小鼠精子冻存液和体外受精培养基

FERTIUP^® 和CARD MEDIUM^®

该试剂可以保证和促进实验小鼠精子的冷冻保存效果，并能提高体外受精率。

FERTIUP^® 小鼠精子冻存液
FERTIUP^® 小鼠精子预孵培养基
CARD MEDIUM^® 小鼠体外受精用培养基

FERTIUP^® PM -CARD MEDIUM^® 套装

◆原理

       FERTIUP^®（小鼠精子冻存液、小鼠精子预孵培养基）和CARD MEDIUM^®（高性能体外受精用培养基）是冻存小鼠精子、预孵培养、体外受精的高性能试剂。可以通过试剂冷冻保存精子，建立高效经济的小鼠系统（转基因小鼠等）。大大提高了传统C57BL/6与129品系小鼠“冻存-精子”的复苏和新鲜精子的体外受精率。

       使用了FERTIUP^® 和CARD MEDIUM^® 小鼠精子冻存・体外受精系统能够保证宝贵小鼠资源的安全性及可靠性。研究人员发现使用液氮低温保存小鼠品系的精子，成本约是单克隆保存的三十分之一。

◆产品介绍

FERTIUP^® 和 CARD MEDIUM^® 是什么?

FERTIUP^® 和 CARD MEDIUM^® 是能保证和促进实验小鼠精子的冷冻保存效果，并能提高体外受精率的试剂。产品系列如下：
1. FERTIUP^® Mouse Sperm Cryoprotectant小鼠精子冻存液 (KYD-001-EX)
→该试剂用来冻存精子。

2. FERTIUP^® Mouse Sperm Preincubation Medium小鼠精子预孵培养基 (KYD-002-EX)
→该试剂用于在体外受精前，预孵复苏后的精子。

3.CARD MEDIUM^® Mouse Fertilization Medium小鼠体外受精培养基(KYD-003-EX)
→该培养基用于体外受精

单独使用FERTIUP 能得到较高的体外受精率，但如果配用上CARD MEDIUM就能达到更高的受精率，取得进一步成功。

◆优点・特色

●   受精率高达80%以

●   有效维系转基因小鼠(Tg/KO)

●   降低人工、设备和养殖升本

●   缩短小鼠繁殖时间

●   高效繁殖了以往难以繁殖的品系

◆案例・应用

【案例1】用FERTIUP^® 和CARD MEDIUM^® 冷冻复苏精子的体外受精率

【案例2】 不同品系小鼠的新鲜和冻存精子，使用了FERTIUP^® 预孵培养基和CARD MEDIUM^® 后的体外受精率比较

【使用流程】

       使用FERTIUP^®（小鼠精子冻存液），用冻存的精子代替新鲜的精子，能够保存小鼠的系统。此方法能大幅度减少饲养小鼠的成本及空间。复苏冻存的精子，使用FERTIUP^® （小鼠精子预孵培养基）和CARD MEDIUM^® ，进行高效受精，移植胚胎至代育雌鼠体内，才能繁衍后代。

       即使自然交配程序困难，但只要在FERTIUP^® （小鼠精子预孵培养基）中预孵从雄性小鼠取出新鲜的精子，接着和使用了CARD MEDIUM^® 的卵子进行体外受精，移植胚胎，就能在短期内繁殖小鼠。

       取替雄性小鼠，用冷藏运输试剂盒运输小鼠的附睾尾，即经济又安全。然后把从尾部取下的精子放在FERTIUP^®（小鼠精子预孵培养基）里预孵，接着和使用了CARD MEDIUM^®的卵子进行体外受精，移植胚胎，就能简便地预孵小鼠。

       即使在低受精率的129和BALB/c系統中，ba取出的精子放在FERTIUP^®（小鼠精子预孵培养基）里预孵，与在CARD MEDIUM^®的卵子进行体外受精，就能得到高受精率。

