycle Assay Solution Blue 同仁化学研究所

技術や使用製品に関する補足

  • 細胞周期測定試薬 Cell Cycle Assay Solution Blue 同仁化学研究所

    ミトコンドリア膜電位検出キット

    JC-1 MitoMP Detection Kit

  • 細胞周期測定試薬 Cell Cycle Assay Solution Blue 同仁化学研究所

    老化細胞検出キット

    Cellular Senescence Detection Kit – SPiDER-βGal

参考文献

参考文献を表示する

 

文献No. 対象サンプル 引用(リンク)
1) 細胞
(PC-9, A549)
K. Tsuchiya, K. Yoshimura, Y. Iwashita, Y. Inoue, T. Ohta, H. Watanabe, H. Yamada, A. Kawase, M. Tanahashi, H. Ogawa, K. Funai, K. Shinmura, T. Suda and H. Sugimura, "m6 A demethylase ALKBH5 promotes tumor cell proliferation by destabilizing IGF2BPs target genes and worsens the prognosis of patients with non-small-cell lung cancer", Cancer Gene Ther.,  2022, doi:10.1038/s41417-022-00451-8.

よくある質問

Q

浮遊細胞と接着細胞のどちらも測定できますか?

A

 浮遊細胞、接着細胞の両方で使用可能です。

Q

トリプシンは測定に影響しますか?

A

トリプシンが残存すると測定に影響します。
トリプシンを用いた細胞の回収後は、プロトコルに従い染色前の洗浄操作を確実に行ってください。

トリプシンの影響を確認した実験例を以下に掲載します。
細胞周期測定試薬 Cell Cycle Assay Solution Blue 同仁化学研究所

Q

細胞表面抗原の免疫染色とCell Cycle Assay Solutionの共染色はできますか?

A

Cell Cycle Assay Solution中の添加剤が免疫検出系に影響するため、共染色は出来ません。

Q

細胞の固定化は必要ですか?

A

未固定および固定化した細胞の両方に使用できます。

Q

固定化細胞を保存して測定する場合、染色は保存する前と後のどちらが良いですか?

A

どちらも染色できます。小社では以下の条件で染色した実績がございます。
固定化細胞を保存する前後で染色した各サンプルをフローサイトメトリーで測定したところ、結果に変化は見られませんでした。

・固定化細胞を冷蔵(4℃)で1週間保存し、取扱説明書に従って細胞を染色した。
・固定化細胞を取扱説明書に従って染色し、細胞を冷蔵(4℃)で1週間保存した。

冷凍で細胞を保存すると不溶物が析出する可能性があるため、冷凍での保存はお勧めできません。
 

Q

Cell Cycle Assay Solutonで染色後、過剰な試薬を除くために細胞を洗浄してもいいですか?

A

染色後の洗浄はお勧めしません。
洗浄時の遠心操作により、細胞周期解析に適切なヒストグラムが得られない可能性があります。

Q

フローサイトメトリーを行う際は、どのような点に注意すべきでしょうか?

A

フローサイトメトリーを行う際は、最適な条件で測定を行う必要があります。
以下で実際にお客様から寄せられた測定時の失敗例をご紹介します。

 

①フィルターが測定条件に合っていない。
例えばフローサイトメーターでの細胞周期測定で一般的に使用されるPropidium Iodide (PI)法で使用するフィルターを用いた場合、
電圧の設定に関わらず、良好なヒストグラムが得られません。

測定には以下のフィルターをご利用下さい。
細胞周期測定試薬 Cell Cycle Assay Solution Blue 同仁化学研究所

細胞周期測定試薬 Cell Cycle Assay Solution Blue 同仁化学研究所

 

②測定電圧が適切でない。
例えばフローサイトメーターの電圧が高すぎる(または低すぎる)場合、良好なヒストグラムが得られません。
ヒストグラムでG0/G1期、S期、G2/M期が明瞭となる測定電圧に調整してください。
細胞周期測定試薬 Cell Cycle Assay Solution Blue 同仁化学研究所

 

③細胞のゲーティングが適切でない。
例えば解析時のゲーティングが不適切な場合、良好なヒストグラムが得られません。
解析時には細胞全体をゲーティングするようにしてください。
細胞周期測定試薬 Cell Cycle Assay Solution Blue 同仁化学研究所

Q

試薬添加後に凝集物が見られました。どうすればよいですか?

