日度归档：2025年12月31日

オートファジー（オートリソソーム）の検出試薬 DALGreen – Autophagy Detection 同仁化学研究所

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オートファジー（オートリソソーム）の検出試薬 DALGreen - Autophagy Detection 同仁化学研究所DALGreen – Autophagy Detection

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

DALGreen – Autophagy Detection

オートファジー（オートリソソーム）の検出試薬 DALGreen - Autophagy Detection 同仁化学研究所

  • 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
  • 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
  • 細胞機能解析
  • オートファジー

オートファジー（オートリソソーム）の検出試薬

  • 製品コード
    D675　 DALGreen – Autophagy Detection
容　量 メーカー希望
小売価格		 富士フイルム
和光純薬
20 nmol ￥31,900 344-09191

オートファジー（オートリソソーム）の検出試薬 DALGreen - Autophagy Detection 同仁化学研究所 DALGreenの最適濃度の検討については、
よくある質問の「DALGreenの最適濃度の検討方法を教えてください」
をご覧ください。

  • オートファジー（オートリソソーム）の検出試薬 DALGreen - Autophagy Detection 同仁化学研究所
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  • プロトコル オートファジー（オートリソソーム）の検出試薬 DALGreen - Autophagy Detection 同仁化学研究所 オートファジーを検出したい
    オートファジー（オートリソソーム）の検出試薬 DALGreen - Autophagy Detection 同仁化学研究所

技術情報

原理

オートファジー（オートリソソーム）の検出試薬 DALGreen - Autophagy Detection 同仁化学研究所
オートファジー（オートリソソーム）の検出試薬 DALGreen - Autophagy Detection 同仁化学研究所 DAPGreen、DAPRedと同様にオートファゴソーム形成時に色素が膜に取り込まれます。その後、リソソームと融合し酸性環境になったときにDALGreenの蛍光が増大します。