   具体操作见“相关资料”。

【相关资料】

FERTIUP^®和CARD MEDIUM^®系列

操作手册

CARD MEDIUM^®.pdf

 注意：CARD MEDIUM^®在体外受精时根据所用的精子的不同，调试方法液不一样。请详细阅读相关说明及正确使用试剂。

其他操作方法：

■采用新鲜精子的体外受精方法

小鼠的体外受精方法（使用FERTIUP^®孵育培养基和CARD MEDIUM^®）

■使用冷冻运输的附睾尾的体外受精方法

使用冷藏运输试剂盒进行附睾尾的低温运输

取出冷藏运输后的附睾尾进行体外受精（使用FERTIUP^®孵育培养基和CARD MEDIUM^®）

■小鼠精子的冻存、融解、解冻精子的体外受精方法

冻存小鼠精子（使用FERTIUP^®冻存液）

解冻已冻存的精子后进行体外受精（使用FERTIUP^®孵育培养基和CARD MEDIUM^®）

用CARD以外的方法来冻结的精子进行体外受精（使用FERTIUP^®孵育培养基和CARD MEDIUM^®）

◆产品选择

冻存小鼠精子
(使用FERTIUP^®Cryoprotectant冻存液、mHTF培养基、精子吸管、吸管接头和冷冻罐)
使用复苏精子进行体外受精
(使用FERTIUP^® Preincubation medium预孵培养基、CARD MEDIUM^®体外受精培养基、mHTF 培养基和吸管接头)
低温采集运输附睾尾

(使用Cold Transport Kit冷藏运输试剂盒)
使用低温运输的附睾尾精子进行体外受精
(使用FERTIUP^®Preincubation medium预孵培养基： PM 和mHTF培养基)
低温运输2-细胞期胚胎
(使用Cold Transport Kit冷藏运输试剂盒M2 和 KSOM)
体外受精
(使用FERTIUP^® Preincubation medium预孵培养基、CARD MEDIUM^® 体外受精培养基和mHTF培养基)
简易的玻璃化冷冻保存小鼠胚胎
(使用DAP213 和 DMSO)
胚胎移植入输卵管
用以前保存的冻存精子进行体外受精
(使用FERTIUP^®Preincubation medium预孵培养基: PM, CARD MEDIUM^® 体外受精培养基和mHTF培养基)
复苏玻璃化冷冻后的胚胎的步骤
(使用0.25M 蔗糖and KSOM)
在氮气安瓿瓶里存储试剂和相关处理方法

玻璃化冷冻小鼠卵母细胞

(使用mHTF培养基)
试剂的组成

1M DMSO, DAP213, 0.25M蔗糖, mHTF培养基和 KSOM

◆产品系列

FERTIUP^®

我们提供了各种尺寸方便你使用  (0.5ml, 1ml, 5*0.5ml, 5*1ml)。

请注意，一旦开封了安瓿瓶，建议尽快一次性使用完，不要留到下次使用。

CARD MEDIUM^®

[试剂盒的组成]
一个装有培养基的安瓿瓶(A)：3 mL
一个装有粉末的小瓶(B)：30 mg
一个1.5ml的塑料管(C)
一个1.5ml的塑料管(D)
一个2.5毫升的一次性注射器
一根针
一套过滤器（孔径：0.22μm）

套装产品(FERTIUP^® + CARD MEDIUM^®) 

ARK and KYD-宣传页	CARD&FERTIUP-宣传页	HyperOva-宣传页

○常规问题

Q1：    请告知FERTIUP^®小鼠精子冻存液、小鼠精子孵育培养基以及CARD MEDIUM^® 的保存方法以和保质期。
A1：    1.请在2～10℃ 冷藏FERTIUP^®小鼠精子孵育培养基和CARD MEDIUM^®。
          2.请在18～28℃室温，保存FERTIUP^®小鼠精子冻存液 。
          3. 关于保质期，请查看与产品附带的说明书或者安瓿瓶上的注释。

