細胞増殖/細胞毒性アッセイキット Cell Counting Kit-8 同仁化学研究所

发表于2024年3月18日由whatman中国官网

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Cell Counting Kit-8

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

Cell Counting Kit-8

細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
細胞機能解析
細胞毒性

細胞増殖/細胞毒性アッセイキット

製品コード

CK04　 Cell Counting Kit-8

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
100 回用	￥6,200	341-07761
500 回用	￥15,400	347-07621
2500 回用	￥42,600	343-07623
5000 回用	￥79,200	341-07624
10000 回用	￥113,000	341-08001

キット内容

100 回用	1 ml×1
500 回用	5 ml×1
2500 回用	5 ml×5
5000 回用	5 ml×10
10000 回用	100 ml×1

試験成績書

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ご購入方法
お問い合わせ

マニュアル

取扱説明書日本語
取扱説明書 English
プロトコル生細胞数を測りたい(吸光測定)
パンフレット細胞増殖測定細胞染色プロトコル

技術情報

細胞別の参考文献一覧 Cell Counting Kit-8を使用した、細胞別の論文を掲載しています。

参考文献

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細胞別の参考文献はコチラ

1) M. Ishiyama, Y. Miyazono, K. Sasamoto, Y. Ohkura and K. Ueno, "A Highly Water-Soluble Disulfonated Tetrazolium Salt as a Chromogenic Indicator for NADH as Well as Cell Viability", Talanta., 1997, 44, 1299.
2) H. Tominaga, M. Ishiyama, F. Ohseto, K. Sasamoto, T. Hamamoto, K. Suzuki and M. Watanabe, "A water-soluble tetrazolium salt useful for colorimetric cell viability assay", Anal. Commun., 1999, 36, 47.
3) T. Miyamoto, W. Min and H. S. Lillehoj, "Lymphocyte Proliferation Response During Eimeria tenella Infection Assessed by a New, Reliable, Nonradioactive Colorimetric Assay", Avian Dis., 2002, 46, 10.
4) K. Yoshimura, A. Tanimoto, T. Abe, M. Ogawa, T. Yutsudo, M. Kashimura and S. Yoshida, "Shiga toxin 1 and 2 Induce Apoptosis in the Amniotic cell line WISH", J. Soc. Gynecol. Investig., 2002, 9, 22.
5) Y. Hayakawa, Y. Hirata, H. Nakagawa, K. Sakamoto, Y. Hikiba, H. Kinoshita, W. Nakata, R. Takahashi, K. Tateishi, M. Tada, M. Akanuma, H. Yoshida, K. Takeda, H. Ichijo, M. Omata, S. Maeda and K. Koike, "Apoptosis signal-regulating kinase 1 and cyclin D1 compose a positive feedback loop contributing to tumor growth in gastric cancer", Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 2011, 108, (2), 780.
6) R. Chugh, V. Sangwan, S. P. Patil, V. Dudeja, R. K. Dawra, S. Banerjee, R. J. Schumacher, B. R. Blazar, G. I. Georg, S. M. Vickers and A. K. Saluja, "A Preclinical Evaluation of Minnelide as a Therapeutic Agent Against Pancreatic Cancer", Sci. Transl. Med., 2012, 4, (156), 156ra139.
7) R. Kang, T. Loux, D. Tang, N. E. Schapiro, P. Vernon, K. M. Livesey, A. Krasinskas, M. T. Lotze and H. J. Zeh III, "The expression of the receptor for advanced glycation endproducts (RAGE) is permissive for early pancreatic neoplasia", Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 2012, 109, (18), 7031.
8) Y. Matsuo, J H Park, T. Miyamoto, S. Yamamoto, S. Hisada, H. Alachkar and Y. Nakamura, "TOPK inhibitor induces complete tumor regression in xenograft models of human cancer through inhibition of cytokinesis", Sci. Transl. Med., 2014, 6, (259), 259ra145.
9) K. Takayam, Y. Morisaki, S. Kuno, Y. Nagamoto, K. Harada, N. Furukawa, M. Ohtaka, K. Nishimura, K. Imagawa, F. Sakurai, M. Tachibana, R. Sumazaki, E. Noguchi, M. Nakanishi, K. Hirata, K. Kawabata and H. Mizuguchi, "Prediction of interindividual differences in hepatic functions and drug sensitivity by using human iPS-derived hepatocytes", Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 2014, 111, (47), 16772.
10) T. Ida, T. Sawa, H. Ihara, Y. Tsuchiya, Y. Watanabe, Y. Kumagai, M. Suematsu, H. Motohashi, S. Fujii, T. Matsunaga, M. Yamamoto, K. Ono, N. O. Devarie-Baez, M. Xian, J. M. Fukuto and Takaaki Akaike, "Reactive cysteine persulfides and S-polythiolation regulate oxidative stress and redox signaling", Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 2014, 111, (21), 7606.
11) K. Palumbo-Zerr, P. Zerr, A. Distler, J. Fliehr, R. Mancuso, J. Huang, D. Mielenz, M. Tomcik, B. G Furnrohr, C. Scholtysek, C. Dees, C. Beyer, G. Kronke, D. Metzger, O. Distler, G. Schett and J. H W Distler, Orphan nuclear receptor NR4A1 regulates transforming growth factor-β signaling and fibrosis", Nat. Med., 2015, 21, (2), 150.
12) T. Tu, C. Zhang, H. Yan, Y. Luo, R. Kong, P. Wen, Z. Ye, J. Chen, J. Feng, F. Liu, J. Y Wu and X. Yan, "CD146 acts as a novel receptor for netrin-1 in promoting angiogenesis and vascular development", Cell Res., 2015, 25, (3), 275.
13) S. Ji, Y. Qin, S. Shi, X. Liu, H. Hu, H. Zhou, J. Gao, B. Zhang, W. Xu, J. Liu, D. Liang, L. Liu, C. Liu, J. Long, H. Zhou, P J Chiao, J. Xu, Q. Ni, D. Gao and X. Yu, "ERK kinase phosphorylates and destabilizes the tumor suppressor FBW7 in pancreatic cancer", Cell Res., 2015, 25, (5), 561.
14) N. Li, W. Zhang, M. Khan, L. Lin, JM. Lin, "MoS2-LA-PEI nanocomposite carrier for real-time imaging of ATP metabolism in glioma stem cells co-cultured with endothelial cells on a microfluidic system", Biosens Bioelectron., 2017, 99, (2018), 142.
15) R. Watanabe, T. Kurose, Y. Morishige and K. Fujimori, "Protective Effects of Fisetin Against 6-OHDA-Induced Apoptosis by Activation of PI3K-Akt Signaling in Human Neuroblastoma SH-SY5Y Cells.", Neurochem. Res.., 2018, 43, (2), 488-499.
16) Y. Xu, C. Huang, M. Liu, N. Chen, W. Chen, C. Yang, Y. Zhao, X. Li, J. Duan, S. Liu and S. Yang, "Survivin regulated by autophagy mediates hyperglycemia-induced vascular endothelial cell dysfunction", Exp. Cell Res.., 2018,doi: 10.1016/j.yexcr.2018.01.037 .
17) E. E. Mon, F. Y. Wei, R. N. R. Ahmad, T. Yamamoto, T. Moroishi and K. Tomizawa, "Regulation of mitochondrial iron homeostasis by siderofexin 2 ", J Physiol Sci.,2018,doi:10.1007/s12576-018-0652-2.

よくある質問

Q カタログや説明書には96 wellプレートでの測定例が示してありますが、 24 wellや12 wellのプレートで測定を行うことができますか？その場合には試薬(Cell Counting Kit)の添加量はどのようにすれば良いでしょうか？: A

96wellプレート以外でも測定できます。

試薬の添加量は使用培地の10分の1を目安にして下さい。
(1 mLであれば試薬を100 μL など）

細胞数などにより、試薬の添加量を少なくして測定できる可能性もありますが、最初は10分の１量を目安として検討されることをお勧めします。

Q Cell Counting Kit-8とCell Counting Kit-Fの違いは何ですか？

Cell Counting Kit-8は細胞内酵素活性を指標とし、比色測定を行います。

【Cell Counting Kit-8】
色素：WST-8
形態：1ボトル

Cell Counting Kit-Fは蛍光での測定となります。
細胞内エステラーゼ活性を指標に蛍光測定を行います。
比色法よりも少ない細胞数から測定出来ます。（50 cells/well 以上）

【Cell Counting Kit-F】
色素：Calcein-AM
形態：1ボトル

製品別に細胞増殖および毒性試験法の特徴を一覧表で比較しています細胞増殖／細胞毒性測定試薬ガイド

Q Cell Counting Kit-8とMTTの違いは何でしょうか？

細胞の酵素により、テトラゾリウムがホルマザンになるというのは共通したところです。
それぞれの違いとしては

【Cell Counting Kit-8】
生成するホルマザンが水溶性である。（溶解操作が不要）
測定波長：400～450 nm
細胞全体の酵素活性を反映している。
生成するホルマザンは細胞毒性がない。
細胞が生きたまま測定できる。

【MTT】
生成するホルマザンが非水溶性である。（有機溶媒等による溶解が必要）
測定波長：550～600 nm
主にミトコンドリアの酵素活性を反映している。
生成するホルマザンが細胞毒性を示す。
細胞を溶かさないと測定できない。

有機溶媒によるホルマザン溶解が必要な分、MTTの方が操作が煩雑になります。

製品別に細胞増殖および毒性試験法の特徴を一覧表で比較しています細胞増殖／細胞毒性測定試薬ガイド

Q ブランク試験を行うとしたらどのような条件で吸光度を測定すればよいでしょうか？（細胞単独、細胞＋培地、培地のみ、いずれも無し　etc.): A

ブランクとして確認するのは3種類の考え方があります。

①細胞＋培地にて600 nm以上で測定する。
→細胞を含む培地の測定試料に濁りがある場合に測定します。
濁りによる散乱が測定誤差となるためで、全波長領域で高くなります。試薬の吸収がない600 nm以上で測定します。しかし、濁りがない、殆ど無視できる程度の濁りであれば、測定する必要はありません。

②細胞＋培地にて450 nm(測定波長)を測定する。
→細胞を含む培地の測定試料に試薬の発色と同じ吸収がある場合に測定します。
450 nmの吸収ですので、試料の着色で判断できます。着色がなければ必要はありません。

③培地＋試薬(CCK)にて450 nm(測定波長)を測定する。
→細胞を含まない培地に試薬を添加した場合の吸収を測定するもので、一般的な試薬ブランクです。
培地に還元性物質が含まれると、試薬が発色します。そのような発色がないことを確認します。
発色が僅かであれば、ブランクとして差し引いてもよいです。しかし、発色が強いようであれば培地中の還元物質を除くか、別の培地をご検討下さい。
また、薬物添加試験を行われるのであれば、添加する薬物で発色しないかを確認してください。

＊ブランクとして大きく出てくるのは②の培地に着色がある場合と③の試薬の誤発色です。
　これらをご確認ください。

Q 前培養をするように取扱説明書に指示されていますが、これは必要なものですか？: A

付着細胞では前培養を推奨しております。
トリプシン処理等により培養用フラスコから回収する際に、細胞はダメージを受けます。
そのため、対数増殖期の状態にために細胞の前培養が必要になります。

浮遊細胞の場合は省略しても構いません。

Q Cell Counting Kit-8の発色に阻害を与えるような物質はなんですか？: A

一般的に還元物質（アスコルビン酸など）が共存していると正誤差が生じます。

フェノールレッドや血清は問題ありません。
フェノールレッドの場合、若干（5％程度）のブランク上昇がみられますが、使用上は問題ありません。

しかし、発色に阻害を与える培地成分が含まれているかもしれませんので、ご使用の培地が誤発色を与えないかご確認の上、ご使用ください。（薬剤も同様です）

また薬剤によっては細胞の機能に影響を与えるものがあるようで、細胞の増殖能は止まっていても酵素活性を働かせたりしていると（タンパク合成を行なったり）発色を起こしたりします。

負誤差の要因としては、特にこの物質が影響があるといわれているものはないのですが、上記と逆で、薬剤により影響を受け、実際には増殖しているのに発色が低く出る
という現象が起ることはあるようです。また、酸化剤も発色を阻害し負誤差を与える要因となることがあります。

Q 細胞数は変わらないのに吸光度が上昇します。どのような要因が考えられますか。: A

以下の要因が考えられます。

(1)還元物質の影響　　　　　　　　　　　　
(2)細胞当たりの代謝活性の変化　　　

詳細は下記をご確認下さい。

—————————————————————————————————————————————-
(1)還元物質の影響について

　試料や被験物質に還元性を持つ物質が存在する場合、Cell Counting Kit-8に含まれるWST-8を直接還元し誤発色することがあります。

　　細胞が無い系で、Cell Counting Kit-8を添加し、発色の有無を予めご確認ください。
　　発色する場合は、Cell Counting Kit-8を添加する前に培地交換を行ってください。

　　その他発色に影響を与える因子については、
　　よくある質問「Cell Counting Kit-8の発色に阻害を与えるような物質はなんですか？」をご確認ください。
—————————————————————————————————————————————-
(2)細胞当たりの代謝活性の変化について

　細胞当たりの代謝活性が上昇した場合、細胞数が変わらなくても、吸光度が上昇することがあります。

　Cell Counting Kit-8は生細胞の脱水素酵素の活性を指標としています。
　そのため、細胞数の変化がなくても、細胞の代謝活性が変化した場合に吸光度が変化する可能性があります。

　細胞の代謝活性の変化の有無は、別の指標で生細胞を測定^*1したり、細胞の代謝産物^＊2を確認することで
　複合的に評価される場合があります。下記リンク先の資料もご参考ください。

　*1:細胞増殖／細胞毒性測定用試薬の選択ガイド

　*2:細胞内代謝測定
—————————————————————————————————————————————-
ご不明点がありましたら、小社カスタマーサポートまでお問合せください。
(free dial:0120-489548 / E-mail:info@dojindo.co.jp)

Q 呈色反応を途中で止めたい(測定までに時間が空く)のですが、どうすれば反応を止められますか？: A

Cell Counting Kitの発色機構は細胞内に存在する脱水素酵素に依存しているので、
呈色反応を止めるには、この酵素反応を止める為に細胞を死滅させます。

下記のいずれかの方法で反応停止を行ってください(添加量は96wellの場合)
反応停止後は24時間以内に測定して下さい。

(1)1 w/v% SDSを10 μL添加する。
　　*SDSを添加する場合には、泡立たないように注意して下さい。
　　表面に泡があると光散乱して吸光度が高くなります。
　　
(2)0.1 mol/ HClを10 μL添加する。
　　*もし、緩衝能の高い培地をご使用の場合には、もっと濃い酸を添加してください。
　　アルカリ溶液による反応停止では定量が出来ません。
　　反応液をアルカリ性にすると、生成したホルマザン色素が青変し、定量性が失われます。

Q 450 nm 以外のフィルターは使用できますか？: A

430-490 nm のフィルターが使用できますが、450 nm のフィルターをご使用いただきますと最も高感度に測定できます。

　　　参考)WST-8ホルマザンの吸収スペクトル

Q Cell Counting Kit-8の保存期間を教えてください。: A

キット溶液は4℃で12ヶ月安定です。遮光して冷蔵にて保管してください。

長期保存の際は、遮光し-20℃で保存してください。

凍結-融解操作はなるべく行わないで下さい。

＊容器をプラスチック容器に変更いたしました。（以前はガラス容器）それに伴い、安定性試験を再度行い冷蔵での長期安定性が確認出来ましたので保管条件を変更しております。

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷蔵,遮光

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細胞増殖/細胞毒性アッセイキット Cell Counting Kit-F 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

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Cell Counting Kit-F

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

Cell Counting Kit-F

細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
細胞毒性

細胞増殖/細胞毒性アッセイキット

製品コード

CK06　 Cell Counting Kit-F

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
500 回用	￥16,500	343-07743

キット内容

500 回用	Calcein-AM DMSO solution	110 μl x1

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マニュアル

取扱説明書
取扱説明書 English
プロトコル生細胞数を測りたい（蛍光測定）
パンフレット細胞増殖測定細胞染色プロトコル

技術情報

細胞増殖／細胞毒性測定試薬ガイド細胞増殖および毒性試験法の特徴を一覧表で比較

参考文献

参考文献を表示する

1) S. Sakamoto, M. Yokoyama, X. Zhang, K. Prakash, K. Nagao, T. Hatanaka, R. H. Getzenberg and Y. Kakehi, "Increased Expression of CYR61, an Extracellular Matrix Signaling Protein, in Human Benign Prostatic Hyperplasia and Its Regulation by Lysophosphatidic Acid", Endocrinology, 2004, 145, 2929.