A

細胞によっては、細胞数が多いと下記のような凝集物が見られる場合があります。
その場合、細胞数を減らして(目安:0.25-1×105 cells/ml)試薬を添加し、速やかに測定を行ってください。

細胞周期測定試薬 Cell Cycle Assay Solution Blue 同仁化学研究所

*写真下の細胞数は、取扱説明書の操作1における細胞数を示しています。

細胞周期測定試薬 Cell Cycle Assay Solution Blue 同仁化学研究所 細胞周期測定試薬 Cell Cycle Assay Solution Blue 同仁化学研究所

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷凍
危険・有害
シンボルマーク
細胞周期測定試薬 Cell Cycle Assay Solution Blue 同仁化学研究所細胞周期測定試薬 Cell Cycle Assay Solution Blue 同仁化学研究所
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細胞周期測定試薬 Cell Cycle Assay Solution Blue 同仁化学研究所

関連製品

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    ミトコンドリア膜電位検出キット

    JC-1 MitoMP Detection Kit

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    老化細胞検出キット

    Cellular Senescence Detection Kit – SPiDER-βGal

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    DNAダメージ検出抗体

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    グルタチオン定量キット

    GSSG/GSH Quantification Kit

グルコース測定キット Glucose Assay Kit-WST 同仁化学研究所

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グルコース測定キット Glucose Assay Kit-WST 同仁化学研究所Glucose Assay Kit-WST

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

Glucose Assay Kit-WST

グルコース測定キット Glucose Assay Kit-WST 同仁化学研究所

  • 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
  • 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
  • 細胞機能解析
  • 細胞内代謝

グルコース測定キット

  • 細胞培養上清のグルコースを測定可能
  • マイクロプレートを使った多検体処理が可能
  • 製品コード
    G264  Glucose Assay Kit-WST
容 量 メーカー希望
小売価格
富士フイルム
和光純薬
50 tests ¥19,900 342-09413
200 tests ¥41,900 346-09411
キット内容
50 tests ・Dye Mixture
・Glucose Standard
・Enzyme
・Assay Buffer
・Reconstitution Buffer
×1
150 μl×1
×1
3.5 ml×1
350 μl×1
200 tests ・Dye Mixture
・Glucose Standard
・Enzyme
・Assay Buffer
・Reconstitution Buffer
×1
600 μl×1
×1
14 ml×1
1.4 ml×1

  • グルコース測定キット Glucose Assay Kit-WST 同仁化学研究所
試験成績書

SDSダウンロード

  • ご購入方法
  • お問い合わせ

マニュアル

  • 取扱説明書 日本語
    グルコース測定キット Glucose Assay Kit-WST 同仁化学研究所
  • Manual English
    グルコース測定キット Glucose Assay Kit-WST 同仁化学研究所

Glucose Assay Kit-WST の使い方

技術情報

グルコースの検出原理

本キットは、グルコース量に応じ発色したWSTホルマザンを吸光度測定することで、細胞培養上清のグルコースを検出することができます。またキットにはグルコース標準液が含まれており、標準曲線を作成しサンプル中のグルコース濃度を測定することができます。

グルコース測定キット Glucose Assay Kit-WST 同仁化学研究所
*細胞培養上清以外のサンプルについては、よくある質問 培養上清以外で実績のあるサンプルを教えてください。をご参照ください。

技術や使用製品に関する補足

グルコース測定キット Glucose Assay Kit-WST 同仁化学研究所学会発表ポスター

WSTを用いた細胞の代謝解析

グルコース測定キット Glucose Assay Kit-WST 同仁化学研究所

グルコース及び乳酸の測定例

グルコーストランスポーター阻害剤である Phloretin をJurkat 細胞に加えた際の代謝活性の変化をGlucose Assay Kit-WST 及びLactate Assay Kit-WST にて確認しました。

グルコース測定キット Glucose Assay Kit-WST 同仁化学研究所

技術や使用製品に関する補足

本キット使用時の注意点:細胞数の補正をお勧めします。

マイクロプレートを用いた細胞の解析では、得られる結果がウェル中の細胞数によって変化する場合があります。その際には、細胞数のカウントやトータルタンパク質量の確認により、得られた測定値の補正(ノーマライゼーション)が必要となります。本キットでは、試薬を細胞培養液に添加するだけで、細胞内の核を染色し得られる蛍光強度から、細胞数を簡便に評価することができます。
細胞数ノーマライゼーションキットはこちらから

