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日本同仁化学MitoBright LT Green试剂,MT10,同仁化学Dojindo日本原装进口- DOJINDO
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MitoBright LT Green试剂货号：MT10
线粒体长效荧光探针-绿色
MitoBright LT Green
商品信息
储存条件：-20度保存
运输条件：室温
特点：
● 荧光持续时间长
● 可在含血清培养基中染色
● 荧光显微镜、流式细胞仪均可检测
选择规格：
20 μl
400 μl
荧光长时间存在
可使用含血清培养基
荧光/流式检测
更多线粒体检测方案（点击查看）
订购满5000元，200元礼品等你拿
凑单关联产品TOP5
NO.1. Mitophagy Detection Kit 线粒体自噬检测
NO.2. FerroOrange 细胞亚铁离子检测
NO.3. DALGreen – Autophagy Detection 细胞自噬检测
NO.4. Liperfluo 细胞脂质过氧化物检测
NO.5. Lactate Assay Kit-WST 乳酸检测
产品概述
细胞内有各种各样的细胞器，承担着各种各样必须的生命活动。其中线粒体不仅是通过氧化磷酸化反应生成ATP的场所，它还与癌症、细胞衰老、阿尔兹海默症、帕金森综合症等神经退行性疾病紧密相关，因此它是细胞内最重要的细胞器之一。
在对线粒体的形态和动态进行观察以及定量检测时，通常使用小分子荧光探针标记和荧光蛋白的基因转染两种方法。荧光蛋白的基因转染存在转染效率不稳定等情况，因此操作简便的小分子荧光探针的使用更为广泛。现在市面上销售的小分子荧光探针中，多为含有氯甲基的探针，该探针存在观察时间短，染色时不能使用含血清的培养基，染色后荧光背景高等问题。MitoBright LT荧光探针克服了这些问题，可在线粒体内稳定存在一天以上，条件合适的情况下可达到一周。而且与含有氯甲基的探针相比，染色后的荧光强度更高。本品直接采用DMSO溶液包装，可快速方便的进行线粒体染色。荧光颜色有Green, Red, Deep Red等多种选择，可满足多重染色等各种各样的实验要求。
产品特点
1.可长时间在细胞内存在
用HBSS清洗HeLa细胞后，分别用MitoBright LT和其他公司的试剂进行染色，更换含血清的培养基，培养4天后观察线粒体染色情况。其他公司的染色试剂在4天后荧光强度大幅降低，而MitoBright LT依然维持着高荧光强度，并且在染色7日后依然可以观察到荧光。
＜检测条件＞
MitoBright LT Green 、（T公司）Green：Ex 488 nm/Em 500–560 nm
MitoBright LT Red 、（T公司）Red：Ex 561 nm/Em 560–620 nm
MitoBright LT Deep Red 、（T公司）Deep Red：Ex 640 nm/Em 650–700 nm
2.可以使用含血清培养基
用MitoBright LT和其他公司试剂，分别用含有血清和不含血清的培养基染色。其他公司试剂在含有血清的培养基染色时，荧光明显减弱，而MitoBright LT在含有血清的培养基条件下，荧光没有减弱，可明显观察到线粒体的染色情况。
实验例
实时荧光观察
HeLa细胞用CCCP处理，并与线粒体检测试剂（Mtphagy Dye）和线粒体染色试剂（MitoBright LT Green）共同染色，并经过一段时间（6小时）后进行检测。
<检测条件>
设备：LSM-700 Laser scanning confocal microscope (LSCM)
(Carl Zeiss, Oberkochen, Germany)
激发波长：
MitoBright LT Green 488 nm
Mtphagy Dye 555 nm
物镜：63x
拍摄时间：6小时
拍摄间隔：15秒
用流式细胞仪检测
1. 用RPMI培养基(10% Fetal Bovine Serum, 1% Penicillin-Streptomycin)配制Jurkat细胞悬液(3.2×105cell/ml)接种于5 cm培养皿中，在37℃，5% CO2培养箱内过夜培养。
2. 去除培养基，加入MitoBright LT Working Solution (0.1 μmol/l, 5 ml)， 在37℃培养30分钟。
3. 去除溶液，用 5 ml的PRPMI培养基清洗细胞2 次。
4. 更换RPMI培养基，持续培养细胞，每隔2 天用流式细胞仪检测。
MitoBright LT Green MitoBright LT Red MitoBright LT Deep Red
Excitation: 488 nm Excitation: 488 nm Excitation: 633 nm
Emission: 515-545 nm Emission: 564-604 nm Emission: 650-670 nm
在胶原蛋白涂覆玻璃板上观察线粒体荧光成像
胶原蛋白涂覆玻璃板通常用于线粒体形态的高倍放大观察。
现有的线粒体染色试剂存在吸附胶原蛋白和升高背景的问题，但是MitoBright LT系列可以在不受背景影响的情况下清楚地对线粒体进行染色。
<染色条件>
将HeLa细胞接种在胶原蛋白涂覆玻璃板上，培养24小时，提取上清液并用HBSS洗涤。
加入100 nmol/l的MitoBright LT Green工作溶液，培养30分钟后，提取上清液并用HBSS洗涤后用荧光显微镜观察。
<检测条件>
Ex 488 nm，Em 500-560 nm
<结果>
现有的线粒体染色剂存在吸附胶原蛋白和升高背景的问题，但是MitoBright LT系列可以清晰地对线粒体染色，而不受背景影响。
通过超分辨率激光显微镜（STED）观察线粒体内部构造
线粒体疾病致突变的Cybrid细胞用MitoBright-LT-Deep Red染色，用超分辨激光显微镜(STED)观察，证实线粒体嵴结构异常。
＜实验条件＞
色素：MitoBrightLT Deep Red（100 nmol/l）
仪器：Leica超分辨率激光显微镜TCS SP8 STED 3X
Ex. 640 nm / Em. 650-700 nm
STED激光：775nm
<实验步骤>
1将细胞接种在玻璃培养皿中，培养2天（37℃，5% CO2）。
2去除培养基后，加入使用L-15培养基（含10%FBS）制备的MitoBrightLT Deep Red（100 nmol/l）工作液。
3孵育45分钟（37度，5% CO2）。
4去除上清液，用HBSS清洗两次。
5加入L-15培养基（含10%FBS），通过超分辨率激光显微镜（Leica TCS SP8 STED）进行观察。
以上数据由东京都老年学研究所衰老控制研究小组的大澤郁朗博士和藤田泰典博士友情提供。
产品文献
同仁化学研究所开发的线粒体长效染色荧光探针MitoBright LT系列在世界范围内广受科研人员的好评。在上市后的很短时间内，就出现了多篇使用MitoBright LT系列探针的论文，下面收集整理了部分的论文，其中红色字体标记的是使用本产品标记线粒体后，长时间(最长至5天)观察线粒体动态的报道，供感兴趣的科研人员参考。
| 产品名 | 检测样品 | 染色后的 观察时间 |
检测仪器 | 发表期刊(含原文链接) | 影响因子 |
| MitoBright LT Green | 细胞 (U251) | 立即 | 荧光显微镜 | Pharmaceuticals | 4.286 |
| MitoBright LT Green | 酵母 (Lipomyces starkeyi) | 立即 | 荧光显微镜 | Genes to Cells | 1.655 |
| MitoBright LT Green | 细胞 (HeLa) | 立即 | 荧光酶标仪 | Biomaterials | 10.317 |
| MitoBright LT Green | 细胞 (Naive CD4+ T cells) | 立即 | 荧光显微镜 | Cell Reports | 9.423 |
| MitoBright LT Green | 细胞 (CT26) | 立即 | 流式细胞仪 | Journal of Radiation Research | 2.841 |
| MitoBright LT Green | 细胞 (C2C12) | 5 天 | 荧光显微镜 | Polymers | 4.329 |
| MitoBright LT Green | 细胞 (BMM) | 36 小时 or
3 天 |
荧光显微镜/ 流式细胞仪 |
JCI Insights | 8.315 |
| MitoBright LT Green | 细胞 (mouse erythrocytes) | 立即 | 荧光显微镜 | Front. Cell. Infect. Microbiol. | 5.293 |
| MitoBright LT Red | 细胞 (SH-SY5Y) | 立即 | 荧光显微镜 | Free Radical Biol. Med. | 7.376 |
| MitoBright LT Red | 细胞 (MRC-5) | 立即 | 荧光显微镜 | The FEBS Journal | 5.542 |
| MitoBright LT Red | 细胞 (A11 cells/ P29 cells) | 3 天 | 荧光显微镜 | BMC Mol. Cell Biol. | 5.293 |
| MitoBright LT Deep Red | 细胞 (HT-1080; MCF-10A; MCF-7; HCT-116 ) | 立即 | 荧光显微镜 | Small | 13.281 |
| MitoBright LT Deep Red | 细胞 (HT-1080; MCF-10A; MCF-7 ) | 8 小时 | 荧光显微镜 | Advanced Therapeutics | – |
| MitoBright LT Deep Red | 细胞 (4T1) | 24 小时 | 荧光显微镜 | Advanced Functional Materials | 18.808 |
| MitoBright LT Deep Red | 细胞 (SW982) | 立即 | 荧光显微镜 | Gene | 3.368 |
荧光特性
MitoBright LT 染料的荧光特性
常见问题Q&A
| Q1：MitoBright LT需要用DMSO溶液配制，反复冻结融化也不会影响试剂质量吗？ |
| A1：我们已经确认可以使用冻融30次的溶液进行染色。 |
| Q2：MitoBright LT和MitoBright的区别。 |
| A2：MitoBright LT是MitoBright具有更强细胞内滞留性性能的产品。另外MitoBright LT是溶于DMSO的产品，可以立即使用，而无需准备染色溶液。 |
|
Q3：用MitoBright LT系列染色后再去极化是否会影响染色效果？ |
| A3：我们确认了去极化和细胞种类对于染色效果的影响，MitoBright LT的每种染料都有不同程度的影响。作为参考，本公司将HeLa细胞用不同的MitoBrightLT试剂进行染色，在以下条件下进行去极化处理，观察荧光染色的变化。
<染色条件> HeLa细胞用MitoBright LT（100 μmol/l，孵育30分钟）染色，并用HBSS洗涤。 用FCCP（100 μmol/l，孵育60分钟）处理，用HBSS洗涤2次，然后观察荧光。
<检测条件> MitoBright LT Green :Ex 488 nm/Em 500–560 nm MitoBright LT Red :Ex 561 nm/Em 560–620 nm MitoBright LT Deep Red :Ex 640 nm/Em 650–700 nm |
规格性状
性状：本品是黄色液体
吸光度：0.600～0.800(490 nm附近）
日本同仁化学MitoBright IM Red for Immunostaining试剂,MT15,Dojindo同仁化学- DOJINDO
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MitoBright IM Red for Immunostaining试剂货号：MT15
免疫荧光用线粒体荧光染料
MitoBright IM Red for Immunostaining
商品信息
储存条件：-20度保存
运输条件：室温
特点：
● 标记稳定性强、特异性高
● 可用于免疫荧光共染色
选择规格：20μl 20μl*3
可在含血清的培养基中染色
更多线粒体检测方案（点击查看）
规格性状
产品概述
实验例：与内质网标记物KDEL的共染色
MitoBright IM Red与其他试剂的不同
与传统试剂的对比
可检测的次数
荧光特性
常见问题Q&A
规格性状
产品概述
线粒体不仅是细胞中产生能量的场所，也是与癌症、衰老、神经退行性疾病（例如，阿尔茨海默症、帕金森症）等密切相关的最重要的细胞器之一。
近年来，随着显微镜技术的发展，有关细胞器的研究正在由原来的“单独研究线粒体的机能””逐渐向“线粒体与其他细胞器之间的相互作用”的方向转移。因此，对于线粒体的更详细的形态观察需求越来越大。
MitoBright IM Red克服了其他染料的靶向标记稳定性差的问题，是一种可以用于免疫荧光共染色线粒体荧光探针。
实验例：与内质网标记物KDEL的共染色
用MitoBrightIM Red标记HeLa细胞的线粒体，经固定化和膜透性处理后再用内质网标记物KDEL的抗体进行免疫共染色。并且在左图的箭头所示范围内进行了荧光强度的检测。从荧光图像可以清晰的观察线粒体与附近的内质网的形态。
<检测条件>
MitoBright IM Red (红) Ex: 561 nm, Em: 560-620 nm
KDEL抗体-Alexa488 (绿) Ex: 488 nm, Em= 490-550 nm
Scale bar: 10 μm
MitoBright IM Red与其他试剂的不同
传统的小分子荧光染料在染色后的固定化操作或透膜剂处理后，往往会失去靶向性。而MitoBright IM Red与其他染料相比，提高了靶向稳定性，可以抑制免疫荧光实验时固定化操作造成的荧光强度减弱等问题。
・荧光强度差的比较
MitoBright IM与(T公司的)传统荧光染料相比，在活细胞线粒体染色后的固定化处理和透膜剂处理后的荧光强度如下图所示。固定化处理和透膜剂处理后，荧光强度都有一定的下降，但是MitoBright IM比传统染料的靶向标记稳定性更高，因此可以观察到更清晰的线粒体染色情况。
<检测条件>
Ex=561 nm; Em= 560-620 nm
・荧光背景的比较
使用线粒体标记物TOM20抗体比较MitoBrightIM和传统试剂的免疫染色后的线粒体定位情况。 用MitoBrightIM和传统试剂对HeLa细胞进行染色，然后用TOM20抗体进行二抗免疫荧光染色。 结果显示， 用MitoBrightIM或现有试剂对HeLa细胞进行染色，然后用TOM20抗体进行二抗染色。 结果显示，传统试剂有扩散到线粒体以外区域的情况，导致背景很高，而MitoBrightIM的背景更低，而且定位与TOM20抗体一致。
<检测条件>
Ex=561 nm; Em= 560-620 n
与传统试剂的对比
可检测的次数
| MitoBright IM Red
规格 |
荧光显微镜 |
| （35 mm dish, working solution 2 ml/dish时) | |
| 20 μl | 10 枚 |
| 20 µl x3 | 30 枚 |
荧光特性
激发波长(λex) ： 548 nm
发射波长(λem) ： 566 nm
常见问题Q&A
| Q: MitoBright IM Red出厂就是是DMSO溶液状态，反复冻融是否会影响染色结果？ |
| 我们做过反复冻融5次的稳定性实验，染色结果正常。如果长时间保存时需要反复冻融，保险起见建议提前分装，分开保存。 |
| Q：先药物刺激再进行MitoBright IM染色时，发现有荧光辉斑产生，请问是否有好的解决办法？ |
| A：请在药物刺激前进行MitoBright IM的染色。 由于本试剂是依靠线粒体膜电位在线粒体处积累的，如果线粒体膜电位大幅降低，会导致试剂无法在线粒体处聚集。
(参考实验) 分别采用“先FCCP刺激后染色” 和“先染色后FCCP刺激” 的方法对HeLa细胞进行实验并观察荧光。 先进行MitoBright IM染色再FCCP刺激的实验组很顺利的观察到了荧光，而相反的实验组没有观察到荧光。
|
日本同仁化学MQAE试剂货号：M024- DOJINDO
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MQAE试剂货号：M024
N-Ethoxycarbonylmethyl-6-methoxyquinolinium bromide
MQAE
商品信息
储存条件：0-5度保存
运输条件：室温
特点：
● 高水溶性
● 膜渗透性好
SDS下载
选择规格：
50mg
期货
荧光探针检测方案
性质
溶解例
参考文献
规格性状
性质
氯离子通过细胞膜的运输，涉及很多细胞方面的生理功能，并且是生物学上非常重要的研究课题。 此处介绍的MQAE是一种高灵敏度的荧光试剂，其荧光强度会被Cl-降低。 MQAE对Cl-的消光系数约为SPQ的两倍，并且Cl-对浓度变化的敏感性也优于SPQ。 MQAE的荧光波长为λex= 355 nm和λem= 460 nm，荧光强度与SPQ相似，可检测的Cl离子浓度为0至50 mmol / l。
此外，MQAE具有高水溶性和膜通透性，可以很容易地引入到细胞膜中。 MQAE的荧光强度不受其他体内阴离子，pH等的影响，[Cl-]的变化可通过荧光强度进行跟踪。
溶解例
3 mg/mL（水：乙腈= 1：1）
参考文献
1) A. S. Verkman, M. C. Sellers, A. C. Chao, T. Leung and R. Ketcham, “Synthesis and Characterization of Improved Chloride-sensitive Fluorescent Indicators for Biological Applications”, Anal. Biochem., 1989, 178, 355.
2) M. Inoue, M. Hara, X.-T. Zeng, T. Hirose, S. Ohnishi, T. Yasukura, T. Uriu, K. Omori, A. Minato and C. Inagaki, “An ATP-driven Cl– Pump Regulates Cl– Concentrations in Rathippocampal Neurons”, Neurosci. Lett., 1991, 134, 75.
3) T. Nakamura, H. Kaneko and N. Nishida, “Direct Measurement of Chloride Concentration in Newt Olfactory Receptors with the Fluorescent Probe”, Neurosci. Lett., 1997, 237, 5.