Q2：    产品开封后能否少量分装冻存？
A2：    不可以。因为无法保证冻存后的质量，所以不建议此做法；

Q3：    产品里面含有对人体有害的物质吗？
A3：    不，里面不含有对人体有害的物质。

Q4：    要怎样购买FERTIUP^®和CARD MEDIUM^® 试剂呢？
A4：    如需购买，请与我司联系。

Q5：    产品的货期需要多久？
A5：    我司产品均为日本原装进口，货期3~4周。

Q6：    如果产品中混有杂质，可以更换吗？
A6：    我司从生产到出货都实行严谨的品质管理体制，但如果在产品中混入类似玻璃片等杂物这情况，请立即拍照

          并与我们联系，会有专人为您解决。

Q7：    发现未开封的小鼠精子冻存液中出现结晶的现象。
A7：    极少数情况下，受低温影响会产生结晶。只要在使用前1小时，把小鼠精子冻存液放进37℃的孵育器中保温，

          搅拌后结晶就会融解。融解后冻存液的效力不会产生任何问题。

○关于FERTIUP^®系列产品的疑问

Q1：    采用FERTIUP^®小鼠精子冻存液/小鼠精子孵育培养基冷冻而成的精子进行体外受精的C57BL/6小鼠虽然得

          到了较高体外受精率，但是否也能提高其他系统小鼠的体外受精率呢？
A1：    经验证，几乎都能提高C57BL/6小鼠之外的系统的体外受精率。

Q2：    FERTIUP^®小鼠精子冻存液不会一次性用完，如果用试管分装保存，冷藏数周后还可以使用吗？
A2：    不可以。建议尽快使用完开封后的冻存液。请尽量购买可以一次性使用完的规格。

Q3：    FERTIUP^®小鼠精子冻存液在保质期间呈乳白色，请问能够使用呢？
A3：    可以使用。之所以呈乳白色是因为保存液成分中的脱脂牛奶里的酪蛋白胶团沉淀。酪蛋白胶团对冻存精子没

          有帮助，生产过程中我们已尽量去除，但长期保存是还是有可能出现酪蛋白胶团沉淀。

          轻拍安瓿瓶混合溶液时，冻存液可能呈乳白的，但是不会影响体外受精率。

Q4：    FERTIUP^®系列产品的使用方法中，用流动液体石蜡会不会造成不良影响。
A4：    不会。因为一般的精子悬浊液（保存液中悬浊的精子）不会与流动石蜡混合，所以不会造成不良影响。

Q5：    冻存精子在FERTIUP^®小鼠精子孵育培养基里培养后，在体外受精培养基上进行体外受精时，精子浓度是多

          少？
A5：    通常冻存液的精子浓度是100,000～200,000精子/μL，在小鼠培养基(90μL)里加入冻融后的精子悬浊液

          (10μL)，被稀释了10倍后，精子孵育培养基中的精子浓度变成10,000～20,000精子/μL。
          然后，加入孵育精子悬浊液(10μL)，又被稀释了10倍，体外受精培养基中精子的浓度是1,000～2,000精子

          /μL。
          最后冻融后的运动精子比例大约是20%，体外受精培养基中运动精子的浓度是200～400精子/μL。

Q6：    我想下载FERTIUP^®系列产品说明，要去哪里下载呢？
A6：    请在金畔官网查找，或者联系我们。

Q7：    请告知能确认精子冻结融解的方法。
A7：    1.比较简单地确认冻融后精子的质量的方法是，冻结后在孵育培养基培养，以滴液周边活跃的精子数来作

          判断。
          2.采取精子的方法是先确认未受精卵进行体外受精时，受精率是否最低达到30%。
         （现销售的产品，在确保质量时，进行体外受精，已确认了C57BL/6小鼠的体外受精率达到30%以上。）

Q8：    请问有没有传统方法和在国外冻结精子的溶解方法？
A8：    请参考熊本大学的网上指南，里面提供了除CARED以外用冻结精子进行体外受精的方法。

○关于CARD MEDIUM^®的疑问

Q1：    CARD MEDIUM^®生产后能保质几个月呢？
A1：    目前为“生产后18个月”，今后若技术进步有可能进一步延长保质期。

Q2：    如果不与FERTIUP^®系列一起使用的话，就不能得到较高的受精率吗？
A2：    是的。FERTIUP^®对精子起作用，CARD MEDIUM^®对卵子起作用，从而提高受精率。因此，如果两者同时