グルコース測定キット Glucose Assay Kit-WST 同仁化学研究所

参考文献

参考文献を表示する

 

文献No. 対象サンプル 引用(リンク)
1) 血清
(マウス)
M. Shinohara, Y. Tashiro, M. Shinohara, J. Hirokawa, K. Suzuki, M. O. Takeya, M. Mukouzono, S. Takeda, T. Saito, A. Fukumori, T. C. Saido, R. Morishita and N. Sato, "Increased levels of Aβ42 decrease the lifespan of ob/ob mice with dysregulation of microglia and astrocytes”, FASEB J., 2019,DOI: 10.1096/fj.201901028RR
2) 微生物
Streptomyces albulus )
K. Yamanaka, Y. Hamano and T. Oikawa, "Enhancement of metabolic flux toward ε-poly-l-lysine biosynthesis by targeted inactivation of concomitant polyene macrolide biosynthesis in Streptomyces albulus.”, J. Biosci. Bioeng., 2020,DOI: 10.1016/j.jbiosc.2019.12.002
3) 細胞
(HCT116)

K. Ohshima, S. Nojima, S. Tahara, M. Kurashige, K. Kawasaki, Y. Hori, M. Taniguchi, Y. Umakoshi, D. Okuzaki, N. Wada, J. Ikeda, E. Fukusaki and E. Morii, "Serine racemase enhances growth of colorectal cancer by producing pyruvate from serine”, Nat Metab, 20202(1), 81

4) 細胞
(P388白血病)

T. Matsuo, Y. Konya, E. Hirayama and Y. Sadzuka , "2-Deoxy-D-glucose enhances the anti-cancer effects of idarubicin on idarubicin-resistant P388 leukemia cells”, Oncol Lett , 202020(1), 962-966

5) 細胞
(マウス:精子)

M. Hashimoto, S. Kimura, C. Kanno, Y. Yanagawa, T. Watanabe, J. Okabe, E. Takahashi, M. Nagano and H. Kitamura, "Macrophage ubiquitin‑specific protease 2 contributes to motility, hyperactivation, capacitation, and in vitro fertilization activity of mouse sperm”, Cellular and Molecular Life Sciences, 2020, doi: 10.1007/s00018-020-03683-9

6) 細胞
(マクロファージ)

N. Saeki and Y. Imai, "Reprogramming of synovial macrophage metabolism by synovial fbroblasts under infammatory conditions ”, Cell Commun Signal, 2020, 18, 188

 *細胞培養上清以外のサンプルについては、よくある質問  細胞培養上清以外で実績のあるサンプルを教えてください。をご確認ください。

よくある質問

Q

測定可能なサンプル数を教えて下さい。

A

検量線の作成およびサンプルの測定をそれぞれn=3で行った場合、下記表に記載のサンプル数を測定頂けます。

グルコース測定キット Glucose Assay Kit-WST 同仁化学研究所
※検量線作成:8点(0, 0.00785, 0.0157, 0.0313, 0.0625, 0.125, 0.25, 0.5 mmol/l)をn=3で評価。

グルコース測定キット Glucose Assay Kit-WST 同仁化学研究所
Glucose standard solutionとサンプルのレイアウト例(n=3)

Q

450 nm以外の吸収フィルターで測定できますか?

A

490 nmのフィルターでも使用できます。
ただし、吸光度の値は450 nmで測定した場合よりも低くなります。

Q

細胞培養上清以外で実績のあるサンプルを教えてください。

A

細胞内のグルコースを測定した実績がございます。
操作の詳細は、よくある質問「細胞内グルコース測定はできますか?」をご参照ください。
その他のサンプルについては実績がございません。

Q

細胞内のグルコース測定はできますか?