规格性状
规格性状
性状：本品为淡黄色至黄色粉末。
纯度（HPLC）：95.0％或更高
红外光谱：测试合格
处理条件
1.保存方法：冷藏
日本同仁化学DTSSP试剂 D630 交联剂- DOJINDO
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DTSSP试剂 D630 交联剂
蛋白抗体标记
简单、迅速的标记试剂盒 Dojindo Labeling Kits是一系列包含了活性试剂以及特制的过滤管，可以简便标记抗体等蛋白质的试剂盒。样品预处理-反应-纯化的整个过程都在一支过滤管中完成，3个小时内就能获得标记产物。1次可以标记50-200 μg的样品。使用本试剂盒的过滤管来纯化样品，与凝胶过滤和透析法相比，回收率要高很多，适合用于标记一些比较贵重的抗体。试剂盒中包含了标记产物的保存溶液，标记产物在保存溶液中能够稳定保存。Dojindo Labeling Kits能够标记分子量在50,000以上的大分子。其中辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶标记试剂盒还可以标记分子量在5,000以下的小分子。标记方法有两种：一种是氨基标记法，另一种是巯基标记法。氨基标记法采用带有N-hydroxysuccinimide (NHS) 基的活化试剂，能够标记抗体等样品上的氨基。巯基标记法采用带有Maleimide基的活化试剂，能够标记还原抗体等样品上带有巯基的化合物。根据样品的特性可以选择不同的标记方法。
生物素
荧光标记
酶标记物
螯合标记
藻胆蛋白
ICG标记
IgG纯化分离
交联剂
品名货号用途
| DTSSP试剂 | D630 | 交联剂 |
| BS3试剂 | B574 | 交联剂 |
| DSP试剂 | D629 | 交联剂 |
| EMCS试剂 | E018 | 交联剂 |
| GMBS试剂 | G005 | 交联剂 |
| SPDP试剂 | S291 | 交联剂 |
| Sulfo-SMCC试剂 | S330 | 交联剂 |
日本同仁化学代谢 糖代谢 脂质代谢 线粒体呼吸 氨基酸代谢- DOJINDO
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代谢
细胞内代谢系统(糖酵解系统，TCA回路和电子转移系统)的分析对于理解细胞状态非常重要。
糖代谢
脂质代谢
线粒体呼吸
氨基酸代谢
品名货号用途
| Glycolysis/JC-1 MitoMP Assay Kit | G272 | 糖酵解(乳酸生成量)和线粒体膜电位(JC-1)同时检测 |
| 糖酵解/氧化磷酸化检测试剂盒—Glycolysis/OXPHOS Assay Kit | G270 | 方便快捷的检测糖酵解能、细胞代谢途径转移、细胞对糖酵解途径和氧化磷酸化途径的依赖程度 |
| Glucose(葡萄糖)摄取能力检测试剂盒-Blue | UP01 | 葡萄糖摄取能力检测（蓝色荧光） |
| Glucose(葡萄糖)摄取能力检测试剂盒-Green | UP02 | 葡萄糖摄取能力检测（绿色荧光） |
| Glucose(葡萄糖)摄取能力检测试剂盒-Red | UP03 | 葡萄糖摄取能力检测（红色荧光） |
| Glucose Assay Kit-WST试剂盒 | G264 | 葡萄糖含量检测 |
| Lactate Assay Kit-WST试剂盒 | L256 | 乳酸检测试剂盒 |
| α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric | K261 | 对细胞内的α-KG进行定量检测 |
| 脂肪酸摄取测定试剂盒——Fatty Acid Uptake Assay Kit | UP07 | 脂肪酸摄取检测 |
| Lipi-Blue试剂 | LD01 | 脂滴检测（蓝色） |
| Lipi-Green试剂 | LD02 | 脂滴检测（绿色） |
| Lipi-Red试剂 | LD03 | 脂滴检测（红色） |
| Lipi-Deep Red试剂 | LD04 | 脂滴检测（深红色） |
| Lipid Droplet Assay Kit-Blue试剂 | LD05 | 脂滴荧光检测（蓝色） |
| Lipid Droplet Assay Kit-Deep Red试剂 | LD06 | 脂滴荧光检测（深红色） |
| ADP/ATP比率检测试剂盒—ADP/ATP Ratio Assay Kit-Luminescence | A552 | 检测细胞中ADP与ATP的比率 |
| Oxygen Consumption Rate(OCR) Plate Assay Kit-氧消耗量检测试剂盒 | E297 | 氧消耗量检测 |
| Cell Counting Kit-Luminescence试剂盒 | CK18 | ATP活性检测 |
| Glutamine Assay Kit-WST试剂盒 | G268 | 谷氨酰胺的定量检测 |
| Glutamate Assay Kit-WST试剂盒 | G269 | 谷氨酸的定量检测 |
| NAD/NADH Assay Kit-WST试剂盒 | N509 | NAD/NADH检测试剂盒 |
| NADP/NADPH Assay Kit-WST试剂盒 | N510 | NADP/NADPH检测 |
| 氨基酸摄取能力检测试剂盒——Amino Acid Uptake Assay Kit | UP04 | 检测细胞摄取氨基酸的能力 |
| 胱氨酸摄取能力检测试剂盒—Cystine Uptake Assay Kit | UP05 | 胱氨酸摄取能力检测 |
各项代谢指标完全解读
糖酵解氧化磷酸化代谢关联指标
脂质代谢关联指标
氨基酸代谢关联指标
线粒体相关指标
衰老相关指标
当试图了解细胞状态时，分析各种细胞内代谢途径【例如糖酵解系统、三羧酸（TCA）循环、电子运输链等】非常重要。代谢产物和能量来源，【例如葡萄糖、乳酸和NAD（P）+/NAD（P）H】都是用于分析细胞内代谢的指标。
细胞代谢与疾病
近年来，针对癌症、糖尿病等疾病模型的细胞内代谢研究受到了广泛关注。下面是不同疾病的 代谢指标变化的详细介绍。
癌症
癌细胞在无限增殖的同时保持着活跃的细胞代谢，不断吸收大量的营养物质进行蛋白质、核酸、能量（如ATP）的合成。即使在不利的环境下(低氧气、低营养)，癌细胞仍然可以通过改变代谢途径而存活下来。近年来，针对癌细胞的代谢途径的研究也越来越多。
糖代谢有两种途径：线粒体氧化磷酸化和糖酵解(Glycolysis)。正常哺乳动物细胞在有氧条件下，糖酵解被抑制。而癌细胞即使在氧气充足的情况下，糖酵解仍然十分活跃(瓦格博效应，Warburg effect)。因此，癌细胞大量的摄取糖分并在亢进的糖酵解作用下大量产生乳酸。由于糖酵解途径在生成ATP时并不需要氧气，所以即使在低氧环境下，癌细胞仍然可以增殖。另一方面，癌细胞的线粒体利用氨基酸和脂肪产生NADH，NADH除了用于产生ATP以外，还主要用于抵御氧化还原作用。癌细胞的线粒体有着异常的机能，这会引起线粒体膜电位的上升（过极化）以及过剩的活性氧的产生。因此需要产生大量的谷胱甘肽来维持胞内的氧化还原平衡。而谷氨酰胺 (Glutamine)和胱氨酸(Cystine)是谷胱甘肽合成的必要来源，癌细胞不断的过量摄入这些氨基酸。另外，由于需要 NADPH来维持还原型谷胱甘肽，癌细胞会不断利用从糖酵解、戊糖磷酸途径(pentose phosphate pathway)以及线粒体产生的NADH来维持高浓度的NADPH。
*请注意，上述内容是概括性的癌细胞代谢特征的描述。随着癌细胞种类的不同和环境的变化会有一定差别。
参考文献
下面是一些癌细胞代谢的综述性文献，供初次接触这一领域的研究人员参考。
1) 糖酵解：M. G. Vander Heiden, L. C. Cantley, and C. B. Thompson, “Understanding the Warburg Effect: The Metabolic Requirements of Cell Proliferation”, Science, 2009, 324, 1029.
2) 氨基酸代谢、ROS：P. Koppula, Y. Zhang, and B. Gan, “Amino Acid Transporter SLC7A11/xCT at the Crossroads of Regulating Redox Homeostasis and Nutrient Dependency of Cancer”, Cancer Commun., 2018, 38, 12.
3) 氨基酸代谢：E. L. Lieu, T. Nguyen, S. Rhyne, and J. Kim, “Amino Acids in Cancer”, Exp. Mol. Med., 2020, 52, 15.
4) 线粒体、ROS、NADPH：F. Ciccarese and V. Ciminale, “Escaping Death: Mitochondrial Redox Homeostasis in Cancer Cells”, Front. Oncol. 2017, 7, 117.
5) NADH：A. Chiarugi, C. Dolle, R. Felici, and M. Ziegler, “The NAD Metabolome-A Key Determinant of Cancer Cell Biology”, Nat. Rev. Cancer, 2012, 12, 741.
⚫ 葡萄糖(Glucose)代谢障碍与抗癌作用
⚫ 氨基酸代谢障碍和抗癌作用
⚫ 1个试剂盒，匀浆和非匀浆自由选择
⚫ 癌细胞免疫与代谢
抑制葡萄糖代谢和抗癌作用
癌细胞主要使用糖酵解系统产生ATP，因此针对糖酵解系统的抗癌药物的开发已经进行了很长时间。目前还没有开发出有效的抗癌药物，但糖酵解仍然是癌细胞的主要药物靶点。因此，糖酵解是了解癌细胞代谢的最重要途径。
葡萄糖转运蛋白（GLUT）是药物发现中糖酵解靶蛋白的一个例子。由于癌细胞通过葡萄糖转运蛋白摄取大量的糖，因此可以通过直接抑制葡萄糖转运蛋白来抑制糖酵解。另外，抑制葡萄糖饥饿的活性、糖酵解系统的酶 (己激酶：HK、乳酸脱氢酶：LDH等) ，和抑制糖酵解系统的最终产物乳酸向细胞外的流出也是有效的手段。
各抑制剂引起的细胞内代谢变化.文献
| 产品用途 | 产品名称 |
货号 |
| 葡萄糖检测试剂盒 | Glucose Assay Kit-WST | G264 |
| 乳酸检测试剂盒 | Lactate Assay Kit-WST | L256 |
| NAD/NADH 检测试剂盒 | NAD/NADH Assay Kit-WST | N509 |
| NADP/NADPH 检测试剂盒 | NADP/NADPH Assay Kit-WST | N510 |
| JC-1 线粒体膜电位检测试剂盒 | JC-1 MitoMP Detection Kit | MT09 |
抑制氨基酸代谢与癌症治疗
在增殖活跃的癌细胞中，氨基酸是蛋白质和核酸合成所必需的营养素。由于癌细胞中来自糖酵解系统的乙酰CoA的供给降低，因此积极利用氨基酸
作为TCA循环的营养源。研究表明，癌细胞通过氨基酸转运蛋白的表达量增加，吸收大量氨基酸。特别是谷氨酰胺是谷胱甘肽的原料和TCA循环中必需的α-酮戊二酸的来源，并且针对谷氨酰胺的摄取和代谢（谷氨酰胺分解）的药物开发备受关注。此外，我们发现与许多必需氨基酸摄取有关的氨基酸转运蛋白LAT(L-type amino acid transporter)在许多癌细胞中过度表达，并有望作为新的药物发现目标。
与其他氨基酸不同，氧化还原控制所需的半胱氨酸主要由胱氨酸转运蛋白xCT吸收到细胞中。癌细胞会产生大量的活性氧，从而增加抗氧化剂谷胱甘肽的产生，维持氧化还原平衡。因此，通过抑制谷胱甘肽产生的途径，可以改变细胞内氧化还原平衡，并诱导细胞死亡，如铁吞作用。此外，谷胱甘肽还有助于耐药性，因此涉及谷胱甘肽产生的途径是药物发展的主要目标。特别是最近，长期用作抗炎药的磺胺沙拉嗪和癌症的分子靶向治疗药物索拉非尼布抑制了xCT，通过xCT抑制的铁吞作用引起了人们的关注。
各抑制剂引起的细胞内代谢变化.文献
关联产品
| 产品用途 | 产品名称 |
货号 |
| NAD/NADH 检测试剂盒 | NAD/NADH Assay Kit-WST | N509 |
| JC-1 线粒体膜电位检测试剂盒 | JC-1 MitoMP Detection Kit | MT09 |
| 谷氨酰胺检测试剂盒 | Glutamine Assay Kit-WST | G268 |
| 谷氨酸检测试剂盒 | Glutamate Assay Kit-WST | G269 |
| GSSG/GSH检测试剂盒 | GSSG/GSH Quantification Kit | G263 |
| 脂质过氧化物检测试剂 | Liperfluo | L248 |
| 线粒体过氧化物检测试剂 | MitoPeDPP | M466 |
| 自噬检测试剂 | DAPGreen – Autophagy Detection | D676 |
抑制脂肪酸代谢和抗癌作用
细胞增殖活跃的癌细胞当然需要大量的脂质。因此，细胞内的脂肪酸合成和细胞外的脂肪酸摄取是很活跃的。因此，许多癌细胞增加了脂质滴的积累。针对癌细胞的治疗目标主要是与脂肪酸的产生相关的途径，并开发了许多抑制剂。
另一方面，癌细胞利用脂肪酸的β氧化来有效地产生能量，以补充糖酵解系统低效能量的产生。因此，以脂肪酸的β氧化为目标的药剂开发也在进行中。
各抑制剂引起的细胞内代谢变化.文献
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货号 |
| 脂滴检测试剂盒 | Lipid Droplet Assay Kit
– Blue/Deep Red |
LD05/LD06 |
| 脂滴荧光染料 | Lipi-Blue/Green/Red/Deep Red | LD01/LD02/LD03/LD04 |
| NADP/NADPH 检测试剂盒 | NADP/NADPH Assay Kit-WST | N510 |
| GSSG/GSH检测试剂盒 | GSSG/GSH Quantification Kit | G263 |
癌症免疫治疗与细胞代谢
T细胞在消除癌细胞的免疫系统中起着核心的作用。近年来发现，T细胞的分化和活化等调节机制也与细胞内的代谢有关，因此癌症免疫相关的代谢研究也越发活跃起来。癌细胞需要吸收大量营养才能维持增殖活性，而活化的T细胞同样需要大量营养(尤其是葡萄糖)才能消除癌细胞。所以，活化的T细胞与癌细胞存在局部的“葡萄糖竞争”。众所周知，癌细胞可以通过表达活性化T细胞表面的免疫检查点PD-1来抑制T细胞的活性。而且，最近的研究发现，在这个相互作用中，T细胞的葡萄糖摄取也会受到抑制。癌细胞通过抑制免疫细胞的代谢来获得免疫逃逸，因此癌症免疫方面的研究并不局限于癌细胞，对免疫细胞的代谢研究也十分重要。
参考文献
1) Z. Yin, L. Bai, W. Li, T. Zheng, H. Tian, and J. Cui, “Targeting T cell metabolism in the tumor microenvironment: an anti-cancer therapeutic stratety”, J. Exp. Clin. Cancer Res. 2019, 38, 403.
2) L. Almeida, M. Lochner, L. Berod, and T. Sparwasser, “Metabolic pathways in T cell activation and linear differentiation”, Semin. Immunol. 2016, 28(5), 514.
3) A. Kumar and K. Chamoto, “Immune metabolism in PD-1 blockage-based cancer immunotherapy”, Int. Immunol., 2020 Jul 5;dxaa046.
4) D. G. Franchina, F. He, and D. Brenner, “Survival of the fittest: Cancer challenges T cell metabolism”, Cancer Lett., 2018, 412, 216.
5) N. Patsoukis, K. Bardhan, P. Chatterjee, D. Sari, B. Liu, L. N. Bell, E. D. Karoly, G. J. Freeman, V. Petkova, P. Seth, L. Li, and V. A. Boussiotis, “PD-1 alters T-cell metabolic reprogramming by inhibiting glycolysis and promoting lipolysis and fatty acid oxidation”, Nat. Commun., 2015, 6, 6692.