よくある質問

Q 51Cr-release法とCell Couting Kit-Fとの相関はありますか？: A

Cell Couting Kit-Fとしての相関は確認していませんが、
蛍光試薬として用いているCalcein-AMと51Cr-release法との相関の報告はございます。

N.G.Papadopoulos, et.al., J.Immunol.Methods, 177,101-111(1994)

Q Cell Counting KitとCell Counting Kit-8、Cell Counting Kit-Fの違いは何ですか？: A

Cell Counting KitとCell Counting Kit-8は、発色色素が違いますが基本的な原理は同じです。
細胞内酵素活性を指標とし、比色測定を行います。
また、Cell Counting Kit-8は、Cell Counting Kitと比較して、「感度が高い」、「試薬安定性が高い」と利点があります。

Cell Counting Kit-Fは蛍光での測定となります。細胞内エステラーゼ活性を指標に蛍光測定を行います。
比色法よりも少ない細胞数から測定出来ます。

各製品で使用される色素と形態は以下の通りです。
　【Cell Counting Kit】
　　色素：　WST-1
　　形態：　2ボトル

　【Cell Counting Kit-8】
　　色素：WST-8
　　形態：1ボトル

　【Cell Counting Kit-F】
　　色素：Calcein-AM
　　形態：1ボトル

Q 通常の透明な培養プレートでも測定出来ますか？: A

白か黒のプレートを使用してください。

透明な培養プレートでは測定時の照射した光が散乱してしまい、正確な測定が行えません。
正確な測定を行うためにも、白色及び黒色の蛍光用プレートの御使用をお薦めします。

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷凍,遮光
危険・有害シンボルマーク

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老化細胞検出キット Cellular Senescence Detection Kit – SPiDER-βGal 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

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Cellular Senescence Detection Kit – SPiDER-βGal

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

Cellular Senescence Detection Kit – SPiDER-βGal

細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
細胞機能解析
細胞老化

老化細胞検出キット

製品コード

SG03　 Cellular Senescence Detection Kit – SPiDER-βGal

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
10 assays	￥44,200	347-09181

キット内容

10 assays	[10 assays:　35 mm dish] ・SPiDER-βGal ・Bafilomycin A1	x 1 x 1

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マニュアル

取扱説明書日本語
Manual English
プロトコル老化細胞を検出したい

技術情報

技術情報の目次

原理
蛍光特性（β-galactosidaseと反応後のSPiDER-βGal）
本キットを使用した論文
キットの使用手順
特長①．生細胞も固定化細胞も適用できる
特長②．定量が容易にできる
一般的な老化細胞マーカー
異なる老化マーカーとの共染色
組織サンプル中のSA-β-gal検出
T細胞(浮遊細胞)におけるSA-β-gal検出
細胞老化と細胞周期との関連性
共焦点定量イメージサイトメーターによる定量解析

細胞老化と細胞周期との関連性

細胞周期のG2/M 期に作用して細胞増殖を停止させ、細胞老化を誘導することが知られているDoxorubicin(DOX) をA549 細胞へ添加後、本製品で細胞老化、Cell Cycle Assay Solution Blue （製品コード：C549）/ Deep Red（製品コード：C548）でA549 細胞における細胞周期の変化と、JC-1 MitoMP Detection Kit （製品コード：MT09）でミトコンドリア膜電位の変化を確認しました。

技術や使用製品に関する補足

細胞周期測定試薬

Cell Cycle Assay Solution Blue
ミトコンドリア膜電位検出キット

JC-1 MitoMP Detection Kit

参考文献

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文献No.	対象サンプル	装置	引用（リンク）
1)	細胞（HEK）遺伝子（LacZ）	蛍光顕微鏡フローサイトメーター	T. Doura, M. Kamiya, F. Obata, Y. Yamaguchi, T. Y. Hiyama, T. Matsuda, A. Fukamizu, M. Noda, M. Miura, Y. Urano, "Detection of LacZ-Positive Cells in Living Tissue with Single-Cell Resolution.", Angew Chem Int Ed Engl., 2016, 55, 33
2)	組織（マウス脂肪）	蛍光顕微鏡	T. Sugizaki, S. Zhu, G. Guo, A. Matsumoto, J. Zhao, M. Endo, H. Horiguchi, J. Morinaga, Z. Tian, T. Kadomatsu, K. Miyata, H. Itoh & Y. Oike, "Treatment of diabetic mice with the SGLT2 inhibitor TA-1887 antagonizes diabetic cachexia and decreases mortality", Nature Partner Journal：Aging and Mechanisms of Disease., 2017, doi:10.1038/s41514-017-0012-0.
3)	細胞（HSP27-knockdown）タンパク質（Ki67、cyclin B1）	蛍光顕微鏡	A. Park, I. Tsunoda and O. Yoshie, "Heat shock protein 27 promotes cell cycle progression by down-regulating E2F transcription factor 4 and retinoblastoma family protein p130", J. Biol. Chem., 2018, doi: 10.1074/jbc.RA118.003310 .
4)	細胞（A549)	蛍光顕微鏡フローサイトメーター	R. Tanino, Y. Tsubata, N. Harashima, M. Harada and T. Isobe, "Novel drug-resistance mechanisms of pemetrexed-treated non-small cell lung cancer", Oncotarget., 2018, 9, (24), 16807.
5)	細胞（NHDF)	蛍光顕微鏡	Y. Kitahiro, A. Koike, A. Sonoki, M. Muto, K. Ozaki and M. Shibano. , "Anti-inflammatory activities of Ophiopogonis Radix on hydrogen peroxide-induced cellular senescence of normal human dermal fibroblasts.", J Nat Med., 2018, 72, 905.
6)	組織（老齢マウス腸上皮オルガノイド）	蛍光顕微鏡	R. Uchida, Y. Saito, K. Nogami, Y. Kajiyama, Y. Suzuki, Y. Kawase, T. Nakaoka, T. Muramatsu, M. Kimura and H. Saito, "Epigenetic silencing of Lgr5 induces senescence of intestinal epithelial organoids during the process of aging", NPJ Aging Mech Dis., 2018, doi：10.1038/s41514-018-0031-5.
7)	組織（腎臓凍結切片）	蛍光顕微鏡	S. R. Kim, A. Eirin, X. Zhang, A. Lerman and L. O. Lerman, "Mitochondrial Protection Partly Mitigates Kidney Cellular Senescence in Swine Atherosclerotic Renal Artery Stenosis.", Cell. Physiol. Biochem., 2019, 52, 617.
8)	細胞（HN6, HN12, HN13）	フローサイトメーター	Liana P. Webber, Veronica Q. Yujra, Pablo A. Vargas, Manoela D. Martins. Cristiane H. Squarize, Rogerio M. Castilho, "Interference with the bromodomain epigenome readers drives p21 expression and tumor senescence", Cancer Letters., 2019, doi.org/10.1016/j.canlet.2019.06.019.
9)	細胞（UE7T-13）	フローサイトメーター	H. Ise, K. Matsunaga, M. Shinohara and Y. Sakai, Improved Isolation of Mesenchymal Stem Cells Based on Interactions between N-Acetylglucosamine-Bearing Polymers and Cell-Surface Vimentin ", Stem Cells Int., 2019, 4341286, 13.
10)	細胞（マウス角膜間質）	フローサイトメーター	X. Wang, M. Qu, J. Li, P. Danielson, L. Yang and Q. Zhou, Induction of Fibroblast Senescence During Mouse Corneal Wound Healing.", Invest. Ophthalmol. Vis. Sci., 2019, 60, (10), 3669.
11)	細胞（VZ/SVZ)	フローサイトメーター	Y. Nakatani, H. Kiyonari and T. Kondo, Ecrg4 deficiency extends the replicative capacity of neural stem cells in a Foxg1-dependent manner.", Development., 2019, 146, (4), 18.
12)	細胞（HaCaT, HEK001)	蛍光顕微鏡	Y. S. Ryu, K. A. Kang, M. J. Piao, M. J. Ahn, J. M. Yi, G. Bossis, Y. M. Hyun, C. O. Park and J. W. Hyun, Particulate matter-induced senescence of skin keratinocytes involves oxidative stress-dependent epigenetic modifications", Exp. Mol. Med., 2019, 51, 108.
13)	細胞（HT1080)	蛍光顕微鏡	E. M. Angela Ibler, E. Mohamed, L. N. Kathryn, A. B. Natalia, F. E. K. Sherif and H. Daniel, Typhoid toxin exhausts the RPA response to DNA replication stress driving senescence and Salmonella infection', Nat Commun., 2019, 10, 4040.
14)	– (Review)	フローサイトメーター	B.L. Torres, A. Estepa-Fernandez, M. Rovira, M. Oraez, M. Serrano, R. Martinez-Manez and F. Sancenon,"The chemistry of senescence.", The chemistry of senescence., 2019, (3), 426-411
15)	細胞（HepG2）	蛍光顕微鏡	三谷塁一, "肝臓のミトコンドリア活性化に及ぼす大豆イソフラボンの効果とその分子機構に関する研究", 大豆たん白質研究, 2019, 21
16)	細胞（PC12）	蛍光顕微鏡	N. Wang, H. Wang, L. Li, Y. Li and R. Zhang, "β-Asarone Inhibits Amyloid-β by Promoting Autophagy in a Cell Model of Alzheimer's Disease.", Front Pharmacol., 2020, 10, 1529
17)	細胞（A2780)	フローサイトメーター	Z. Wang, J. Gao, Y. Ohno, H. Liu and C. Xu, "Rosiglitazone ameliorates senescence and promotes apoptosis in ovarian cancer induced by olaparib.", Cancer Chemother Pharmacol., 2020.
18)	組織（マウス腎臓凍結切片）	蛍光顕微鏡フローサイトメーター	J. H. Cho, E. Kim, Y. Son, D. Lee, Y. S. Park, J. H. Choi, K. Cho, K. Kwon and J. Kim, "CD9 Induces Cellular Senescence and Aggravates Atherosclerotic Plaque Formation.", Cell Death Differ., 2020, doi: 10.1038/s41418-020-0537-9
19)	細胞（T cell）	フローサイトメーター	S. Yoshida, H. Nakagami, H. Hayashi, Y. Ikeda, J. Sun, A. Tenma, H. Tomioka, T. Kaawano, M. Shimamura, R. Morishita and H. Rakugi, "The CD153 vaccine is a senotherapeutic option for preventing the accumulation of senescent T cells in mice.", Nat. Commun., 2020, 11, (2482), doi:10.1038/s41467-020-16347-w
20)	細胞（PC12）	蛍光顕微鏡	N. Wang, H. Wang, L. Li, Y. Li and R. Zhang, "β-Asarone Inhibits Amyloid-β by Promoting Autophagy in a Cell Model of Alzheimer's Disease.", Front Pharmacol., 2020, 10, 1529
21)	細胞（ARPE-19）	蛍光顕微鏡	T. Yamazaki, H. Suzuki, S. Yamada, K. Ohshio, M. Sugamata, T. Yamada and Y. Morita, "Lactobacillus paracasei KW3110 Suppresses Inflammatory Stress-Induced Premature Cellular Senescence of Human Retinal Pigment Epithelium Cells and Reduces Ocular Disorders in Healthy Humans”, Int J Mol Sci, 2020, 21(14), 5091
22)	細胞 (ゼブラフィッシュの上皮細胞)	蛍光顕微鏡	Y. Haraoka, Y. Akieda, Y. Nagai, C. Mogi and T. Ishitani, "Zebrafish imaging reveals TP53 mutation switching oncogene-induced senescence from suppressor to driver in primary tumorigenesis", Nat. Commun., 2022, doi:10.1038/s41467-022-29061-6.
23)	組織 (脂肪組織)	蛍光顕微鏡	A. Kita, Y. Saito, N. Miura, M. Miyajima, S. Yamamoto, T. Sato, T. Yotsuyanagi, M. Fujimiya and T. Chikenji, "Altered regulation of mesenchymal cell senescence in adipose tissue promotes pathological changes associated with diabetic wound healing", Commun. Biol., 2022, doi:10.1038/s42003-022-03266-3.
24)	細胞(hMPC)	蛍光顕微鏡	X. Liu, Z. Liu, Z. Wu, J. Ren, Y. Fan, L. Sun, G. Cao, Y. Niu, B. Zhang, Q. Ji, X Jiang, C. Wang, Q. Wang, Z. Ji, L. Li, C. R. Esteban, K. Yan, W. Li, Y. Cai, S. Wang, A. Zheng, Y. E. Zhang, S. Tan, Y. Cai, M. Song, F. Lu, F. Tang, W. Ji, Q. Zhou, J. Belmonte, W. Zhang, J. Qu, G. Liu, "Resurrection of endogenous retroviruses during aging reinforces senescence", Cell, 2023, doi:10.1016/j.cell.2022.12.017.

よくある質問

Q 1キット当りの使用回数の目安は？: A

目安となる使用回数については、下記の容器毎の数量をご参考ください。

※１ウェル当りに添加する染色溶液の量によって上記の数量は変わります。
　使用する容器と必要な１ウェル当りの染色溶液量を予め確認の上、ご使用ください。

Q Bafilomycin A1 を添加する理由を教えて下さい。: A

多くの細胞には内在性のβ-ガラクトシダーゼの存在が知られていますが、SPiDER-βGalは、内在性のβ-ガラクトシダーゼと老化マーカーであるSA-β-Galともに反応するため、老化が認められていない細胞でも、バックグラウンドが高くなり、SA-β-Galの検出に支障が出てきます。
Bafilomycin A1は、リソソーム中のATPase活性を阻害し、リソソーム中のpHを酸性から中性付近に変化させますが、この作用により内在性β-ガラクトシダーゼの活性が低下します。そのため、SPiDER-βGalを添加する前にBafilomycin A1で細胞を処理することで、SPiDER-βGalはSA-β-Galと反応して老化細胞を蛍光染色することができます。

左図ではBafilomycin A1の添加有無によるSA-β-Gal検出の違いを示しています。

なお、Bafilomycin A1は、オートファジー阻害剤としての利用も知られています。ご利用の際は、実験系に支障があるかご検討の上、支障が有る場合は、固定化細胞の利用をお勧めします。固定化細胞を用いる場合は、バッファーで細胞内pHをコントロールするため、Bafilomycin A1 は使用しません。取扱説明書に記載された手順に従って染色することができます。

Q DMSO stock solutionは、どのくらい安定ですか？: A

SPiDER-βGal DMSO stock solution及びBafilomycin A1 DMSO stock solution調製後は、-20℃保存した場合に1か月間安定であることを確認しています。

Q Working solutionは、どのくらい安定ですか？: A

SPiDER-βGal working solution及びBafilomycin A1 working solutionは保存できないため、用時調製して下さい。

Q 老化細胞を蛍光観察する際の注意点はありますか？: A

細胞老化が進むと細胞内にリポフスチンと呼ばれる不溶性物質が蓄積してきます。リポフスチンは自家蛍光を発するため蛍光観察時にバックグラウンドとして影響することがあります。その場合、老化細胞中のSA-β-gal活性を正確に評価するために、SPiDER-βGalを添加しない試料もご用意いただき確認することをお勧めします。

○フローサイトメーターの場合
・「老化細胞」および「老化していない細胞」を用いて、各々①②の平均蛍光強度(MFI)を測定してください。
　　　①SPiDER-βGalを添加した細胞
　　　②SPiDER-βGalを添加していない細胞（バックグラウンド）

・「①の平均蛍光強度」から「②の平均蛍光強度」を差し引いてください。
　バックグラウンドを差し引いたSA-β-gal由来の蛍光強度をSA-β-gal活性の指標とします。
　　　a：SA-β-gal活性（老化細胞）　　　　　 = ①の平均蛍光強度　－　②の平均蛍光強度
　　　b：SA-β-gal活性（老化していない細胞） = ①の平均蛍光強度　－　②の平均蛍光強度

・上記の aおよびb の値を比較することで、SA-β-gal活性として評価してください。
また、上記のaからbを差し引くことで細胞老化に伴うSA-β-gal活性の変化を確認できます。

○蛍光顕微鏡の場合
・初めにSPiDER-βGalを添加していない老化細胞を用いて蛍光観察してください。
・リポフスチン由来の蛍光像（バックグラウンド）が影響を与えない程度に感度（gainなど）を調整してください。
・その後、同じ撮影条件でSPiDER-βGalを添加した細胞や老化していない細胞の蛍光観察を行い評価してください。

Q 細胞を固定化した後に、SA-β-galは染色できますか？: A

可能です。固定化した場合、Bafilomycin A1を用いた細胞の前処理は必要ありませんが、pH6.0に調整したMcIlvain bufferを別途準備して頂く必要があります。詳細は取扱説明書をご覧ください。

Q 固定化細胞をフローサイトメーターを用いて検出するプロトコルを教えて下さい。: A

下記のプロトコルを参照ください。

(1) 細胞を35 mmディッシュに播種し、37℃、5% CO²インキュベーターで一晩培養する。
(2) 培地を吸引除去し、HBSS 2 mlで1回洗浄する。
(3) トリプシンで細胞を剥がし、培地500 μlで回収する。
(4) 300×gで5分間遠心し、上澄みを除去する。
(5) 2% PFA/PBS 100 μlに懸濁し、室温で5分間固定する。
(6) 300×gで5分間遠心し、上澄みを除去する。
(7) HBSS 500 μLに懸濁し、300×gで5分間遠心後、上澄みを除去する。これを2回繰り返す。
(8) SPiDER-βGal working solution(固定化細胞用) 500 μlを加え、37℃で30分間インキュベートする。
　　 ※pHの変動を抑えるため、5% CO₂インキュベーターは使用しない。
(9) 300×gで5分間遠心し、上澄みを除去する。
(10) HBSS 500 μlに懸濁し、300×gで5分間遠心後、上澄みを除去する。これを2回繰り返す。
(11) HBSS 500 μlを加えて細胞を回収し、フローサイトメーターにて解析する。

Q 細胞を固定化後にSA-β-gal検出および免疫染色はできますか？

はい、染色は可能ですが、細胞を固定化するとSA-β-galが低下する可能性があります。（下記の^※2に注意事項を記載）
以下の実験例を参照しご検討ください。

WI-38細胞を固定化後に、SA-β-gal検出およびγ-H2AX（DNA損傷マーカー）の免疫染色を行った。

＜実験操作＞

(1)	WI-38細胞を35 mm dishに播種し、37℃、5% CO₂インキュベーターで一晩培養した。
(2)	培養上清を除き、4% Paraformaldehyde/PBS溶液2 mlを細胞に添加し、室温で3分間インキュベートした^※1。
(3)	PBS 2 mlで細胞を3回洗浄した。
(4)	SPiDER-βGal working solution ^※2 2 mlを添加し、37℃で30分間インキュベートした^※3。
(5)	PBS 2 mlで細胞を2回洗浄した。
(6)	0.1% Triton X-100/PBS 2 mlを細胞へ添加し、室温で30分間インキュベートした。
(7)	PBS 2 mlで2回洗浄した。
(8)	1% BSA/PBS溶液2 mlを細胞へ添加し、室温で1時間インキュベートした。
(9)	抗γ-H2AX IgG (マウス由来)を1% BSA/PBS溶液にて希釈後、細胞に添加し4℃で一晩インキュベートした。
(10)	PBS 2 mlで細胞を3回洗浄した。
(11)	抗マウスIgG(Cy5標識)を1% BSA/PBSで希釈後、細胞に添加し室温で1時間インキュベートした。
(12)	上清を除き、PBS 2 mlで細胞を2回洗浄し蛍光顕微鏡下で観察した。
※1	固定化時間を長くすると、SA-β-gal活性が低下します。
※2	細胞の固定化操作によりSA-β-gal活性が低下する可能性があります。もしSA-β-gal評価時に十分な蛍光強度が得られない場合は、SPiDER-βGal DMSO stock solution を500-1000倍に希釈しご使用ください。通常はSPiDER-βGal DMSO stock solutionをMcIlvaine buffer（pH 6.0）にて2,000倍の希釈を推奨。希釈倍率の異なるSPiDER-βGal working solutionの結果をFig.1に示す。
※3	インキュベートの際は、5% CO₂インキュベーターでは行わないこと。5% CO₂インキュベーター内に固定化した細胞をおくと、バッファーが酸性になることで内在性のβ-galactosidase活性が上昇することが考えられる。結果として、バックグラウンドが上昇し、老化細胞と若い細胞のSA-β-gal活性の差が見えにくくなる。