A

細胞内グルコース測定は可能です。
「0.1% Triton X-100 水溶液」と「限外ろ過膜フィルター(分画分子量:10K)」が必要です。
下記のサンプル調製手順を参照ください。

(1) 細胞*1を1.5 mlマイクロチューブに回収する。
※測定に必要な細胞数は、細胞種により検討が必要です。HepG2細胞およびJurkat細胞での
    測定実績を下記図に示しておりますので参照ください。
(2) 300 x gで5分間遠心し、上澄みを除去する。
(3) 冷PBS 300 µlを加え、ピペッティングにより懸濁後、300 x gで5分間遠心し、上澄みを除去する。
(4) 細胞溶解液*2(0.1% Triton X-100 水溶液)を250 µlを加え、ピペッティングにより細胞を溶解した後、
12,000 x gで5分間遠心する。
(5) 操作(4)の上清200 µlを限外ろ過膜フィルター(分画分子量:10K)に移し、12,000x gで10分間遠心する。
※測定用サンプルはn=3で測定する場合、合計150 µl以上は必要です(1ウェルあたり50 µl×3ウェル分)。
※遠心後の濾液が150 µl以上ない場合は、遠心時間を延長して下さい。
(6) 操作(5)で得られた濾液を測定サンプルとする。
その後、キット付属の取扱説明書に従い、グルコース濃度を測定する。
※測定試料は、検量線範囲内(0-0.5 mmol/l)に入るように適宜細胞溶解液で希釈し、測定に用いて下さい。

*10.02 mmol/l以上のグルコースを検出するためにはHepG2細胞の場合、1×105 cells以上、
 Jurkat細胞の場合、2×106 cells以上必要。
*2細胞溶解液にSDSを含むと発色を阻害するため、SDSを含むバッファーの使用はできません。

グルコース測定キット Glucose Assay Kit-WST 同仁化学研究所 グルコース測定キット Glucose Assay Kit-WST 同仁化学研究所

Q

2-Deoxy-D-glucoseも検出されますか?

A

本キットでは、2-Deoxy-D-glucoseもグルコースとして検出されます。

Q

L-Glucoseの測定はできますか?

A

本製品はβ-D-Glucose測定用となりますので、L-Glucoseの測定はできません。

Q

Working solutionはどのくらい安定ですか?

A

Working solutionは保存できないので、用時調製して下さい。
Working solutionは光に不安定なため、調製後は遮光して下さい。遮光下室温にて4時間安定です。
(Working solutionを光に暴露させると溶液の色が赤色から橙色に変化し、バックグラウンドが上昇します)

Q

還元物質を含むサンプルは測定できますか?

A

サンプル中に還元性の物質が含まれると、色素(WST)が誤発色して正確なグルコース濃度を測定できません。
還元性を持つ薬剤を培地に添加して実験を行う場合は、バックグラウンドコントロールとして「細胞を含まない培地」+「薬剤のみ」を同時に評価し、検量線およびサンプルの吸光度から試薬ブランクとして差し引いてください。

Q

発色反応が進まない場合の原因を教えて下さい。

A

測定試料に含まれるグルコース濃度が、0.02 mmol/lより低い可能性があります。
グルコース濃度が0.02 mmol/l以下の測定試料は本キットでは定量できませんので、LC-MSなど他の方法をご検討下さい。
なお、測定試料を希釈している場合は、希釈倍率を下げ、グルコース濃度を定量可能範囲以上に調整してください。

Q

測定試料は保存できますか?

A

保存できます。
細胞培養上清サンプルの場合、冷凍(-20℃)で3週間、細胞ライセートサンプルの場合は、冷凍(-20℃)で1ヶ月保存可能であることを確認しております。
ただし、細胞ライセートサンプルの場合は、除タンパク処理 *を行って下さい。
( *よくある質問「細胞内のグルコース測定はできますか?」操作5)の溶液を保存してください。)

グルコース測定キット Glucose Assay Kit-WST 同仁化学研究所 グルコース測定キット Glucose Assay Kit-WST 同仁化学研究所

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷蔵,遮光 , 取扱条件: 吸湿注意
SDSダウンロード
グルコース測定キット Glucose Assay Kit-WST 同仁化学研究所

関連製品

この製品に関連する研究では、下記の関連製品も使われています。

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    細胞数ノーマライゼーションキット

    Cell Count Normalization Kit

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    乳酸測定キット

    Lactate Assay Kit-WST

  • グルコース測定キット Glucose Assay Kit-WST 同仁化学研究所

    ミトコンドリア膜電位検出キット

    JC-1 MitoMP Detection Kit

  • グルコース測定キット Glucose Assay Kit-WST 同仁化学研究所

    老化細胞検出キット

    Cellular Senescence Detection Kit – SPiDER-βGal

グルタミン測定キット Glutamine Assay Kit-WST 同仁化学研究所

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品,欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