各抑制剂引起的细胞内代谢变化.文献
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| 产品用途 | 产品名称 |
货号 |
| 葡萄糖检测试剂盒 | Glucose Assay Kit-WST | G264 |
| 乳酸检测试剂盒 | Lactate Assay Kit-WST | L256 |
| 谷氨酰胺检测试剂盒 | Glutamine Assay Kit-WST | G268 |
| 谷氨酸检测试剂盒 | Glutamate Assay Kit-WST | G269 |
糖尿病
抑制葡萄糖代谢和抗癌作用
在高血糖状态下，细胞内葡萄糖浓度升高，多元醇途径代谢增强。这会过 度消耗NADPH，减少还原型谷胱甘肽(GSH)。 其结果是，氧化应激增加，促进细胞损伤。
参考文献
M. Brownlee, “The pathobiology of diabetic complications: a unifying mechanism”, DIABETES, 2005, 54, 1615.
关联产品
| 产品用途 | 产品名称 |
货号 |
| NAD/NADH检测试剂盒 | NAD/NADH Assay Kit-WST | N509 |
| NADP/NADPH 检测试剂盒 | NADP/NADPH Assay Kit-WST | N510 |
| 谷胱甘肽检测试剂盒 | GSSG/GSH Quantification Kit | G263 |
衰老
⚫ 衰老相关疾病与乳酸、NAD+的关系
⚫ DNA损伤引发的细胞衰老
⚫ 谷氨酰胺代谢与细胞衰老
衰老相关疾病与乳酸、NAD +的关系
近年来，NAD+与衰老之间的关系 引起了人们的关注。单个小鼠的 衰老模型中，在肝脏等中观察到 的NAD+量减少1)，并且据报道， 抑制NAD +合成酶会导致衰老细胞 功能下降2）。此外，NAD+量的减 少导致线粒体功能下降3)，而线粒 体功能的降低表明NAD+量减少， 从而导致衰老细胞的功能下降4)。
DNA损伤引发的细胞衰老
在衰老的细胞中，由于线粒体功能下 降，主要由厌氧的糖酵解通路产生ATP， 因此乳酸的产生量增加7）。 DNA损伤是细胞衰老导致线粒体功能 障碍的原因之一。 DNA损伤的积累会激活 DNA修复机制并增加NAD+消耗。 NAD+量的减少会降低SIRT1活性，这 是维持线粒体功能的重要因素，导致线粒 体功能的降低（电子转移的抑制→ATP产 生/ NAD+量的减少）3),8)。
谷氨酰胺代谢和细胞衰老
抑制肿瘤的menin通过靶向依赖mTORC1的代谢激活来预防效应CD8T细胞功能障碍9)。
Menin是一种肿瘤抑制因子，在预防衰老和疲劳等T细胞功能障碍中起着重要作用。当Menin缺乏时， mTORC1被激活，并通过糖酵解系统和谷氨酰胺降解增强氧化磷酸化，导致CD8T细胞功能障碍。此外， 谷氨酰胺代谢中间产物α酮戊二酸有助于维持mTORC1激活和促进细胞衰老(SA-β-gal活性增强)。谷氨酰 胺-α-酮戊二酸通路在诱导CD8T细胞功能障碍中发挥重要作用，并发现Menin有抑制T细胞衰老的可能性。
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| 产品用途 | 产品名称 |
货号 |
| 细胞衰老检测试剂盒 (荧光显微镜 / 流式细胞仪用) | Cellular Senescence Detection Kit – SPiDER-βGal | SG03 |
| 细胞衰老检测试剂盒 (荧光酶标仪用) | Cellular Senescence Plate Assay Kit – SPiDER-βGal | SG05 |
| JC-1 线粒体膜电位检测试剂盒 | JC-1 MitoMP Detection Kit | MT09 |
日本同仁化学MitoPeDPP试剂货号：M466- DOJINDO
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MitoPeDPP试剂货号：M466
3-[4-(Perylenylphenylphosphino)phenoxy]propyltriphenylphosphonium iodide
MitoPeDPP
商品信息
储存条件：0-5度保存，避光
运输条件：室温
特点：
● 特异性的在细胞中线粒体内聚集
● 可以检测线粒体膜内的脂质过氧化物
● 可以在488 nm和535 nm的荧光波长下进行检测
下载说明书
选择规格：
5μg*3
现货
铁死亡检测方案
产品概述
检测原理
实验例
参考文献
产品概述
MitoPeDPP是一种新型荧光染料，由于其具有三苯基膦结构，因此可以穿过细胞膜并在线粒体中聚集。
聚集在线粒体内膜上的MitoPeDPP可以被脂质过氧化物氧化而释放出强荧光。由于氧化的MitoPeDPP
(Ox-MitoPeDPP) 的激发和发射波长分别是452 nm和470 nm，可以减小样品的光损伤和自发荧光，因此利用
荧光显微镜MitoPeDPP可以检测活细胞中的脂质过氧化物。
特点
1.特异性的在细胞中线粒体内聚集
2.可以检测线粒体膜内的脂质过氧化物
3.可以在488 nm和535 nm的荧光波长下进行检测
* 本产品由福冈大学化学系的Dr. Shioji开发
*由于MitoPeDPP量极少不宜看到，可以通过观察MitoPeDPP DMSO溶液的颜色是否为黄色来判断。
检测原理
MitoPeDPP可以穿过细胞膜并在线粒体中聚集。聚集在线粒体内膜上的MitoPeDPP可以被脂质过氧化物氧化而释放出强荧光。
实验例
1.MitoPeDPP和线粒体染色试剂MitoBright共同染色的实施例
在HeLa细胞中添加t-BHP（氢过氧化叔丁基），检测脂质过氧化物
波长（wavelength/band pass）
MitoPeDPP：470/40（Ex），525/50（Em）
MitoBright DeepRed：600/50（Ex），685/50（Em）
结果证实在HeLa细胞内的线粒体中，MitoPeDPP受t-BHP氧化后会发出荧光。另外通过与线粒体染色试剂（MitoBright Deep Red:MT08）的共染色，确认了MitoPeDPP的荧光是定位在线粒体中。
2.检测添加Rotenone产生的脂质过氧化物
向HeLa细胞[μ-slide，8孔（由Ibidi制造）]中添加MitoPeDPP之后，添加Rotenone溶液并使用荧光显微镜观察。实验结果证实，添加Rotenone后，检测到细胞中产生了脂质过氧化物。
Rotenone的刺激时间：0 min(左)，90 min(中)，180 min(右)
上部）荧光图，下部）明场图
3.神经细胞使用MitoPeDPP的实验例
A.荧光显微镜检测
向NIE-115细胞（小鼠神经芽细胞瘤）添加异黄素，诱导Ca2+流入细胞内，并通过MitoPeDPP的荧光染色来观察线粒体膜内的脂溶性过氧化物的产生。实验结果证实添加了异霉素的实验组相比对照组来说荧光更强。
B. 平均荧光强度数据比较
为了量化对照组细胞和添加了离子霉素的细胞的荧光强度，对两组数据进行基于平均荧光强度的比较。
结果证实，加入离子霉素后30分钟的细胞对比对照组的细胞，观察到的荧光强度显着增加。
数据提供（Free Radical Research, in press)
参照芝浦工业大学系统理工学院 福井浩二副教授、中村沙希[参考文献3]
4.MitoPeDPP反应的选择性
在不含细胞的反应体系中，MitoPeDPP可以与各种过氧化物如H2O2，t-BHP和ONOO- 反应，但是在细胞中，积
累在线粒体中的MitoPeDPP可以被t-BHP氧化而释放出较强荧光 (图3A)，却和其它ROS或RNS反应很弱 (图3B)。
A) 在HepG2细胞中加入MitoPeDPP培养15 min，然后用100 μmol / l的t-BHP处理。
B) 在HepG2细胞中加入MitoPeDPP培养15 min后，加入ROS、RNS诱导剂。
分别加入100 μmol / l (H2O2，NO和ONOO-诱导剂)和10 μmol / l PMA（O2-.诱导剂） 。
左边为明场图，右边为荧光图
* t-BHP：tert-Butylhydroperoxide; PMA, Phorbol myristate acetate;
SIN-1, 3-(Morpholinyl)sydnonimine, hydrochloride;
NOC 7, 1-Hydroxy-2-oxo-3-(N-methyl-3-aminopropyl)-3-methyl-1-triazene
波长/带通滤波器：470/40 (Ex), 525 /50 (Em)
参考文献
1) K. Shioji K, Y. Oyama, K. Okuma and H. Nakagawa, “Synthesis and properties of fluorescence probe for detection of peroxides in mitochondria.”, Bioorg Med Chem Lett., 2010, 20, (13), 3911.
2) S. Oka, J. Leon, K. Sakumi, T. Ide, D. Kang, F. M. LaFerla and Y. Nakabeppu, “Human mitochondrial transcriptional factor A breaks the mitochondria-mediated vicious cycle in Alzheimer’s disease”, Scientific Reports ., 2016, DOI: 10.1038/srep37889 , .
3) S. Nakamura, A. Nakanishi, M. Takazawa, S. Okihiro, S. Urano and K. Fukui, “Ionomycin-induced calcium influx induces neurite degeneration in mouse neuroblastoma cells: Analysis of a time-lapse live cell imaging system”, Free Radical Research., 2016, 50, (11), 1214.
4) M. Akimoto, R. Maruyama, Y. Kawabata, Y. Tajima and K. Takenaga, “Antidiabetic adiponectin receptor agonist AdipoRon suppresses tumour growth of pancreatic cancer by inducing RIPK1/ERKdependent necroptosis”, Cell Death Dis., 2018, 9, 804.
5) M. Álvarez-Córdoba, A. Fernández Khoury, M. Villanueva-Paz, C. Gómez-Navarro, I. Villalón-García, J. M. Suárez-Rivero, S. Povea-Cabello, M. Mata, D. Cotán, M. Talaverón-Rey, A. J. Pérez-Pulido, J. J. Salas, E. M. Pérez-Villegas, A. Díaz-Quintana, J. A. Armengol, J. A. Sánchez-Alcázar , “Pantothenate Rescues Iron Accumulation in Pantothenate Kinase-Associated Neurodegeneration Depending on the Type of Mutation.”, Mol. Neurobiol. ., 2019, 56, (5), 3638.
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mtSOX Deep Red – Mitochondrial Superoxide Detection
线粒体超氧化物检测用荧光染料
线粒体膜电位检测试剂盒—JC-1 MitoMP Detection Kit
线粒体膜电位检测试剂盒
线粒体膜电位检测试剂盒
线粒体膜电位检测试剂盒
MitoBright LT Green试剂
线粒体长效荧光探针-绿色
MitoBright LT Deep Red试剂
线粒体长效荧光探针-深红色
日本同仁化学线粒体染色 线粒体损伤 线粒体自噬 线粒体氧化应激 线粒体呼吸- DOJINDO
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线粒体
线粒体(mitochondrion) 是一种存在于大多数细胞中的由两层膜包被的细胞器，是细胞中制造能量的结构，是细胞进行有氧呼吸的主要场所，线粒体拥有自身的遗传物质和遗传体系，但其基因组大小有限，是一种半自主细胞器。除了为细胞供能外，线粒体还参与诸如细胞分化、细胞信息传递和细胞凋亡等过程，并拥有调控细胞生长和细胞周期的能力。最近越老越多的研究发现线粒体在细胞中的作用远远不止”细胞能量站”。它们参与了各种细胞功能调控，与很多人类疾病存在着莫大的联系。包括细胞信号传导、代谢、自噬、衰老和肿瘤发生都与线粒体的质量和活性相关
线粒体染色
线粒体损伤
线粒体自噬
线粒体氧化应激
线粒体呼吸
品名货号用途
| MitoBright IM Red for Immunostaining试剂 | MT15 | 免疫荧光用线粒体荧光染料Red |
| MitoBright LT Green试剂 | MT10 | 线粒体长效荧光染色（绿色） |
| MitoBright LT Red试剂 | MT11 | 线粒体长效荧光染色（红色） |
| MitoBright LT Deep Red试剂 | MT12 | 线粒体长效荧光染色（深红色） |
| 线粒体膜电位检测试剂盒 | MT13 | 线粒体膜电位检测 |
| 线粒体膜电位检测试剂盒—JC-1 MitoMP Detection Kit | MT09 | 线粒体膜电位检测 |
| Cellstain- MitoRed试剂 | R237 | 线粒体ATP检测-红色 |
| Mtphagy Dye试剂 | MT02 | 线粒体自噬 |
| 线粒体自噬—Mitophagy Detection Kit | MD01 | 线粒体自噬检测 |
| mtSOX Deep Red – Mitochondrial Superoxide Detection | MT14 | 线粒体超氧化物检测 |
| 铁离子荧光探针—Mito-FerroGreen | M489 | 线粒体内二价铁离子检测 |
| Si-DMA for Mitochondrial Singlet Oxygen Imaging试剂 | MT05 | 线粒体内单线态氧检测 |
| MitoPeDPP试剂 | M466 | 线粒体内脂质过氧化物检测 |
| ADP/ATP比率检测试剂盒—ADP/ATP Ratio Assay Kit-Luminescence | A552 | 检测细胞中ADP与ATP的比率 |
| Oxygen Consumption Rate(OCR) Plate Assay Kit-氧消耗量检测试剂盒 | E297 | 氧消耗量检测 |
| Cell Counting Kit-Luminescence试剂盒 | CK18 | ATP活性检测 |
| Glutamine Assay Kit-WST试剂盒 | G268 | 谷氨酰胺的定量检测 |
| Glutamate Assay Kit-WST试剂盒 | G269 | 谷氨酸的定量检测 |
| NAD/NADH Assay Kit-WST试剂盒 | N509 | NAD/NADH检测试剂盒 |
| NADP/NADPH Assay Kit-WST试剂盒 | N510 | NADP/NADPH检测 |
| α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric | K261 | 对细胞内的α-KG进行定量检测 |
线粒体功能研究
▶ 线粒体呼吸指标一览表
▶ 线粒体染色选择指南
▶ 线粒体自噬检测
▶ 线粒体膜电位选择指南
▶ 代谢相关检测
▶ 癌症关联检测
▶ 脂质过氧化物积累与细胞衰老、线粒体之间的联系
线粒体质量控制途径
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线粒体自噬检测
| 线粒体自噬 | ||
| 试剂 | Mtphagy Dye | Keima-Red |
| 原理 | 线粒体自噬染料是一种PH敏感的荧光探针，该染料聚集在线粒体中，并由溶酶体的酸性条件而发出荧光 | 这是一种基于PH感应比值的荧光蛋白。该蛋白在溶酶体中具有比较高的荧光比值（如550 nm/440 nm）。 |
| 固定细胞染色 | – | – |
| 活细胞染色 | Yes | Yes |
| 活细胞染色后固定 | – | – |
| 染色时间 | >30 min | – |
| Ex/Em | 530/700 | 440,550/620 |
| 产品货号 | MD01 , MT02 | – |
线粒体自噬Mitophagy试剂盒【MD01】无需蛋白质表达/转染。添加试剂即可轻松检测线粒体自噬。
线粒体膜电位检测
| Membrane potential
线粒体膜电位 |
|||
| 试剂 | JC-1 | MT-1 | TMRM, TMRE |
| 原理 | JC-1是一种被广泛使用的小分子线粒体膜电位探针，依赖于线粒体膜电位在线粒体中聚集，染料伴随聚集过程，荧光从绿色 (530 nm) 变为红色 (590 nm)。当线粒体发生去极化，红/绿荧光强度比值降低。 | 由于膜电位，细胞渗透性荧光染料在完整的线粒体中积累。MT-1具有极强的光稳定性，比JC-1更灵敏，可以提供与TMRE相当的检测灵敏度。 | 该试剂是细胞渗透性荧光染料，由于膜电位在完整的线粒体中积累。探针扩散发生在膜电位降低的受损线粒体中。 |
| 固定细胞染色 | – | – | – |
| 活细胞染色 | Yes | Yes | Yes |
| 活细胞染色后固定 | – | Yes | – |
| 染色时间 | 10- 60 min | 30 min | 30- 60 min |
| Ex/Em | Monomer:514/529
J-aggregation: 585/590 |
530-560 / 570-640 | 550/575 |
| 产品货号 | MT09 | MT13 | – |
JC-1、TMRE和TMRM广泛用于监测线粒体膜电位。然而，这些染料具有局限性，例如光稳定性低和醛固定后的保留性差。这些限制导致实验再现性差。
MT-1 MitoMP检测试剂盒具有高光稳定性，即使在染色后用多聚甲醛固定的细胞中。这些特征使得MT-1试剂盒能够产生高度可重复的结果。
此外，该试剂盒中包含的成像缓冲液使背景荧光最小化，并在进行测定时保持细胞活力。
线粒体金属离子检测
| Iron ion (Fe2+)
亚铁离子 |
Calcium ion (Ca2+)
钙离子 |
|
| 试剂 | Mito-FerroGreen | Rhod 2-AM |
| 原理 | 该试剂是一种细胞通透性探针，其积累在线粒体中，并与线粒体中的亚铁离子发生特异性反应，发出绿色荧光。 | 该试剂是一种细胞通透性探针，该探针积聚在线粒体中，并与线粒体中的钙离子发生特异性反应，发出红色荧光。 |
| 固定细胞染色 | – | – |
| 活细胞染色 | Yes | Yes |
| 活细胞染色后固定 | – | – |
| 染色时间 | 30 min | 30-60 min |
| Ex/Em | 505/535 | 553/576 |
| 产品货号 | M489 | R002 |
线粒体荧光染色
| Mitochondria staining
线粒体染色 |
|||
| 试剂 | MitoBright LT series | MitoBright IM Red | MitoTracker series |
| 原理 | 细胞渗透性荧光染料，基于线粒体膜电位而在完整的线粒体中积累。 | 细胞渗透性荧光染料，由于膜电位而聚集在完整的线粒体中，并与蛋白质和其他生物分子共价结合。 | 细胞渗透性荧光染料，基于线粒体膜电位而在完整的线粒体中积累。 |
| 固定细胞染色 | – | – | – |
| 活细胞染色 | Yes | Yes | Yes |
| 活细胞染色后固定 | – | Yes | – |
| 染色时间 | >10 min | 30 min | 15 -45 min |
| Ex/Em | 493/508,547/563, 643/663 | 548/566 | 490/516~644/665 |
| 产品货号 | MT10、MT11、MT12 | MT15 | – |
在HeLa细胞中4天后，MitoBright LT仍被证实保留在线粒体中。
日本同仁化学MitoPeDPP试剂货号：M466- DOJINDO
上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学 DOJINDO代理商全线产品，欢迎访问官网了解更多信息
MitoPeDPP试剂货号：M466
3-[4-(Perylenylphenylphosphino)phenoxy]propyltriphenylphosphonium iodide
MitoPeDPP
商品信息
储存条件：0-5度保存，避光
运输条件：室温
特点：
● 定位线粒体
● 更深层次脂质过氧化探究
下载说明书
产品文献
宣传资料下载
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铁死亡通路图
选择规格：
5μg*3
铁死亡检测方案
活动进行中
产品概述
检测原理
实验例
参考文献
活动进行中
订购满5000元，200元礼品等你拿
凑单关联产品TOP5
NO.1. FerroOrange 细胞亚铁离子检测
NO.2. Mito-FerroGreen 线粒体内亚铁离子检测
NO.3. Liperfluo 细胞脂质过氧化物检测
NO.4. GSSG/GSH Quantification Kit II 氧化型/还原型谷胱甘肽
NO.5. ROS Assay Kit 活性氧检测
产品概述
MitoPeDPP是一种新型荧光染料，由于其具有三苯基膦结构，因此可以穿过细胞膜并在线粒体中聚集。
聚集在线粒体内膜上的MitoPeDPP可以被脂质过氧化物氧化而释放出强荧光。由于氧化的MitoPeDPP
(Ox-MitoPeDPP) 的激发和发射波长分别是452 nm和470 nm，可以减小样品的光损伤和自发荧光，因此利用
荧光显微镜MitoPeDPP可以检测活细胞中的脂质过氧化物。
特点
1.特异性的在细胞中线粒体内聚集
2.可以检测线粒体膜内的脂质过氧化物
3.可以在488 nm和535 nm的荧光波长下进行检测
* 本产品由福冈大学化学系的Dr. Shioji开发
*由于MitoPeDPP量极少不宜看到，可以通过观察MitoPeDPP DMSO溶液的颜色是否为黄色来判断。
检测原理
MitoPeDPP可以穿过细胞膜并在线粒体中聚集。聚集在线粒体内膜上的MitoPeDPP可以被脂质过氧化物氧化而释放出强荧光。
实验例
1.MitoPeDPP和线粒体染色试剂MitoBright共同染色的实施例
在HeLa细胞中添加t-BHP（氢过氧化叔丁基），检测脂质过氧化物
波长（wavelength/band pass）
MitoPeDPP：470/40（Ex），525/50（Em）
MitoBright DeepRed：600/50（Ex），685/50（Em）
结果证实在HeLa细胞内的线粒体中，MitoPeDPP受t-BHP氧化后会发出荧光。另外通过与线粒体染色试剂（MitoBright Deep Red:MT08）的共染色，确认了MitoPeDPP的荧光是定位在线粒体中。
2.检测添加Rotenone产生的脂质过氧化物
向HeLa细胞[μ-slide，8孔（由Ibidi制造）]中添加MitoPeDPP之后，添加Rotenone溶液并使用荧光显微镜观察。实验结果证实，添加Rotenone后，检测到细胞中产生了脂质过氧化物。
Rotenone的刺激时间：0 min(左)，90 min(中)，180 min(右)
上部）荧光图，下部）明场图
3.神经细胞使用MitoPeDPP的实验例
A.荧光显微镜检测
向NIE-115细胞（小鼠神经芽细胞瘤）添加异黄素，诱导Ca2+流入细胞内，并通过MitoPeDPP的荧光染色来观察线粒体膜内的脂溶性过氧化物的产生。实验结果证实添加了异霉素的实验组相比对照组来说荧光更强。
B. 平均荧光强度数据比较
为了量化对照组细胞和添加了离子霉素的细胞的荧光强度，对两组数据进行基于平均荧光强度的比较。
结果证实，加入离子霉素后30分钟的细胞对比对照组的细胞，观察到的荧光强度显着增加。
数据提供（Free Radical Research, in press)
参照芝浦工业大学系统理工学院 福井浩二副教授、中村沙希[参考文献3]
4.MitoPeDPP反应的选择性
在不含细胞的反应体系中，MitoPeDPP可以与各种过氧化物如H2O2，t-BHP和ONOO- 反应，但是在细胞中，积
累在线粒体中的MitoPeDPP可以被t-BHP氧化而释放出较强荧光 (图3A)，却和其它ROS或RNS反应很弱 (图3B)。
A) 在HepG2细胞中加入MitoPeDPP培养15 min，然后用100 μmol / l的t-BHP处理。
B) 在HepG2细胞中加入MitoPeDPP培养15 min后，加入ROS、RNS诱导剂。
分别加入100 μmol / l (H2O2，NO和ONOO-诱导剂)和10 μmol / l PMA（O2-.诱导剂） 。
左边为明场图，右边为荧光图
* t-BHP：tert-Butylhydroperoxide; PMA, Phorbol myristate acetate;
SIN-1, 3-(Morpholinyl)sydnonimine, hydrochloride;
NOC 7, 1-Hydroxy-2-oxo-3-(N-methyl-3-aminopropyl)-3-methyl-1-triazene
波长/带通滤波器：470/40 (Ex), 525 /50 (Em)
参考文献
1) K. Shioji K, Y. Oyama, K. Okuma and H. Nakagawa, “Synthesis and properties of fluorescence probe for detection of peroxides in mitochondria.”, Bioorg Med Chem Lett., 2010, 20, (13), 3911.