技術や使用製品に関する補足

グルタミン代謝とオートファジー

グルタミナーゼの安定化を介してオートファジーとグルタミノリシスを促進するタンパク質に関する報告例を紹介！

その他、疾患と細胞内代謝指標との関連性をマップでわかりやすく紹介しています。

オートファジー（オートリソソーム）の検出試薬 DALGreen - Autophagy Detection 同仁化学研究所

参考文献

参考文献を表示する
文献No. 対象サンプル 装置 引用（リンク）
1) 細胞
（HeLa, MEF）		 蛍光顕微鏡 H. Iwashita, H. T. Sakurai, N. Nagahora, M. Ishiyama, K. Shioji, K. Sasamoto, K. Okuma, S. Shimizu, and Y. Ueno, "Small fluorescent molecules for monitoring autophagic flux.", FEBS Letters., 2018, 592, (4), 559–567.
2) 細胞
（HeLa）		 蛍光顕微鏡 T. Sakata, A. Saito and H. Sugimoto, "In situ measurement of autophagy under nutrient starvation based on interfacial pH sensing.", Scientific Reports., 2018, 8, 8282.
3) 細胞
（HS-MM）		 蛍光顕微鏡 Y. Egawa, C. Saigo, Y. Kito, T. Moriki and T. Takeuchi, "Therapeutic potential of CPI-613 for targeting tumorous mitochondrial energy metabolism and inhibiting autophagy in clear cell sarcoma.", PLoS One., 2018, 13, (6), e0198940.
4) 細胞
（HaCaT)		 蛍光顕微鏡 S. Abe, S. Hirose, M. Nishitani, I. Yoshida, M. Tsukayama, A. Tsuji and K. Yuasa, "Citrus peel polymethoxyflavones, sudachitin and nobiletin, induce distinct cellular responses in human keratinocyte HaCaT cells.", Biosci. Biotechnol. Biochem. ., 2018, 82, (12), 1347.
5) 細胞
（KGN)		 蛍光顕微鏡 W. Yuping, M. Congshun, Z. Huihui, Z. Yuxia, C. Zhenguo and W. Liping, "Alleviation of endoplasmic reticulum stress protects against cisplatin-induced ovarian damage.", Reprod. Biol. Endocrinol., 2018,doi: 10.1186/s12958-018-0404-4.
6) 細胞
（BmN)		 蛍光顕微鏡 S. Xue, F. Mao, D. Hu, H. Yan, J. Lei, E. Obeng, Y. Zhou, Y. Quan, and W. Yu, "Acetylation of BmAtg8 inhibits starvation-induced autophagy initiation.", Mol. Cell Biochem., 2019,doi: 10.1007/s11010-019-03513-y.
7) 細胞
（HeLa)		 蛍光顕微鏡 F. Hongbao, Y. Shankun, C. Qixin, L. Chunyan, C. Yuqi, G. Shanshan, B. Yang, T. Zhiqi, L. Z. Amanda, T. Takanori, C.Yuncong, G. Zijian, H. Weijiang and D. Jiajie, "De Novo-Designed Near-Infrared Nanoaggregates for Super-Resolution Monitoring of Lysosomes in Cells, in Whole Organoids, and in Vivo.", ACS Nano, 2019, 13, (12), 1446.
8) 細胞
（RT-7)		 フローサイトメーター E. Sasabe, A. Tomomura, N. Kitamura and T. Yamamoto, "Metal nanoparticles-induced activation of NLRP3 inflammasome in human oral keratinocytes is a possible mechanism of oral lichenoid lesions.", Toxicol In Vitro., 2020, 62, 104663.
9) 細胞
（骨髄腫)		 蛍光顕微鏡 J. Xia, Y. He, B. Meng, S. Chen, J. Zhang, X. Wu, Y. Zhu, Y. Shen, X. Feng, Y. Guan, C. Kuang, J. Guo, Q. Lei, Y. Wu, G. An, G. Li, L. Qiu, F. Zhan and W. Zhou, "NEK2 induces autophagy-mediated bortezomib resistance by stabilizing Beclin-1 in multiple myeloma.", Mol Oncol, 2020, DOI: 10.1002/1878-0261.12641.
10) 細胞
（Human L2)		 蛍光顕微鏡 Q. Xu, W. Shi, P. Lv, W. Meng, G. Mao, C. Gong, Y. Chen, Y. Wei, X. He, J. Zhao, H. Han, M. Sun and K. Xiao, "Critical role of caveolin-1 in aflatoxin B1-induced hepatotoxicity via the regulation of oxidation and autophagy.", Cell Death Dis., 2020, 11(1), 6.
11) 細胞
（心筋)		 蛍光顕微鏡 L Cui, LP Zhao, JY Ye, L Yang, Y Huang, X.P. Jiang, Q. Zhang, JZ. Jia, DX. Zhang and Y. Huang, "The Lysosomal Membrane Protein Lamp2 Alleviates Lysosomal Cell Death by Promoting Autophagic Flux in Ischemic Cardiomyocytes.", Front Cell Dev Biol, 2020,DOI:10.3389/fcell.2020.00031.
12) 細胞
（IPEC-J2)		 蛍光顕微鏡 Y Yang, J Huang, J Li, H Yang and Y. Yin, "The Effects of Butyric Acid on the Differentiation, Proliferation, Apoptosis, and Autophagy of IPEC-J2 Cells..", Curr. Mol. Med., 2020, 20(4), 307.
13) 細胞 (線維芽細胞、腎臓上皮細胞) 蛍光顕微鏡 M. M. Ivanova, J. Dao, N. Kasaci, B. Adewale, J. Fikry and O. G. Alpan, "Rapid Clathrin-Mediated Uptake of Recombinant α-Gal-A to Lysosome Activates Autophagy", Biomolecules, 2020,  10(6), 837.
14)

細胞 (NHEKs)