グルタミン測定キット Glutamine Assay Kit-WST 同仁化学研究所Glutamine Assay Kit-WST

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

Glutamine Assay Kit-WST

グルタミン測定キット Glutamine Assay Kit-WST 同仁化学研究所

  • 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
  • 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
  • 細胞機能解析
  • 細胞内代謝

グルタミン測定キット

  • 製品コード
    G268  Glutamine Assay Kit-WST
容 量 メーカー希望
小売価格
富士フイルム
和光純薬
100 tests ¥58,900 348-09611
キット内容
100 tests ・Dye Mixture
・Glutamine Standard 
・Enzyme 
・Assay Buffer          
・Reconstitution Buffer    
・lysis Buffer
・Glutaminase  
・Reaction Buffer  
・Filtration Tube   
×1
×1
×1
7.5 ml×1
750 ×l×1
25 ml×1
20 ×l×1
5 ml×1
×12

  • グルタミン測定キット Glutamine Assay Kit-WST 同仁化学研究所
試験成績書

SDSダウンロード

  • ご購入方法
  • お問い合わせ

マニュアル

  • 取扱説明書 日本語
    グルタミン測定キット Glutamine Assay Kit-WST 同仁化学研究所
  • Manual English
    グルタミン測定キット Glutamine Assay Kit-WST 同仁化学研究所
  • パンフレット グルタミン測定キット Glutamine Assay Kit-WST 同仁化学研究所
    グルタミン測定キット Glutamine Assay Kit-WST 同仁化学研究所

技術情報

グルタミンの測定原理

本キットは、グルタミン量に応じ発色したWSTホルマザンを吸光度測定することで、細胞培養液や細胞内のグルタミンを検出することができます。またキットにはグルタミン標準液が含まれており、標準曲線を作成しサンプル中のグルタミン濃度を定量することができます。

グルタミン測定キット Glutamine Assay Kit-WST 同仁化学研究所

技術や使用製品に関する補足

グルタミン測定キット Glutamine Assay Kit-WST 同仁化学研究所学会発表ポスター

WSTを用いた細胞の代謝解析

グルタミン測定キット Glutamine Assay Kit-WST 同仁化学研究所

参考文献

参考文献を表示する
文献No. 対象サンプル 引用(リンク)
1 細胞
(マクロファージ)
N. Saeki and Y. Imai, "Reprogramming of synovial macrophage metabolism by synovial fibroblasts under inflammatory conditions ”, Cell Commun Signal, 202018, 188.
2 細胞
(去勢抵抗性前立腺がん細胞)
R. Imamura, S. Kitagawa, T. Kubo, A. Irie, T. Kariu, M. Yoneda, T. Kamba, T. Imamura, "Prostate cancer C5a receptor expression and augmentation of cancer cell proliferation, invasion, and PD‐L1 expression by C5a", Prostate2020, doi:10.1002/pros.24090.
3 細胞
(HSC-2; HSC-3; HeLa; HaCaT)
S. Liu, J. Washio, S. Sato, Y. Abiko, Y. Shinohara, Y. Kobayashi, H. Otani, S. Sasaki, X. Wang and N. Takahashi, "Rewired Cellular Metabolic Profiles in Response to Metformin under Different Oxygen and Nutrient Conditions", 2022, doi:10.1016/j.snb.2021.130554.

よくある質問

Q

1キットあたり測定可能なサンプル数を教えて下さい。

A

検量線の作成およびサンプルの測定をそれぞれn=3で行った場合、96 wellプレート1枚当たり12サンプル数測定できます(検量線の測定濃度を下表の通り8点で作成した場合)。

Glutamine standard solutionとサンプルのレイアウト例(n=3)

グルタミン測定キット Glutamine Assay Kit-WST 同仁化学研究所

グルタミン測定キット Glutamine Assay Kit-WST 同仁化学研究所

注) Glutamine Assay Kit-WSTを用いてサンプル中グルタミン濃度を定量する場合、1サンプルにつき、[Glutaminase solution処理済有のサンプル(n=3)]および[Glutaminase solution処理無のサンプル(n=3)]の計6well分が必要です。

サンプル中のグルタミン濃度(mmol/l)=(Glutaminase solution処理済有)-(Glutaminase solution処理無)

 

Q

Working solutionは保存できますか?