          使用，C57BL/6小鼠就得到高达80%的受精率。

Q3：    除C57BL/6小鼠以外的系统也能得到很高的体外受精率吗？
A3：    可以。其他系统也能得到较高的体外受精率。

【参考文献】

[1]　Takeo, T., Hoshii, T., Kondo, Y., Toyodome, H., Arima, H., Yamamura, KI., Irie, T. and Nakagata, 

　　 N. Methyl-beta-cyclodextrin improves the fertilizing ability of C57BL/6 mouse sperm after freezing

　　 and thawing by facilitating cholesterol efflux from the cells. Biol Reprod. 78(3):546-51. 2008.

[2]　Takeo, T and Nakagata, N. Combination medium of cryoprotective agents containing L-glutamine

　　 and methyl-{beta}-cyclodextrin in a preincubation medium yields a high fertilization rate for cryopreserved

　　 C57BL/6J mouse sperm. Lab Anim. 44(2):132-7. 2010

[3]　Nakagata N. 2011. Cryopreservation of mouse spermatozoa and in vitro fertilization. Methods Mol 

　　 Biol. 693: 57-734
[4]　Cryopreservation of mouse spermatozoa and in vitro fertilization.Nakagata N.Methods Mol Biol. 2011

　　 693:57-73. PMID: 21080274,<链接>

[5]　Combination medium of cryoprotective agents containing L-glutamine and methyl-{beta}-cyclodextrin 

　　 in a preincubation medium yields a high fertilization rate for cryopreserved C57BL/6J mouse sperm.Takeo T,

　　 Nakagata N.Lab Anim. 2010 Apr;44(2):132-7. PMID: 20357317<链接>

[6]　Short-term storage and transport at cold temperatures of 2-cell mouse embryos produced by 

　　 cryopreserved sperm.Takeo T, Kondo T, Haruguchi Y, Fukumoto K,Nakagawa Y, Takeshita Y, 

　　 Nakamuta Y, Tsuchiyama S, Shimizu N, Hasegawa T, Goto M, Miyachi H, Anzai M, Fujikawa R, 

　　 Nomaru K, Kaneko T, Itagaki Y,Nakagata N.J Am Assoc Lab Anim Sci. 2010 Jul;49(4):

　　 415-9. PMID: 20819385<链接>

[7]　Birth of mice from vitrified/warmed 2-cell embryos transported at a cold temperature.Takeo

 　　T, Kaneko T, Haruguchi Y, Fukumoto K, Machida H, Koga M, Nakagawa Y, Takeshita Y, 

　　 Matsuguma T, Tsuchiyama S, Shimizu N, Hasegawa T, Goto M, Miyachi H, Anzai M, Nakatsukasa E, 

　　 Nomaru K, Nakagata N.Cryobiology. 2009 Apr;58(2):196-202. PMID: 19168045<链接>

[8]　Methyl-beta-cyclodextrin improves fertilizing ability of C57BL/6 mouse sperm after freezing 

　　 and thawing by facilitating cholesterol efflux from the cells.Takeo T, Hoshii T, Kondo Y, 

　　 Toyodome H, Arima H, Yamamura K, Irie T, Nakagata N.Biol Reprod. 2008 Mar;78(3):

　　 546-51. PMID: 18046011<链接>

Collins氧化

●　用吡啶溶解三氧化铬配制制剂

●　Collins氧化在中性条件进行

●　用于容易被酸破坏的底物反应

反应例子^【b】

Collins氧化

愈创木酚检测试剂盒

Guaiacol Detection Kit

◆背景

嗜酸耐热菌Alicyclobacillus acidoterrestris是革兰氏阳性，产芽胞厌氧菌，在自然界中普遍存在。1984年透明苹果汁混浊事件后该物种被大量研究。生长在相对高的温度和酸性条件下的Alicyclobacillus类细菌，称为热-嗜酸性杆菌（TAB） [1, 2, 3].