 蛍光顕微鏡 S. Ikeoka and A. Kiso, "The Involvement of Mitophagy in the Prevention of UV-B-Induced Damage in Human Epidermal Keratinocytes ", J. Soc. Cosmet. Chem. Jpn., 2020,  54(3), 252.
15) 細胞
（HeLa）		 蛍光顕微鏡(超解像) Q. Chen, M. Hao, L. Wang, L. Li, Y. Chen, X. Shao, Z. Tian, R. A. Pfuetzner, Q. Zhong, A. T. Brunger, J. Guan and J. Diao, "Prefused lysosomes cluster on autophagosomes regulated by VAMP8", Cell Death Dis., 2021, doi:10.1038/s41419-021-04243-0.
16) 細胞
（SH-SY5Y）		 蛍光顕微鏡 Chang-ki Oh, Nima Dolatabadi, Piotr Cieplak, Maria T. Diaz-Meco, Jorge Moscat, John P. Nolan, Tomohiro Nakamura and Stuart A. Lipton, "S-Nitrosylation of p62 Inhibits Autophagic Flux to Promote α-Synuclein Secretion and Spread in Parkinson’s Disease and Lewy Body Dementia", J. Neurosci., 2022, doi:10.1523/JNEUROSCI.1508-21.2022.

よくある質問

Q

DALGreen working solutionは、どのくらい安定ですか？

A

保存できません。用時調製してください。

Q

DMSO stock solutionは、どのくらい安定ですか？

A

調製後は、-20℃で保存してください。調製後1ヶ月間安定です。
また使用量に応じて小分けし保存することをお勧めします。

Q

オートファジーに関連するタンパク質をノックダウンし評価した実績はありますか？

A

 オートファゴソーム膜形成に関与しているULK1及びULK2をノックダウンした細胞と野生株の細胞を飢餓誘導し、DALGreenにて評価した実績がございます。

評価では、ULK1/ULK2ノックダウン細胞に比べ、野生株ではDALGreenの蛍光が増大している結果が得られています。

本評価データは下記論文のSupporting Information（Fig. S5）をご参照ください。

なお、オートファジーのマーカーであるLC3-RFPとDALGreenを共染色し、殆どのPuncta（斑点）が共局在する結果も得られております。本実験データは、下記論文のFig..1をご参照ください。

H. Iwashita, H. T. Sakurai, N. Nagahora, M. Ishiyama, K. Shioji, K. Sasamoto, K. Okuma, S. Shimizu, and Y. Ueno, "Small fluorescent molecules for monitoring autophagic flux", FEBS Letters., 2018, 592, (4), 559–567.
論文へのリンクは製品HPにございます。
製品HP：DALGreen – Autophagy Detection

Q

リソソーム染色試薬との違いはありますか？

A

リソソーム染色試薬は、細胞内のリソソームに局在します。一方、DALGreenはオートファゴソームに
局在した後、オートファゴソームとリソソームが融合した際に蛍光が増大します。

そのため、リソソーム染色試薬とDLGreenで共染色した場合、リソソーム染色試薬由来の蛍光のうち、オート

リソソームの部分がDALGreenの蛍光と重なります。

本評価データは下記論文のSupporting Information（Fig. S5）をご参照ください。

H. Iwashita, H. T. Sakurai, N. Nagahora, M. Ishiyama, K. Shioji, K. Sasamoto, K. Okuma, S. Shimizu, and Y. Ueno, "Small fluorescent molecules for monitoring autophagic flux", FEBS Letters., 2018, 592, (4), 559–567.
論文へのリンクは製品HPにございます。
製品HP：DALGreen – Autophagy Detection

Q

推奨フィルターを教えてください。

A

励起フィルター：350～450 nm
蛍光フィルター：500～560 nm

なお、共焦点顕微鏡を用いて488 nm励起により蛍光観察した実績がございます。
弊社HP内の製品ページの実験例を参照ください。

Q

DALGreenの最適濃度の検討方法を教えてください。

A

試薬の特性により、試薬の濃度が高すぎたり低すぎたりすると、オートファジー誘導時と誘導していないコントロールとの差が判りにくい場合があります。
下記の情報を参考に試薬濃度の検討することをお勧めします。

細胞種によりDALGreenの最適濃度は異なります。
DALGreenを薄い濃度から(目安0.1 μmol/l）から数点段階的に振ってご検討ください。
(濃い濃度は4 μmol/L前後を目安としてください)