A

 Working solutionは保存できません。用時調製して下さい。また、光に不安定であるため、調製後は遮光して下さい。

Q

D-Glutamineの定量はできますか。

A

本製品はL-Glutamine定量用となりますので、D-Glutamineの定量はできません。

Q

還元物質を含むサンプルは測定できますか。

A

サンプル中に還元性を持つ物質が含まれていると、色素WSTが誤発色して正確なグルタミン濃度の定量ができません。
培地に、還元性を持つ薬剤等を添加して実験を行う場合、バックグラウンドコントロールとして細胞を含まない培地+薬剤のみの試薬ブランクを一緒に測定して下さい。
 

Q

測定試料は保存できますか。

A

細胞培養上清サンプルの場合、冷凍(-20℃)で1ヶ月保存可能であることを確認しています。

細胞ライセートサンプルの場合、冷凍(-20℃)で1ヶ月保存可能であることを確認しております。ただし、保存を行う前に、キット付属のFiltration Tubeにて除タンパク処理を行って下さい。

Q

サンプルが発色しません。

A

本キットで定量可能なグルタミン濃度は5 µmol/l以上です。グルタミン濃度が5 µmol/l以下の測定試料は本キットでは定量できません。
また、測定試料を希釈している場合、希釈後の測定試料に含まれているグルタミン量が5 µmol/Lよりも少ない可能性があります。
希釈倍率を下げ、測定試料の濃度を定量可能範囲以上にして下さい。
 

Q

450 nm以外の吸収フィルターで測定できますか。

A

450 nm以外では、490 nmのフィルターで使用可能です。
ただし、吸光度値は450 nmで測定した場合と比較し低くなります。(下図参照)

グルタミン測定キット Glutamine Assay Kit-WST 同仁化学研究所

 

グルタミン測定キット Glutamine Assay Kit-WST 同仁化学研究所 グルタミン測定キット Glutamine Assay Kit-WST 同仁化学研究所

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷蔵 , 取扱条件: 吸湿注意
危険・有害
シンボルマーク
グルタミン測定キット Glutamine Assay Kit-WST 同仁化学研究所グルタミン測定キット Glutamine Assay Kit-WST 同仁化学研究所グルタミン測定キット Glutamine Assay Kit-WST 同仁化学研究所
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グルタミン測定キット Glutamine Assay Kit-WST 同仁化学研究所

関連製品

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グルタミン酸測定キット Glutamate Assay Kit-WST 同仁化学研究所

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品,欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

グルタミン酸測定キット Glutamate Assay Kit-WST 同仁化学研究所Glutamate Assay Kit-WST

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

Glutamate Assay Kit-WST

グルタミン酸測定キット Glutamate Assay Kit-WST 同仁化学研究所

  • 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
  • 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
  • 細胞機能解析
  • 細胞内代謝

グルタミン酸測定キット

  • 製品コード
    G269  Glutamate Assay Kit-WST
容 量 メーカー希望
小売価格
富士フイルム
和光純薬
100 tests ¥53,500 345-09621
キット内容
100 tests ・Dye Mixture
・Glutamate Standard 
・Enzyme 
・Assay Buffer          
・Reconstitution Buffer    
・lysis Buffer  
・Filtration Tube
×1
300 ×l×1
×1
7.5 ml×1
750 ×l×1
25 ml×1
×24

  • グルタミン酸測定キット Glutamate Assay Kit-WST 同仁化学研究所
試験成績書

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    グルタミン酸測定キット Glutamate Assay Kit-WST 同仁化学研究所
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    グルタミン酸測定キット Glutamate Assay Kit-WST 同仁化学研究所

技術情報

グルタミン酸の測定原理

本キットは、グルタミン酸量に応じ発色したWSTホルマザンを吸光度測定することで、細胞培養液や細胞内のグルタミン酸を検出することができます。またキットにはグルタミン酸標準液が含まれており、標準曲線を作成しサンプル中のグルタミン酸濃度を定量することができます。