＜実験データ＞

図1 免染前後におけるSPiDER-βGal染色の蛍光強度変化

免疫染色の前後でSPiDER-βGalの蛍光強度を比較すると、固定化を行う免疫染色の過程でSPiDER-βGalの蛍光強度が低下していることを確認した。

図2 希釈倍率の異なるSPiDER-βGalによる染色例（免疫染色後）
　赤： SPiDER-βGal、青： γ-H2AX　＜露光時間: 1.5 sec＞

SPiDER-βGal working solutionの希釈倍率を2000倍から666倍に変更することで、免疫染色（固定化）により低下したSPiDER-βGalの蛍光強度が免疫染色前と同程度の強度を示すことを確認した。

Q 染色後の蛍光が弱くて確認できないのですが、対策を教えてください。: A

下記の3点についてご確認またはご検討ください。

①ご使用のフィルターが試薬の蛍光特性に合致している。
　＜推奨フィルター＞
　　・蛍光顕微鏡：　励起（500-540 nm）, 蛍光（530-570 nm）
　　・フローサイトメーター：　励起（488 nm）, 蛍光（500-540 nm）
　
②各working solutionは用時調製したものを使用する。

③染色時間を長くする。
　SPiDER-βGal working solution添加後、30分間のインキュベーションで蛍光が確認できない場合は、インキュベーション時間を45-60分間を目安にご検討ください。

Q SA-β-Gal発現細胞を染色後、細胞は固定化できますか？: A

可能です。4%パラホルムアルデヒドを用いて固定化することを推奨します。

Q 培地中の血清やフェノールレッドは検出に影響しますか？: A

培地中の血清およびフェノールレッドは、SA-β-galの検出には影響しません。

Q 老化細胞とコントロール細胞で蛍光強度に差がない場合、何を確認したら良いですか？: A

STEP1:顕微鏡の観察条件を最適化してください。
STEP2:観察条件を最適化しても解決しない場合、染色条件の最適化を行ってください。

—————————————————————————
STEP1＜顕微鏡の観察条件を最適化＞

コントロール細胞の蛍光と老化細胞の蛍光に差が見られない場合下記をご確認ください。

・コントロール細胞を観察し蛍光が僅かに確認できる条件までGain、レーザー強度を下げる、または露光時間を短くする。
(共焦点顕微鏡：Gain、レーザー強度の調整　落射型顕微鏡：露光時間の調整)

・老化細胞の蛍光を観察し、コントロール細胞との蛍光の差を確認する。

・蛍光の差がみられない場合はSTEP2を確認する。

※観察する部分がガラスボトムシャーレの容器をお使いください。

顕微鏡観察条件とコントロールおよび老化細胞の蛍光強度の関係

—————————————————————————
STEP2＜染色条件の最適化＞

細胞によっては、SPiDERの染色時間もしくは濃度の検討が必要な場合がございます。
以下を目安に最適条件をご検討ください。
染色時間：10分～60分
染色濃度：取扱説明書に記載の濃度の1/2量～2倍量

※観察する細胞数が少ないと感度が得られない場合がございます。
　必要に応じて、細胞数の最適化を行ってください。

染色条件とコントロールおよび老化細胞の蛍光強度の関係

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷蔵

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グルコース取り込み検出キットBlue Glucose Uptake Assay Kit-Blue 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

Glucose Uptake Assay Kit-Blue

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

Glucose Uptake Assay Kit-Blue

細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
細胞機能解析
細胞老化
細胞内代謝
蛍光色素
顕微鏡
FCM

グルコース取り込み検出キットBlue

グルコース取り込み能力を高感度かつ簡便に測定できる
蛍光顕微鏡やフローサイトメーターで測定が可能
取り込まれた色素の漏れ出しを抑制し、再現性の高いデータを取得できる

製品コード

UP01　 Glucose Uptake Assay Kit-Blue

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
1 set	￥42,800	342-09871

使用回数の目安
1 set あたり、35 mm dish 12 枚、96-well microplate 1 枚

キット内容

1 set	Glucose Uptake Probe-Blue WI Solution (50×)	×1 5 ml ×1

試験成績書

SDSダウンロード

ご購入方法
お問い合わせ

マニュアル

取扱説明書日本語
Manual English

技術情報

既存法よりココが良い！4つの特徴

Glucose Uptake Probe-Blueは青色蛍光を発するため、蛍光顕微鏡やフローサイトメーターの多重染色の際に緑色蛍光以外の試薬としてご利用頂けます。また、高輝度の色素と細胞からの漏出を抑えるバッファーを採用したことで、既存法(2-NBDG)よりも短時間での測定が可能となりました。

よくある質問

Q Glucose Uptake Probe-Blueはどのグルコーストランスポーターを介して取り込まれるのでしょうか？: A

複数のトランスポーターを介して細胞内へ取り込まれていると推測されますが、各グルコーストランスポーターに対する特異性や親和性に関する詳細なデータはございません。

Q 使用実績のある細胞種を教えてください。

下記の細胞においてプローブの使用実績があります。

細胞
ヒト肺胞基底上皮腺癌細胞	A549
ヒト肝癌由来細胞	HepG2
前駆脂肪細胞	preadipocyte(3T3-L1)
脂肪細胞	adipocyte(3T3-L1)
ルイス肺がん由来細胞	3LL
T細胞	CD4⁺ T cell

Q 阻害剤や取り込み能力を変化させる実験の実績を教えて下さい。: A

下記の細胞において阻害剤や取り込み能力を変化させる実験の実績があります。

Q グルコースでの競合阻害ができない場合の対処法はありますか？: A

細胞ごとのグルコーストランスポーターの発現量や種類により、競合阻害がかからない場合があります。（例：HepG2細胞）

その場合には、2-deoxyglucose(2-DG)による前処理(Pretreatment)を行うことでglucose競合阻害の差が得られる
可能性があります。Glucose Uptake Assay Kit-Green(製品コード：UP02)での実施例を参考にご検討ください。

2-DG前処理とグルコースによる競合阻害を組み合わせた Glucose Uptake Probe の取り込み阻害（HepG2 細胞）

1. 細胞をディッシュまたはマイクロプレートに播種し、5% CO₂ インキュベーター（37℃）内で一晩培養した。
2. Medium [DMEM (10% FBS, High-glucose) ]を除去した後、50 mmol/l 2-DG/Mediumを添加し、5% CO₂
インキュベーター（37℃）内で二時間培養した。
3. 加温したDMEM (Glucose-free, serum-free)で2 回洗浄した。
4. 加温したDMEM (Glucose-free, serum-free)を添加し、5% CO₂ インキュベーター（37℃）内で15 分間静置した。
5. 上清を除去した後、加温したProbe solutionを添加し、5% CO₂ インキュベーター（37℃）内で15 分間静置した。
6. 上清を除去した後、冷却したWI Solution (1x) で2 回洗浄した。
7. 上清を除去した後、冷却したWI Solution (1x) を添加し、室温で5 分間静置した。
8. 上清を除去した後、冷却したWI Solution (1x) を添加した。
9. 蛍光顕微鏡で観察した。

Q Glucose Uptake Probe-Blueは細胞内に取り込まれた後、分解・代謝されるのでしょうか？: A

蛍光色素部位は安定な構造を有しているため、実験操作内において分解されることはございません。グルコース部位は、構造上ヘキソキナーゼによるリン酸化を受けることが考えられますが、それ以降の代謝は行われないと考えられます。

Q Glucose Uptake Probe-Blueを生細胞へ取り込ませた後、固定することは可能でしょうか？: A

プローブが細胞内から漏出するため、染色後の細胞を固定することはできません。

Q Probe solutionは保存可能でしょうか？: A

Probe solutionは保存できません。Probe stock solutionは一か月間冷凍保存が可能です。

Q バックグラウンドが高い場合、どうすればいいですか？: A

細胞に取り込まれなかったプローブが残存している可能性があります。再度WI solutionによる洗浄操作を一度行ってください。

Q 蛍光シグナルの変化が観察されない場合、どうすればいいですか？: A

初期検討としてプローブ濃度(x250～x1,000)や染色時間(15分～1時間程度)をご検討下さい。

Q WI solutionを用いて洗浄した後、プローブはどのくらいの時間細胞内に保持されますか？: A

室温で約１時間程度は細胞内に保持されます。ただし、細胞の種類によって異なることが考えられます。

Q 取り込まれた色素の定量はできますか？: A

取り込まれた色素の定量を行う事はできません。本色素は、グルコース取り込み能力の増減を確認するための色素となります。

Q グルコースの定量はできますか？: A

本製品を用いてグルコースを定量することはできません。

培地中のグルコース消費量や細胞内のグルコース量を定量したい場合は、弊社 グルコース代謝測定キット Glucose Assay Kit-WST (G264) をご使用下さい。

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷蔵

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グルコース取り込み検出キットGreen Glucose Uptake Assay Kit-Green 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

Glucose Uptake Assay Kit-Green

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

Glucose Uptake Assay Kit-Green

細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
細胞機能解析
細胞老化
細胞内代謝
蛍光色素
顕微鏡
FCM

グルコース取り込み検出キットGreen

グルコース取り込み能力を高感度かつ簡便に測定できる
プレートリーダーを用いて測定が可能
取り込まれた色素の漏れ出しを抑制し、再現性の高いデータを取得できる

製品コード

UP02　 Glucose Uptake Assay Kit-Green

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
1 set	￥40,700	347-09821

使用回数の目安
1 set あたり、35 mm dish 12 枚、96-well plate 1 枚

キット内容

1 set	Glucose Uptake Probe-Green WI Solution (50×)	×1 5 ml ×1

試験成績書

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マニュアル

取扱説明書日本語
Manual English

技術情報

既存法よりココが良い！４つの特徴

高輝度の色素を採用したことにより、既存法(2-NBDG)よりも高感度かつ短時間での測定が可能となりました。

参考文献

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No.	Sample	Publication
1)	細胞 (HeLa)	W. Islam, Y. Matsumoto, J. Fang, A. Harada, T. Niidome, K. Ono, H. Tsutsuki, T. Sawa, T. Imamura, K. Sakurai, N. Fukumitsu, H. Yamamoto, H. Maeda., "Polymer-conjugated glucosamine complexed with boric acid shows tumor-selective accumulation and simultaneous inhibition of glycolysis ", Biomaterials., 2021, 269, (-), 120631.
2)	菌 (B. licheniformis; P. stutzeri)	M. Jiang, Q. Li, S. Hu, P. He, Y. Chen, D. Cai, Y. Wu, S. Chen, "Enhanced aerobic denitrification performance with Bacillus licheniformis via secreting lipopeptide biosurfactant lichenysin", 2022, doi:10.1016/j.cej.2022.134686.
3)	細胞 (分化した3T3-L1脂肪細胞)	Y. Liu, Y. Le, M. Xu, W. Wang, H. Chen, Q. Zhang, C. Wang, " Remodeling on adipocytic physiology of organophosphorus esters in mature adipocytes", Environ. Pollut., 2022, doi:10.1016/j.envpol.2022.119287.

よくある質問

Q Glucose Uptake Probe-Greenはどのグルコーストランスポーターを介して取り込まれるのでしょうか？: A

複数のトランスポーターを介して細胞内へ取り込まれていると推測されますが、各グルコーストランスポーターに対する特異性や親和性に関する詳細なデータはございません。

Q 使用実績のある細胞種を教えてください。

下記の細胞においてプローブの使用実績があります。

細胞
ヒト肺胞基底上皮腺癌細胞	A549
ヒト肝癌由来細胞	HepG2
前駆脂肪細胞	preadipocyte(3T3-L1)
脂肪細胞	adipocyte(3T3-L1)
悪性黒色腫	MO5
マウス筋芽細胞(未分化)	C2C12
マウス筋管	C2C12
アストロサイト―マ	U-251 MG
ヒト子宮頸癌由来細胞	HeLa
ルイス肺がん由来細胞	3LL
T細胞	CD4⁺ T cell
マウスマクロファージ様株化細胞	J774.1
線虫	N2

Q 阻害剤や取り込み能力を変化させる実験の実績を教えて下さい。: A

下記の細胞において阻害剤や取り込み能力を変化させる実験の実績があります。

Q グルコースでの競合阻害ができない場合の対処法はありますか？: A

細胞ごとのグルコーストランスポーターの発現量や種類により、競合阻害がかからない場合があります。（例：HepG2細胞）

その場合には、2-deoxyglucose(2-DG)による前処理(Pretreatment)を行うことでglucose競合阻害の差が得られる
可能性があります。下記例を参考にご検討ください。

2-DG前処理とグルコースによる競合阻害を組み合わせた Glucose Uptake Probe の取り込み阻害（HepG2 細胞）

1. 細胞をディッシュまたはマイクロプレートに播種し、5% CO₂ インキュベーター（37℃）内で一晩培養した。
2. Medium [DMEM (10% FBS, High-glucose) ]を除去した後、50 mmol/l 2-DG/Mediumを添加し、
5% CO₂ インキュベーター（37℃）内で二時間培養した。
3. 加温したDMEM (Glucose-free, serum-free)で2 回洗浄した。
4. 加温したDMEM (Glucose-free, serum-free)を添加し、5% CO₂ インキュベーター（37℃）内で15 分間静置した。
5. 上清を除去した後、加温したProbe solutionを添加し、5% CO₂ インキュベーター（37℃）内で15 分間静置した。
6. 上清を除去した後、冷却したWI Solution (1x) で2 回洗浄した。
7. 上清を除去した後、冷却したWI Solution (1x) を添加し、室温で5 分間静置した。
8. 上清を除去した後、冷却したWI Solution (1x) を添加した。
9. 蛍光顕微鏡で観察した。

Q Glucose Uptake Probe-Greenは細胞内に取り込まれた後、分解・代謝されるのでしょうか？: A

蛍光色素部位は安定な構造を有しているため、実験操作内において分解されることはございません。グルコース部位は、構造上ヘキソキナーゼによるリン酸化を受けることが考えられますが、それ以降の代謝は行われないと考えられます。

Q Glucose Uptake Probe-Greenを生細胞へ取り込ませた後、固定することは可能でしょうか？: A

プローブが細胞内から漏出するため、染色後の細胞を固定することはできません。

Q プレートリーダーで測定する場合、どのプレートを使用すればよいでしょうか？: A

蛍光検出のため細胞培養用のブラックマイクロプレートをご使用ください。

Q Probe working solutionは保存可能でしょうか？: A

Probe working solutionは保存できません。Probe stock solutionは冷凍保存が一か月間可能です。

Q 蛍光シグナルの変化が観察されない場合、どうすればいいですか？: A

初期検討としてプローブ濃度(x250～x1,000)や染色時間(15分～1時間程度)をご検討下さい。

Q バックグラウンドが高い場合、どうすればいいですか？: A

細胞に取り込まれなかったプローブが残存している可能性があります。マニュアルの洗浄操作6-7を繰り返してください。

Q Glucose Uptake Probe-Greenに細胞毒性はありますか？: A

弊社製品のCell Counting Kit-8 (CK04)を用いてA549細胞におけるプローブの細胞毒性を調査した結果、細胞毒性は確認されませんでした。

Q WI solutionを用いて洗浄した後、プローブはどのくらいの時間細胞内に保持されますか？: A

室温で約１時間程度は細胞内に保持されます。ただし、細胞の種類によって異なることが考えられます。

Q グルコースの定量はできますか？: A

本製品を用いてグルコースを定量することはできません。

培地中のグルコース消費量や細胞内のグルコース量を定量したい場合は、弊社 グルコース代謝測定キット Glucose Assay Kit-WST (G264) をご使用下さい。

Q 取り込まれた色素の定量はできますか？: A

取り込まれた色素の定量を行う事はできません。本色素は、グルコース取り込み能力の増減を確認するための色素となります。

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷蔵

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グルコース取り込み検出キットRed Glucose Uptake Assay Kit-Red 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

Glucose Uptake Assay Kit-Red

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

Glucose Uptake Assay Kit-Red

細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
細胞機能解析
細胞老化
細胞内代謝
蛍光色素
顕微鏡
FCM

グルコース取り込み検出キットRed

グルコース取り込み能力を高感度かつ簡便に測定できる
プレートリーダーやフローサイトメーターでも測定が可能
取り込まれた色素の漏れ出しを抑制し、再現性の高いデータを取得できる

製品コード

UP03　 Glucose Uptake Assay Kit-Red

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
1 set	￥42,800	349-09881

使用回数の目安
1 set あたり、35 mm dish 12 枚、96-well microplate 1 枚

キット内容

1 set	Glucose Uptake Probe-Red WI Solution (50×)	×1 5 ml ×1

試験成績書

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ご購入方法
お問い合わせ

マニュアル

取扱説明書日本語
Manual English

技術情報

既存法よりココが良い！４つの特徴

Glucose Uptake Probe-Redは赤色蛍光を発するため、蛍光顕微鏡やフローサイトメーターの多重染色の際に緑色蛍光以外の試薬としてご利用頂けます。
また、高輝度の色素と細胞からの漏出を抑えるバッファーを採用したことで、既存法(2-NBDG)よりも短時間での測定が可能となりました。

参考文献

参考文献を表示する

No.	Sample	Publication
1)	菌 (OP50-1)	Y. Suzuki, K. Kikuchi, K. Numayama-Tsuruta and T. Ishikawa, "Reciprocating intestinal flows enhance glucose uptake in C. elegans", Sci. Rep., 2022, doi:10.1038/s41598-022-18968-1.