2) S. Oka, J. Leon, K. Sakumi, T. Ide, D. Kang, F. M. LaFerla and Y. Nakabeppu, “Human mitochondrial transcriptional factor A breaks the mitochondria-mediated vicious cycle in Alzheimer’s disease”, Scientific Reports ., 2016, DOI: 10.1038/srep37889 , .
3) S. Nakamura, A. Nakanishi, M. Takazawa, S. Okihiro, S. Urano and K. Fukui, “Ionomycin-induced calcium influx induces neurite degeneration in mouse neuroblastoma cells: Analysis of a time-lapse live cell imaging system”, Free Radical Research., 2016, 50, (11), 1214.
4) M. Akimoto, R. Maruyama, Y. Kawabata, Y. Tajima and K. Takenaga, “Antidiabetic adiponectin receptor agonist AdipoRon suppresses tumour growth of pancreatic cancer by inducing RIPK1/ERKdependent necroptosis”, Cell Death Dis., 2018, 9, 804.
5) M. Álvarez-Córdoba, A. Fernández Khoury, M. Villanueva-Paz, C. Gómez-Navarro, I. Villalón-García, J. M. Suárez-Rivero, S. Povea-Cabello, M. Mata, D. Cotán, M. Talaverón-Rey, A. J. Pérez-Pulido, J. J. Salas, E. M. Pérez-Villegas, A. Díaz-Quintana, J. A. Armengol, J. A. Sánchez-Alcázar , “Pantothenate Rescues Iron Accumulation in Pantothenate Kinase-Associated Neurodegeneration Depending on the Type of Mutation.”, Mol. Neurobiol. ., 2019, 56, (5), 3638.
6）Yaxu Li, Qiao Ran, Qiuhui Duan, Jiali Jin, Yanjin Wang, Lei Yu, Chaojie Wang, Zhenyun Zhu, Xin Chen, Linjun Weng, Zan Li, Jia Wang, Qi Wu, Hui Wang, Hongling Tian, Sihui Song, Zezhi Shan, Qiwei Zhai, Huanlong Qin, Shili Chen, Lan Fang, Huiyong Yin, Hu Zho“7-Dehydrocholesterol dictates ferroptosis sensitivity”Nature.626, 411-418（2024）.
日本同仁化学铁死亡 脂质过氧化 铁离子- DOJINDO
上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学 DOJINDO代理商全线产品，欢迎访问官网了解更多信息
铁死亡
铁死亡是一种主要由铁依赖的氧化损伤所引起的调节性细胞坏死。但这种死亡方式在形态学、生物化学和遗传学等方面与凋亡、坏死、自噬都有较大的差别。 下表为铁死亡常用检测指标，各指标检测方法可点击链接查看，其与铁死亡的关系可下拉，获取铁死亡特刊了解。
脂质过氧化
铁离子
更多关联指标
品名货号用途
| Lipid Peroxidation Probe -BDP 581/591 C11试剂 | L267 | 脂质过氧化检测 |
| Liperfluo-细胞脂质过氧化物检测 | L248 | 细胞脂质过氧化物检测 |
| MDA检测试剂盒 | M496 | 检测细胞或组织中的MDA浓度 |
| MitoPeDPP试剂 | M466 | 线粒体内脂质过氧化物检测 |
铁死亡的发生
在细胞中有大量的脂质组成细胞膜，细胞膜上的脂质会以大量磷脂的形式存在，细胞内的脂质会分为单不饱和脂肪酸和多不饱和脂肪酸，在氧分子和铁离子的存在下，多不饱和脂肪酸的增加容易被氧化而产生脂质过氧化物，有更多的不饱和脂肪酸的情况下，会更容易扩散，引起细胞膜损伤，也就是我们说的铁死亡。但是正常的细胞是可以调控这种细胞膜损伤，也就是我们常说的GPX4通路等等抗氧化系统，所以细胞才能在氧化物质存在的情况下，仍然可以存活。
以上为铁死亡的简要发生原理，我们也整理了较为详尽的铁死亡通路图，点击下方链接可直接下载
铁死亡通路图下载链接
如何检测铁死亡发生
各指标与铁死亡的关联性、检测注意事项等，请扫描以下二维码获取铁死亡特刊以及铁死亡讲座回放
更多铁死亡指标，请点击查看本页上方表格内各指标详情↑
铁死亡的机制及其在疾病中的作用
各种疾病与铁死亡的文献整理，请上拉扫描二维码联系我们获取
实验例：Erastin诱导铁死亡发生
Erastin是一种已知的铁死亡诱导剂。通过抑制胱氨酸转运蛋白（xCT），erastin抑制胱氨碱的摄取。胱氨酸是谷胱甘肽的原料。因此，Erastin最终会降低GSH的含量。GSH的降低会导致脂质过氧化物的积累和铁死亡的诱导。
以下实验实例显示了在Erastin刺激下各指标结果的变化情况，各项指标均使用Dojindo试剂进行测量。
使用Erastin处理的A549细胞，我们测量了细胞内Fe2+、ROS、脂质过氧化物、谷胱甘肽、谷氨酸释放到细胞外含量和胱氨酸摄取。结果，观察到Erastin对xCT的抑制，导致谷氨酸的释放和胱氨酸的摄取也减少。此外，Erastin处理后，细胞内谷胱甘肽降低，细胞内Fe2+、ROS和脂质过氧化物增加。
更多实验资讯
| 代谢检测指南 |
线粒体检测指南 |
衰老试剂选择指南 | 细胞增殖/毒性检测 |
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DOJINDO同仁CCK-8细胞增殖/细胞毒性检测试剂盒
DOJINDO同仁CCK-8细胞增殖/细胞毒性检测试剂盒
- 产品型号：
- 简单描述
- DOJINDO同仁CCK-8细胞增殖/细胞毒性检测试剂盒CCK-8用途：药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验CCK-8试剂盒在国内科研院所、重点大学、*医院被广泛应用，认可度高，使用CCK-8发表的中外文献达600多篇，其中截止08年底SCI影响因子IF＞10分的论文有37篇，Z高IF38.5分
详细介绍
DOJINDO同仁CCK-8细胞增殖/细胞毒性检测试剂盒
CCK-8法与普通的MTT法相比，具有显著特点：
★灵敏度高，数据可靠，重现性好
★操作简便，省时省力
★水溶性，不需要换液，尤其适合于悬浮细胞
★无需放射性同位素和有机溶剂，对细胞毒性低
★为1瓶溶液，毋需预制，即开即用
★适合于高通量药物筛选
DOJINDO同仁CCK-8细胞增殖/细胞毒性检测试剂盒
Cell Counting Kit-8（CCK-8试剂盒）是由同仁化学研究所（Dojindo）开发的检测细胞增殖、细胞毒性的试剂盒，为MTT法的替代方法，试剂盒中采用自己开发的水溶性四唑盐-WST-8，在美国，欧洲等国家地区均持有，同仁化学研究所于2006年在中国获得了WST的注册商标。
2015年版中国药典第三部363页收载了新药：尼妥珠单抗（Nimotuzumab）注射液，是*个以表皮生长因子受体（EGFR）为靶点的单抗药物，也是中国*个治疗恶性肿瘤的人源化单克隆抗体。商品名：泰欣生（百泰药业生产）。
该药的生物学活性测定方法采用H292细胞（人肺癌淋巴结转移细胞）增殖抑制法（通则138页），使用了同仁化学研究所（Dojindo Laboratories）研发的CCK-8试剂。这是CCK-8检测方法*被中国药典收载，表明该方法已经获得国家机构认可。
CCK-8试剂与MTT等方法灵敏度比较
CCK-8试剂毒性：CCK-8和其他检测方法对比可以得出——CCK-8对细胞几乎无毒性，不伤害细胞，细胞可重复利用
CCK-8 P公司产品 R公司产品
（操作说明请参考中英文说明书或来电/在线咨询）
細胞増殖/細胞毒性アッセイキット Cell Counting Kit-8 同仁化学研究所
上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。
Cell Counting Kit-8
01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
Cell Counting Kit-8
- 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
- 細胞機能解析
- 細胞毒性
細胞増殖/細胞毒性アッセイキット
-
製品コードCK04 Cell Counting Kit-8
| 容 量 | メーカー希望 小売価格 |
富士フイルム 和光純薬 |
|---|---|---|
| 100 回用 | ￥6,200 | 341-07761 |
| 500 回用 | ￥15,400 | 347-07621 |
| 2500 回用 | ￥42,600 | 343-07623 |
| 5000 回用 | ￥79,200 | 341-07624 |
| 10000 回用 | ￥113,000 | 341-08001 |
キット内容
| 100 回用 | 1 ml×1 | |
|---|---|---|
| 500 回用 | 5 ml×1 | |
| 2500 回用 | 5 ml×5 | |
| 5000 回用 | 5 ml×10 | |
| 10000 回用 | 100 ml×1 |
試験成績書
SDSダウンロード
- ご購入方法
- お問い合わせ
マニュアル
-
取扱説明書
日本語 
-
取扱説明書 English
-
プロトコル 生細胞数を測りたい(吸光測定)
-
パンフレット 細胞増殖測定 細胞染色プロトコル
技術情報
-
細胞別の参考文献 一覧 Cell Counting Kit-8を使用した、細胞別の論文を掲載しています。
参考文献
参考文献を表示する
-
細胞別の参考文献はコチラ
1) M. Ishiyama, Y. Miyazono, K. Sasamoto, Y. Ohkura and K. Ueno, "A Highly Water-Soluble Disulfonated Tetrazolium Salt as a Chromogenic Indicator for NADH as Well as Cell Viability", Talanta., 1997, 44, 1299.
2) H. Tominaga, M. Ishiyama, F. Ohseto, K. Sasamoto, T. Hamamoto, K. Suzuki and M. Watanabe, "A water-soluble tetrazolium salt useful for colorimetric cell viability assay", Anal. Commun., 1999, 36, 47.
3) T. Miyamoto, W. Min and H. S. Lillehoj, "Lymphocyte Proliferation Response During Eimeria tenella Infection Assessed by a New, Reliable, Nonradioactive Colorimetric Assay", Avian Dis., 2002, 46, 10.
4) K. Yoshimura, A. Tanimoto, T. Abe, M. Ogawa, T. Yutsudo, M. Kashimura and S. Yoshida, "Shiga toxin 1 and 2 Induce Apoptosis in the Amniotic cell line WISH", J. Soc. Gynecol. Investig., 2002, 9, 22.
5) Y. Hayakawa, Y. Hirata, H. Nakagawa, K. Sakamoto, Y. Hikiba, H. Kinoshita, W. Nakata, R. Takahashi, K. Tateishi, M. Tada, M. Akanuma, H. Yoshida, K. Takeda, H. Ichijo, M. Omata, S. Maeda and K. Koike, "Apoptosis signal-regulating kinase 1 and cyclin D1 compose a positive feedback loop contributing to tumor growth in gastric cancer", Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 2011, 108, (2), 780.
6) R. Chugh, V. Sangwan, S. P. Patil, V. Dudeja, R. K. Dawra, S. Banerjee, R. J. Schumacher, B. R. Blazar, G. I. Georg, S. M. Vickers and A. K. Saluja, "A Preclinical Evaluation of Minnelide as a Therapeutic Agent Against Pancreatic Cancer", Sci. Transl. Med., 2012, 4, (156), 156ra139.
7) R. Kang, T. Loux, D. Tang, N. E. Schapiro, P. Vernon, K. M. Livesey, A. Krasinskas, M. T. Lotze and H. J. Zeh III, "The expression of the receptor for advanced glycation endproducts (RAGE) is permissive for early pancreatic neoplasia", Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 2012, 109, (18), 7031.
8) Y. Matsuo, J H Park, T. Miyamoto, S. Yamamoto, S. Hisada, H. Alachkar and Y. Nakamura, "TOPK inhibitor induces complete tumor regression in xenograft models of human cancer through inhibition of cytokinesis", Sci. Transl. Med., 2014, 6, (259), 259ra145.
9) K. Takayam, Y. Morisaki, S. Kuno, Y. Nagamoto, K. Harada, N. Furukawa, M. Ohtaka, K. Nishimura, K. Imagawa, F. Sakurai, M. Tachibana, R. Sumazaki, E. Noguchi, M. Nakanishi, K. Hirata, K. Kawabata and H. Mizuguchi, "Prediction of interindividual differences in hepatic functions and drug sensitivity by using human iPS-derived hepatocytes", Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 2014, 111, (47), 16772.
10) T. Ida, T. Sawa, H. Ihara, Y. Tsuchiya, Y. Watanabe, Y. Kumagai, M. Suematsu, H. Motohashi, S. Fujii, T. Matsunaga, M. Yamamoto, K. Ono, N. O. Devarie-Baez, M. Xian, J. M. Fukuto and Takaaki Akaike, "Reactive cysteine persulfides and S-polythiolation regulate oxidative stress and redox signaling", Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 2014, 111, (21), 7606.
11) K. Palumbo-Zerr, P. Zerr, A. Distler, J. Fliehr, R. Mancuso, J. Huang, D. Mielenz, M. Tomcik, B. G Furnrohr, C. Scholtysek, C. Dees, C. Beyer, G. Kronke, D. Metzger, O. Distler, G. Schett and J. H W Distler, Orphan nuclear receptor NR4A1 regulates transforming growth factor-β signaling and fibrosis", Nat. Med., 2015, 21, (2), 150.
12) T. Tu, C. Zhang, H. Yan, Y. Luo, R. Kong, P. Wen, Z. Ye, J. Chen, J. Feng, F. Liu, J. Y Wu and X. Yan, "CD146 acts as a novel receptor for netrin-1 in promoting angiogenesis and vascular development", Cell Res., 2015, 25, (3), 275.
13) S. Ji, Y. Qin, S. Shi, X. Liu, H. Hu, H. Zhou, J. Gao, B. Zhang, W. Xu, J. Liu, D. Liang, L. Liu, C. Liu, J. Long, H. Zhou, P J Chiao, J. Xu, Q. Ni, D. Gao and X. Yu, "ERK kinase phosphorylates and destabilizes the tumor suppressor FBW7 in pancreatic cancer", Cell Res., 2015, 25, (5), 561.
14) N. Li, W. Zhang, M. Khan, L. Lin, JM. Lin, "MoS2-LA-PEI nanocomposite carrier for real-time imaging of ATP metabolism in glioma stem cells co-cultured with endothelial cells on a microfluidic system", Biosens Bioelectron., 2017, 99, (2018), 142.
15) R. Watanabe, T. Kurose, Y. Morishige and K. Fujimori, "Protective Effects of Fisetin Against 6-OHDA-Induced Apoptosis by Activation of PI3K-Akt Signaling in Human Neuroblastoma SH-SY5Y Cells.", Neurochem. Res.., 2018, 43, (2), 488-499.
16) Y. Xu, C. Huang, M. Liu, N. Chen, W. Chen, C. Yang, Y. Zhao, X. Li, J. Duan, S. Liu and S. Yang, "Survivin regulated by autophagy mediates hyperglycemia-induced vascular endothelial cell dysfunction", Exp. Cell Res.., 2018,doi: 10.1016/j.yexcr.2018.01.037 .
17) E. E. Mon, F. Y. Wei, R. N. R. Ahmad, T. Yamamoto, T. Moroishi and K. Tomizawa, "Regulation of mitochondrial iron homeostasis by siderofexin 2 ", J Physiol Sci.,2018,doi:10.1007/s12576-018-0652-2.
よくある質問
-
Q
カタログや説明書には96 wellプレートでの測定例が示してありますが、 24 wellや12 wellのプレートで測定を行うことができますか？ その場合には試薬(Cell Counting Kit)の添加量はどのようにすれば良いでしょうか？
-
A
96wellプレート以外でも測定できます。
試薬の添加量は使用培地の10分の1を目安にして下さい。
(1 mLであれば試薬を100 μL など）細胞数などにより、試薬の添加量を少なくして測定できる可能性もありますが、最初は10分の１量を目安として検討されることをお勧めします。
-
Q
Cell Counting Kit-8とCell Counting Kit-Fの違いは何ですか？
-
A
Cell Counting Kit-8は細胞内酵素活性を指標とし、比色測定を行います。
【Cell Counting Kit-8】
色素：WST-8
形態：1ボトルCell Counting Kit-Fは蛍光での測定となります。
細胞内エステラーゼ活性を指標に蛍光測定を行います。
比色法よりも少ない細胞数から測定出来ます。（50 cells/well 以上）【Cell Counting Kit-F】
色素：Calcein-AM
形態：1ボトル
-
製品別に細胞増殖および毒性試験法の特徴を一覧表で比較しています 細胞増殖／細胞毒性測定試薬ガイド
-
-
Q
Cell Counting Kit-8とMTTの違いは何でしょうか？
-
A
細胞の酵素により、テトラゾリウムがホルマザンになるというのは共通したところです。
それぞれの違いとしては【Cell Counting Kit-8】
生成するホルマザンが水溶性である。（溶解操作が不要）
測定波長：400～450 nm
細胞全体の酵素活性を反映している。
生成するホルマザンは細胞毒性がない。
細胞が生きたまま測定できる。【MTT】
生成するホルマザンが非水溶性である。（有機溶媒等による溶解が必要）
測定波長：550～600 nm
主にミトコンドリアの酵素活性を反映している。
生成するホルマザンが細胞毒性を示す。
細胞を溶かさないと測定できない。有機溶媒によるホルマザン溶解が必要な分、MTTの方が操作が煩雑になります。
-
製品別に細胞増殖および毒性試験法の特徴を一覧表で比較しています 細胞増殖／細胞毒性測定試薬ガイド
-
-
Q
ブランク試験を行うとしたらどのような条件で吸光度を測定すればよいでしょうか？ （細胞単独、細胞＋培地、培地のみ、いずれも無し etc.)