グルタミン酸測定キット Glutamate Assay Kit-WST 同仁化学研究所

技術や使用製品に関する補足

グルタミン酸測定キット Glutamate Assay Kit-WST 同仁化学研究所学会発表ポスター

WSTを用いた細胞の代謝解析

グルタミン酸測定キット Glutamate Assay Kit-WST 同仁化学研究所

フェロトーシス研究におけるグルタミン酸とグルタチオンの測定例

エラスチン処理により、シスチン/ グルタミン酸トランスポーター(xCT) を阻害すると、鉄依存性の細胞死であるフェロトーシスが誘導されることが知られています。エラスチン処理したA549 細胞において、グルタミン酸放出量および細胞内グルタチオン量を確認したところ、エラスチン処理した細胞はグルタミン酸放出量が減少し、シスチンの取り込みが阻害されたことにより、グルタチオン量が減少する結果が得られました。

グルタミン酸測定キット Glutamate Assay Kit-WST 同仁化学研究所グルタミン酸測定キット Glutamate Assay Kit-WST 同仁化学研究所

グルタミン酸測定キット Glutamate Assay Kit-WST 同仁化学研究所

技術や使用製品に関する補足

フェロトーシス研究において、脂質過酸化を蛍光イメージングで検出する試薬「Liperfluo」を使用した論文報告が増えています。

参考文献

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文献No. 対象サンプル 引用(リンク)
1 食品
(出汁、味噌汁、醤油、トマトジュース)
K. Danchana, H. Iwasaki, K. Ochiai, H. Namba, T. Kaneta, "Determination of glutamate using paper-based microfluidic devices with colorimetric detection for food samples", Microchem. J.2022, doi:10.1016/j.microc.2022.107513.
2 細胞培養上清
(骨髄由来抑制細胞)
Z. Xie, T. Kawasaki, H. Zhou, D. Okuzaki, N. Okada and M. Tachbana, "Targeting GGT1 Eliminates the Tumor-Promoting Effect and Enhanced Immunosuppressive Function of Myeloid-Derived Suppressor Cells Caused by G-CSF", Front. Pharmacol.2022, doi:10.3389/fphar.2022.873792.

よくある質問

Q

1キットあたり測定可能なサンプル数を教えて下さい。

A

検量線およびサンプルの測定をそれぞれn=3で行った場合、96ウェルプレートで24サンプルを測定できます。
(検量線の測定濃度を下表の通り、8点で作成した場合)

Glutamate standard solutionとサンプルのレイアウト例(n=3)

グルタミン酸測定キット Glutamate Assay Kit-WST 同仁化学研究所
 

Q

Working solutionは保存できますか?

A

Working solutionは保存できません。用時調製して下さい。また、光に不安定であるため、調製後は遮光して下さい。

※Working solutionは調製後、遮光下であれば室温で4時間安定です。 光に暴露させた場合、溶液の色が褐色味を帯びてきます。

Q

D-Glutamateの定量はできますか。

A

本製品はL-Glutamate定量用のため、D-Glutamateの定量はできません。

Q

還元物質を含むサンプルは測定できますか。

A

サンプル中に還元性を持つ物質が含まれていると、色素WSTが誤発色して正確なグルタミン酸濃度の定量ができません。
培地に、還元性を持つ薬剤等を添加して実験を行う場合、バックグラウンドコントロールとして細胞を含まない培地+薬剤のみの試薬ブランクを一緒に測定して下さい。
 

Q

測定試料は保存できますか。

A

細胞培養上清サンプルの場合、冷凍(-20℃)で1ヶ月保存可能であることを確認しております。

細胞ライセートサンプルの場合、冷凍(-20℃)で1ヶ月保存可能であることを確認しております。ただし、保存を行う前に、キット付属のFiltration Tubeにて除タンパク処理を行って下さい。

 

Q

サンプルのウェルが発色しません。

A

本キットで定量可能なグルタミン酸濃度は5 µmol/l以上です。グルタミン酸濃度が5 µmol/l以下の測定試料は本キットでは定量できません。
また、測定試料を希釈している場合、希釈後の測定試料に含まれているグルタミン酸量が5 µmol/lよりも少ない可能性があります。
希釈倍率を下げ、測定試料の濃度を定量可能範囲以上にして下さい。
 

Q

450 nm以外の吸収フィルターで測定できますか。

A

450 nm以外では、490 nmのフィルターで使用可能です。
ただし、吸光度値は450 nmで測定した場合と比較し低くなります。(下図参照)