よくある質問

Q Glucose Uptake Probe-Redはどのグルコーストランスポーターを介して取り込まれるのでしょうか？: A

複数のトランスポーターを介して細胞内へ取り込まれていると推測されますが、各グルコーストランスポーターに対する特異性や親和性に関する詳細なデータはございません。

Q 使用実績のある細胞種を教えてください。

下記の細胞においてプローブの使用実績があります。

細胞
ヒト肺胞基底上皮腺癌細胞	A549
ヒト肝癌由来細胞	HepG2
前駆脂肪細胞	preadipocyte(3T3-L1)
脂肪細胞	adipocyte(3T3-L1)
ルイス肺がん由来細胞	3LL
T細胞	CD4⁺ T cell

Q 阻害剤や取り込み能力を変化させる実験の実績を教えて下さい。: A

下記の細胞において阻害剤や取り込み能力を変化させる実験の実績があります。

Q グルコースでの競合阻害ができない場合の対処法はありますか？: A

細胞ごとのグルコーストランスポーターの発現量や種類により、競合阻害がかからない場合があります。（例：HepG2細胞）

その場合には、2-deoxyglucose(2-DG)による前処理(Pretreatment)を行うことでglucose競合阻害の差が得られる
可能性があります。Glucose Uptake Assay Kit-Green(製品コード：UP02)での実施例を参考にご検討ください。

2-DG前処理とグルコースによる競合阻害を組み合わせた Glucose Uptake Probe の取り込み阻害（HepG2 細胞）

1. 細胞をディッシュまたはマイクロプレートに播種し、5% CO₂ インキュベーター（37℃）内で一晩培養した。
2. Medium [DMEM (10% FBS, High-glucose) ]を除去した後、50 mmol/l 2-DG/Mediumを添加し、5% CO₂
インキュベーター（37℃）内で二時間培養した。
3. 加温したDMEM (Glucose-free, serum-free)で2 回洗浄した。
4. 加温したDMEM (Glucose-free, serum-free)を添加し、5% CO₂ インキュベーター（37℃）内で15 分間静置した。
5. 上清を除去した後、加温したProbe solutionを添加し、5% CO₂ インキュベーター（37℃）内で15 分間静置した。
6. 上清を除去した後、冷却したWI Solution (1x) で2 回洗浄した。
7. 上清を除去した後、冷却したWI Solution (1x) を添加し、室温で5 分間静置した。
8. 上清を除去した後、冷却したWI Solution (1x) を添加した。
9. 蛍光顕微鏡で観察した。

Q Glucose Uptake Probe-Redは細胞内に取り込まれた後、分解・代謝されるのでしょうか？: A

蛍光色素部位は安定な構造を有しているため、実験操作内において分解されることはございません。グルコース部位は、構造上ヘキソキナーゼによるリン酸化を受けることが考えられますが、それ以降の代謝は行われないと考えられます。

Q Glucose Uptake Probe-Redを生細胞へ取り込ませた後、固定することは可能でしょうか？: A

プローブが細胞内から漏出するため、染色後の細胞を固定することはできません。

Q プレートリーダーで測定する場合、どのプレートを使用すればよいでしょうか？: A

蛍光検出のため細胞培養用のブラックマイクロプレートをご使用ください。

Q Probe working solutionは保存可能でしょうか？: A

Probe solutionは保存できません。Probe stock solutionは一か月間冷凍保存が可能です。

Q 蛍光シグナルの変化が観察されない場合、どうすればいいですか？: A

初期検討としてプローブ濃度(x250～x1,000)や染色時間(15分～1時間程度)をご検討下さい。

Q バックグラウンドが高い場合、どうすればいいですか？: A

細胞に取り込まれなかったプローブが残存している可能性があります。再度WI solutionによる洗浄操作を行ってください。

Q WI solutionを用いて洗浄した後、プローブはどのくらいの時間細胞内に保持されますか？: A

室温で約１時間程度は細胞内に保持されます。ただし、細胞の種類によって異なることが考えられます。

Q グルコースの定量はできますか？: A

本製品を用いてグルコースを定量することはできません。

培地中のグルコース消費量や細胞内のグルコース量を定量したい場合は、弊社 グルコース代謝測定キット Glucose Assay Kit-WST (G264) をご使用下さい。

Q 取り込まれた色素の定量はできますか？: A

取り込まれた色素の定量を行う事はできません。本色素は、グルコース取り込み能力の増減を確認するための色素となります。

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷蔵

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シスチン取り込み検出キット Cystine Uptake Assay Kit 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

Cystine Uptake Assay Kit

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

Cystine Uptake Assay Kit

細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
細胞内代謝

シスチン取り込み検出キット

シスチン取り込み能力を簡便に検出できる
プレートリーダーを用いて検出が可能

製品コード

UP05　 Cystine Uptake Assay Kit

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
20 tests	￥19,300	344-09951
100 tests	￥53,500	340-09953

<使用回数の目安> 100 testsあたり、96-well plate 1 枚

キット内容

20 tests	Cystine Analog Solution Fluorescent Probe Reducing Agent Assay Buffer	45 μl×1 ×1 ×1 5 ml×1
100 tests	Cystine Analog Solution Fluorescent Probe Reducing Agent Assay Buffer	225 μl×1 ×1 ×2 25 ml×1

試験成績書

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ご購入方法
お問い合わせ

マニュアル

取扱説明書日本語
Manual English

技術情報

この製品でできること

本キットはCystine Analog (CA)としてSelenocystineを用いており、細胞のシスチン取り込み能力を短時間の操作で簡便にプレートリーダーにて測定することが可能です。

参考文献

参考文献を表示する

文献No.	対象サンプル	装置	引用（リンク）
1)	細胞 (A172; LN229)	プレートリーダー	K. Hayashima, H. Katoh, "Expression of gamma-glutamyltransferase 1 in glioblastoma cells confers resistance to cystine deprivation-induced ferroptosis", J. Biol. Chem., 2022, doi:10.1016/j.jbc.2022.101703.
2)	細胞 (HK2; 293T)	プレートリーダー	H. Chen, L. Cao, K. Han, H. Zhang, J. Cui, X. Ma, S. Zhao, C. Zhao, S. Yin, L. Fan, H. Hu, "Patulin disrupts SLC7A11-cystine-cysteine-GSH antioxidant system and promotes renal cell ferroptosis both in vitro and in vivo", 2022, Food Chem. Toxicol., doi: 10.1016/j.fct.2022.113255.
3)	細胞 (Hep 3B)	プレートリーダー	X. Hu, Y. He, Z. Han, W. Liu, D. Liu, X. Zhang, L. Chen, L. Qi, L. Chen, Y. Luo, Q. Li, P. Chen, Q. Wu, X. Zhu and H. Guo, "PNO1 inhibits autophagy-mediated ferroptosis by GSH metabolic reprogramming in hepatocellular carcinoma ", 2022, Cell Death Dis., doi:10.1038/s41419-022-05448-7.

よくある質問

Q 蛍光測定用のマイクロプレートはどのようなものが使えますか？

使用実績のあるマイクロプレートは下記の通りです。

社名	製品名	Cat No.
ibidi	μPlate 96 well ibiTreat black S 15	ib89626
AGC techno glass	EZVIEW Glass Bottom Culture Plate LB 96well	5866-096
Thermo Fisher	96 Well Black/Clear Bottom Plate, TC Surface, Pack of 10	165305

Q Cystine Analogはどのトランスポーターを介して取り込まれるのでしょうか？: A

Cystine Analogはシスチン・グルタミン酸トランスポーター(xCT)を介して細胞内へ取り込まれます。

Q 細胞種の実績を教えて下さい。

下記の細胞において使用実績があります。

由来	細胞名
ヒト神経膠芽腫由来細胞	A172
ヒト肺胞基底上皮腺癌細胞	A549
ヒト悪性黒色種	A375
ヒト結腸腺癌	HCT116
ヒト子宮頸癌由来細胞	HepG2
白血病細胞	HL60
ヒトサルコーマ細胞	HT1080
マウス胚性線維芽細胞	MEF
ヒト肺小細胞癌	SBC-5
アストロサイト―マ	U-251 MG

Q Cystine Analogは細胞内に取り込まれた後、分解・代謝されるのでしょうか？: A

Cystine Analogは安定な構造を有しているため、実験操作内において分解されることはございません。

Q Cystine uptake solutionは保存可能でしょうか？: A

Cystine uptake solutionは保存できません。添加前に必要量のCystine uptake solutionを調製して下さい。

Q シスチンを定量することはできますか？: A

本製品を用いてシスチンを定量することはできません。

Q 細胞内に取り込まれたCystine Analogを定量することはできますか？: A

細胞内に取り込まれたCystine Analogを定量することはできません。本製品は、シスチン取り込み能力を数値化するためのキットです。

Q サンプル間またはブランクとの蛍光強度差が無い場合、何を確認すればよいですか？: A

以下5点をご確認ください。

1.細胞数が変化している。　
測定値(蛍光強度)を細胞数やタンパク質量で補正してください。
　詳細はよくある質問[測定値(蛍光強度)を細胞数やタンパク質濃度で補正する方法を教えてください。]をご参照ください。

2. 細胞へCystine Analogが十分取り込まれていない。
マニュアルの各操作の時間を以下を目安にご検討ください。
　　・シスチン不含培地での培養時間 (接着細胞操作3, 浮遊細胞操作4 )：5 – 30分間　
　　・Cystine Analogの取り込み時間 (接着細胞操作4, 浮遊細胞操作5 ) : 30 – 60分間

3. 細胞に取り込まれなかったCystine Analogがウェル内に残存することでバックグラウンドが上昇している。　
PBSによる洗浄(接着細胞：操作5, 浮遊細胞：操作6)を繰り返してください。

4. Working solutionが分解しており、バックグラウンドが上昇している。
Working solutionを調製後、時間をおくと溶液に含まれる蛍光色素が分解し、蛍光強度が高くなる可能性があります。
Working Solution調製後、時間をおかずに添加してください。

5. 細胞種の影響
細胞種ごとにシスチンの取り込み能は大きく異なっており、取り込み能が低い細胞種では相対的にバックグラウンドが高く見えることがあります。下図は異なるがん細胞のシスチン取り込み能の違いを示しています。上記記載の対処法でもバックグラウンドが解決できない場合には、よくある質問記載の実績のある細胞種でまずご検討いただくことをおすすめいたします。

Q シスチン不含無血清培地以外にCA Uptake solutionの調製に使用できるバッファーはありますか？: A

HeLa細胞においてHBSSや0.1%Glucoseを含むPBS(+)を使用して測定した実績がございます。

Q 測定値(蛍光強度)を細胞数やタンパク質濃度で補正する方法を教えてください。

小社では下記表に記載する方法を推奨しております。使用する細胞（接着細胞・浮遊細胞）により補正方法とタイミングが異なるため、下記表を参照し[UP05による測定値]を補正してください。

細胞	接着細胞	浮遊細胞
補正方法	核染色（蛍光）	タンパク質定量法: BCA法　(比色)
製品	Cell Count Normalization Kit [Code:C544]	Sodium bicinchoninate [Code:B037] 市販のキット
補正のタイミング	取扱説明書接着細胞の操作10（UP05の測定）後の溶液を用いる。	取扱説明書浮遊細胞の操作9で使用した溶液の残りを使用する。
補正の操作	Cell count Normalization Kit [Code:C544] の取扱説明書 [培地交換法]をご参照ください。	取扱説明書の下記実験例をご参照ください。 [xCT阻害剤エラスチンによるシスチントランスポーター活性阻害(HL60)]

[UP05による測定値]を [補正方法による測定値]で補正蛍光強度を計算してください。
補正蛍光強度=[UP05による測定値]/[補正方法による測定値]

※[UP05による測定値] = (サンプルの測定値) – (ブランクの測定値)
※[補正方法による測定値] = (サンプルウェルの測定値) – (細胞なしのウェルの測定値)

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷凍
危険・有害シンボルマーク

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脂肪酸取り込み検出キット Fatty Acid Uptake Assay Kit 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

Fatty Acid Uptake Assay Kit

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

Fatty Acid Uptake Assay Kit

細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
細胞機能解析
細胞内代謝
顕微鏡
FCM

脂肪酸取り込み検出キット

脂肪酸取り込み能力を高感度かつ簡便に測定できる
3 ステップの簡便操作
Quenching Buffer（同梱）で洗浄不要

製品コード

UP07　 Fatty Acid Uptake Assay Kit

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
100 tests	￥32,000	343-10031

使用回数の目安
1 set あたり96-well plate 1 枚

キット内容

100 tests	・Fatty Acid Uptake Probe ・Quenching Buffer ・Washing Buffer (10X)	×1 11 ml×1 11 ml×1

試験成績書

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ご購入方法
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マニュアル

取扱説明書日本語
Manual English

技術情報

なぜ、脂肪酸取り込み能力が注目されているのか？

脂肪酸は、生体がエネルギーを得るために重要な物質です。脂肪酸取り込み能は肥満や糖尿病などの疾患に関わるだけでなく、がん細胞における代謝指標の 1 つでもあります（左図）。細胞増殖が活発ながん細胞は多くの脂質を必要とするため、細胞内における脂肪酸合成や細胞外からの脂肪酸取り込みが活発に行われています（右図）。そのため、がん細胞の脂肪酸代謝経路をターゲットとした多くの薬剤が開発されています。

よくある質問

Q 使用実績のある細胞種を教えてください。

下記の細胞において使用実績がございます。

細胞名	由来
A549	ヒト肺胞基底上皮腺癌細胞
HepG2	ヒト肝癌由来細胞
HeLa	ヒト子宮頸癌由来細胞
Jurkat	ヒト白血病T細胞
MOLT-4	ヒト急性リンパ芽球性白血病細胞
3T3-L1 (preadipocyte)	前駆脂肪細胞
3T3-L1 (adipocyte)	脂肪細胞

Q Fatty Acid Uptake Probeを生細胞へ取り込ませた後、細胞を固定することは可能でしょうか？: A

4% PFAを用いて染色後の細胞を固定した実績がございます。

〈プロトコル〉
－付着細胞－
1. ディッシュまたはマイクロプレートに播種した細胞を準備した。
2. 培地を除去し、無血清培地で2回洗浄した。
3. 無血清培地を添加し、インキュベーター(37℃、5%CO₂存在下)で15分間静置した。
4. 上清を除去した後、Fatty Acid Uptake Probe working solutionを添加し、インキュベーター(37℃、5%CO₂存在下)で15分間静置した。
5. 上清を除去した後、Washing Buffer solutionで1回洗浄した。
6. 4% PFA/PBSを細胞へ添加し、室温で5分間インキュベートした。
7. PBSで細胞を3回洗浄後、蛍光顕微鏡で観察、プレートリーダーで測定した。

※固定化により蛍光強度は低下します。

－浮遊細胞－
1. マイクロチューブに細胞を準備した。
2. 300×gで5分間遠心し、上清を除去した。
3. 無血清培地を加え、ピペッティングにより懸濁後、300×gで5分間遠心し、上清を除去した。この操作を2回繰り返した。
4. 無血清培地を添加し、ピペッティングにより懸濁後、インキュベーター(37℃、5%CO₂存在下)で15分間静置した。
5. 300×gで5分間遠心し、上清を除去した。
6. Fatty Acid Uptake Probe working solutionを添加し、ピペッティングにより懸濁後、インキュベーター(37℃、5%CO₂存在下)で15分間静置した。
7. 300×gで5分間遠心し、上清を除去した。
8. Washing Buffer solutionで1回洗浄した。
9. 4% PFA/PBSを添加し、ピペッティングにより懸濁後、室温で5分間インキュベートした。
10. 300×gで5分間遠心し、上清を除去した。
11. PBSを加え、ピペッティングにより懸濁後、300×gで5分間遠心し、上清を除去した。この操作を2回繰り返した。
12. 蛍光顕微鏡で観察、フローサイトメーターで測定した。

Q プレートリーダーで測定する場合、どのプレートを使用すればよいでしょうか？

蛍光検出のため細胞培養用のブラックマイクロプレートをご使用ください。

〇: 使用可、×: 使用不可、△: 注釈参照

		付着細胞		浮遊細胞
		不透明底プレート	透明底プレート	不透明底プレート	透明底プレート
Washing Buffer (10×) 使用時	Top Reading	〇		〇
	Bottom Reading	×	〇	×	〇
Quenching Buffer 使用時	Top Reading	×		×
	Bottom Reading	×	〇	×	△^※

※細胞がプレートの底を覆う程度に播種し、しばらく静置させて細胞をプレートの底に沈めることで測定することは可能です。

〈Quenching Buffer使用時、浮遊細胞のデータ〉

脂肪酸取り込み検出キット Fatty Acid Uptake Assay Kit 同仁化学研究所

また、使用実績のあるマイクロプレートは下記の通りです。

メーカー名	製品名	Cat No.
ibidi	µPlate 96 well ibiTreat black S 15	ib89626
Thermo Fisher	96 Well Black/Clear Bottom Plate, TC Surface, Pack of 10	165305

Q Fatty Acid Uptake Probe working solutionは保存可能でしょうか？: A

Fatty Acid Uptake Probe working solutionは保存できません。

Q バックグラウンドが高い場合、どうすればいいですか？: A

細胞に取り込まれなかったFatty Acid Uptake Probeがウェル内に残存している可能性があります。Washing Buffer solutionによる洗浄を繰り返すか、Quenching Bufferの使用をご検討ください。

Q 1キットあたり測定可能なサンプル数を教えてください。

下記表をご参照ください。

付着細胞

浮遊細胞

培養器材

(添加量)

6-well

(1.5 ml/well)

24-well

(0.3 ml/well)

96-well

(0.1 ml/well)

35-mm dish

(1.5 ml/well)

1.5-ml microtube

(0.5 ml/tube)

測定可能

サンプル数

7 sample

34 sample

100 sample

7 sample

20 sample

Q Quenching Bufferを使用して共焦点レーザー顕微鏡で透過光観察を行ったのですが、透過光観察ができません。どうすればいいですか？: A

Quenching Bufferを使用して共焦点レーザー顕微鏡で透過光観察を行う場合は、QuenchingBufferをWashing Buffer solutionで10倍希釈してご使用いただくか、640 nmレーザーを用いて透過光観察を行ってください。

〈共焦点レーザー顕微鏡で透過光観察を行う場合に見られる現象〉

Q 脂肪酸を定量することはできますか？: A

本製品を用いて脂肪酸を定量することはできません。

Q 細胞内に取り込まれた色素(Fatty Acid Uptake Probe)を定量することはできますか？: A

取り込まれた色素(Fatty Acid Uptake Probe)を定量することはできません。本製品は、脂肪酸取り込み能力の増減を確認するためのキットとなります。

Q 他の蛍光色素との共染色を行うことはできますか？: A

Fatty Acid Uptake Probeは赤色蛍光への漏れ込みが僅かに観察されます。そのため、緑色および赤色蛍光検出以外の色素を用いて共染色を行って下さい。