-
A
ブランクとして確認するのは3種類の考え方があります。
①細胞＋培地にて600 nm以上で測定する。
→細胞を含む培地の測定試料に濁りがある場合に測定します。
濁りによる散乱が測定誤差となるためで、全波長領域で高くなります。試薬の吸収がない600 nm以上で測定します。しかし、濁りがない、殆ど無視できる程度の濁りであれば、測定する必要はありません。②細胞＋培地にて450 nm(測定波長)を測定する。
→細胞を含む培地の測定試料に試薬の発色と同じ吸収がある場合に測定します。
450 nmの吸収ですので、試料の着色で判断できます。着色がなければ必要はありません。③培地＋試薬(CCK)にて450 nm(測定波長)を測定する。
→細胞を含まない培地に試薬を添加した場合の吸収を測定するもので、一般的な試薬ブランクです。
培地に還元性物質が含まれると、試薬が発色します。そのような発色がないことを確認します。
発色が僅かであれば、ブランクとして差し引いてもよいです。しかし、発色が強いようであれば培地中の還元物質を除くか、別の培地をご検討下さい。
また、薬物添加試験を行われるのであれば、添加する薬物で発色しないかを確認してください。＊ブランクとして大きく出てくるのは②の培地に着色がある場合と③の試薬の誤発色です。
これらをご確認ください。
-
Q
前培養をするように取扱説明書に指示されていますが、これは必要なものですか？
-
A
付着細胞では前培養を推奨しております。
トリプシン処理等により培養用フラスコから回収する際に、細胞はダメージを受けます。
そのため、対数増殖期の状態にために細胞の前培養が必要になります。浮遊細胞の場合は省略しても構いません。
-
Q
Cell Counting Kit-8の発色に阻害を与えるような物質はなんですか？
-
A
一般的に還元物質（アスコルビン酸など）が共存していると正誤差が生じます。
フェノールレッドや血清は問題ありません。
フェノールレッドの場合、若干（5％程度）のブランク上昇がみられますが、使用上は問題ありません。しかし、発色に阻害を与える培地成分が含まれているかもしれませんので、ご使用の培地が誤発色を与えないかご確認の上、ご使用ください。（薬剤も同様です）
また薬剤によっては細胞の機能に影響を与えるものがあるようで、細胞の増殖能は止まっていても酵素活性を働かせたりしていると（タンパク合成を行なったり）発色を起こしたりします。
負誤差の要因としては、特にこの物質が影響があるといわれているものはないのですが、上記と逆で、薬剤により影響を受け、実際には増殖しているのに発色が低く出る
という現象が起ることはあるようです。また、酸化剤も発色を阻害し負誤差を与える要因となることがあります。
-
Q
細胞数は変わらないのに吸光度が上昇します。どのような要因が考えられますか。
-
A
以下の要因が考えられます。
(1)還元物質の影響
(2)細胞当たりの代謝活性の変化詳細は下記をご確認下さい。
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(1)還元物質の影響について試料や被験物質に還元性を持つ物質が存在する場合、Cell Counting Kit-8に含まれるWST-8を直接還元し誤発色することがあります。
細胞が無い系で、Cell Counting Kit-8を添加し、発色の有無を予めご確認ください。
発色する場合は、Cell Counting Kit-8を添加する前に培地交換を行ってください。その他発色に影響を与える因子については、
よくある質問「Cell Counting Kit-8の発色に阻害を与えるような物質はなんですか？」をご確認ください。
—————————————————————————————————————————————-
(2)細胞当たりの代謝活性の変化について細胞当たりの代謝活性が上昇した場合、細胞数が変わらなくても、吸光度が上昇することがあります。
Cell Counting Kit-8は生細胞の脱水素酵素の活性を指標としています。
そのため、細胞数の変化がなくても、細胞の代謝活性が変化した場合に吸光度が変化する可能性があります。細胞の代謝活性の変化の有無は、別の指標で生細胞を測定*1したり、細胞の代謝産物＊2を確認することで
複合的に評価される場合があります。下記リンク先の資料もご参考ください。*1:細胞増殖／細胞毒性測定用試薬の選択ガイド
*2:細胞内代謝測定
—————————————————————————————————————————————-
ご不明点がありましたら、小社カスタマーサポートまでお問合せください。
(free dial:0120-489548 / E-mail:info@dojindo.co.jp)
-
Q
呈色反応を途中で止めたい(測定までに時間が空く)のですが、どうすれば反応を止められますか？
-
A
Cell Counting Kitの発色機構は細胞内に存在する脱水素酵素に依存しているので、
呈色反応を止めるには、この酵素反応を止める為に細胞を死滅させます。下記のいずれかの方法で反応停止を行ってください(添加量は96wellの場合)
反応停止後は24時間以内に測定して下さい。(1)1 w/v% SDSを10 μL添加する。
*SDSを添加する場合には、泡立たないように注意して下さい。
表面に泡があると光散乱して吸光度が高くなります。
(2)0.1 mol/ HClを10 μL添加する。
*もし、緩衝能の高い培地をご使用の場合には、もっと濃い酸を添加してください。
アルカリ溶液による反応停止では定量が出来ません。
反応液をアルカリ性にすると、生成したホルマザン色素が青変し、定量性が失われます。
-
Q
450 nm 以外のフィルターは使用できますか？
-
A
430-490 nm のフィルターが使用できますが、450 nm のフィルターをご使用いただきますと最も高感度に測定できます。
参考)WST-8ホルマザンの吸収スペクトル
-
Q
Cell Counting Kit-8の保存期間を教えてください。
-
A
キット溶液は4℃で12ヶ月安定です。遮光して冷蔵にて保管してください。
長期保存の際は、遮光し-20℃で保存してください。
凍結-融解操作はなるべく行わないで下さい。
＊容器をプラスチック容器に変更いたしました。（以前はガラス容器）それに伴い、安定性試験を再度行い冷蔵での長期安定性が確認出来ましたので保管条件を変更しております。
取扱条件
| 保存条件: 冷蔵,遮光 |
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関連製品
この製品に関連する研究では、下記の関連製品も使われています。
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細胞毒性測定キット
Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST
-
細胞増殖/細胞毒性アッセイキット
Viability/Cytotoxicity Multiplex Assay Kit
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微生物増殖アッセイキット
Microbial Viability Assay Kit-WST
-
グルタチオン定量キット
GSSG/GSH Quantification Kit
細胞増殖/細胞毒性アッセイキット Cell Counting Kit-F 同仁化学研究所
上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。
Cell Counting Kit-F
01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
Cell Counting Kit-F
- 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
- 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
- 細胞毒性
細胞増殖/細胞毒性アッセイキット
-
製品コードCK06 Cell Counting Kit-F
| 容 量 | メーカー希望 小売価格 |
富士フイルム 和光純薬 |
|---|---|---|
| 500 回用 | ￥16,500 | 343-07743 |
キット内容
| 500 回用 | Calcein-AM DMSO solution | 110 μl x1 |
|---|
試験成績書
SDSダウンロード
- ご購入方法
- お問い合わせ
マニュアル
-
取扱説明書
-
取扱説明書 English
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プロトコル 生細胞数を測りたい（蛍光測定）
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パンフレット 細胞増殖測定細胞染色プロトコル
技術情報
-
細胞増殖／細胞毒性測定試薬ガイド 細胞増殖および毒性試験法の特徴を一覧表で比較
参考文献
参考文献を表示する
1) S. Sakamoto, M. Yokoyama, X. Zhang, K. Prakash, K. Nagao, T. Hatanaka, R. H. Getzenberg and Y. Kakehi, "Increased Expression of CYR61, an Extracellular Matrix Signaling Protein, in Human Benign Prostatic Hyperplasia and Its Regulation by Lysophosphatidic Acid", Endocrinology, 2004, 145, 2929.
よくある質問
-
Q
51Cr-release法とCell Couting Kit-Fとの相関はありますか？
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A
Cell Couting Kit-Fとしての相関は確認していませんが、
蛍光試薬として用いているCalcein-AMと51Cr-release法との相関の報告はございます。N.G.Papadopoulos, et.al., J.Immunol.Methods, 177,101-111(1994)
-
Q
Cell Counting KitとCell Counting Kit-8、Cell Counting Kit-Fの違いは何ですか？
-
A
Cell Counting KitとCell Counting Kit-8は、発色色素が違いますが基本的な原理は同じです。
細胞内酵素活性を指標とし、比色測定を行います。
また、Cell Counting Kit-8は、Cell Counting Kitと比較して、「感度が高い」、「試薬安定性が高い」と利点があります。Cell Counting Kit-Fは蛍光での測定となります。細胞内エステラーゼ活性を指標に蛍光測定を行います。
比色法よりも少ない細胞数から測定出来ます。各製品で使用される色素と形態は以下の通りです。
【Cell Counting Kit】
色素： WST-1
形態： 2ボトル【Cell Counting Kit-8】
色素：WST-8
形態：1ボトル【Cell Counting Kit-F】
色素：Calcein-AM
形態：1ボトル
-
Q
通常の透明な培養プレートでも測定出来ますか？
-
A
白か黒のプレートを使用してください。
透明な培養プレートでは測定時の照射した光が散乱してしまい、正確な測定が行えません。
正確な測定を行うためにも、白色及び黒色の蛍光用プレートの御使用をお薦めします。
取扱条件
| 保存条件: 冷凍,遮光 | |
| 危険・有害 シンボルマーク |
 |
|---|---|
SDSダウンロード
関連製品
この製品に関連する研究では、下記の関連製品も使われています。
-
細胞増殖/細胞毒性アッセイキット
Cell Counting Kit-8
-
細胞増殖/細胞毒性アッセイキット
Viability/Cytotoxicity Multiplex Assay Kit
-
細胞毒性測定キット
Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST
-
グルタチオン定量キット
GSSG/GSH Quantification Kit
シスチン取り込み検出キット Cystine Uptake Assay Kit 同仁化学研究所
上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。
Cystine Uptake Assay Kit
01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
Cystine Uptake Assay Kit
- 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
- 細胞内代謝
シスチン取り込み検出キット
- シスチン取り込み能力を簡便に検出できる
- プレートリーダーを用いて検出が可能
-
製品コードUP05 Cystine Uptake Assay Kit
| 容 量 | メーカー希望 小売価格 |
富士フイルム 和光純薬 |
|---|---|---|
| 20 tests | ￥19,300 | 344-09951 |
| 100 tests | ￥53,500 | 340-09953 |
<使用回数の目安> 100 testsあたり、96-well plate 1 枚
キット内容
| 20 tests | Cystine Analog Solution Fluorescent Probe Reducing Agent Assay Buffer |
45 μl×1 ×1 ×1 5 ml×1 |
|---|---|---|
| 100 tests | Cystine Analog Solution Fluorescent Probe Reducing Agent Assay Buffer |
225 μl×1 ×1 ×2 25 ml×1 |
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マニュアル
-
取扱説明書 日本語
-
Manual English
技術情報
この製品でできること
本キットはCystine Analog (CA)としてSelenocystineを用いており、細胞のシスチン取り込み能力を短時間の操作で簡便にプレートリーダーにて測定することが可能です。
参考文献
参考文献を表示する
| 文献No. | 対象サンプル | 装置 | 引用（リンク） |
|---|---|---|---|
| 1) | 細胞 (A172; LN229) |
プレートリーダー | K. Hayashima, H. Katoh, "Expression of gamma-glutamyltransferase 1 in glioblastoma cells confers resistance to cystine deprivation-induced ferroptosis", J. Biol. Chem., 2022, doi:10.1016/j.jbc.2022.101703. |
| 2) | 細胞 (HK2; 293T) |
プレートリーダー | H. Chen, L. Cao, K. Han, H. Zhang, J. Cui, X. Ma, S. Zhao, C. Zhao, S. Yin, L. Fan, H. Hu, "Patulin disrupts SLC7A11-cystine-cysteine-GSH antioxidant system and promotes renal cell ferroptosis both in vitro and in vivo", 2022, Food Chem. Toxicol., doi: 10.1016/j.fct.2022.113255. |
| 3) | 細胞 (Hep 3B) |
プレートリーダー | X. Hu, Y. He, Z. Han, W. Liu, D. Liu, X. Zhang, L. Chen, L. Qi, L. Chen, Y. Luo, Q. Li, P. Chen, Q. Wu, X. Zhu and H. Guo, "PNO1 inhibits autophagy-mediated ferroptosis by GSH metabolic reprogramming in hepatocellular carcinoma ", 2022, Cell Death Dis., doi:10.1038/s41419-022-05448-7. |
よくある質問
-
Q
蛍光測定用のマイクロプレートはどのようなものが使えますか？
-
A
使用実績のあるマイクロプレートは下記の通りです。
社名 製品名 Cat No. ibidi μPlate 96 well ibiTreat black S 15 ib89626 AGC techno glass EZVIEW Glass Bottom Culture Plate LB 96well 5866-096 Thermo Fisher 96 Well Black/Clear Bottom Plate, TC Surface, Pack of 10 165305
-
Q
Cystine Analogはどのトランスポーターを介して取り込まれるのでしょうか？
-
A
Cystine Analogはシスチン・グルタミン酸トランスポーター(xCT)を介して細胞内へ取り込まれます。
-
Q
細胞種の実績を教えて下さい。
-
A
下記の細胞において使用実績があります。
由来 細胞名 ヒト神経膠芽腫由来細胞 A172 ヒト肺胞基底上皮腺癌細胞 A549 ヒト悪性黒色種 A375 ヒト結腸腺癌 HCT116 ヒト子宮頸癌由来細胞 HepG2 白血病細胞 HL60 ヒトサルコーマ細胞 HT1080 マウス胚性線維芽細胞 MEF ヒト肺小細胞癌 SBC-5 アストロサイト―マ U-251 MG
-
Q
Cystine Analogは細胞内に取り込まれた後、分解・代謝されるのでしょうか？
-
A
Cystine Analogは安定な構造を有しているため、実験操作内において分解されることはございません。
-
Q
Cystine uptake solutionは保存可能でしょうか？
-
A
Cystine uptake solutionは保存できません。添加前に必要量のCystine uptake solutionを調製して下さい。
-
Q
シスチンを定量することはできますか？
-
A
本製品を用いてシスチンを定量することはできません。
-
Q
細胞内に取り込まれたCystine Analogを定量することはできますか？
-
A
細胞内に取り込まれたCystine Analogを定量することはできません。本製品は、シスチン取り込み能力を数値化するためのキットです。
-
Q
サンプル間またはブランクとの蛍光強度差が無い場合、何を確認すればよいですか？
-
A
以下5点をご確認ください。
1.細胞数が変化している。
測定値(蛍光強度)を細胞数やタンパク質量で補正してください。
詳細はよくある質問[測定値(蛍光強度)を細胞数やタンパク質濃度で補正する方法を教えてください。]をご参照ください。2. 細胞へCystine Analogが十分取り込まれていない。
マニュアルの各操作の時間を以下を目安にご検討ください。
・シスチン不含培地での培養時間 (接着細胞 操作3, 浮遊細胞 操作4 )：5 – 30分間
・Cystine Analogの取り込み時間 (接着細胞 操作4, 浮遊細胞 操作5 ) : 30 – 60分間3. 細胞に取り込まれなかったCystine Analogがウェル内に残存することでバックグラウンドが上昇している。
PBSによる洗浄(接着細胞：操作5, 浮遊細胞：操作6)を繰り返してください。4. Working solutionが分解しており、バックグラウンドが上昇している。
Working solutionを調製後、時間をおくと溶液に含まれる蛍光色素が分解し、蛍光強度が 高くなる可能性があります。
Working Solution調製後、時間をおかずに添加してください。5. 細胞種の影響
細胞種ごとにシスチンの取り込み能は大きく異なっており、取り込み能が低い細胞種では相対的にバックグラウンドが高く見えることがあります。下図は異なるがん細胞のシスチン取り込み能の違いを示しています。上記記載の対処法でもバックグラウンドが解決できない場合には、よくある質問記載の実績のある細胞種でまずご検討いただくことをおすすめいたします。
-
Q
シスチン不含無血清培地以外にCA Uptake solutionの調製に使用できるバッファーはありますか？
-
A
HeLa細胞においてHBSSや0.1%Glucoseを含むPBS(+)を使用して測定した実績がございます。
-
Q
測定値(蛍光強度)を細胞数やタンパク質濃度で補正する方法を教えてください。
-
A
小社では下記表に記載する方法を推奨しております。使用する細胞（接着細胞・浮遊細胞）により補正方法とタイミングが異なるため、下記表を参照し[UP05による測定値]を補正してください。
細胞 接着細胞 浮遊細胞 補正方法
核染色（蛍光）
タンパク質定量法: BCA法 (比色)
製品
Cell Count Normalization Kit [Code:C544]
Sodium bicinchoninate [Code:B037]
市販のキット補正のタイミング
取扱説明書 接着細胞の操作10（UP05の測定）後の溶液を用いる。取扱説明書 浮遊細胞の操作9で使用した溶液の残りを使用する。
補正の操作
Cell count Normalization Kit [Code:C544]
の取扱説明書 [培地交換法]をご参照ください。取扱説明書 の下記 実験例をご参照ください。
[xCT阻害剤エラスチンによるシスチントランスポーター活性阻害(HL60)][UP05による測定値]を [補正方法による測定値]で補正蛍光強度を計算してください。
補正蛍光強度=[UP05による測定値]/[補正方法による測定値]※[UP05による測定値] = (サンプルの測定値) – (ブランクの測定値)
※[補正方法による測定値] = (サンプルウェルの測定値) – (細胞なしのウェルの測定値)
取扱条件
| 保存条件: 冷凍 | |
| 危険・有害 シンボルマーク |
   |
|---|---|
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関連製品
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グルコース取り込み検出キットGreen
Glucose Uptake Assay Kit-Green
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ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA-
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細胞内鉄イオン測定試薬
FerroOrange
オートファジー（オートリソソーム）の検出試薬 DALGreen – Autophagy Detection 同仁化学研究所
上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。
DALGreen – Autophagy Detection
01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
DALGreen – Autophagy Detection
- 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
- 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
- 細胞機能解析
- オートファジー
オートファジー（オートリソソーム）の検出試薬
-
製品コードD675 DALGreen – Autophagy Detection
| 容 量 | メーカー希望 小売価格 |
富士フイルム 和光純薬 |
|---|---|---|
| 20 nmol | ￥31,900 | 344-09191 |
DALGreenの最適濃度の検討については、
よくある質問の「DALGreenの最適濃度の検討方法を教えてください」
をご覧ください。
試験成績書
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マニュアル
-
取扱説明書 日本語
-
Manual English
-
プロトコル オートファジーを検出したい
技術情報
原理
 |
|
 |
DAPGreen、DAPRedと同様にオートファゴソーム形成時に色素が膜に取り込まれます。その後、リソソームと融合し酸性環境になったときにDALGreenの蛍光が増大します。 |
技術や使用製品に関する補足
グルタミン代謝とオートファジー
グルタミナーゼの安定化を介してオートファジーとグルタミノリシスを促進するタンパク質に関する報告例を紹介！