TAB不能通过巴氏消毒法被灭菌，可能残留在合成的食物和饮料中。尚不清楚TAB是否对人体有害，但产生有异味的愈创木酚，会降解果汁和其他产品的质量。即使没有异味，在分配过程中轻微恶化引起的降解也会降低产品的质量。                                                                                                                               Va-YSG Medium  

避免TAB污染是非常困难的，特别是在土壤中。幸运的是，引起污染的   

A. acidocaldarius 和其他主要物种被认为是无害的，TAB引起的损害能够通

过监测被认为有害的A. acidoterrestri来缩小。因为这些物种生长相对高温

和酸性的条件下，不能通过常规的提取培养的方式进行检测。                 

由于欧洲和其他区域经常发生果汁质变事件，2003年3月日本果汁联合会研发和出版了同一检测TAB方法 [4]。为了容易进行该项检测，我们研发了该试剂盒。该试剂盒不同于会产生异味的愈创木酚的A. acidoterrestri试剂盒。Guaiacol Detection Kit Reference                                                                                        Guaiacol Detection Kit                                                                                                         

◆试剂盒组成

YSG 琼脂板20 块板(货号KYO-06810)

Va-YSG 培养基 (2mL) 100 个管子(货号KYO-08901)

愈创木酚检测试剂盒 100 次 (货号KYO-08921)

◆TAB测试流程图-日本果汁协会

◆实验流程

1. 用接种环，10uL，在YSG琼脂板上提取的新克隆，该克隆还没有形成孢子。在“Va-YSG medium (2mL), ” (≥1×10⁸cfu/mL)管内重悬该克隆。.

2. 孵育 45±1°C，3小时。

3. 加入1 mL“Guaiacol Detection Kit”的试剂1。

4. 加入20 μL“Guaiacol Detection Kit”的试剂 2 。

5. 加入20 μL 试剂3 of “Guaiacol Detection Kit”试剂3.

6. 混匀。

7. 放置5-10 分钟。

8. 检测培养基颜色的变化。*请在10分钟内观察颜色变化。

Brown color indicates contamination of AAT

空白 (阴性对照) 

使用没有接种的"Va-YSG medium (2mL)" ，进行步骤(2)-(8).

阳性对照

2 mL灭菌水和100 µL阳性对照混合，进行步骤 (3)-(8).

处理信息

• 请使用高压灭菌方式处理已经使用的培养基（121℃，超过30分钟)

• 保存条件: 2-10 ℃，避光。

• 保质期：制造后12个月

一般我们提供的产品保质期在3个月到10个月。

欲了解详情资料请点击：果汁中嗜热嗜酸菌的检测方法——膜过滤法和涂布法

Guaiacol Detection Kit Flyer
PDF Download [419 kb] 

Q1：  我对TAB列举法有些问题。

          a. YSG灭菌水是什么意思，我想知道制备的比率。

          b.阳性/阴性测试：样品制备步骤提到的用YSG培养基稀释，稀释比例是多少？
          c.如果是水样品的话，是不是用相同方法？

A1：   (a,b)回答: 
           "YSG distilled water"是错误说法，正确的说法是“灭菌水”。制备比例的话，请参考下面的

           信息，不过具体案例具体分析。(参考数据来自日本果汁联合会R).
           ——————————————————–
           果汁　　　　　　〔Brix 值〕　 　参考比例　　
           ———————————————————
           苹果　　　　　　　 　〔70〕　････････ 10 倍
           橙子　　　　　　　〔65〕　････････ 10 倍
           红葡萄　　　　　〔65〕　････････ 20-50 倍
           白葡萄　　　 〔65〕　････････ 20 倍
           胡萝卜 　　　　　　 　〔40〕　･････････10 倍
           柠檬　　　　 　〔50〕　･････････10 倍　　　
           葡萄柚　　 　〔55〕　･････････20 倍
           桃子　　　　　　　 〔55〕　･････････10 倍
           ———————————————————
            c. 水样品的话，是不是用相同方法？
            回答(c):对不起，我们不能明确告知是否可以运用，我们手头没有相关记录。
           有一种软饮料“near water"，来自调味品，不是果汁（或者少量）和水。我们听说该款产品可用