弊社ミトコンドリア染色用色素MitoBright LT Deep Red (MT12)との共染色を行った実績がございます。

〈赤色蛍光への漏れ込み〉

〈MitoBright LT Deep Redとの共染色プロトコル〉
1. ディッシュまたはマイクロプレートに播種した細胞を準備した。
2. 培地を除去し、無血清培地で2回洗浄した。
3. 無血清培地を添加し、インキュベーター(37℃、5%CO₂存在下)で15分間静置した。
4. 上清を除去した後、Fatty Acid Uptake Probe working solutionを添加し、インキュベーター(37℃、5%CO₂存在下)で15分間静置した。
5. 上清を除去した後、0.1 µmol/l MitoBright LT working solutionを添加し、インキュベーター(37℃、5%CO₂存在下)で30分間静置した。
6. 上清を除去した後、HBSSを用いて2回洗浄した。
7. HBSSを添加し、蛍光顕微鏡で観察した。

Q 蛍光顕微鏡観察時の注意点はありますか？: A

蛍光顕微鏡観察時、励起光を照射し続けるとFatty Acid Uptake Probe由来の蛍光が退色する可能性があります。連続した励起光の照射は控えてください。

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷蔵

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ATP測定キット ATP Assay Kit-Luminescence 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

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ATP Assay Kit-Luminescence

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

ATP Assay Kit-Luminescence

細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
ミトコンドリア関連
細胞内代謝

ATP測定キット

安定した発光による高感度検出
標準品の同梱で、不安定なATPの秤量が不要
試薬を加えるだけの簡単な操作

製品コード

A550　 ATP Assay Kit-Luminescence

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
50 tests	￥26,800	346-09793
200 tests	￥48,200	340-09791

キット内容

50 tests	・Enzyme Solution ・Substrate ・Assay Buffer ・ATP Standard	10 μl×1 ×1 5.5 ml×1 ×1
200 tests	・Enzyme Solution ・Substrate ・Assay Buffer ・ATP Standard	20 μl×2 ×2 11 ml×2 ×1

試験成績書

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ご購入方法
お問い合わせ

マニュアル

取扱説明書日本語
Manual English

技術情報

ATPの測定原理

ATP Assay Kit-Luminescenceは、培養細胞中のアデノシン三リン酸(ATP)量をホタル・ルシフェラーゼ発光法で定量するキットです。
本キットではマイクロプレートを用いた多検体測定が可能です。

参考文献

参考文献を表示する

文献No.	対象サンプル	装置	引用（リンク）
1)	細胞 DLD-1 (ヒト結腸腺癌)	プレートリーダー	G. Enkhbat, A. Nakanishi, Y. Miki, "The BRCA2 missense mutation K2497R suppressed self-degradation and increased ATP production and cell proliferation", 2021, doi:10.1016/j.bbrc.2021.12.073.

よくある質問

Q 1キットで測定可能なサンプル数を教えて下さい: A

検量線の作成およびサンプルの測定をそれぞれn=3で行った場合、以下のサンプル数を測定できます。
96ウェルプレートのレイアウト例については、取扱説明書をご参照ください。
　・50 tests ：8サンプル
　・200 tests：48サンプル(96 ウェルプレート2枚で検量線を2回測定した場合)

Q 発光シグナルはどの程度安定ですか？: A

発光シグナルは3時間安定です。ただし、温度と光が発光に影響しますので、すぐに測定できない場合は、遮光し温度を一定(25℃付近)に保てる場所で静置してください。

Q 測定用のプレートは白色以外のプレートを使用できますか？: A

測定はできますが、ブラックプレートや透明プレートを用いた場合、発光強度が下がります。
また、透明プレートの場合はブランクが高くなりますので、白色プレートを推奨しております。

Q 測定試料は保存できますか？: A

ATPが不安定なため保存できません。実験後は直ぐにWorking solutionを添加し、3時間以内に測定してください。

Q Working solutionは保存できますか？: A

冷凍(-20℃)で30日間の保存が可能です。
凍結融解を繰り返すことは試薬の劣化を招く恐れがありますので、その場合はあらかじめ小分けしてから保存することをお勧めします。

Q 組織を用いた実験例はありますか？: A

マウス肝臓組織を用いてATPおよびNAD/NADH量を測定した事例がございます。
実験操作の詳細は下記をご参照ください。

アルカリ抽出法による肝臓サンプルからの代謝指標の抽出

1. マウス肝臓100 mgあたり500 µlの冷えた0.5 mol/l KOH水溶液を入れる。
　*使用する組織は必ず灌流操作等で十分に脱血してください。血液の残存は測定に影響を与えます。

2. ダウンス型ホモジナイザーで組織を破砕する。
　*氷浴上で行ってください。

3. サンプルを回収し、サンプルチューブに移す。破砕に使用した容器を500 µlの冷えた0.5 mol/l KOH水溶液で共洗いし、チューブ内のサンプルと合わせる。
　（全量 1 ml）

4. 冷えた超純水 1 mlをサンプルチューブに加え、よく混合し氷上で5分間静置する。（全量 2 ml）
　*溶液の粘性が高いと、次操作の遠心後の分離が困難になる場合があります。その際は、シリンジに25 G(針のゲージ数)程度の細い針を付け、サンプル溶液をシリンジでスムーズに出し入れができるまで(20-30回)混合してください。

5. 12,000 x g , 4℃で5分間遠心し、上清を900 µlずつ二つのサンプルチューブに回収する。
　*１本をATP測定、もう１本をNAD/NADH測定に使用。ATPのみを測定する場合は900 μlx1本のみで構いません。

ATP測定用サンプルの調製
6. 上記5. で調製した900 µlのサンプルに200 µl の1 mol/l KH₂PO₄水溶液を入れ中和し、よく混合後氷上で5分間静置する。

7. 12,000 x g , 4℃で5分間遠心し、上清1 mlをサンプルチューブに回収し測定用サンプルとする。

<測定時の注意点>
*操作5、7で得たサンプルは保存できません。その日のうちに測定してください。
*スタンダード、サンプルの希釈には希釈用溶液として0.5 mol/l KOH水溶液と1 mol/l KH₂PO₄水溶液を9:5の比率で混合したものを使用してください。

＜測定例＞
NASH誘導マウス肝臓組織におけるATP量の変化

Q 発光測定の波長を教えてください。: A

本キットには、ホタルルシフェリンを使用しているため、発光測定の波長は556nmとなります。

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷凍 , 取扱条件: 吸湿注意

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細胞数ノーマライゼーションキット Cell Count Normalization Kit 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

Cell Count Normalization Kit

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

Cell Count Normalization Kit

細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
細胞機能解析
細胞老化

細胞数ノーマライゼーションキット

製品コード

C544　 Cell Count Normalization Kit

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
200 tests	￥9,000	342-09393
1000 tests	￥22,000	346-09391

キット内容

200 tests	・Staining Solution ・Dilution Buffer ・Quenching Buffer	50 μl×1 10 ml×4 10 ml×2
1000 tests	・Staining Solution ・Dilution Buffer ・Quenching Buffer	250 μl×1 100 ml×2 100 ml×1

試験成績書

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ご購入方法
お問い合わせ

マニュアル

取扱説明書日本語
Manual English
老化細胞検出キットとの併用プロトコル
Protocol for a Combined Analysis with Cellular Senescence Plate Assay Kit – SPiDER-βGal [English]

技術情報

細胞数補正の必要性

マイクロプレートを用いた細胞の解析では、得られる結果がウェル中の細胞数によって変化する場合があります。その際には、
サンプル中の細胞数に応じた測定値の補正（ノーマライゼーション）が必要になります。

参考文献

参考文献を表示する

文献No.	ノーマライズ測定対象	引用（リンク）
1)	ROS Level	A. Alimu et al, "The 7-days-exposure to gammahexachlorocyclohexane causes resistance to insulin in differentiated mature 3T3-L1 adipocytes", Jpn. J. Clin. Ecol., 2020, 29(2), 45.
2)	ATP Assay Mitochondria	M. Ganbold et al, "New Amphiphilic Squalene Derivative Improves Metabolism of Adipocytes Differentiated From Diabetic Adipose-Derived Stem Cells and Prevents Excessive Lipogenesis", Front. Cell Dev. Biol., 2020, 8, 1. DOI: 10.3389/fcell.2020.577259
3)	SA-β-Gal	H. Yamamoto-Imoto et al, "Measurement of autophagy via LC3 western blotting following DNA-damage-induced senescence", STAR Protocols, 2022, 3(3), 101539. DOI: 10.1016/j.xpro.2022.101539
4)	SA-β-Gal	H. Yamamoto-Imoto et al, "Age-associated decline of MondoA drives cellular senescence through impaired autophagy and mitochondrial homeostasis", Cell Reports, 2022, 38, 110444. DOI: 10.1016/j.celrep.2022.110444
5)	SA-β-Gal	W. Klinngam et al, "Polymethoxyflavones from Kaempferia parviflora ameliorate skin aging in primary human dermal fibroblasts and ex vivo human skin", 2022, 145, 112461. DOI: 10.1016/j.biopha.2021.112461
6)	SA-β-Gal	B. Tsevegjav et al, "Holliday junction recognition protein as a prognostic biomarker and therapeutic target for oral cancer", Int. J. Oncol., 2022, 60(3), 26. DOI: 10.3892/ijo.2022.5316
7)	NAD⁺	H. Murata et al, "STAT1/3 signaling suppresses axon degeneration and neuronal cell death through regulation of NAD⁺-biosynthetic and consuming enzymes", Cell Signal., 2023, 108, 110717. DOI: 10.1016/j.cellsig.2023.110717
8)	Stem cells (585A1)	R. Abdalkader et al, "Early Differentiation Signatures in Human Induced Pluripotent Stem Cells Determined by Non-Targeted Metabolomics Analysis", Metabolites, 2023, 13(6), 706. DOI: 10.3390/metabo13060706

よくある質問

Q 他の蛍光色素との同時測定は可能ですか？: A

本キットで使用しているHoechst 33342と励起・蛍光波長が重なる場合は、共染色による評価はできません。
Hoechst 33342の励起波長（300-400 nm）及び蛍光波長（400-550 nm）に重ならないことを確認し評価下さい。

なお上記波長に重ならない場合は、他の蛍光色素で評価した後に本キットにて測定ください。

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷蔵,遮光

SDSダウンロード

グルコース測定キット Glucose Assay Kit-WST 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

Glucose Assay Kit-WST

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

Glucose Assay Kit-WST

細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
細胞機能解析
細胞内代謝

グルコース測定キット

細胞培養上清のグルコースを測定可能
マイクロプレートを使った多検体処理が可能

製品コード

G264　 Glucose Assay Kit-WST

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
50 tests	￥19,900	342-09413
200 tests	￥41,900	346-09411

キット内容

50 tests	・Dye Mixture ・Glucose Standard ・Enzyme ・Assay Buffer ・Reconstitution Buffer	×1 150 μl×1 ×1 3.5 ml×1 350 μl×1
200 tests	・Dye Mixture ・Glucose Standard ・Enzyme ・Assay Buffer ・Reconstitution Buffer	×1 600 μl×1 ×1 14 ml×1 1.4 ml×1

試験成績書

SDSダウンロード

ご購入方法
お問い合わせ

マニュアル

取扱説明書日本語
Manual English

Glucose Assay Kit-WST の使い方

技術情報

グルコースの検出原理

本キットは、グルコース量に応じ発色したWSTホルマザンを吸光度測定することで、細胞培養上清^＊のグルコースを検出することができます。またキットにはグルコース標準液が含まれており、標準曲線を作成しサンプル中のグルコース濃度を測定することができます。

グルコース測定キット Glucose Assay Kit-WST 同仁化学研究所
*細胞培養上清以外のサンプルについては、よくある質問　培養上清以外で実績のあるサンプルを教えてください。をご参照ください。

技術や使用製品に関する補足

学会発表ポスター

WSTを用いた細胞の代謝解析

グルコース及び乳酸の測定例

グルコーストランスポーター阻害剤である Phloretin をJurkat 細胞に加えた際の代謝活性の変化をGlucose Assay Kit-WST 及びLactate Assay Kit-WST にて確認しました。

グルコース測定キット Glucose Assay Kit-WST 同仁化学研究所

技術や使用製品に関する補足

本キット使用時の注意点：細胞数の補正をお勧めします。

マイクロプレートを用いた細胞の解析では、得られる結果がウェル中の細胞数によって変化する場合があります。その際には、細胞数のカウントやトータルタンパク質量の確認により、得られた測定値の補正（ノーマライゼーション）が必要となります。本キットでは、試薬を細胞培養液に添加するだけで、細胞内の核を染色し得られる蛍光強度から、細胞数を簡便に評価することができます。
細胞数ノーマライゼーションキットはこちらから

参考文献

参考文献を表示する

文献No.	対象サンプル	引用（リンク）
1)	血清（マウス）	M. Shinohara, Y. Tashiro, M. Shinohara, J. Hirokawa, K. Suzuki, M. O. Takeya, M. Mukouzono, S. Takeda, T. Saito, A. Fukumori, T. C. Saido, R. Morishita and N. Sato, "Increased levels of Aβ42 decrease the lifespan of ob/ob mice with dysregulation of microglia and astrocytes”, FASEB J., 2019,DOI: 10.1096/fj.201901028RR
2)	微生物（Streptomyces albulus ）	K. Yamanaka, Y. Hamano and T. Oikawa, "Enhancement of metabolic flux toward ε-poly-l-lysine biosynthesis by targeted inactivation of concomitant polyene macrolide biosynthesis in Streptomyces albulus.”, J. Biosci. Bioeng., 2020,DOI: 10.1016/j.jbiosc.2019.12.002
3)	細胞（HCT116）	K. Ohshima, S. Nojima, S. Tahara, M. Kurashige, K. Kawasaki, Y. Hori, M. Taniguchi, Y. Umakoshi, D. Okuzaki, N. Wada, J. Ikeda, E. Fukusaki and E. Morii, "Serine racemase enhances growth of colorectal cancer by producing pyruvate from serine”, Nat Metab, 2020, 2(1), 81
4)	細胞（P388白血病）	T. Matsuo, Y. Konya, E. Hirayama and Y. Sadzuka , "2-Deoxy-D-glucose enhances the anti-cancer effects of idarubicin on idarubicin-resistant P388 leukemia cells”, Oncol Lett , 2020, 20(1), 962-966
5)	細胞（マウス:精子）	M. Hashimoto, S. Kimura, C. Kanno, Y. Yanagawa, T. Watanabe, J. Okabe, E. Takahashi, M. Nagano and H. Kitamura, "Macrophage ubiquitin‑specific protease 2 contributes to motility, hyperactivation, capacitation, and in vitro fertilization activity of mouse sperm”, Cellular and Molecular Life Sciences, 2020, doi: 10.1007/s00018-020-03683-9
6)	細胞（マクロファージ）	N. Saeki and Y. Imai, "Reprogramming of synovial macrophage metabolism by synovial fbroblasts under infammatory conditions ”, Cell Commun Signal, 2020, 18, 188

　＊細胞培養上清以外のサンプルについては、よくある質問細胞培養上清以外で実績のあるサンプルを教えてください。をご確認ください。

よくある質問

Q 測定可能なサンプル数を教えて下さい。: A

検量線の作成およびサンプルの測定をそれぞれn=3で行った場合、下記表に記載のサンプル数を測定頂けます。

※検量線作成：8点（0, 0.00785, 0.0157, 0.0313, 0.0625, 0.125, 0.25, 0.5 mmol/l）をn=3で評価。

Glucose standard solutionとサンプルのレイアウト例(n=3)

Q 450 nm以外の吸収フィルターで測定できますか？: A

490 nmのフィルターでも使用できます。
ただし、吸光度の値は450 nmで測定した場合よりも低くなります。

Q 細胞培養上清以外で実績のあるサンプルを教えてください。: A

細胞内のグルコースを測定した実績がございます。
操作の詳細は、よくある質問「細胞内グルコース測定はできますか？」をご参照ください。
その他のサンプルについては実績がございません。

Q 細胞内のグルコース測定はできますか？

細胞内グルコース測定は可能です。
「0.1% Triton X-100 水溶液」と「限外ろ過膜フィルター(分画分子量：10K)」が必要です。
下記のサンプル調製手順を参照ください。

(1)	細胞*¹を1.5 mlマイクロチューブに回収する。 ※測定に必要な細胞数は、細胞種により検討が必要です。HepG2細胞およびJurkat細胞での測定実績を下記図に示しておりますので参照ください。
(2)	300 x gで5分間遠心し、上澄みを除去する。
(3)	冷PBS 300 µlを加え、ピペッティングにより懸濁後、300 x gで5分間遠心し、上澄みを除去する。
(4)	細胞溶解液*²(0.1% Triton X-100 水溶液)を250 µlを加え、ピペッティングにより細胞を溶解した後、 12,000 x gで5分間遠心する。
(5)	操作(4)の上清200 µlを限外ろ過膜フィルター(分画分子量：10K)に移し、12,000x gで10分間遠心する。 ※測定用サンプルはn=3で測定する場合、合計150 µl以上は必要です(1ウェルあたり50 µl×3ウェル分)。 ※遠心後の濾液が150 µl以上ない場合は、遠心時間を延長して下さい。
(6)	操作(5)で得られた濾液を測定サンプルとする。その後、キット付属の取扱説明書に従い、グルコース濃度を測定する。 ※測定試料は、検量線範囲内(0-0.5 mmol/l)に入るように適宜細胞溶解液で希釈し、測定に用いて下さい。

*¹0.02 mmol/l以上のグルコースを検出するためにはHepG2細胞の場合、1×10⁵ cells以上、
Jurkat細胞の場合、2×10⁶ cells以上必要。
*²細胞溶解液にSDSを含むと発色を阻害するため、SDSを含むバッファーの使用はできません。

グルコース測定キット Glucose Assay Kit-WST 同仁化学研究所

Q 2-Deoxy-D-glucoseも検出されますか？: A

本キットでは、2-Deoxy-D-glucoseもグルコースとして検出されます。

Q L-Glucoseの測定はできますか？: A

本製品はβ-D-Glucose測定用となりますので、L-Glucoseの測定はできません。

Q Working solutionはどのくらい安定ですか？: A

Working solutionは保存できないので、用時調製して下さい。
Working solutionは光に不安定なため、調製後は遮光して下さい。遮光下室温にて4時間安定です。
（Working solutionを光に暴露させると溶液の色が赤色から橙色に変化し、バックグラウンドが上昇します）