その他、疾患と細胞内代謝指標との関連性をマップでわかりやすく紹介しています。
参考文献
参考文献を表示する
| 文献No. | 対象サンプル | 装置 | 引用（リンク） |
|---|---|---|---|
| 1) | 細胞 （HeLa, MEF） |
蛍光顕微鏡 | H. Iwashita, H. T. Sakurai, N. Nagahora, M. Ishiyama, K. Shioji, K. Sasamoto, K. Okuma, S. Shimizu, and Y. Ueno, "Small fluorescent molecules for monitoring autophagic flux.", FEBS Letters., 2018, 592, (4), 559–567. |
| 2) | 細胞 （HeLa） |
蛍光顕微鏡 | T. Sakata, A. Saito and H. Sugimoto, "In situ measurement of autophagy under nutrient starvation based on interfacial pH sensing.", Scientific Reports., 2018, 8, 8282. |
| 3) | 細胞 （HS-MM） |
蛍光顕微鏡 | Y. Egawa, C. Saigo, Y. Kito, T. Moriki and T. Takeuchi, "Therapeutic potential of CPI-613 for targeting tumorous mitochondrial energy metabolism and inhibiting autophagy in clear cell sarcoma.", PLoS One., 2018, 13, (6), e0198940. |
| 4) | 細胞 （HaCaT) |
蛍光顕微鏡 | S. Abe, S. Hirose, M. Nishitani, I. Yoshida, M. Tsukayama, A. Tsuji and K. Yuasa, "Citrus peel polymethoxyflavones, sudachitin and nobiletin, induce distinct cellular responses in human keratinocyte HaCaT cells.", Biosci. Biotechnol. Biochem. ., 2018, 82, (12), 1347. |
| 5) | 細胞 （KGN) |
蛍光顕微鏡 | W. Yuping, M. Congshun, Z. Huihui, Z. Yuxia, C. Zhenguo and W. Liping, "Alleviation of endoplasmic reticulum stress protects against cisplatin-induced ovarian damage.", Reprod. Biol. Endocrinol., 2018,doi: 10.1186/s12958-018-0404-4. |
| 6) | 細胞 （BmN) |
蛍光顕微鏡 | S. Xue, F. Mao, D. Hu, H. Yan, J. Lei, E. Obeng, Y. Zhou, Y. Quan, and W. Yu, "Acetylation of BmAtg8 inhibits starvation-induced autophagy initiation.", Mol. Cell Biochem., 2019,doi: 10.1007/s11010-019-03513-y. |
| 7) | 細胞 （HeLa) |
蛍光顕微鏡 | F. Hongbao, Y. Shankun, C. Qixin, L. Chunyan, C. Yuqi, G. Shanshan, B. Yang, T. Zhiqi, L. Z. Amanda, T. Takanori, C.Yuncong, G. Zijian, H. Weijiang and D. Jiajie, "De Novo-Designed Near-Infrared Nanoaggregates for Super-Resolution Monitoring of Lysosomes in Cells, in Whole Organoids, and in Vivo.", ACS Nano, 2019, 13, (12), 1446. |
| 8) | 細胞 （RT-7) |
フローサイトメーター | E. Sasabe, A. Tomomura, N. Kitamura and T. Yamamoto, "Metal nanoparticles-induced activation of NLRP3 inflammasome in human oral keratinocytes is a possible mechanism of oral lichenoid lesions.", Toxicol In Vitro., 2020, 62, 104663. |
| 9) | 細胞 （骨髄腫) |
蛍光顕微鏡 | J. Xia, Y. He, B. Meng, S. Chen, J. Zhang, X. Wu, Y. Zhu, Y. Shen, X. Feng, Y. Guan, C. Kuang, J. Guo, Q. Lei, Y. Wu, G. An, G. Li, L. Qiu, F. Zhan and W. Zhou, "NEK2 induces autophagy-mediated bortezomib resistance by stabilizing Beclin-1 in multiple myeloma.", Mol Oncol, 2020, DOI: 10.1002/1878-0261.12641. |
| 10) | 細胞 （Human L2) |
蛍光顕微鏡 | Q. Xu, W. Shi, P. Lv, W. Meng, G. Mao, C. Gong, Y. Chen, Y. Wei, X. He, J. Zhao, H. Han, M. Sun and K. Xiao, "Critical role of caveolin-1 in aflatoxin B1-induced hepatotoxicity via the regulation of oxidation and autophagy.", Cell Death Dis., 2020, 11(1), 6. |
| 11) | 細胞 （心筋) |
蛍光顕微鏡 | L Cui, LP Zhao, JY Ye, L Yang, Y Huang, X.P. Jiang, Q. Zhang, JZ. Jia, DX. Zhang and Y. Huang, "The Lysosomal Membrane Protein Lamp2 Alleviates Lysosomal Cell Death by Promoting Autophagic Flux in Ischemic Cardiomyocytes.", Front Cell Dev Biol, 2020,DOI:10.3389/fcell.2020.00031. |
| 12) | 細胞 （IPEC-J2) |
蛍光顕微鏡 | Y Yang, J Huang, J Li, H Yang and Y. Yin, "The Effects of Butyric Acid on the Differentiation, Proliferation, Apoptosis, and Autophagy of IPEC-J2 Cells..", Curr. Mol. Med., 2020, 20(4), 307. |
| 13) | 細胞 (線維芽細胞、腎臓上皮細胞) | 蛍光顕微鏡 | M. M. Ivanova, J. Dao, N. Kasaci, B. Adewale, J. Fikry and O. G. Alpan, "Rapid Clathrin-Mediated Uptake of Recombinant α-Gal-A to Lysosome Activates Autophagy", Biomolecules, 2020, 10(6), 837. |
| 14) |
細胞 (NHEKs) |
蛍光顕微鏡 | S. Ikeoka and A. Kiso, "The Involvement of Mitophagy in the Prevention of UV-B-Induced Damage in Human Epidermal Keratinocytes ", J. Soc. Cosmet. Chem. Jpn., 2020, 54(3), 252. |
| 15) | 細胞 （HeLa） |
蛍光顕微鏡(超解像) | Q. Chen, M. Hao, L. Wang, L. Li, Y. Chen, X. Shao, Z. Tian, R. A. Pfuetzner, Q. Zhong, A. T. Brunger, J. Guan and J. Diao, "Prefused lysosomes cluster on autophagosomes regulated by VAMP8", Cell Death Dis., 2021, doi:10.1038/s41419-021-04243-0. |
| 16) | 細胞 （SH-SY5Y） |
蛍光顕微鏡 | Chang-ki Oh, Nima Dolatabadi, Piotr Cieplak, Maria T. Diaz-Meco, Jorge Moscat, John P. Nolan, Tomohiro Nakamura and Stuart A. Lipton, "S-Nitrosylation of p62 Inhibits Autophagic Flux to Promote α-Synuclein Secretion and Spread in Parkinson’s Disease and Lewy Body Dementia", J. Neurosci., 2022, doi:10.1523/JNEUROSCI.1508-21.2022. |
よくある質問
-
Q
DALGreen working solutionは、どのくらい安定ですか？
-
A
保存できません。用時調製してください。
-
Q
DMSO stock solutionは、どのくらい安定ですか？
-
A
調製後は、-20℃で保存してください。調製後1ヶ月間安定です。
また使用量に応じて小分けし保存することをお勧めします。
-
Q
オートファジーに関連するタンパク質をノックダウンし評価した実績はありますか？
-
A
オートファゴソーム膜形成に関与しているULK1及びULK2をノックダウンした細胞と野生株の細胞を飢餓誘導し、DALGreenにて評価した実績がございます。
評価では、ULK1/ULK2ノックダウン細胞に比べ、野生株ではDALGreenの蛍光が増大している結果が得られています。
本評価データは下記論文のSupporting Information（Fig. S5）をご参照ください。
なお、オートファジーのマーカーであるLC3-RFPとDALGreenを共染色し、殆どのPuncta（斑点）が共局在する結果も得られております。本実験データは、下記論文のFig..1をご参照ください。
H. Iwashita, H. T. Sakurai, N. Nagahora, M. Ishiyama, K. Shioji, K. Sasamoto, K. Okuma, S. Shimizu, and Y. Ueno, "Small fluorescent molecules for monitoring autophagic flux", FEBS Letters., 2018, 592, (4), 559–567.
論文へのリンクは製品HPにございます。
製品HP：DALGreen – Autophagy Detection
-
Q
リソソーム染色試薬との違いはありますか？
-
A
リソソーム染色試薬は、細胞内のリソソームに局在します。一方、DALGreenはオートファゴソームに
局在した後、オートファゴソームとリソソームが融合した際に蛍光が増大します。そのため、リソソーム染色試薬とDLGreenで共染色した場合、リソソーム染色試薬由来の蛍光のうち、オート
リソソームの部分がDALGreenの蛍光と重なります。
本評価データは下記論文のSupporting Information（Fig. S5）をご参照ください。
H. Iwashita, H. T. Sakurai, N. Nagahora, M. Ishiyama, K. Shioji, K. Sasamoto, K. Okuma, S. Shimizu, and Y. Ueno, "Small fluorescent molecules for monitoring autophagic flux", FEBS Letters., 2018, 592, (4), 559–567.
論文へのリンクは製品HPにございます。
製品HP：DALGreen – Autophagy Detection
-
Q
推奨フィルターを教えてください。
-
A
励起フィルター：350～450 nm
蛍光フィルター：500～560 nmなお、共焦点顕微鏡を用いて488 nm励起により蛍光観察した実績がございます。
弊社HP内の製品ページの実験例を参照ください。
-
Q
DALGreenの最適濃度の検討方法を教えてください。
-
A
試薬の特性により、試薬の濃度が高すぎたり低すぎたりすると、オートファジー誘導時と誘導していないコントロールとの差が判りにくい場合があります。
下記の情報を参考に試薬濃度の検討することをお勧めします。細胞種によりDALGreenの最適濃度は異なります。
DALGreenを薄い濃度から(目安0.1 μmol/l）から数点段階的に振ってご検討ください。
(濃い濃度は4 μmol/L前後を目安としてください)（参考）
小社では、HeLa, HepG2、CHO細胞にて、細胞種毎のDALGreenの最適濃度の検討を行いました。
DALGreenを下記濃度で染色し、アミノ酸不含培地にて培養してオートファジーを誘導しました。
その結果、下記の赤字の濃度条件ではコントロールとの誘導時との差が見られました。細胞種 DALGreen 濃度 HeLa 4 µmol/l 2 µmol/l 1 µmol/l 0.5 µmol/l HepG2 4 µmol/l 2 µmol/l 1 µmol/l 0.5 µmol/l CHO 4 µmol/l 2 µmol/l 1 µmol/l 0.5 µmol/l 【HeLa細胞】
【HepG2細胞】
【CHO細胞】
-
Q
タイムラプスイメージングを行う上で注意点はありますか？
-
A
測定条件設定のための予備実験を行ってください。
試薬の特性上、染色直後は初期蛍光値が高くなる傾向があるため、以下の手順を参考に予備実験およびタイムラプスイメージングを行ってください。①予備実験
・コントロール細胞(オートファジーを誘導しない細胞)を用いる。
・取扱説明書に従い、Working soluitonで染色後、培養培地で2回洗浄する。
・通常培地を添加した後、蛍光の時間変化を観察する。
・下図の様に、染色後に細胞内の蛍光が次第に低下した後、蛍光の変化が安定してくる時間(図中 T)を確認する。
※条件は細胞の種類により変わる可能性があります。（参考）
HeLa細胞の場合、染色後の約60分経過すると蛍光強度が安定することを確認しております（DALGreen）。
②タイムラプスイメージング
・細胞を Working solutionで染色後、培養培地中で細胞を37℃でインキュベートする。
※予備実験で設定した時間でインキュベートする。
※染色後、直ぐにはオートファジー誘導は行わない。
・インキュベート後にオートファジーの誘導を開始して、タイムラプスイメージングをする。（参考）
HeLa細胞をDALGreenで染色し、通常培地中で60分間(予備実験で設定した時間)培養後、オートファジーを誘導しました。
-
Q
オートファジーにはどのような経路があり、DALGreenはどの状態を検出するのですか？
-
A
オートファジーには、Atg5依存的オートファジー(LC3が変化する)とLC3の変化を伴わない、Atg5非依存的オートファジーがあることが知られております*。
DALGreenはオートファゴソーム膜に取り込まれ、その後、リソソームと融合し酸性環境下で蛍光が増大します。
そのため、DALGreenはオートリソソームの状態を検出します。
*参考資料 : 新たなオートファジー機構の発見 清水重臣
▶初めて検出する細胞種や実験系の場合は、よくある問い合わせ【 DALGreenの最適濃度の検討手順】をご参照ください。
取扱条件
| 性状： | 本品は淡黄色固体でメタノール及びジメチルスルホキシドに溶ける。 |
|---|---|
| 純度(HPLC)： | 90.0％ 以上 |
| 保存条件: 冷凍,遮光 , 取扱条件: 窒素置換 |
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関連製品
この製品に関連する研究では、下記の関連製品も使われています。
-
オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬
DAPRed – Autophagy Detection
-
マイトファジー検出キット
Mitophagy Detection Kit
-
老化細胞検出キット
Cellular Senescence Detection Kit – SPiDER-βGal
-
細胞増殖/細胞毒性アッセイキット
Cell Counting Kit-8
オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬 DAPGreen – Autophagy Detection 同仁化学研究所
上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。
DAPGreen – Autophagy Detection
01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
DAPGreen – Autophagy Detection
- 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
- 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
- 細胞機能解析
- オートファジー
オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬
-
製品コードD676 DAPGreen – Autophagy Detection
| 容 量 | メーカー希望 小売価格 |
富士フイルム 和光純薬 |
|---|---|---|
| 5 nmol | ￥40,900 | 340-09291 |
DAPGreenの最適濃度の検討については、
よくある質問の「DAPGreenの最適濃度の検討方法を教えてください」
をご覧ください。
試験成績書
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- ご購入方法
- お問い合わせ
マニュアル
-
取扱説明書 日本語
-
取扱説明書 English
技術情報
技術情報の目次
- 原理
- 操作は試薬の添加だけ
- 検出試薬の概要
- LC3との高い相関
- Lamp1との共染色
- フローサイトでの定量解析
- プレートリーダーでの定量解析
- 応用例：蛍光顕微鏡での定量解析
- DAPGreenの励起、蛍光スペクトル
原理
 |
|
 |
オートファゴソーム膜が形成される際に、DAPGreenは膜内に取り込まれ、脂溶性環境下に応答し蛍光が増大します。なお、オートファジーマーカーのLC3 を指標とした検出法とも高い相関性が得られています。 |
技術や使用製品に関する補足
グルタミン代謝とオートファジー
グルタミナーゼの安定化を介してオートファジーとグルタミノリシスを促進するタンパク質に関する報告例を紹介！
その他、疾患と細胞内代謝指標との関連性をマップでわかりやすく紹介しています。
参考文献
参考文献を表示する
| 文献No. | 対象サンプル | 装置 | 引用（リンク） |
|---|---|---|---|
| 1) | 細胞 （HeLa, MEF） |
蛍光顕微鏡 |
H. Iwashita, H. T. Sakurai, N. Nagahora, M. Ishiyama, K. Shioji, K. Sasamoto, K. Okuma, S. Shimizu, and Y. Ueno, "Small fluorescent molecules for monitoring autophagic flux.", FEBS Letters., 2018, 592, (4), 559–567. |
| 2) | 細胞 （HepG2; Huh-7） |
蛍光顕微鏡; フローサイトメーター |
L. Hu, T. Zhang, D. Liu, G. Guan, J. Huang, P. Proksch, X. Chen and W. Lin, "Notoamide-type alkaloid induced apoptosis and autophagy via a P38/JNK signaling pathway in hepatocellular carcinoma cells", RSC Adv., 2019, 9, 19855. |
| 3) | 細胞 （HepG2） |
蛍光顕微鏡 |
Q. Chu, S. Zhang, M. Chen, W. Han, R. Jia, W. Chen and X. Zheng, "Cherry Anthocyanins Regulate NAFLD by Promoting Autophagy Pathway", Oxid Med Cell Longev., 2019,DOI:10.1155/2019/4825949. |
| 4) | 細胞 （HLMVEC) |
蛍光顕微鏡 |
K. Koike, E. V. Berdyshev, A. M. Mikosz, I. A. Bronova, A. S. Bronoff, J. P. Jung, E. L. Beatman, K. Ni, D. Cao, A. K. Scruggs, K. A. Serban and I. Petrache, "Role of Glucosylceramide in Lung Endothelial Cell Fate and Emphysema", Am. J. Respir. Crit. Care Med., 2019,DOI:10.1164/rccm.201812-2311OC. |
| 5) | 細胞 （HeLa) |
蛍光顕微鏡 |
F. Hongbao,Y. Shankun, C. Qixin, L. Chunyan, C. Yuqi, G. Shanshan, B. Yang, T. Zhiqi, L. Z. Amanda, T. Takanori, C.Yuncong, G. Zijian, H. Weijiang and D. Jiajie , "De Novo-Designed Near-Infrared Nanoaggregates for Super-Resolution Monitoring of Lysosomes in Cells, in Whole Organoids, and in Vivo.", ACS Nano, 2019, 13, (12), 1446. |
| 6) | 細胞 （HeLa; A375) |
フローサイトメーター |
B. Yang, L. Ding, Y. Chen and J. Shi, "Augmenting Tumor-Starvation Therapy by Cancer Cell Autophagy Inhibition", Adv. Sci., 2020,DOI:10.1002/advs.201902847. |
| 7) | 細胞 （PC12) |
蛍光顕微鏡(超解像) |
Y. Tan, L. Yin, Z. Sun, S. Shao, W. Chen, X. Man,Y. Du and Y. Chen, "Astragalus polysaccharide exerts anti-Parkinson via activating the PI3K/AKT/mTOR pathway to increase cellular autophagy level in vitro.", Int. J. Biol. Macromol., 2020, DOI:10.1016/j.ijbiomac.2020.02.282. |
| 8) | 細胞 （Wild type Hepa 1-6) |
蛍光顕微鏡 (ImageJで数値化) |
Z. Peng, Y. Liao, X. Wang, L. Chen, L. Wang, C. Qin, Z. Wang, M. Cai, J. Hu, D. Li,P. Yao, A. K. Nüssler, L. Liu and W. Yang, "Heme oxygenase-1 regulates autophagy through carbon-oxygen to alleviate deoxynivalenol-induced hepatic damage., Arch. Toxicol., 2020, 94(2), 573. |