           于检测该类饮料。 

Q2：   果糖能够作为样品吗？

A2：   非常抱歉，我们这边没有关于愈创木酚检测糖果（果糖）样品的相关知识。所以我们建议参考简单

           流程，该流程修改自 “Japanese spore counting method of sugar samples”。如果你们有预处

           理微生物测试的流程，请按照你们的操作流程操作代替操作操作流程中的“样品制备“。该流程中

           有制备YSG液体培养基的方法。如果 您使用我们提供的流程，不需要使用接种环和YSG琼脂板。

Q3：   我们使用该试剂盒鉴定Alicyclobacillus acidoterrestris。我们的客户是做墨西哥沙拉的，它们也

           有类似愈创木酚的异味。我们是否可以用该试剂盒去检测沙拉中的愈创木酚(主要西红柿，红色)？红

           色是否会干扰？

A3：   我们这边没有数据是关于愈创木酚检测试剂盒检测沙拉酱的案例。如果您考虑观察方法，请参考下

           面的"注意事项" 。

           注意事项（1）：来自样品的固体如果样品的固体中有AAT，必须采取胃部处理或者匀浆去除固体的致

           病菌。

           注意事项（2）：材料中多酚的影响多酚是AAT（Alicyclobacillus acidoterrestris）生长抑制剂。因此，

           检测AAT必须稀释样品20~50倍。否则，无法检测出来。我们不清楚沙拉中有多少多酚。但是西红

           柿是含有多酚的。一般稀释10倍。可以考虑沙拉稀释超过20倍。

           注意事项（3）：关于样品 的粘度。稀释降低粘度。因子样品必须适当稀释。请参考微生物稀释比例检测

           样品，不包括抗热嗜酸性细菌。注意事项(4):关于样品到标本上携带的颜色如果最终采用过氧化物酶

           方法，如果样品带有棕色的话，可能判断起来很麻烦。如果样品稀释的话，我认为不会引起大问题。

           注意事项（4）：其他干扰材料如果使用过氧化物酶方法，通过过氧化物酶反应会使愈创木酚 (AAT产物，

           会引起异味)聚合并且变成棕色。我们认为沙拉酱包括不同的香味料可以作为材料。因此，如果有材料

           抑制过氧化物酶反应或者含有的物质可以起过氧化酶作用，通过过氧化物酶反应变成棕色，会引起假

           阳性或者假阴性的结果。

Q4：  如何接种TAB到YSG琼脂板上面？请提供流程。

A4：    根据Japan Fruit Juice Association，有3种方法

            1) 倾注平皿的方法

            2) 用曲面玻璃棒涂布平板的方法 
            3) MF 方法
            如果告知客户的样品和检测方法，我们可以推荐方法。

            对于您的信息，请让我们知道在我们手册里面TAB检测的流程。

Q5：    是否提供不含香草酸的YSG培养基？

A5：    是的，我们提供不含香草酸的YSG培养基。然而售价会高，也需要额外时间考虑生产。另外，小批量生产

            会比较难。

Q6：    是否有数据或者参考文献显示 Guaiacol detection kit的准确性? 我们的客户希望提供上述信息。

A6：    关于产品的准确性，Japan Institute of fruit juice认可检测操作手册还有手册上提到的批次准确性的数据。

            然后，英文版的操作搜出不提供准确性的信息。

            关于您的要求，请参考下面有研发者by developer(Motohiro Niwa)写的论文 "Development of a rapid 

            detection method of A. acidoterrestiris, Hazardous bacteria to acidic beverage"