Q 還元物質を含むサンプルは測定できますか？: A

サンプル中に還元性の物質が含まれると、色素（WST）が誤発色して正確なグルコース濃度を測定できません。
還元性を持つ薬剤を培地に添加して実験を行う場合は、バックグラウンドコントロールとして「細胞を含まない培地」＋「薬剤のみ」を同時に評価し、検量線およびサンプルの吸光度から試薬ブランクとして差し引いてください。

Q 発色反応が進まない場合の原因を教えて下さい。: A

測定試料に含まれるグルコース濃度が、0.02 mmol/lより低い可能性があります。
グルコース濃度が0.02 mmol/l以下の測定試料は本キットでは定量できませんので、LC-MSなど他の方法をご検討下さい。
なお、測定試料を希釈している場合は、希釈倍率を下げ、グルコース濃度を定量可能範囲以上に調整してください。

Q 測定試料は保存できますか?: A

保存できます。
細胞培養上清サンプルの場合、冷凍(-20℃)で３週間、細胞ライセートサンプルの場合は、冷凍(-20℃)で1ヶ月保存可能であることを確認しております。
ただし、細胞ライセートサンプルの場合は、除タンパク処理 *を行って下さい。
( *よくある質問「細胞内のグルコース測定はできますか？」操作5)の溶液を保存してください。)

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷蔵,遮光 , 取扱条件: 吸湿注意

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グルタミン測定キット Glutamine Assay Kit-WST 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

Glutamine Assay Kit-WST

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

Glutamine Assay Kit-WST

細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
細胞機能解析
細胞内代謝

グルタミン測定キット

製品コード

G268　 Glutamine Assay Kit-WST

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
100 tests	￥58,900	348-09611

キット内容

100 tests	・Dye Mixture ・Glutamine Standard　・Enzyme　・Assay Buffer　　　　　　　　　　・Reconstitution Buffer　　　　・lysis Buffer ・Glutaminase　　・Reaction Buffer　　・Filtration Tube	×1 ×1 ×1 7.5 ml×1 750 ×l×1 25 ml×1 20 ×l×1 5 ml×1 ×12

試験成績書

SDSダウンロード

ご購入方法
お問い合わせ

マニュアル

取扱説明書日本語
Manual English
パンフレット

技術情報

グルタミンの測定原理

本キットは、グルタミン量に応じ発色したWSTホルマザンを吸光度測定することで、細胞培養液や細胞内のグルタミンを検出することができます。またキットにはグルタミン標準液が含まれており、標準曲線を作成しサンプル中のグルタミン濃度を定量することができます。

グルタミン測定キット Glutamine Assay Kit-WST 同仁化学研究所

技術や使用製品に関する補足

学会発表ポスター

WSTを用いた細胞の代謝解析

参考文献

参考文献を表示する

文献No.	対象サンプル	引用(リンク)
1	細胞 (マクロファージ)	N. Saeki and Y. Imai, "Reprogramming of synovial macrophage metabolism by synovial fibroblasts under inflammatory conditions ”, Cell Commun Signal, 2020, 18, 188.
2	細胞 (去勢抵抗性前立腺がん細胞)	R. Imamura, S. Kitagawa, T. Kubo, A. Irie, T. Kariu, M. Yoneda, T. Kamba, T. Imamura, "Prostate cancer C5a receptor expression and augmentation of cancer cell proliferation, invasion, and PD‐L1 expression by C5a", Prostate, 2020, doi:10.1002/pros.24090.
3	細胞 (HSC-2; HSC-3; HeLa; HaCaT)	S. Liu, J. Washio, S. Sato, Y. Abiko, Y. Shinohara, Y. Kobayashi, H. Otani, S. Sasaki, X. Wang and N. Takahashi, "Rewired Cellular Metabolic Profiles in Response to Metformin under Different Oxygen and Nutrient Conditions", 2022, doi:10.1016/j.snb.2021.130554.

よくある質問

Q 1キットあたり測定可能なサンプル数を教えて下さい。: A

検量線の作成およびサンプルの測定をそれぞれn=3で行った場合、96 wellプレート1枚当たり12サンプル数測定できます(検量線の測定濃度を下表の通り8点で作成した場合)。

Glutamine standard solutionとサンプルのレイアウト例(n=3)

注) Glutamine Assay Kit-WSTを用いてサンプル中グルタミン濃度を定量する場合、1サンプルにつき、[Glutaminase solution処理済有のサンプル(n=3)]および[Glutaminase solution処理無のサンプル(n=3)]の計6well分が必要です。

サンプル中のグルタミン濃度(mmol/l)=(Glutaminase solution処理済有)-(Glutaminase solution処理無)

Q Working solutionは保存できますか？: A

Working solutionは保存できません。用時調製して下さい。また、光に不安定であるため、調製後は遮光して下さい。

Q D-Glutamineの定量はできますか。: A

本製品はL-Glutamine定量用となりますので、D-Glutamineの定量はできません。

Q 還元物質を含むサンプルは測定できますか。: A

サンプル中に還元性を持つ物質が含まれていると、色素WSTが誤発色して正確なグルタミン濃度の定量ができません。
培地に、還元性を持つ薬剤等を添加して実験を行う場合、バックグラウンドコントロールとして細胞を含まない培地＋薬剤のみの試薬ブランクを一緒に測定して下さい。

Q 測定試料は保存できますか。: A

細胞培養上清サンプルの場合、冷凍(-20℃)で1ヶ月保存可能であることを確認しています。

細胞ライセートサンプルの場合、冷凍(-20℃)で1ヶ月保存可能であることを確認しております。ただし、保存を行う前に、キット付属のFiltration Tubeにて除タンパク処理を行って下さい。

Q サンプルが発色しません。: A

本キットで定量可能なグルタミン濃度は5 µmol/l以上です。グルタミン濃度が5 µmol/l以下の測定試料は本キットでは定量できません。
また、測定試料を希釈している場合、希釈後の測定試料に含まれているグルタミン量が5 µmol/Lよりも少ない可能性があります。
希釈倍率を下げ、測定試料の濃度を定量可能範囲以上にして下さい。

Q 450 nm以外の吸収フィルターで測定できますか。: A

450 nm以外では、490 nmのフィルターで使用可能です。
ただし、吸光度値は450 nmで測定した場合と比較し低くなります。（下図参照）

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷蔵 , 取扱条件: 吸湿注意
危険・有害シンボルマーク

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グルタミン酸測定キット Glutamate Assay Kit-WST 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

Glutamate Assay Kit-WST

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

Glutamate Assay Kit-WST

細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
細胞機能解析
細胞内代謝

グルタミン酸測定キット

製品コード

G269　 Glutamate Assay Kit-WST

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
100 tests	￥53,500	345-09621

キット内容

100 tests	・Dye Mixture ・Glutamate Standard　・Enzyme　・Assay Buffer　　　　　　　　　　・Reconstitution Buffer　　　　・lysis Buffer 　・Filtration Tube	×1 300 ×l×1 ×1 7.5 ml×1 750 ×l×1 25 ml×1 ×24

試験成績書

SDSダウンロード

ご購入方法
お問い合わせ

マニュアル

取扱説明書日本語
Manual English
パンフレット

技術情報

グルタミン酸の測定原理

本キットは、グルタミン酸量に応じ発色したWSTホルマザンを吸光度測定することで、細胞培養液や細胞内のグルタミン酸を検出することができます。またキットにはグルタミン酸標準液が含まれており、標準曲線を作成しサンプル中のグルタミン酸濃度を定量することができます。

グルタミン酸測定キット Glutamate Assay Kit-WST 同仁化学研究所

技術や使用製品に関する補足

学会発表ポスター

WSTを用いた細胞の代謝解析

フェロトーシス研究におけるグルタミン酸とグルタチオンの測定例

エラスチン処理により、シスチン/ グルタミン酸トランスポーター(xCT) を阻害すると、鉄依存性の細胞死であるフェロトーシスが誘導されることが知られています。エラスチン処理したA549 細胞において、グルタミン酸放出量および細胞内グルタチオン量を確認したところ、エラスチン処理した細胞はグルタミン酸放出量が減少し、シスチンの取り込みが阻害されたことにより、グルタチオン量が減少する結果が得られました。

グルタミン酸測定キット Glutamate Assay Kit-WST 同仁化学研究所

技術や使用製品に関する補足

フェロトーシス研究において、脂質過酸化を蛍光イメージングで検出する試薬「Liperfluo」を使用した論文報告が増えています。

参考文献

参考文献を表示する

文献No.	対象サンプル	引用(リンク)
1	食品 (出汁、味噌汁、醤油、トマトジュース)	K. Danchana, H. Iwasaki, K. Ochiai, H. Namba, T. Kaneta, "Determination of glutamate using paper-based microfluidic devices with colorimetric detection for food samples", Microchem. J., 2022, doi:10.1016/j.microc.2022.107513.
2	細胞培養上清 (骨髄由来抑制細胞)	Z. Xie, T. Kawasaki, H. Zhou, D. Okuzaki, N. Okada and M. Tachbana, "Targeting GGT1 Eliminates the Tumor-Promoting Effect and Enhanced Immunosuppressive Function of Myeloid-Derived Suppressor Cells Caused by G-CSF", Front. Pharmacol., 2022, doi:10.3389/fphar.2022.873792.

よくある質問

Q 1キットあたり測定可能なサンプル数を教えて下さい。: A

検量線およびサンプルの測定をそれぞれn=3で行った場合、96ウェルプレートで24サンプルを測定できます。
(検量線の測定濃度を下表の通り、8点で作成した場合)

Glutamate standard solutionとサンプルのレイアウト例(n=3)

Q Working solutionは保存できますか？: A

Working solutionは保存できません。用時調製して下さい。また、光に不安定であるため、調製後は遮光して下さい。

※Working solutionは調製後、遮光下であれば室温で4時間安定です。光に暴露させた場合、溶液の色が褐色味を帯びてきます。

Q D-Glutamateの定量はできますか。: A

本製品はL-Glutamate定量用のため、D-Glutamateの定量はできません。

Q 還元物質を含むサンプルは測定できますか。: A

サンプル中に還元性を持つ物質が含まれていると、色素WSTが誤発色して正確なグルタミン酸濃度の定量ができません。
培地に、還元性を持つ薬剤等を添加して実験を行う場合、バックグラウンドコントロールとして細胞を含まない培地＋薬剤のみの試薬ブランクを一緒に測定して下さい。

Q 測定試料は保存できますか。: A

細胞培養上清サンプルの場合、冷凍(-20℃)で1ヶ月保存可能であることを確認しております。

細胞ライセートサンプルの場合、冷凍(-20℃)で1ヶ月保存可能であることを確認しております。ただし、保存を行う前に、キット付属のFiltration Tubeにて除タンパク処理を行って下さい。

Q サンプルのウェルが発色しません。: A

本キットで定量可能なグルタミン酸濃度は5 µmol/l以上です。グルタミン酸濃度が5 µmol/l以下の測定試料は本キットでは定量できません。
また、測定試料を希釈している場合、希釈後の測定試料に含まれているグルタミン酸量が5 µmol/lよりも少ない可能性があります。
希釈倍率を下げ、測定試料の濃度を定量可能範囲以上にして下さい。

Q 450 nm以外の吸収フィルターで測定できますか。: A

450 nm以外では、490 nmのフィルターで使用可能です。
ただし、吸光度値は450 nmで測定した場合と比較し低くなります。（下図参照）

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷蔵 , 取扱条件: 吸湿注意

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NADP/NADPH 測定キット NADP/NADPH Assay Kit-WST 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

NADP/NADPH Assay Kit-WST

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

NADP/NADPH Assay Kit-WST

細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
細胞機能解析
細胞内代謝

NADP/NADPH 測定キット

製品コード

N510　 NADP/NADPH Assay Kit-WST

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
100 tests	￥59,700	344-09331

キット内容

100 tests	NADP/NADPH Extraction Buffer　　　　　 NADP/NADPH Control Buffer　　　　　　　 Standard Buffer　　　　　　　　　　　　　　 Assay Buffer　　　　　　　　　　　　　　　　 Dye Mixture　　　　　　　　　　　　　　　　　　 Enzyme Standard 　　 Filtration Tube	20 ml ×1 20 ml ×1 10 ml ×1 5.5 ml ×1 ×1 110 μl ×1 ×1 ×12

試験成績書

SDSダウンロード

ご購入方法
お問い合わせ

マニュアル

取扱説明書日本語
Manual English

技術情報

測定原理

NADP/NADPH 測定キット NADP/NADPH Assay Kit-WST 同仁化学研究所

技術や使用製品に関する補足

学会発表ポスター

WSTを用いた細胞の代謝解析

参考文献

参考文献を表示する

1) C. Henninger and G. Fritz, “Statins in anthracycline-induced cardiotoxicity: Rac and Rho, and the heartbreakers.”, Cell Death Dis. 2017, 8(1), e2564.
2) S. Mandziuk, R. Gieroba, A. Korga, W. Matysiak, B. Jodlowska-Jedrych, F. Burdan, E. Poleszak, M. Kowalczyk, L. Grzycka-Kowalczyk, E. Korobowicz, A. Jozefczyk and J. Dudka, “The differential effects of green tea on dose-dependent doxorubicin toxicity.”, Food Nutr Res., 2015, 59, 29754.
3) M. Nagaya, H. Hara, T. Kamiya and T. Adachi,"Inhibition of NAMPT markedly enhances plasma-activated medium-induced cell death in human breast cancer MDA-MB-231 cells.", Arch. Biochem. Biophys., 2019, 676, 108155.

よくある質問

Q 1キットで測定可能なサンプル数は？

全てのサンプルをn:3で測定した際のサンプル数の目安は下記の通りです。

	『NADP⁺とNADPHの総量』または『NADPH量』の何れかを測定する場合	『NADP⁺とNADPHの総量』および『NADPH量』の両方を測定する場合
サンプル数	24サンプル	12サンプル

　※標準サンプルを2 μmol/Ⅼから段階希釈し、計8点(n:3)で検量線を1回作成した際に測定可能な実サンプル数を記載。
　　測定を2回に分けて行う場合は、別途検量線を作成する必要があるため上記サンプル数よりも少なくなります。

Q Filtration Tube（除タンパク質用）は別途購入できますか？: A

ご不便おかけしますが、Filtration Tubeのみの販売は行っておりません。

小社にて実績のある市販の除タンパク質用チューブをご紹介いたします。

製造メーカー：Pall Corporation

製品名：ナノセップ遠心ろ過デバイス（分画分子量：10K、色：ブルー）

Q Working solutionはどのくらい安定ですか?: A

Working solutionは保存できません。用時調製して下さい。また、光に対して不安定なため

溶液調製後は遮光して下さい。遮光、室温で4時間安定です。

Q サンプルが発色しない原因はありますか？: A

測定試料中に含まれているNAD量が、本キットで定量可能な濃度(10 nmol/L)以下となっている可能性があります。

その場合は細胞数を増やして頂くか、測定試料を希釈している場合は、希釈倍率を下げて測定して下さい。

Q 測定試料は保存できますか?: A

保存できます。取扱説明書 [1.測定用サンプルの調製]の操作6)の溶液は、冷凍(-20℃)で２週間保存可能であることを確認しております。

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷蔵,遮光 , 取扱条件: 吸湿注意

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ストレスマーカー検出試薬 -Nucleostain- DNA Damage Quantification Kit -AP Site Counting- 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

–Nucleostain– DNA Damage Quantification Kit -AP Site Counting-

02 酸化ストレス関連試薬

–Nucleostain– DNA Damage Quantification Kit -AP Site Counting-

酸化ストレス関連試薬
酸化ストレス関連試薬

ストレスマーカー検出試薬

製品コード

DK02　 –Nucleostain– DNA Damage Quantification Kit -AP Site Counting-

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
20 samples	￥86,700	346-90143

キット内容

20 samples

･ARP-DNA Standard Solution
×(0, 2.5, 5.0, 10, 20, 40 AP sites/100,000 bp)　　
･ARP Solution
･DNA Binding Solution
･Washing Buffer　
･HRP-Streptavidin
･TE Buffer
･Substrate Solution
･Filtration Tube
･96-well Microplate/U Bottom

各 250 μl × 1

250 μl × 1
10 ml × 1
× 1
25 μl × 1
40 ml × 1
10 ml × 1
20 tubes
× 1

試験成績書

SDSダウンロード

ご購入方法
お問い合わせ

マニュアル

取扱説明書日本語
Manual English

技術情報

＜キット以外に必要なもの＞

・10 μl, 200 μl, 1 mlマイクロピペッター(可変式）　・200 μl 8連マイクロピペッター(可変式)　・インキュベーター(37℃) ・マイクロプレートリーダー　・0.5 ml, 1.5 ml遠心チューブ　・遠心機　・DNA精製キット　　・ペーパータオル

参考文献

参考文献を表示する

参考文献

1) A. Sancar and G. B. Sancar, "DNA Repair Enzymes", Annu. Rev. Biochem., 1988, 57, 29.
2) T. Lindahl and B. Nyberg, "Rate of Depurination of Native Deoxyribonucleic Acid", Biochemistry, 1972, 11, 3610.
3) M. Liuzzi and M. Talpaert-Borle, "A New Approach to the Study of the Base-excision Repair Pathway Using Methoxyamine", J. Biol. Chem., 1985, 260, 5252.
4) M. Weinfeld, M. Liuzzi and M. C. Paterson, "Response of Phage T4 Polynucleotide Kinase Toward Dinucleotides Containing Apurinic Sites: Design of a 32P-postlabeling Assay for Apurinic Sites in DNA", Biochemistry, 1990, 29, 1737.
5) B. X. Chen, K. Kubo, H. Ide, B. F. Erlanger, S. S. Wallace and Y. W. Kow, "Properties of a Monoclonal Antibody for the Detection of Abasic Sites, a Common DNA Lesion", Mutat. Res., 1992, 273, 253.
6) J. A. Gralnick and D. M. Downs, "The YggX Protein of Salmonella enterica Is Involoved in Fe(II) Trafficking and Minimizes the DNA Damage Cause by Hydroxyl Radicals:Residue CYS-7 is Essential for YggX Function", J. Biol. Chem., 2003, 278, 20708.
7) J. W. Pippin, R. Durvasula, A. Petermann, K. Hiromura, W. G. Couser and S. J. Shankland, "DNA Damage is a Novel Response to Sublytic Complement C5b-9 Induced Injury in Podocytes", J. Clin. Invest., 2003, 111, 877.
8) S. Watanabe, T. Ichimura, N. Fujita, S. Tsuruzono, I. Ohki, M. Shirakawa, M. Kawasuji and M. Nakao, "Methylated DNA-binding Domain 1 and Methylpurine DNA Glycosylase Link Transcriptional Repression and DNA Repair in Chromatin", Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2003, 100, 12859.
9) M. Endres, M. Ahmadi, I. Kruman, D. Biniszkiewicz, A. Meisel and K. Gertz, "Folate Deficiency Increases Postischemic Brain Injury", Stroke, 2005, 36, 321.
10) J.-M. Li, M. Mogi, K. Tsukuda, H. Tomochika, J. Iwanami, L.-J. Min, C. Nahmias, M. Iwai and M. Horiuchi, "Angiotensin II-Induced Neural Differentiation via Angiotensin II Type 2 (AT2) Receptor-MMS2 Cascade Involving Interaction between AT2 Receptor-Interacting Protein and Src Homology 2 Domain-Containing Protein-Tyrosine Phosphatase 1", Mol. Endocrinolo., 2007, 21(2):499.
11) D. R. McNeill and D. M. Wilson III, "A Dominant-Negative Form of the Major Human Abasic Endonuclease Enhances Cellular Sensitivity to Laboratory and Clinical DNA-Damaging Agents", Mol. Cancer Res., 2007, 5(1), 61.