グルタミン酸測定キット Glutamate Assay Kit-WST 同仁化学研究所

グルタミン酸測定キット Glutamate Assay Kit-WST 同仁化学研究所 グルタミン酸測定キット Glutamate Assay Kit-WST 同仁化学研究所

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷蔵 , 取扱条件: 吸湿注意
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NADP/NADPH 測定キット NADP/NADPH Assay Kit-WST 同仁化学研究所

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NADP/NADPH 測定キット NADP/NADPH Assay Kit-WST 同仁化学研究所NADP/NADPH Assay Kit-WST

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

NADP/NADPH Assay Kit-WST

NADP/NADPH 測定キット NADP/NADPH Assay Kit-WST 同仁化学研究所

  • 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
  • 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
  • 細胞機能解析
  • 細胞内代謝

NADP/NADPH 測定キット

  • 製品コード
    N510  NADP/NADPH Assay Kit-WST
容 量 メーカー希望
小売価格
富士フイルム
和光純薬
100 tests ¥59,700 344-09331
キット内容
100 tests NADP/NADPH Extraction Buffer     
NADP/NADPH Control Buffer       
Standard Buffer              
Assay Buffer                
Dye Mixture                   
Enzyme
Standard   
Filtration Tube
20 ml ×1
20 ml ×1
10 ml ×1
5.5 ml ×1
×1
110 μl ×1
×1
×12

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試験成績書

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測定原理

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WSTを用いた細胞の代謝解析

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参考文献

参考文献を表示する

1) C. Henninger and G. Fritz, “Statins in anthracycline-induced cardiotoxicity: Rac and Rho, and the heartbreakers.”, Cell Death Dis. 2017, 8(1), e2564.
2) S. Mandziuk, R. Gieroba, A. Korga, W. Matysiak, B. Jodlowska-Jedrych, F. Burdan, E. Poleszak, M. Kowalczyk, L. Grzycka-Kowalczyk, E. Korobowicz, A. Jozefczyk and J. Dudka, “The differential effects of green tea on dose-dependent doxorubicin toxicity.”, Food Nutr Res., 2015, 59, 29754.
3) M. Nagaya, H. Hara, T. Kamiya and T. Adachi,"Inhibition of NAMPT markedly enhances plasma-activated medium-induced cell death in human breast cancer MDA-MB-231 cells.", Arch. Biochem. Biophys., 2019, 676, 108155.

よくある質問

Q

1キットで測定可能なサンプル数は?

A

全てのサンプルをn:3で測定した際のサンプル数の目安は下記の通りです。

  『NADP+とNADPHの総量』
または『NADPH量』の何れかを測定する場合
『NADP+とNADPHの総量』
および『NADPH量』の両方を測定する場合
サンプル数 24サンプル 12サンプル

 ※標準サンプルを2 μmol/Ⅼから段階希釈し、計8点(n:3)で検量線を1回作成した際に測定可能な実サンプル数を記載。
   測定を2回に分けて行う場合は、別途検量線を作成する必要があるため上記サンプル数よりも少なくなります。

Q

Filtration Tube(除タンパク質用)は別途購入できますか?

A

ご不便おかけしますが、Filtration Tubeのみの販売は行っておりません。

小社にて実績のある市販の除タンパク質用チューブをご紹介いたします。

製造メーカー:Pall Corporation

製品名:ナノセップ遠心ろ過デバイス (分画分子量:10K、色:ブルー)

Q

Working solutionはどのくらい安定ですか?

A

Working solutionは保存できません。用時調製して下さい。また、光に対して不安定なため

溶液調製後は遮光して下さい。遮光、室温で4時間安定です。

Q

サンプルが発色しない原因はありますか?

A

 測定試料中に含まれているNAD量が、本キットで定量可能な濃度(10 nmol/L)以下となっている可能性があります。

その場合は細胞数を増やして頂くか、測定試料を希釈している場合は、希釈倍率を下げて測定して下さい。

Q

測定試料は保存できますか?

A

保存できます。取扱説明書 [1.測定用サンプルの調製]の操作6)の溶液は、冷凍(-20℃)で2週間保存可能であることを確認しております。

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取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷蔵,遮光 , 取扱条件: 吸湿注意
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関連製品

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