Q7：   我们需要下面两者之一的微生物菌株A.acidobacillus 或者 A.acidoterrestris 去完成分析，制定质量政

            策。是否可以从你们那边获得？

A7：   非常抱歉我们不能提供细菌菌株。您可以通过ATCC和DSMZ的当地经销商联系购买。

           http://www.atcc.org/About/tabid/138/Default.aspx
           http://www.dsmz.de/
           下面的菌株是分泌愈创木酚的。
           ———————————————————-
          ・　A.acidoterrestris　ATCC49025
          ・　A.acidoterrestris　DSM2498
          ・　A.acidoterrestris　DSM3923
          ・　A.acidoterrestris　DSM3924

Q8：    该试剂盒是否可用于牛奶或者啤酒？

A8：     关于牛奶和啤酒，我们没有相关的信息。

Q9：    该试剂盒可以检测多少愈创木酚？

A9：     Va-YSG 培养基 和Guaiacol detection kit能够检测25ppm愈创木酚。

Q10：  是否与关于假阳性结果的信息？

A10：   如果样品中有过氧化物酶或则过氧化氢酶的话，我们试剂盒可能还有假阳性的结果。

Q11：  是否可用BAT培养基代替YSG琼脂？

A11：   他们的YSG琼脂用这个试剂盒是可以的。我们推荐使用Va-YSG (KYO- 08901)用于下一步实验室（在YSG琼

             脂上孵育后）。我们的试剂盒是基于 Japan Fruit Juice Association的操作流程， 不推荐使用BAT培养

              基。所以不能保证使用BAT培养基的结果。

Q12：  是否可用来检测糖果？

A12：   对不起我们这边没有这方面信。可以参考 “Japanese spore counting method of sugar samples”。

             如果您与细菌检测的预处理流程，请使用您的实验流程代替样品处理。该流程中，有YSG液体培养基

             的制备方法。如果 您使用我们建议的流程，需要接种环和YSG琼脂板。如果不适合您的样品，建议修改。

Q13:    该试剂盒是否可以检测Ethylvanillin 到Ethoxyphenol转变?Ethoxyphenol也会类似愈创木酚，会有

            异味？

A13：  该试剂盒有比色法的结果，通过过氧化物酶反应愈创木酚转变成四-愈创木酚检测愈创木酚。关于2-

            Ethoxyphenol, 也会发生过氧化物酶反应，会有比色法结果。然而我们之前没有测试过，也没有看

           到相关的文献，不能确定。在很多化学物质数据库中我们也没有找到关于异味是由Ethoxyphenol引

           起的信息。

Q14：  该试剂盒可检测蜂蜜吗？

A14:     对不起，我们没有做过类似实验。

Guaiakol_detection_kit_reference.pdf

【1】   G.Deinhard, et al., Bacillus acidoterrestris sp. nov., a new thermotolerant acidophile isolated from

            different soils. Syst. Appl. Microbiol. 10, 47-53 (1987)

【2】  GOTO, M., Spore-forming thermo-acidophilic bacilli of the genus Alicyclobacillus, Bokin Bobai, 28

           (8), 499-508 (2000), in Japanese

【3】  GOTO, K., Lecture on "Classification and identification of microbes" 1. Classification and properties

           of new thermo-acidophilic bacilli, January 2001 issue of Soft Drink Technical Data, 9-26 (2001), in 

           Japanese

【4】  Niwa, M., et al., Development of a rapid detection method of A.acidoterrestris, hazardous bacteria

           to acidic beverage. Fruit processing, 13, 102-107 (2003)

【5】  Japan Fruit Juice Association, On the unified test method for thermo-acidophilic bacilli, Report of 

           Japan Fruit Juice Association, 535, 4-12 (2003), in Japanese

【6】  Niwa, M., et al., A.acidoterretris rapid detection kit, Fruit processing, 13, 328-331 (2003)

【7】  Niwa, M., Control of deleterious bacteria in acidic beverages by using a guaiacol detection kit

           (peroxidase method), Japan Food Science, 2004-2, 23-28 (2004), in Japanese

【8】  Japan Laid-Open P2003-259A “Detection of guaiacol forming bacteria and/or its identification 

           method”