よくある質問

Q 40 AP sites/100,000以上のstandard solutionを作成することは出来ますか？: A

このキットのstandard DNAは0～40AP site/100,000 です。
弊社では、50 AP sites/100,000までのARP-DNAを調製したことは
ありますが、それ以上はありません。

　理論的にはそれ以上のARP-DNAを調製することは可能ですが、
検量線の直線性がどこまで保持されるかは保証できません。
　高いレベルの塩基損傷を検出するには、サンプルDNAを同じ濃度の損傷の無いDNA
つまり、0AP site-DNAで測定レンジに希釈してアッセイを行い、
その後に実際のAP数を換算して求める方が良いと思います。

Q DNA中の塩基損傷部位であるAP Siteは酸化ストレスの指標として使用されますが、 AP Siteの他に酸化ストレスマーカーとなるものはありますか？: A

酸化ストレスマーカーについてまとめた資料を作成しております。
カスタマーサポートの視点から、各酸化ストレスマーカーの特徴・測定サンプルの前処理方法などを記載しておりますので、ご参照ください。

下記URLよりダウンロード可能です。

「はじめての酸化ストレスマーカー測定プロトコル～カスタマーサポートの視点から～」

Q DNAの純度が吸光度比で1.8以上を推奨されていますが、1.5程度でも測定出来ますか？: A

1.5では確認していませんので、保証は出来ません。
1.6～1.7のDNAでの測定では大きなバラツキは見られません。
推奨として1.8以上としております。

精製度が低いということは、タンパク質の混入が考えられます。
タンパク質はブロッキング作用を持ち、DNAがプレートに吸着するのを
防ぐ可能性がありますので、出来るだけ精度が高いものをご使用ください。

Q 抽出したDNAをARP化せずに保存することは可能でしょうか？: A

溶液状態での保存はAP siteが増えてくるので望ましくありません。（冷蔵・冷凍ともに）
ARP化せずに保存するのであれば、エタノール沈殿を行い、ペレット状にして冷凍保存してください。

　AP部位は確かに切断が起こりやすい部位です。

ただ、catalist freeの状態で保存されていれば3'側に切断があってもARPの検出には支障ありません。

むしろ抽出DNAは凍結状態以外の環境下で保存されていた場合、

自然に起こる脱塩基によって形成されたAP部位の方が重要な問題になります。

この場合、サンプルに同一条件下で保存されていた標準DNAが含まれる場合は

補正が可能になります。

　ARP修飾後のAP部位は安定ですので、抽出後の速やかなAPR処理をお勧めします。

Q このキットを使用して何を測定することが出来るのでしょうか？: A

DNA中のAP siteの定量が出来ます。
AP siteとは[apurinic/apyrimidinic site]の略で、損傷したDNAに働く
塩基除去修復の過程で現れるものです。

DNAの損傷は複製時のDNA polymeraseのエラーに加えて、環境中の放射線や
紫外線またはアルキル化剤等の化学物質、生体内における活性酸素などの
代謝産物により起こります。

AP siteを測定することによりDNA損傷をみることが出来ます。

Q このキットで測定できる検体数はどのくらいでしょうか？: A

20 samplesが20検体となります。
それぞれFiltration Tubeが20 samplesで20本入っています。
Filtration Tubeを一つのサンプルに1本使用しますので、このTubeの数が
測定できる検体数となります。

20 samplesも測定用のプレートは1枚です。

Q 96-wellマイクロプレートやフィルトレーションチューブ以外の溶液が余ったのですが、廃棄方法を教えて下さい。: A

余った溶液は、以下の成分情報をご確認の上、ご所属の機関の廃棄ルールに従って廃棄して下さい。
＜キットコンポーネント成分＞

・ARP-DNA standard solution　（水に希釈後廃棄、有害成分含まず）

・ARP solution　（水に希釈後廃棄、有害成分含まず）

・DNA binding solution　（水に希釈後廃棄、有害成分含まず）

・Washing buffer　（水に希釈後廃棄、有害成分含まず）

・HRP-streptavidin　（水に希釈後廃棄、有害成分含まず）

・TE buffer　（水に可溶、EDTA・2NA 0.1%以下）

・Substrate solution　（水に希釈後廃棄、有害成分含まず）

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷蔵

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グルタチオン定量キット GSSG/GSH Quantification Kit 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

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GSSG/GSH Quantification Kit

02 酸化ストレス関連試薬

GSSG/GSH Quantification Kit

酸化ストレス関連試薬
酸化ストレス関連試薬
食品機能評価

グルタチオン定量キット

製品コード

G257　 GSSG/GSH Quantification Kit

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
200 tests	￥62,300	342-09011

キット内容

200 tests	・ Enzyme Solution ・ Coenzyme ・ Buffer Solution ・ Substrate (DTNB) ・ Standard GSH ・ Standard GSSG ・ Masking Reagent	50 μl x1 x2 60 ml x1 x4 x1 x1 20 μl x1

試験成績書

SDSダウンロード

ご購入方法
お問い合わせ

マニュアル

取扱説明書日本語
Manual English

技術情報

特長

1)酸化型グルタチオン(GSSG)、還元型グルタチオン(GSH)の分別定量が可能である。
2)短時間で簡便に多検体の測定が可能である。

参考文献

参考文献を表示する

1) M. E. Anderson, "Determination of Glutathione and Glutathione Disulfide in Biological Samples", Methods in Enzymol., 1985, 113, 548.
2) M. A. Baker, G. J. Cerniglia and A. Zaman, "Microtiter Plate Assay for the Measurement of Glutathione and Glutathione Disulfide in Large Numbers of Biological Samples", Anal. Biochem., 1990, 190, 360.
3) C. Vandeputte, I. Guizon, I. Genestie-Denis, B. Vannier and G. Lorenzon, "A Micrototer Plate Assay for Total Glutathione and Glutathione Disulfide Contents in Cultured/isolated Cells: Performance Study of a New Miniaturized Protocol", Cell Biol. Toxicol., 1994, 10, 415.
4) S. A. McGrath-Morrow and J. Stahl, "Inhibition of Glutamine Synthetase in A549 Cells During Hyperoxia", Am. J. Respir. Cell Mol. Biol., 2002, 27, 99.
5) T. Sato, K. Seyama, Y. Sato, H. Mori, S. Souma, T. Akiyoshi, Y. Kodama, T. Mori, S. Goto, K. Takahashi, Y. Fukuchi, N. Maruyama and A. Ishigami, "Senescence Marker Protein-30 Protects Mice Lungs from Oxidative Stress, Aging, and Smoking", Am. J. Respir. Crit. Care Med., 2006, 174, 530.
6) M. L. Mulhern, C. J. Madson, A. Danford, K. Ikesugi, P. F. Kador and T. Shinohara, "The Unfolded Protein Response in Lens Epithelial Cells from Galactosemic Rat Lenses", Invest. Ophthalmol. Vis. Sci., 2006, 47(9), 3951.
7) N. Miura, Y. Yanagiba, K. Ohtani, M. Mita, and M. Togawa, "Diurnal Variation of Cadmium-induced Mortality in Mice", J. Toxicol. Sci., 2012, 37(1), 191.
8) K. Okabayashi, T. Narita, Y. Takahashi and H. Sugiya, "Effrct of Oxidative Stress on Secretory Function in Salivary Gland Cells", Oxidative Stress-Environmental Induction and Dietary Antioxidants, V. Lushchak, InTech, 2012, 189.
9) G. Tian, J. Sawashita, H. Kubo, S. Nishio, S. Hashimoto, N. Suzuki, H. Yoshimura, M. Tsuruoka, Y. Wang, Y. Liu, H. Luo, Z. Xu, M. Mori, M. Kitano, K. Hosoe, T. Takeda, S. Usami and K. Higuchi, "Ubiquinol-10 Supplementation Activates Mitochondria Functions to Decelerate Senescence in Senescence-Accelerated Mice", Antioxid. Redox Signal., 2014, 20(16), 2606.
10) H. Nakagawa, A. Umemura, K. Taniguchi, J. Font-Burgada, D. Dhar, H. Ogata, Z. Zhong, M. A. Valasek, E. Seki, J. Hidalgo, K. Koike, R. J. Kaufman and M. Karin, "ER Stress Cooperates with Hypernutrition to Trigger TNF-Dependent Spontaneous HCC Development", Cancer cell, 2014, 26(3), 331.
11) M. Sueyoshi, M. Fukunaga, M. Mei, A. Nakajima, G. Tanaka, T. Murase, Y. Narita, S. Hirata, and D. Kadowaki, "Effects of lactulose on renal function and gut microbiota in adenine-induced chronic kidney disease rats", Clinical and Experimental Nephrology., 2019,doi: 10.1007/s10157-019-01727-4.
12) S. Shiromizu, T. Yamauchi, N. Kusunose, N. Matsunaga, S. Koyanagi and S. Ohdo, Dosing Time-Dependent Changes in the Anti-tumor Effect of xCT Inhibitor Erastin in Human Breast Cancer Xenograft Mice', Biol. Pharm. Bull.., 2019, 42, (11), 1921-1925.
13) K. Ogawa, A. Noda, J. Ueda, T. Ogata, R. Matsuyama, Y. Nishizawa, S. Qiao, S. Iwata, M. Ito, Y. Fujihara, M. Ichihara, K. Adachi, Y. Takaoka and T. Iwamoto, "Forced expression of miR-143 and -145 in cardiomyocytes induces cardiomyopathy with a reductive redox shift", Cell. Mol. Biol. Lett., 2020, doi:10.1186/s11658-020-00232-x.

よくある質問

Q どのようなサンプルが測れますか？: A

組織、血漿、赤血球、細胞のサンプルが測れます。
但し、血漿の場合はグルタチオン量が少ないため、検体によっては測り分けが困難な場合があります。

Q このKitで何サンプル測定できますか？: A

本キットは200testsです（96wellプレート2枚分）。

n=3とした場合、18サンプルの測り分けが可能です〈サンプルに着色がない場合）。

測り分けない場合（総グルタチオン量のみを測定する場合）は、50サンプル測定できます。

※サンプルに着色がある場合は、サンプルブランクの測定が必要です。

　サンプルブランクの測定方法は、FAQ 「サンプルに着色がある場合の測定方法」をご参照下さい。

※サンプルのレイアウト例：レーン1～6はGSSG濃度測定、レーン7～12は総グルタチオン濃度測定

Q サンプルに着色がある場合は、どうすればいいですか？: A

サンプルに着色がある場合、以下の2つの方法のどちらかでサンプルブランクを差し引くことが可能です。
①Kinetic methodで測定を行う。

　　※検量線の傾きで検量線を作成する為、サンプルブランクの影響を受けない。

②グルタチオン濃度算出の際、O.D.blankを引く代わりに、別途、測定したO.D. sample blankを引く。

　　グルタチオン（GSH, GSGG) = (O.D. sample – O.D. sample blank) / 検量線の傾き

　　＜O.D. sample blankの測定方法＞

　　　　　取扱説明書　「4. 測定」に従い、吸光度を測定する。

　　　　　その際、Coenzyme working solution, Enzyme working solutionを添加せず、

　　　　　Buffer solutionと純水を添加する。

Q GSSGとGSHの比率を測定することで、何が分かるのですか？: A

グルタチオンは通常、生体内で還元型（GSH）として存在していますが、
酸化ストレスなどの刺激によって酸化型（GSSG）に変換される為、

GSHとGSSGの比率が酸化ストレスの指標となります。

Q GSH濃度はどのように求めるのですか？: A

検量線を基に求めた総グルタチオン（GSH＋GSSG)濃度とGSSG濃度より、

下式を用いてGSH濃度を算出します。

　GSH濃度＝総グルタチオン濃度－[GSSG濃度]×2

　※GSSG（酸化型グルタチオン）はGSH（還元型グルタチオン）２分子に相当します。

　　そのため、GSSG濃度を２倍にすることでGSH濃度に換算しています。

Q 推奨する5-スルホサリチル酸のメーカーやグレードはありますか？: A

特にメーカーの推奨はしておりません。試薬グレードの製品をご利用ください。

Q Masking reagentは、GSSG由来のGSHもマスキングしないのでしょうか？: A

酵素・補酵素添加後に、GSSGから生じたGSHは、マスキング剤と反応するより先にDTNBと反応してGSSGに戻るため、
GSSGから生じたGSHまでマスキングされることはありません。

Q マスキングの時間（37℃、1時間）が長くなってしまっても問題ありませんか？: A

多少長くなっても構いません。2時間まで測定実績がございます。

※マスキングの時間とは、Technical Manual 「測定方法」４．測定 3)にある「37℃で1時間インキュベートする。」の操作を指します。

Q Total Glutathione Quantification Kit (同仁品コード：T419) と何が違うのでしょうか？: A

今回のGSSG/GSH Quantification Kit（G257）はTotal Glutathione Quantification Kit(T419)では出来なかったGSSGとGSHの測り分けができます。
酸化ストレスの指標として、GSHとGSSGの比率は注目されています。

Q サンプル中のグルタチオン量が多いです。サンプルの希釈はできますか？: A

0.5％スルホサリチル酸（SSA)水溶液で希釈してください。
測定時のサンプル中SSA濃度は.0.5～1%にする必要があります。

SSA濃度が高いと反応時のpHが低くなり、吸光度に影響することが懸念されます。

Q 総グルタチオン量のみ測定する場合、マスキングの時間（37℃、1時間）は省略してよいですか？: A

省略可能です。
尚、本キットはGSSGとGSHの測り分けが可能な設計となっております。
測り分けが必要ない場合は、Total Glutathione Quantification Kit (同仁品コード：T419) もご利用いただけます。

※マスキングの時間とは、Technical Manual 「測定方法」４．測定 3)にある「37℃で1時間インキュベートする。」の操作を指します。

Q 発色が弱い場合は、どうすればいいですか？: A

以下の3つが要因として考えられます。

1. 本キットでの測定範囲は 0.5 μmol/l 以上です。測定試料に含まれるグルタチオン量が、それよりも少ない可能性があります。
  測定範囲外の測定試料は、本キットでは測定できませんので、HPLC法など他の方法をご検討下さい。
  可能であれば、前処理の希釈倍率を下げる、サンプル量を増やすなど、測定試料の濃度を測定範囲以上にして下さい。
  ※発色を強める為に、発色の時間を長くすると検量線の直線性が得られなくなりますので、ご注意下さい。

2. 発色を阻害する物質が含まれている可能性があります。例えば、SH基と反応する化合物（マレイミド類）などは測定に影響を及ぼします。
  これらの化合物は前処理等で除くことができませんので、測定試料中に混在させない系で再度測定して下さい。

3.反応時のpHが低く、発色阻害が起こっている可能性があります。
   測定時にSSA濃度が1%以下になってるか、ご確認下さい。SSA濃度が1%以上の場合、発色阻害が起こります。
他の酸を用いた場合にはトリエタノールアミン等でpH7程度に中和するか、酸濃度が1％程度以下になるように希釈してから測定して下さい。

Q 測定値がマイナスになります。どのような要因がありますか。: A

以下の3つが要因として考えられます。

１．サンプル中のグルタチオン量が少ない可能性があります。
　　サンプルの量を増やして、ご検討ください。
　　なお、血漿はグルタチオン量が少なく、測定が困難な場合がございます。

2. サンプルの前処理中にGSHがアミノ基と副反応を起こして減少した可能性があります。
　　GSHは、中性条件で以下のような副反応により減少することが報告されています
（Methods in Enzymology, 1985, 113, 548）。
　　そのため、サンプルの前処理(5%SSA処理）を素早く行ってください。　　

　　GSH + amino acid ⇔　γ-Glu-amino acid +CysH-Gly (アミノ基転移)
　 GSH + H2O → Glu +CysH-Gly (加水分解)
　 GSH + GSH ⇔　γ-Glu-GSH +CysH-Gly (アミノ基転移)

３. サンプルの前処理中にGSHが酸化してGSSGとなった可能性があります。
　　2と同様、サンプルの前処理(5%SSA処理）を素早く行ってください。

Q 酸化ストレスの指標としてグルタチオンが測定されますが、他の酸化ストレスマーカーはありますか？: A

酸化ストレスマーカーに関する資料をご参考ください。
カスタマーサポートの視点から、各酸化ストレスマーカーの特徴・測定サンプルの前処理方法などを記載しております。

下記URLよりダウンロード可能です。
「はじめての酸化ストレスマーカー測定プロトコル～カスタマーサポートの視点から～」

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷蔵
危険・有害シンボルマーク

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DNAダメージ検出抗体 DNA Damage Detection Kit – γH2AX　- Green 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

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DNA Damage Detection Kit – γH2AX　- Green

02 酸化ストレス関連試薬

DNA Damage Detection Kit – γH2AX　- Green

酸化ストレス関連試薬
酸化ストレス関連試薬
細胞機能解析
細胞老化

DNAダメージ検出抗体

製品コード

G265　 DNA Damage Detection Kit – γH2AX　- Green

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
1 set	￥37,700	343-09421

キット内容

1 set	・Anti γH2AX antibody ・Secondary antibody – Green ・Blocking Solution	×1 ×1 22 ml×1

試験成績書

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ご購入方法
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マニュアル

取扱説明書日本語
Manual English

技術情報

DNAダメージの検出原理

DNA ダメージにより二重鎖切断が生じると、ヒストンタンパク質の一種であるH2AX が速やか、かつ広範囲にわたってリン酸化されます。リン酸化H2AX(γH2AX) は、DNA ダメージの鋭敏なマーカーであることから、化学物質や活性酸素、紫外線や放射線などの遺伝毒性及び発がん性評価への応用が期待されています。また、γH2AX の検出は近年では細胞老化を評価する指標としても知られています。
本製品はモノクローナル抗体研究所製の抗γH2AX 抗体を使用しています。

参考文献

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文献No.	対象サンプル	装置	引用(リンク)
1	細胞 (B16 Cell)	フローサイトメーター	J. Takahashi, S. Nagasawa, M. J. Ikemoto, C. Sato, M. Sto and H. Iwahashi, "Verification of 5-Aminolevurinic Radiodynamic Therapy Using a Murine Melanoma Brain Metastasis Model", Int. J. Mol. Sci. ., 2019, 20, (5155), .
2	細胞 (ヒト小気道上皮細胞)	蛍光顕微鏡	M. Komura, T. Sata, H. Yoshikawa, N. A. Nitta, Y. Suzuki, K KOike, Y. Kodama, K. Seyama and K. Takahashi, "Propylene glycol, a component of electronic cigarette liquid, damages epithelial cells in human small airways", 2022, Respir. Res., doi:10.1186/s12931-022-02142-2.