| 9) | 細胞 （マウス皮膚線維芽細胞) |
フローサイトメーター |
J. Kim, W.Y.Chee, N. Yabuta, K. Kajiwara, S. Nada and M. Okada, "Atg5-mediated autophagy controls apoptosis/anoikis via p53/Rb pathway in naked mole-rat fibroblasts", Biochem. Biophys. Res. Commun., 2020, 22, DOI:10.1016/j.bbrc.2020.05.083. |
| 10) | 細胞 （HeLa) |
蛍光顕微鏡(超解像) |
Q. Chen, M. Hao, L. Wang, L. Li, Y. Chen, X. Shao, Z. Tian, R. A. Pfuetzner, Q. Zhong, A. T. Brunger, J. Guan and J. Diao, "Prefused lysosomes cluster on autophagosomes regulated by VAMP8", 2021, doi:10.1038/s41419-021-04243-0. |
よくある質問
-
Q
DAPGreen working solutionは、どのくらい安定ですか？
-
A
DAPGreen working solutionの保存はできません。用時調製してください。
-
Q
DAPGreenのDMSO stock solutionは、どのくらい安定ですか？
-
A
DAPGreenのDMSO stock solutionは、調製後、-20℃、遮光下で保存してください。調製後1ヶ月間安定です。
また、使用量に応じて小分けし保存することをお勧めします。
-
Q
推奨の励起・蛍光フィルターを教えてください。
-
A
励起フィルター：425～475 nm
蛍光フィルター：500～560 nmなお、共焦点顕微鏡を用いて488 nm励起により蛍光観察した実績がございます。
弊社HP内の製品ページの実験例を参照ください。
-
Q
タイムラプスイメージングを行う上で注意点はありますか？
-
A
測定条件設定のための予備実験を行ってください。
試薬の特性上、染色直後は初期蛍光値が高くなる傾向があるため、以下の手順を参考に予備実験およびタイムラプスイメージングを行ってください。①予備実験
・コントロール細胞(オートファジーを誘導しない細胞)を用いる。
・取扱説明書に従い、Working soluitonで染色後、培養培地で2回洗浄する。
・通常培地を添加した後、蛍光の時間変化を観察する。
・下図の様に、染色後に細胞内の蛍光が次第に低下した後、蛍光の変化が安定してくる時間(図中 T)を確認する。
※条件は細胞の種類により変わる可能性があります。（参考）
HeLa細胞の場合、染色後の約60分経過すると蛍光強度が安定することを確認しております（DAPGreen）。
②タイムラプスイメージング
・細胞を Working solutionで染色後、培養培地中で細胞を37℃でインキュベートする。
※予備実験で設定した時間でインキュベートする。
※染色後、直ぐにはオートファジー誘導は行わない。
・インキュベート後にオートファジーの誘導を開始して、タイムラプスイメージングをする。（参考）
HeLa細胞をDAPGreenで染色し、通常培地中で60分間(予備実験で設定した時間)培養後、オートファジーを誘導しました。
-
Q
DAPGreenの最適濃度の検討方法を教えてください。
-
A
試薬の特性により、試薬の濃度が高すぎたり低すぎたりすると、オートファジー誘導時と
誘導していないコントロールとの差が判りにくい場合があります。
下記の情報を参考に試薬濃度の検討することをお勧めします。細胞種によりDAPGreenの最適濃度は異なります。
DAPGreenを薄い濃度から(目安0.05 μmol/l）から数点段階的に振って
ご検討ください(濃い濃度は1 μmol/l前後を目安としてください)。（参考）
小社では、HeLa, HepG2、CHO細胞にて、細胞種毎のDAPGreenの最適濃度の検討を行いました。
DAPGreenを下記濃度で染色し、アミノ酸不含培地にて培養し、オートファジーを誘導しました。
その結果、下記の赤字の濃度条件ではコントロールとの差が見られました。細胞種 検討濃度 HeLa 0.4 µmol/l, 0.2 µmol/l, 0.1 µmol/l, 0.05 µmol/l HepG2 0.4 µmol/l, 0.2 µmol/l, 0.1 µmol/l, 0.05 µmol/l CHO 0.4 µmol/l, 0.2 µmol/l, 0.1 µmol/l, 0.05 µmol/l 【HeLa細胞】
【HepG2細胞】
【CHO細胞】
-
Q
プレートリーダーでの定量解析の測定条件を教えてください。
-
A
HeLa細胞を用いた測定例は下記となります。
DAPGreenで染色後のHeLa細胞を、アミノ酸不含培地にて0、2、4、6時間培養し、プレートリーダーにて検出
<操作>
1) 透明底のブラックプレートに細胞を播種 （HeLa cell, 1.6×10＾4 cells/well, 100 µl/well）
2) 一晩培養（37℃, 5%CO2）
3) 上清を除き培地で調整したWorking solution(DAPGreen：0.1 µmo/l）を100 µl添加
4) 37℃で30分間インキュベート（37℃, 5%CO2）
5) 培地で洗浄(100 µl×2回)
6) 飢餓培地(富士フィルム和光純薬, code:048-33575)を添加(100 µl)
7) 37℃で各時間インキュベート
8) プレートリーダー(TECAN,infinite pro M200)で測定(Ex/Em=450/530nm)
(0minはHBSSに置換して測定)<結果>
<検出条件> 波長 ：Ex. 450 nm / Em. 535 nm飢餓培養を開始してから2時間後には、コントロールより約3.5倍強い蛍光を確認した。
-
Q
オートファジーにはどのような経路があり、 DAPGreenはどの状態を検出するのですか？
-
A
オートファジーには、Atg5依存的オートファジー(LC3が変化する)とLC3の変化を伴わない、Atg5非依存的オートファジーがあることが知られております*。
DAPGreenはオートファゴソーム膜に取り込まれ疎水環境下で蛍光を発し、オートファゴソームの状態を検出します。
*参考資料 : 新たなオートファジー機構の発見 清水重臣
▶初めて検出する細胞種や実験系の場合は、よくある問い合わせ【 DAPGreenの最適濃度の検討手順】をご参照ください。
取扱条件
| 性状： | 本品はメタノール及びジメチルスルホキシドに溶ける。 |
|---|---|
| 純度(HPLC)： | 90.0％ 以上 |
| 保存条件: 冷凍,遮光 , 取扱条件: 窒素置換 |
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関連製品
この製品に関連する研究では、下記の関連製品も使われています。
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オートファジー（オートリソソーム）の検出試薬
DALGreen – Autophagy Detection
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Mitophagy Detection Kit
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-
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Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST
オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬 DAPRed – Autophagy Detection 同仁化学研究所
上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。
DAPRed – Autophagy Detection
01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
DAPRed – Autophagy Detection
- 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
- 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
- 細胞機能解析
- オートファジー
オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬
-
製品コードD677 DAPRed – Autophagy Detection
| 容 量 | メーカー希望 小売価格 |
富士フイルム 和光純薬 |
|---|---|---|
| 5 nmol | ￥39,800 | 340-09551 |
DAPRedの最適濃度の検討については、
よくある質問の「DAPRedの最適濃度の検討方法を教えてください」
をご覧ください。
試験成績書
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- ご購入方法
- お問い合わせ
マニュアル
-
取扱説明書 日本語
-
Manual English
技術情報
原理
オートファゴソーム膜が形成される際に、DAPRedは膜内に取り込まれ、脂溶性環境下に応答し蛍光が増大します。なお、オートファジーマーカーのLC3 を指標とした検出法とも高い相関性が得られています。
技術や使用製品に関する補足
グルタミン代謝とオートファジー
グルタミナーゼの安定化を介してオートファジーとグルタミノリシスを促進するタンパク質に関する報告例を紹介！
その他、疾患と細胞内代謝指標との関連性をマップでわかりやすく紹介しています。
参考文献
参考文献を表示する
| 文献No. | 対象サンプル | 装置 | 引用（リンク） |
|---|---|---|---|
| 1) | 細胞 （HUVEC） |
蛍光顕微鏡 | X. Chen, X. Yan, J. Liu and L. Zhang, " Chaiqi decoction ameliorates vascular endothelial injury in metabolic syndrome by upregulating autophagy.", Am. J. Transl. Res., 2020,12(9), 4902. |
| 2) | 細胞 （HeLa） |
蛍光顕微鏡 | H. Fang , S. Geng, M. Hao, Q. Chen, M. Liu, C. Liu, Z. Tian, C. Wang, T. Takebe, J-L Guan, Y. Chen, Z. Guo, W. He and J. Diao, "Simultaneous Zn2+ tracking in multiple organelles using super-resolution morphology-correlated organelle identification in living cells ", Nat Commun, 2021, 12(1), 109. 10.1016/j.envpol.2019.07.105. |
| 3) | 細胞 （HCT116; HCT8） |
蛍光顕微鏡 | H. Sun, R. Wang, Y. Liu, H. Mei and X. Liu , "USP11 induce resistance to 5-Fluorouracil in Colorectal Cancer through activating autophagy by stabilizing VCP", J Cancer , 2021, 12(8), 2317. |
| 4) | 細胞 （MEF) |
蛍光顕微鏡 | M. Yagi, T. Toshima, R. Amamoto, Y. Do, H. Hirai, D. Setoyama, D. Kang and T. Uchiumi, "Mitochondrial translation deficiency impairs NAD+-mediated lysosomal acidification", EMBO J, 2021, doi:10.15252/embj.2020105268. |
| 5) | 細胞 （SH-SY5Y) |
蛍光顕微鏡 | Chang-ki Oh, Nima Dolatabadi, Piotr Cieplak, Maria T. Diaz-Meco, Jorge Moscat, John P. Nolan, Tomohiro Nakamura and Stuart A. Lipton, "S-Nitrosylation of p62 Inhibits Autophagic Flux to Promote α-Synuclein Secretion and Spread in Parkinson’s Disease and Lewy Body Dementia", J. Neurosci., 2022, doi:10.1523/JNEUROSCI.1508-21.2022. |
よくある質問
-
Q
DMSO stock solutionは、どのくらい安定ですか？
-
A
調製後は、-20℃、遮光下で保存してください。調製後1ヶ月間安定です。
また、使用量に応じて小分けし保存することをお勧めします。
-
Q
Working solutionは、どのくらい安定ですか？
-
A
Working solutionの保存はできません。用時調製してください。
-
Q
推奨の励起・蛍光フィルターを教えてください。
-
A
推奨フィルターは下記の通りです。
励起フィルター：500～560 nm
蛍光フィルター：690～750 nm
-
Q
DAPRedの最適濃度の検討方法を教えてください。
-
A
試薬の特性により、試薬の濃度が高すぎたり低すぎたりすると、オートファジー誘導時と誘導していないコントロールとの差が判りにくい場合があります。
下記の情報を参考に試薬濃度の検討することをお勧めします。細胞種毎でDAPRedの最適濃度が異なります。
DAPRedを薄い濃度から(目安0.05 μmol/l）から数点段階的に振ってご検討ください(濃い濃度は0.4 μmol/lを目安としてください)。(参考)
小社では、HeLa, HepG2、CHO細胞にて、DAPRedの最適濃度の検討を行いました。
DAPRedを下記濃度で染色し、アミノ酸不含培地にて培養し、オートファジーを誘導しました。
その結果、下記の赤字の濃度条件ではコントロールとの差が見られました。細胞種 検討濃度 HeLa 0.4 µmol/l 0.2 µmol/l 0.1 µmol/l 0.05 µmol/l HepG2 0.4 µmol/l 0.2 µmol/l 0.1 µmol/l 0.05 µmol/l CHO 0.4 µmol/l 0.2 µmol/l 0.1 µmol/l 0.05 µmol/l 
-
Q
オートファジーにはどのような経路があり、 DAPRedはどの状態を検出するのですか？
-
A
オートファジーには、Atg5依存的オートファジー(LC3が変化する)とLC3の変化を伴わない、Atg5非依存的オートファジーがあることが知られております*。
DAPRedはオートファゴソーム膜に取り込まれ疎水環境下で蛍光を発し、オートファゴソームの状態を検出します。
*参考資料 : 新たなオートファジー機構の発見 清水重臣
▶初めて検出する細胞種や実験系の場合は、よくある問い合わせ【 DAPRedの最適濃度の検討手順】をご参照ください。
取扱条件
| 性状： | 本品は赤褐色固体でメタノール及びジメチルスルホキシドに溶ける。 |
|---|---|
| 純度(HPLC)： | 93.0％ 以上 |
| 保存条件: 冷蔵,遮光 |
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関連製品
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-
脂肪滴測定キット
Lipid Droplet Assay Kit – Blue
ストレスマーカー検出試薬 3-Deoxyglucosone | CAS 4084-27-9 同仁化学研究所
上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。
3-Deoxyglucosone
02 酸化ストレス関連試薬
3-Deoxyglucosone
- 酸化ストレス関連試薬
- 酸化ストレス関連試薬
ストレスマーカー検出試薬
-
製品コードD535 3-Deoxyglucosone
-
CAS番号4084-27-9
-
化学名3-Deoxy-D-erythro-hexos-2-ulose
-
分子式・分子量C6H10O5=162.14
| 容 量 | メーカー希望 小売価格 |
富士フイルム 和光純薬 |
|---|---|---|
| 1 mg | ￥14,500 | 341-90213 |
試験成績書
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- ご購入方法
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技術情報
溶解例
60 mg/mL（水）
参考文献
参考文献を表示する
1) F. Hayase, R. H. Nagaraj, S. Miyata, F. G. Njoroges and V. M. Monnier, "Aging of Proteins: Immunological Detection of a Glucose-derived Pyrrole Formed during Maillard Reaction in Vivo", J. Biol. Chem., 1989, 264, 3758.
2) S. Miyata and V. Monnier, "Immunohistochemical Detection of Advanced Glycosylation End Products in Diabetic Tissue Using Monoclonal Antibody to Pyrraline", J. Clin. Invest., 1992, 89, 1102.
3) S. Taneda and V. M. Monnier, "ELISA of Pentosidine, an Advanced Glycation End Product, in Biological Specimens", Clin. Chem., 1994, 40, 1766.
4) D. G. Dyer, J. A. Blackedge, S. R. Thorpe and J. W. Baynes, "Formation of Pentosidine during Nonenzymatic Browning of Proteins by Glucose", J. Biol. Chem., 1991, 266, 11654.
5) T. Shinoda, F. Hayase and H. Kato, "Suppres
sion of Cell-cycle Progression during the S Phase of Rat Fibroblasts by 3-Deoxyglucosone, a Maillard Reaction Intermediate", Biotechnol. Biochem., 1994, 58, 1936.
6) F. Hayase, Y. Konishi and H. Kato, "Identification of the Modified Structure of Arginine Residue in Proteins with 3-Deoxyglucosone, a Maillard Reaction Intermediate", Biosci. Biotechnol. Biochem., 1995, 59, 1407.
7) T. Niwa, "3-Deoxyglucosone: Metabolism, Analysis, Biological Activity, and Clinical Implication.", J Chromatogr. B. Biomed Sci. Appl., 1999, 731, 23.
8) 宮田哲、"蛋白糖化反応マーカーとしての3-DG",「蛋白の糖化」医学書院（繁田幸男、谷口直之編）, 1997, p.57.
9) D. V. Zyzak, J. M. Richardson, S. R. Thoepe and J. W. Baynes, "Formation of Reactive Intermediates from Amadori Compounds under Physiological Conditions", Arch. Biochem. Biophys., 1995, 316, 547.
10) B. S. Szwergold, F. Kappler and T. R. Brown, "Identification of Fructose 3-Phosphate in the Lens of Diabetic Rats", Science, 1990, 247, 451.
よくある質問
-
Q
3-Deoxyglucosone(3-DG)は不安定な物質と聞いたことがありますが、保存しておけるのでしょうか？
-
A
粉末で保存する場合、下記項目に注意していただければ比較的安定です。
１）吸湿に注意する（特に冷凍から取り出した時）
２）冷凍保管を行う
３）アミン（NH2)化合物との接触を避ける
この化合物は分子中に還元性のアルデヒド基を持ち、酸化され易いため注意してください。水溶液としては、長期の保存は避けて下さい。
-
Q
3-Deoxyglucosoneは何に溶かせばよいでしょうか？
-
A
本品は水溶性の化合物ですので、水に溶かしてご使用できます。
またメタノール、DMSOなどにも溶解できます。
水溶液とする場合、超音波をかけて溶かしても支障はありません。 溶解性は60 mg/mL（水）濃度まで確認しております。
なお、本化合物は還元性アルデヒド基を持つため、一級アミンとシッフ塩基を形成したり、酸化剤により酸化されます。 よって、緩衝液や培地を使用する際は、一級アミンを持つアミノ酸や酸化剤を含まないものをご使用下さい。
取扱条件
| 性状： | 本品は、白色～淡黄色固体で水に溶ける。 |
|---|---|
| 純度(HPLC)： | 99.0％ 以上 |
| IRスペクトル： | 試験適合 |
| 保存条件: 冷凍 , 取扱条件: 窒素置換,吸湿注意 |
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関連製品
グルタチオン定量キット GSSG/GSH Quantification Kit 同仁化学研究所
上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。
GSSG/GSH Quantification Kit
02 酸化ストレス関連試薬
GSSG/GSH Quantification Kit
- 酸化ストレス関連試薬
- 酸化ストレス関連試薬
- 食品機能評価
グルタチオン定量キット
-
製品コードG257 GSSG/GSH Quantification Kit
| 容 量 | メーカー希望 小売価格 |
富士フイルム 和光純薬 |
|---|---|---|
| 200 tests | ￥62,300 | 342-09011 |
キット内容
| 200 tests | ・ Enzyme Solution ・ Coenzyme ・ Buffer Solution ・ Substrate (DTNB) ・ Standard GSH ・ Standard GSSG ・ Masking Reagent |
50 μl x1 x2 60 ml x1 x4 x1 x1 20 μl x1 |
|---|
試験成績書
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- ご購入方法
- お問い合わせ
マニュアル
-
取扱説明書 日本語
-
Manual English
技術情報
特長
1)酸化型グルタチオン(GSSG)、還元型グルタチオン(GSH)の分別定量が可能である。
2)短時間で簡便に多検体の測定が可能である。
参考文献
参考文献を表示する
1) M. E. Anderson, "Determination of Glutathione and Glutathione Disulfide in Biological Samples", Methods in Enzymol., 1985, 113, 548.