（参考）
小社では、HeLa, HepG2、CHO細胞にて、細胞種毎のDALGreenの最適濃度の検討を行いました。
DALGreenを下記濃度で染色し、アミノ酸不含培地にて培養してオートファジーを誘導しました。
その結果、下記の赤字の濃度条件ではコントロールとの誘導時との差が見られました。

細胞種 DALGreen 濃度
HeLa 4 µmol/l 2 µmol/l 1 µmol/l 0.5 µmol/l
HepG2 4 µmol/l 2 µmol/l 1 µmol/l 0.5 µmol/l
CHO 4 µmol/l 2 µmol/l 1 µmol/l 0.5 µmol/l

 

【HeLa細胞】
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【HepG2細胞】

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【CHO細胞】

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Q

タイムラプスイメージングを行う上で注意点はありますか？

A

測定条件設定のための予備実験を行ってください。
試薬の特性上、染色直後は初期蛍光値が高くなる傾向があるため、以下の手順を参考に予備実験およびタイムラプスイメージングを行ってください。

①予備実験
・コントロール細胞(オートファジーを誘導しない細胞)を用いる。
・取扱説明書に従い、Working soluitonで染色後、培養培地で2回洗浄する。
・通常培地を添加した後、蛍光の時間変化を観察する。
・下図の様に、染色後に細胞内の蛍光が次第に低下した後、蛍光の変化が安定してくる時間(図中 T)を確認する。
※条件は細胞の種類により変わる可能性があります。

（参考）
HeLa細胞の場合、染色後の約60分経過すると蛍光強度が安定することを確認しております（DALGreen）。

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②タイムラプスイメージング
・細胞を Working solutionで染色後、培養培地中で細胞を37℃でインキュベートする。
　※予備実験で設定した時間でインキュベートする。
　※染色後、直ぐにはオートファジー誘導は行わない。
・インキュベート後にオートファジーの誘導を開始して、タイムラプスイメージングをする。

（参考）
HeLa細胞をDALGreenで染色し、通常培地中で60分間(予備実験で設定した時間)培養後、オートファジーを誘導しました。

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Q

オートファジーにはどのような経路があり、DALGreenはどの状態を検出するのですか？

A

オートファジーには、Atg5依存的オートファジー(LC3が変化する)とLC3の変化を伴わない、Atg5非依存的オートファジーがあることが知られております*。

DALGreenはオートファゴソーム膜に取り込まれ、その後、リソソームと融合し酸性環境下で蛍光が増大します。

そのため、DALGreenはオートリソソームの状態を検出します。

*参考資料 :　新たなオートファジー機構の発見　清水重臣

▶初めて検出する細胞種や実験系の場合は、よくある問い合わせ【 DALGreenの最適濃度の検討手順】をご参照ください。

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取扱条件

規格
性状： 本品は淡黄色固体でメタノール及びジメチルスルホキシドに溶ける。
純度(HPLC)： 90.0％ 以上
取扱条件
保存条件: 冷凍,遮光 , 取扱条件: 窒素置換
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関連製品

この製品に関連する研究では、下記の関連製品も使われています。

  • オートファジー（オートリソソーム）の検出試薬 DALGreen - Autophagy Detection 同仁化学研究所

    オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬

    DAPRed – Autophagy Detection

  • オートファジー（オートリソソーム）の検出試薬 DALGreen - Autophagy Detection 同仁化学研究所

    マイトファジー検出キット

    Mitophagy Detection Kit

  • オートファジー（オートリソソーム）の検出試薬 DALGreen - Autophagy Detection 同仁化学研究所

    老化細胞検出キット

    Cellular Senescence Detection Kit – SPiDER-βGal

  • オートファジー（オートリソソーム）の検出試薬 DALGreen - Autophagy Detection 同仁化学研究所

    細胞増殖/細胞毒性アッセイキット

    Cell Counting Kit-8

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オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬 DAPGreen - Autophagy Detection 同仁化学研究所DAPGreen – Autophagy Detection

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

DAPGreen – Autophagy Detection

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  • 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
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オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬

  • 製品コード
    D676　 DAPGreen – Autophagy Detection
容　量 メーカー希望
小売価格		 富士フイルム
和光純薬
5 nmol ￥40,900 340-09291