よくある質問

Q Anti γH2AX antibody staining solution及びSecondary antibody staining solutionは保存できますか？: A

保存はできません。その日のうちにご使用ください。

Q 抗体をキット付属のBlocking Solution以外の溶液で希釈してもいいですか？: A

キット付属のBlocking Solutionでの希釈をお勧めします。
他の溶液で希釈をするとバックグラウンドが上昇する可能性があります。

Q 多重染色時の注意点はありますか？: A

本キットではマウス由来の一次抗体を使用しているため、他抗原を同時染色する場合にはマウス由来以外の一次抗体を選択ください。

Q 組織染色時の注意点はありますか？

組織染色の際、マウス組織は使用できませんのでご注意ください。
マウス組織を染色すると、抗マウス抗体(蛍光標識二次抗体)がマウス組織中のIgGへ非特異吸着を起こし、バックグラウンドが上昇します。

＜キットに含まれる抗体情報＞　　　　　　　　　　　　　

	由来	交差性
一次抗体	マウス	ヒト、マウス
蛍光標識二次抗体	ヤギ	マウスIgG

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷蔵 , 取扱条件: 吸湿注意

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DNAダメージ検出抗体 DNA Damage Detection Kit – γH2AX　- Deep Red 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

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DNA Damage Detection Kit – γH2AX　- Deep Red

02 酸化ストレス関連試薬

DNA Damage Detection Kit – γH2AX　- Deep Red

酸化ストレス関連試薬
酸化ストレス関連試薬
細胞機能解析
細胞老化

DNAダメージ検出抗体

製品コード

G267　 DNA Damage Detection Kit – γH2AX　- Deep Red

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
1 set	￥37,700	347-09441

キット内容

1 set	・Anti γH2AX antibody ・Secondary antibody – Deep Red ・Blocking Solution	×1 ×1 22 ml×1

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マニュアル

取扱説明書日本語
Manual English

技術情報

DNAダメージの検出原理

よくある質問

Q Anti γH2AX antibody staining solution及びSecondary antibody staining solutionは保存できますか？: A

保存はできません。その日のうちにご使用ください。

Q 抗体をキット付属のBlocking Solution以外の溶液で希釈してもいいですか？: A

キット付属のBlocking Solutionでの希釈をお勧めします。
他の溶液で希釈をするとバックグラウンドが上昇する可能性があります。

Q 多重染色時の注意点はありますか？: A

本キットではマウス由来の一次抗体を使用しているため、他抗原を同時染色する場合にはマウス由来以外の一次抗体を選択ください。

Q 組織染色時の注意点はありますか

＜キットに含まれる抗体情報＞　　　　　　　　　　　　　

	由来	交差性
一次抗体	マウス	ヒト、マウス
蛍光標識二次抗体	ヤギ	マウスIgG

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷蔵 , 取扱条件: 吸湿注意

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マロンジアルデヒド測定キット MDA Assay Kit 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

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MDA Assay Kit

02 酸化ストレス関連試薬

MDA Assay Kit

酸化ストレス関連試薬
酸化ストレス関連試薬
細胞機能解析
細胞毒性
フェロトーシス

マロンジアルデヒド測定キット

細胞、組織中のMDA量を測定可能
操作時間を大幅に短縮

製品コード

M496　 MDA Assay Kit

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
100 tests	￥31,000	341-09961

<使用回数の目安> 96-well plate 1枚

キット内容

100 tests	・Lysis Buffer ・Dilution Buffer ・Standard ・Substrate ・Antioxidant	6.5 ml×1 10 ml×1 200 μl×1 58 mg×1 200 μl×1

試験成績書

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マニュアル

取扱説明書日本語
Manual English

技術情報

細胞、組織中のMDA量を測定可能

細胞を測定試料とする場合は、蛍光法で測定できます。組織を測定試料とする場合は、サンプル量や予想されるMDA含有量より蛍光法もしくは比色法から測定方法を選択できます。

蛍光法

比色法

必要サンプル量

測定可能MDA濃度範囲

細胞

○

1-3×10⁷ cells

1-10 µmol/l

組織

○

蛍光法：10-30 mg

比色法：20-50 mg

蛍光法：1-10 µmol/l

比色法：1-50 µmol/l

参考文献

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文献No.	対象サンプル	引用(リンク)
1	組織 (マウス海馬体)	K. Igarashi, H. Iwai, K. Tanaka, Y. Kuwahara, J. Kitanaka, N. Kitanaka, A. Kurimasa, K. Tomita, T. Sato, "Neuroprotective effect of oxytocin on cognitive dysfunction, DNA damage, and intracellular chloride disturbance in young mice after cranial irradiation", 2022, Biochem. Biophys. Res. Commun., doi:10.1016/j.bbrc.2022.04.099.
2	細胞 (HeLa)	J. Zhu, X. Wang, Y. Su, J. Shao, X. Song, W. Wang, L. Zhong, L. Gan, Y. Zhao, X. Dong, "Multifunctional nanolocks with GSH as the key for synergistic ferroptosis and anti-chemotherapeutic resistance", 2022, doi:10.1016/j.biomaterials.2022.121704.
3	細胞 (RAW 264.7)	B. Yang, G. Joe, W. Li, Y. Shimizu, H. Saeki, "Comparison of Maillard-Type Glycated Collagen with Alginate Oligosaccharide and Glucose: Its Characterization, Antioxidant Activity, and Cytoprotective Activity on H2O2-Induced Cell Oxidative Damage", 2022, doi:10.3390/foods11152374.
4	細胞 (HepG2)	L. Dong, Z. Jiang, L. Yang, F. Hu, W. Zheng, P. Xue, S. Jiang, M. E. Andersen, G. He, M. J. C. Crabbe, W. Qu, "The genotoxic potential of mixed nitrosamines in drinking water involves oxidative stress and Nrf2 activation", 2022, doi:10.1016/j.jhazmat.2021.128010.
5	細胞 (OMM-1)	C. Hou, L. Xiao, X. Ren, L. Cheng, B. Guo, M. Zhang, N. Yan., "EZH2-mediated H3K27me3 is a predictive biomarker and therapeutic target in uveal melanoma", 2022, Front. Genet., doi:10.3389/fgene.2022.1013475.
6	細胞 (ヒト歯肉線維芽細胞)	L. Xing, W. Dong, Y. Chen, W. Dai, X. Xiao, Z. Liu, X. Zhang, D. Bai, H. Xu, "Fibroblast ferroptosis is involved in periodontitis-induced tissue damage and bone loss", 2022, Int. Immunopharmacol., doi:10.1016/j.intimp.2022.109607.
7	細胞 (Huh7)	Y. Li, W. Yang, Y. Zheng, W. Dai, J. Ji, L. Wu, Z. Cheng, J. Zhang, J. Li, X. Xu, J. Wu, M. Yang, J. Feng and C. Guo, "Targeting fatty acid synthase modulates sensitivity of hepatocellular carcinoma to via ferroptosis", J. Exp. Clin. Cancer Res., 2023, doi:10.1186/s13046-022-02567-z.
8	組織 (ラット肝臓)	H. Liu, F. Yokoyaa, S. Ishizuka, "Metabolic alterations of the gut–liver axis induced by cholic acid contribute to hepatic steatosis in rats", Biochim. Biophys. Acta, Mol. Cell Biol. Lipids, 2023, doi:10.1016/j.bbalip.2023.159319.
9	細胞 (4T1)	J. Zhao, Y. Chen, T. X, S. Han, C. Li, Y. He, Y. He, G. Zhao, G. Zhao, T. Wang, L. Wang, T. Cheng, C. Wang and J. Wang, "Clustered Cobalt Nanodots Initiate Ferroptosis by Upregulating Heme Oxygenase 1 for Radiotherapy Sensitization", Small, 2023, doi:10.1002/smll.202206415.
10	組織 (マウス膵臓)	L. Liu, Y. Xie, G. Li, T. Zhang, Y. Sui, Z. Zhao, Y. Zhang, W. Yang, X. Geng, D. Xue, H. Chen, Y. Wang, T. Lu, L. Shang, Z. Li, L. Li, B. Sun, "Gut microbiota-derived alleviates acute pancreatitis by activating pancreatic SIRT3 signalling", Br. J. Pharmacol., 2023, doi:10.1111/bph.15980.
11	組織 (乳がん細胞)	Z. ZHu, H. Shen, J. Xu, Z. Fang, G. Wo, Y. Ma, K. Yang, Y. Wang, Q. Yu, J. Tang., "GATA3 mediates doxorubicin resistance by inhibiting CYB5R2-catalyzed iron reduction in breast cancer cells", 2023, doi:10.1016/j.drup.2023.100974.

よくある質問

Q 本キットの測定原理を教えてください。: A

本キットはSubstrateにチオバルビツール酸 (TBA)を使用しております。MDAとTBAの反応により生成したTBA付加体の吸光度もしくは蛍光強度を測定し、Standardの値と比較することでサンプル中のMDA濃度を測定できます。

Q 1キットあたり測定可能なサンプル数を教えてください。: A

サンプルの測定をn=3で行った場合、24サンプルの測定が可能です。

Q 溶液調製後の保存方法を教えてください。: A

Substrate stock solutionは調製後、冷凍保存 (－20℃)して下さい(2カ月間安定)。
Antioxidant PBS solutionとWorking solutionは保存できません。その日の内にお使い下さい。

Q 本キットを使用する場合、細胞数の補正は必要ですか？: A

薬剤刺激等を行っても細胞数の変化がない場合は、細胞数の補正は必要ありません。
細胞数が変化する場合は、タンパク質定量法によってMDA濃度を補正できます。
なお、タンパク質定量で補正を行う場合はBCA法を推奨します。

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷凍
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トータルROS検出キット ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA- 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA-

02 酸化ストレス関連試薬

ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA-

酸化ストレス関連試薬
酸化ストレス関連試薬
蛍光色素

トータルROS検出キット

トータルROSを高感度に検出
蛍光顕微鏡、プレートリーダー、フローサイトメーターで検出可能

製品コード

R252　 ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA-

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
100 tests	￥19,300	340-09811

キット内容

100 tests	・Highly Sensitive DCFH-DA Dye ・loading Buffer (10x)	10 μl×1 1.0 ml×1

試験成績書

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ご購入方法
お問い合わせ

マニュアル

取扱説明書日本語
Manual English

技術情報

比較表：既存試薬との性能

弊社ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA-を含む、一般的に知られている既存色素との比較表を下記に示します。

	同仁化学研究所		T社
品コード	R252	R253	–	–
製品名	本製品 ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA-	関連製品 ROS Assay Kit -Photo-oxidation Resistant DCFH-DA-	D色素	C色素
感度 (細胞染色時)	◎ 最も感度が高い	○ 既存色素に比べ感度が高い	△ 感度が低い	△ 感度が低い
耐光性 ※観察光による自動酸化	× 観察光による自動酸化あり	◎ 最も耐光性が高い	× 観察光による自動酸化あり	× 観察光による自動酸化あり
固定化操作	× 固定化不可	◎ 固定化可能	× 固定化不可	○ 固定化可能

参考文献

参考文献を表示する

文献No.	対象サンプル	装置	引用（リンク）
1)	細胞 U-251MG cells(ヒトグリア芽腫・アストロサイトーマ )	蛍光顕微鏡	S. Kato, "Effects of platinum‑coexisting dopamine with X‑ray irradiation upon human glioblastoma cell proliferation", Hum. Cell, 2021, doi:10.1007/s13577-021-00591-3.
2)	細胞 Valve Interstitial Cells(弁間質細胞)	蛍光顕微鏡	K. Kanno, T. Sakaue, M. Hamaguchi, K. Namiguchi, D. Nanba, J. Aono, M. Kurata, J. Masumoto, S. Higashiyama, H. Izutani, "Hypoxic Culture Maintains Cell Growth of the Primary Human Valve Interstitial Cells with Stemness", Int. J. Mol. Sci. 2021, doi:10.3390/ijms221910534.
3)	細胞 BPH-1細胞(LPS誘導)	フローサイトメーター	C. Fang, L. Wu, M. Zhao, T. Deng, J. Gu, X. Guo, C. Li, W. Li, X. Zeng, "Periodontitis Exacerbates Benign Prostatic Hyperplasia through Regulation of Oxidative Stress and Inflammation", Oxid. Med. Cell. Longevity, 2021, doi:10.1155/2021/2094665.
4)	菌（Synechococcus elongatus PCC7942)	プレートリーダー	M. Tamoi and S. Shigeoka, "CP12 Is Involved in Protection against High Light Intensity by Suppressing the ROS Generation in Synechococcus elongatus PCC7942", Plants, 2021, doi:10.3390/plants10071432.
5)	細胞 SW982(ヒト滑膜肉腫細胞株)	蛍光顕微鏡	S. Xia, Z. Ma, B. Wang, F. Gao, C. Yi, X. Zhou, S. Guo, L. Zhou, "In vitro anti-synovial sarcoma effect of diallyl trisulfide and mRNA profiling", Gene, 2021, doi:10.1016/j.gene.2021.146172.
6)	細胞 BRL3A(肝由来細胞株)	蛍光顕微鏡	Z. Luo, Q. Gao, H. Zhang, Y. Zhang, S. Zhou, J. Zhang, W. Xu, J. Xu, " Microbe-derived antioxidants attenuate cobalt chloride-induced mitochondrial function, autophagy and BNIP3-dependent mitophagy pathways in BRL3A cells", 2022, doi:10.1016/j.ecoenv.2022.113219.
7)	細胞 (骨髄由来抑制細胞)	フローサイトメーター	Z. Xie, T. Kawasaki, H. Zhou, D. Okuzaki, N. Okada and M. Tachbana, "Targeting GGT1 Eliminates the Tumor-Promoting Effect and Enhanced Immunosuppressive Function of Myeloid-Derived Suppressor Cells Caused by G-CSF", Front. Pharmacol., 2022, doi:10.3389/fphar.2022.873792.
8)	細胞 TIG-1 (老化研究用、ヒト胎児肺由来線維芽細胞)	蛍光顕微鏡	Y. Fujita, M. Iketani, M. Ito, I. Ohsawa, "Temporal changes in mitochondrial function and reactive oxygen species generation during the development of replicative senescence in human fibroblasts", 2022, doi:10.1016/j.exger.2022.111866.
9)	細胞 (SK-Hep1)	蛍光顕微鏡	G. Tsujimoto, R. Ito, K. Yoshikawa, C. Ueki and N. Okada, "NFYA promotes the anti-tumor effects of gluconeogenesis in hepatocellular carcinoma through the regulation of PCK1 expression", 2022, doi:10.3389/fcell.2022.983599.

よくある質問

Q 1キットで測定可能なサンプル数を教えてください。: A

測定可能なサンプル数は以下をご参考ください。
・ 96-well plate：1枚
・ ibidi 8-well plate：6枚
・ 35 mm dish：5枚
・ 6-well plate：5ウェル

Q ポジティブコントロールになる実験例はありますか？: A

取扱説明書に過酸化水素処理をしたHeLa細胞による検出例を掲載しております。

Q Highly Sensitive DCFH-DA working solutionはLoading Buffer以外でも調製できますか？: A

染色時の細胞へのダメージを軽減するため付属のLoading Bufferを推奨しますが、Hanks’ HEPESやHBSSでも調製できます。
培地で調製する場合は無血清培地をご使用ください。

Q 染色後の洗浄には、HBSSの代わりにPBSを使用できますか？: A

細胞へのダメージを軽減するためHBSSを推奨しております。
HBSSがお手元にない場合は培地での洗浄をお勧めします。

Q 蛍光顕微鏡でイメージングする際の注意点はありますか？: A

色素はROSと反応し、酸化することで蛍光を発します。
励起光を照射し続けると色素が酸化されることでバックグラウンドが上昇するため、イメージング画像を取得する際は明視野でピントを調整後に蛍光画像を取得してください。

観察光の影響により撮影が困難であった場合は、下記製品がおすすめです。
製品コード: R253、製品名: ROS Assay Kit -Photo-oxidation Resistant DCFH-DA-

Q フローサイトメーターで使用する際、細胞を剥がす操作はどの段階で行えば良いですか？: A

取扱説明書操作6の後(薬剤処理しHBSSで洗浄した後)に細胞を剥がす操作(トリプシン処理)を行ってください。
トリプシン処理後は、培地を添加し反応を止めた後、遠心しHBSSで１回洗浄後、
さらに遠心しHBSSで細胞を懸濁して測定サンプルとしてください。

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