2) M. A. Baker, G. J. Cerniglia and A. Zaman, "Microtiter Plate Assay for the Measurement of Glutathione and Glutathione Disulfide in Large Numbers of Biological Samples", Anal. Biochem., 1990, 190, 360.
3) C. Vandeputte, I. Guizon, I. Genestie-Denis, B. Vannier and G. Lorenzon, "A Micrototer Plate Assay for Total Glutathione and Glutathione Disulfide Contents in Cultured/isolated Cells: Performance Study of a New Miniaturized Protocol", Cell Biol. Toxicol., 1994, 10, 415.
4) S. A. McGrath-Morrow and J. Stahl, "Inhibition of Glutamine Synthetase in A549 Cells During Hyperoxia", Am. J. Respir. Cell Mol. Biol., 2002, 27, 99.
5) T. Sato, K. Seyama, Y. Sato, H. Mori, S. Souma, T. Akiyoshi, Y. Kodama, T. Mori, S. Goto, K. Takahashi, Y. Fukuchi, N. Maruyama and A. Ishigami, "Senescence Marker Protein-30 Protects Mice Lungs from Oxidative Stress, Aging, and Smoking", Am. J. Respir. Crit. Care Med., 2006, 174, 530.
6) M. L. Mulhern, C. J. Madson, A. Danford, K. Ikesugi, P. F. Kador and T. Shinohara, "The Unfolded Protein Response in Lens Epithelial Cells from Galactosemic Rat Lenses", Invest. Ophthalmol. Vis. Sci., 2006, 47(9), 3951.
7) N. Miura, Y. Yanagiba, K. Ohtani, M. Mita, and M. Togawa, "Diurnal Variation of Cadmium-induced Mortality in Mice", J. Toxicol. Sci., 2012, 37(1), 191.
8) K. Okabayashi, T. Narita, Y. Takahashi and H. Sugiya, "Effrct of Oxidative Stress on Secretory Function in Salivary Gland Cells", Oxidative Stress-Environmental Induction and Dietary Antioxidants, V. Lushchak, InTech, 2012, 189.
9) G. Tian, J. Sawashita, H. Kubo, S. Nishio, S. Hashimoto, N. Suzuki, H. Yoshimura, M. Tsuruoka, Y. Wang, Y. Liu, H. Luo, Z. Xu, M. Mori, M. Kitano, K. Hosoe, T. Takeda, S. Usami and K. Higuchi, "Ubiquinol-10 Supplementation Activates Mitochondria Functions to Decelerate Senescence in Senescence-Accelerated Mice", Antioxid. Redox Signal., 2014, 20(16), 2606.
10) H. Nakagawa, A. Umemura, K. Taniguchi, J. Font-Burgada, D. Dhar, H. Ogata, Z. Zhong, M. A. Valasek, E. Seki, J. Hidalgo, K. Koike, R. J. Kaufman and M. Karin, "ER Stress Cooperates with Hypernutrition to Trigger TNF-Dependent Spontaneous HCC Development", Cancer cell, 2014, 26(3), 331.
11) M. Sueyoshi, M. Fukunaga, M. Mei, A. Nakajima, G. Tanaka, T. Murase, Y. Narita, S. Hirata, and D. Kadowaki, "Effects of lactulose on renal function and gut microbiota in adenine-induced chronic kidney disease rats", Clinical and Experimental Nephrology., 2019,doi: 10.1007/s10157-019-01727-4.
12) S. Shiromizu, T. Yamauchi, N. Kusunose, N. Matsunaga, S. Koyanagi and S. Ohdo, Dosing Time-Dependent Changes in the Anti-tumor Effect of xCT Inhibitor Erastin in Human Breast Cancer Xenograft Mice', Biol. Pharm. Bull.., 2019, 42, (11), 1921-1925.
13) K. Ogawa, A. Noda, J. Ueda, T. Ogata, R. Matsuyama, Y. Nishizawa, S. Qiao, S. Iwata, M. Ito, Y. Fujihara, M. Ichihara, K. Adachi, Y. Takaoka and T. Iwamoto, "Forced expression of miR-143 and -145 in cardiomyocytes induces cardiomyopathy with a reductive redox shift", Cell. Mol. Biol. Lett., 2020, doi:10.1186/s11658-020-00232-x.
よくある質問
-
Q
どのようなサンプルが測れますか？
-
A
組織、血漿、赤血球、細胞のサンプルが測れます。
但し、血漿の場合はグルタチオン量が少ないため、検体によっては測り分けが困難な場合があります。
-
Q
このKitで何サンプル測定できますか？
-
A
本キットは200testsです（96wellプレート2枚分）。
n=3とした場合、18サンプルの測り分けが可能です〈サンプルに着色がない場合）。
測り分けない場合（総グルタチオン量のみを測定する場合）は、50サンプル測定できます。
※サンプルに着色がある場合は、サンプルブランクの測定が必要です。
サンプルブランクの測定方法は、FAQ 「サンプルに着色がある場合の測定方法」をご参照下さい。
※サンプルのレイアウト例：レーン1～6はGSSG濃度測定、レーン7～12は総グルタチオン濃度測定
-
Q
サンプルに着色がある場合は、どうすればいいですか？
-
A
サンプルに着色がある場合、以下の2つの方法のどちらかでサンプルブランクを差し引くことが可能です。
①Kinetic methodで測定を行う。※検量線の傾きで検量線を作成する為、サンプルブランクの影響を受けない。
②グルタチオン濃度算出の際、O.D.blankを引く代わりに、別途、測定したO.D. sample blankを引く。
グルタチオン（GSH, GSGG) = (O.D. sample – O.D. sample blank) / 検量線の傾き
＜O.D. sample blankの測定方法＞
取扱説明書 「4. 測定」に従い、吸光度を測定する。
その際、Coenzyme working solution, Enzyme working solutionを添加せず、
Buffer solutionと純水を添加する。
-
Q
GSSGとGSHの比率を測定することで、何が分かるのですか？
-
A
グルタチオンは通常、生体内で還元型（GSH）として存在していますが、
酸化ストレスなどの刺激によって酸化型（GSSG）に変換される為、GSHとGSSGの比率が酸化ストレスの指標となります。
-
Q
GSH濃度はどのように求めるのですか？
-
A
検量線を基に求めた総グルタチオン（GSH＋GSSG)濃度とGSSG濃度より、
下式を用いてGSH濃度を算出します。
GSH濃度＝総グルタチオン濃度－[GSSG濃度]×2
※GSSG（酸化型グルタチオン）はGSH（還元型グルタチオン）２分子に相当します。
そのため、GSSG濃度を２倍にすることでGSH濃度に換算しています。
-
Q
推奨する5-スルホサリチル酸のメーカーやグレードはありますか？
-
A
特にメーカーの推奨はしておりません。試薬グレードの製品をご利用ください。
-
Q
Masking reagentは、GSSG由来のGSHもマスキングしないのでしょうか？
-
A
酵素・補酵素添加後に、GSSGから生じたGSHは、マスキング剤と反応するより先にDTNBと反応してGSSGに戻るため、
GSSGから生じたGSHまでマスキングされることはありません。
-
Q
マスキングの時間（37℃、1時間）が長くなってしまっても問題ありませんか？
-
A
多少長くなっても構いません。2時間まで測定実績がございます。
※マスキングの時間とは、Technical Manual 「測定方法」４．測定 3)にある 「37℃で1時間インキュベートする。」の操作を指します。
-
Q
Total Glutathione Quantification Kit (同仁品コード：T419) と何が違うのでしょうか？
-
A
今回のGSSG/GSH Quantification Kit（G257）はTotal Glutathione Quantification Kit(T419)では出来なかったGSSGとGSHの測り分けができます。
酸化ストレスの指標として、GSHとGSSGの比率は注目されています。
-
Q
サンプル中のグルタチオン量が多いです。 サンプルの希釈はできますか？
-
A
0.5％スルホサリチル酸（SSA)水溶液で希釈してください。
測定時のサンプル中SSA濃度は.0.5～1%にする必要があります。SSA濃度が高いと反応時のpHが低くなり、吸光度に影響することが懸念されます。
-
Q
総グルタチオン量のみ測定する場合、マスキングの時間（37℃、1時間）は省略してよいですか？
-
A
省略可能です。
尚、本キットはGSSGとGSHの測り分けが可能な設計となっております。
測り分けが必要ない場合は、Total Glutathione Quantification Kit (同仁品コード：T419) もご利用いただけます。※マスキングの時間とは、Technical Manual 「測定方法」４．測定 3)にある 「37℃で1時間インキュベートする。」の操作を指します。
-
Q
発色が弱い場合は、どうすればいいですか？
-
A
以下の3つが要因として考えられます。
1. 本キットでの測定範囲は 0.5 μmol/l 以上です。測定試料に含まれるグルタチオン量が、それよりも少ない可能性があります。
測定範囲外の測定試料は、本キットでは測定できませんので、HPLC法など他の方法をご検討下さい。
可能であれば、前処理の希釈倍率を下げる、サンプル量を増やすなど、測定試料の濃度を測定範囲以上にして下さい。
※発色を強める為に、発色の時間を長くすると検量線の直線性が得られなくなりますので、ご注意下さい。2. 発色を阻害する物質が含まれている可能性があります。例えば、SH基と反応する化合物（マレイミド類）などは測定に影響を及ぼします。
これらの化合物は前処理等で除くことができませんので、測定試料中に混在させない系で再度測定して下さい。3.反応時のpHが低く、発色阻害が起こっている可能性があります。
測定時にSSA濃度が1%以下になってるか、ご確認下さい。SSA濃度が1%以上の場合、発色阻害が起こります。
他の酸を用いた場合にはトリエタノールアミン等でpH7程度に中和するか、酸濃度が1％程度以下になるように希釈してから測定して下さい。
-
Q
測定値がマイナスになります。どのような要因がありますか。
-
A
以下の3つが要因として考えられます。
１．サンプル中のグルタチオン量が少ない可能性があります。
サンプルの量を増やして、ご検討ください。
なお、血漿はグルタチオン量が少なく、測定が困難な場合がございます。2. サンプルの前処理中にGSHがアミノ基と副反応を起こして減少した可能性があります。
GSHは、中性条件で以下のような副反応により減少することが報告されています
（Methods in Enzymology, 1985, 113, 548）。
そのため、サンプルの前処理(5%SSA処理）を素早く行ってください。GSH + amino acid ⇔ γ-Glu-amino acid +CysH-Gly (アミノ基転移)
GSH + H2O → Glu +CysH-Gly (加水分解)
GSH + GSH ⇔ γ-Glu-GSH +CysH-Gly (アミノ基転移)３. サンプルの前処理中にGSHが酸化してGSSGとなった可能性があります。
2と同様、サンプルの前処理(5%SSA処理）を素早く行ってください。
-
Q
酸化ストレスの指標としてグルタチオンが測定されますが、 他の酸化ストレスマーカーはありますか？
-
A
酸化ストレスマーカーに関する資料をご参考ください。
カスタマーサポートの視点から、各酸化ストレスマーカーの特徴・測定サンプルの前処理方法などを記載しております。下記URLよりダウンロード可能です。
「はじめての酸化ストレスマーカー測定プロトコル～カスタマーサポートの視点から～」
取扱条件
| 保存条件: 冷蔵 | |
| 危険・有害 シンボルマーク |
  |
|---|---|
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MDA Assay Kit
マロンジアルデヒド測定キット MDA Assay Kit 同仁化学研究所
上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。
MDA Assay Kit
02 酸化ストレス関連試薬
MDA Assay Kit
- 酸化ストレス関連試薬
- 酸化ストレス関連試薬
- 細胞機能解析
- 細胞毒性
- フェロトーシス
マロンジアルデヒド測定キット
- 細胞、組織中のMDA量を測定可能
- 操作時間を大幅に短縮
-
製品コードM496 MDA Assay Kit
| 容 量 | メーカー希望 小売価格 |
富士フイルム 和光純薬 |
|---|---|---|
| 100 tests | ￥31,000 | 341-09961 |
<使用回数の目安> 96-well plate 1枚
キット内容
| 100 tests | ・Lysis Buffer ・Dilution Buffer ・Standard ・Substrate ・Antioxidant |
6.5 ml×1 10 ml×1 200 μl×1 58 mg×1 200 μl×1 |
|---|
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マニュアル
-
取扱説明書 日本語
-
Manual English
技術情報
細胞、組織中のMDA量を測定可能
細胞を測定試料とする場合は、蛍光法で測定できます。組織を測定試料とする場合は、サンプル量や予想されるMDA含有量より蛍光法もしくは比色法から測定方法を選択できます。
| 蛍光法 | 比色法 | 必要サンプル量 | 測定可能MDA濃度範囲 | |
|---|---|---|---|---|
| 細胞 | ○ | × | 1-3×107 cells | 1-10 µmol/l |
| 組織 | ○ | ○ |
蛍光法：10-30 mg 比色法：20-50 mg |
蛍光法：1-10 µmol/l 比色法：1-50 µmol/l |
参考文献
参考文献を表示する
| 文献No. | 対象サンプル | 引用(リンク) |
|---|---|---|
| 1 | 組織 (マウス海馬体) |
K. Igarashi, H. Iwai, K. Tanaka, Y. Kuwahara, J. Kitanaka, N. Kitanaka, A. Kurimasa, K. Tomita, T. Sato, "Neuroprotective effect of oxytocin on cognitive dysfunction, DNA damage, and intracellular chloride disturbance in young mice after cranial irradiation", 2022, Biochem. Biophys. Res. Commun., doi:10.1016/j.bbrc.2022.04.099. |
| 2 | 細胞 (HeLa) |
J. Zhu, X. Wang, Y. Su, J. Shao, X. Song, W. Wang, L. Zhong, L. Gan, Y. Zhao, X. Dong, "Multifunctional nanolocks with GSH as the key for synergistic ferroptosis and anti-chemotherapeutic resistance", 2022, doi:10.1016/j.biomaterials.2022.121704. |
| 3 | 細胞 (RAW 264.7) |
B. Yang, G. Joe, W. Li, Y. Shimizu, H. Saeki, "Comparison of Maillard-Type Glycated Collagen with Alginate Oligosaccharide and Glucose: Its Characterization, Antioxidant Activity, and Cytoprotective Activity on H2O2-Induced Cell Oxidative Damage", 2022, doi:10.3390/foods11152374. |
| 4 | 細胞 (HepG2) |
L. Dong, Z. Jiang, L. Yang, F. Hu, W. Zheng, P. Xue, S. Jiang, M. E. Andersen, G. He, M. J. C. Crabbe, W. Qu, "The genotoxic potential of mixed nitrosamines in drinking water involves oxidative stress and Nrf2 activation", 2022, doi:10.1016/j.jhazmat.2021.128010. |
| 5 | 細胞 (OMM-1) |
C. Hou, L. Xiao, X. Ren, L. Cheng, B. Guo, M. Zhang, N. Yan., "EZH2-mediated H3K27me3 is a predictive biomarker and therapeutic target in uveal melanoma", 2022, Front. Genet., doi:10.3389/fgene.2022.1013475. |
| 6 | 細胞 (ヒト歯肉線維芽細胞) |
L. Xing, W. Dong, Y. Chen, W. Dai, X. Xiao, Z. Liu, X. Zhang, D. Bai, H. Xu, "Fibroblast ferroptosis is involved in periodontitis-induced tissue damage and bone loss", 2022, Int. Immunopharmacol., doi:10.1016/j.intimp.2022.109607. |
| 7 | 細胞 (Huh7) |
Y. Li, W. Yang, Y. Zheng, W. Dai, J. Ji, L. Wu, Z. Cheng, J. Zhang, J. Li, X. Xu, J. Wu, M. Yang, J. Feng and C. Guo, "Targeting fatty acid synthase modulates sensitivity of hepatocellular carcinoma to  via ferroptosis", J. Exp. Clin. Cancer Res., 2023, doi:10.1186/s13046-022-02567-z. |
| 8 | 組織 (ラット肝臓) |
H. Liu, F. Yokoyaa, S. Ishizuka, "Metabolic alterations of the gut–liver axis induced by cholic acid contribute to hepatic steatosis in rats", Biochim. Biophys. Acta, Mol. Cell Biol. Lipids, 2023, doi:10.1016/j.bbalip.2023.159319. |
| 9 | 細胞 (4T1) |
J. Zhao, Y. Chen, T. X, S. Han, C. Li, Y. He, Y. He, G. Zhao, G. Zhao, T. Wang, L. Wang, T. Cheng, C. Wang and J. Wang, "Clustered Cobalt Nanodots Initiate Ferroptosis by Upregulating Heme Oxygenase 1 for Radiotherapy Sensitization", Small, 2023, doi:10.1002/smll.202206415. |
| 10 | 組織 (マウス膵臓) |
L. Liu, Y. Xie, G. Li, T. Zhang, Y. Sui, Z. Zhao, Y. Zhang, W. Yang, X. Geng, D. Xue, H. Chen, Y. Wang, T. Lu, L. Shang, Z. Li, L. Li, B. Sun, "Gut microbiota-derived  alleviates acute pancreatitis by activating pancreatic SIRT3 signalling", Br. J. Pharmacol., 2023, doi:10.1111/bph.15980. |
| 11 | 組織 (乳がん細胞) |
Z. ZHu, H. Shen, J. Xu, Z. Fang, G. Wo, Y. Ma, K. Yang, Y. Wang, Q. Yu, J. Tang., "GATA3 mediates doxorubicin resistance by inhibiting CYB5R2-catalyzed iron reduction in breast cancer cells", 2023, doi:10.1016/j.drup.2023.100974. |
よくある質問
-
Q
本キットの測定原理を教えてください。
-
A
本キットはSubstrateにチオバルビツール酸 (TBA)を使用しております。MDAとTBAの反応により生成したTBA付加体の吸光度もしくは蛍光強度を測定し、Standardの値と比較することでサンプル中のMDA濃度を測定できます。
-
Q
1キットあたり測定可能なサンプル数を教えてください。
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A
サンプルの測定をn=3で行った場合、24サンプルの測定が可能です。
-
Q
溶液調製後の保存方法を教えてください。
-
A
Substrate stock solutionは調製後、冷凍保存 (－20℃)して下さい(2カ月間安定)。
Antioxidant PBS solutionとWorking solutionは保存できません。その日の内にお使い下さい。
-
Q
本キットを使用する場合、細胞数の補正は必要ですか？
-
A
薬剤刺激等を行っても細胞数の変化がない場合は、細胞数の補正は必要ありません。
細胞数が変化する場合は、タンパク質定量法によってMDA濃度を補正できます。
なお、タンパク質定量で補正を行う場合はBCA法を推奨します。
取扱条件
| 保存条件: 冷凍 | |
| 危険・有害 シンボルマーク |
 |
|---|---|
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