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よくある質問の「DAPGreenの最適濃度の検討方法を教えてください」
をご覧ください。

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  • 取扱説明書 オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬 DAPGreen - Autophagy Detection 同仁化学研究所 日本語
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  • 取扱説明書 オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬 DAPGreen - Autophagy Detection 同仁化学研究所 English
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技術情報

技術情報の目次

  • 原理
  • 操作は試薬の添加だけ
  • 検出試薬の概要
  • LC3との高い相関
  • Lamp1との共染色
  • フローサイトでの定量解析
  • プレートリーダーでの定量解析
  • 応用例：蛍光顕微鏡での定量解析
  • DAPGreenの励起、蛍光スペクトル

原理

 

オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬 DAPGreen - Autophagy Detection 同仁化学研究所
オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬 DAPGreen - Autophagy Detection 同仁化学研究所

オートファゴソーム膜が形成される際に、DAPGreenは膜内に取り込まれ、脂溶性環境下に応答し蛍光が増大します。なお、オートファジーマーカーのLC3 を指標とした検出法とも高い相関性が得られています。

技術や使用製品に関する補足

グルタミン代謝とオートファジー

グルタミナーゼの安定化を介してオートファジーとグルタミノリシスを促進するタンパク質に関する報告例を紹介！

その他、疾患と細胞内代謝指標との関連性をマップでわかりやすく紹介しています。

オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬 DAPGreen - Autophagy Detection 同仁化学研究所

参考文献

参考文献を表示する

 

文献No. 対象サンプル 装置    引用（リンク）
1) 細胞
（HeLa, MEF）		 蛍光顕微鏡

H. Iwashita, H. T. Sakurai, N. Nagahora, M. Ishiyama, K. Shioji, K. Sasamoto, K. Okuma, S. Shimizu, and Y. Ueno, "Small fluorescent molecules for monitoring autophagic flux.", FEBS Letters., 2018, 592, (4), 559–567.
2) 細胞
（HepG2; Huh-7）

蛍光顕微鏡;

フローサイトメーター

 L. Hu, T. Zhang, D. Liu, G. Guan, J. Huang, P. Proksch, X. Chen and W. Lin, "Notoamide-type alkaloid induced apoptosis and autophagy via a P38/JNK signaling pathway in hepatocellular carcinoma cells", RSC Adv., 2019, 9, 19855.
3) 細胞
（HepG2）		 蛍光顕微鏡

Q. Chu, S. Zhang, M. Chen, W. Han, R. Jia, W. Chen and X. Zheng, "Cherry Anthocyanins Regulate NAFLD by Promoting Autophagy Pathway", Oxid Med Cell Longev., 2019,DOI:10.1155/2019/4825949.
4) 細胞
（HLMVEC)		 蛍光顕微鏡

K. Koike, E. V. Berdyshev, A. M. Mikosz, I. A. Bronova, A. S. Bronoff, J. P. Jung, E. L. Beatman, K. Ni, D. Cao, A. K. Scruggs, K. A. Serban and I. Petrache, "Role of Glucosylceramide in Lung Endothelial Cell Fate and Emphysema", Am. J. Respir. Crit. Care Med., 2019,DOI:10.1164/rccm.201812-2311OC.
5) 細胞
（HeLa)		 蛍光顕微鏡

F. Hongbao,Y. Shankun, C. Qixin, L. Chunyan, C. Yuqi, G. Shanshan, B. Yang, T. Zhiqi, L. Z. Amanda, T. Takanori, C.Yuncong, G. Zijian, H. Weijiang and D. Jiajie , "De Novo-Designed Near-Infrared Nanoaggregates for Super-Resolution Monitoring of Lysosomes in Cells, in Whole Organoids, and in Vivo.", ACS Nano, 2019, 13, (12), 1446.
6) 細胞
（HeLa; A375)

フローサイトメーター

B. Yang, L. Ding, Y. Chen and J. Shi, "Augmenting Tumor-Starvation Therapy by Cancer Cell Autophagy Inhibition", Adv. Sci., 2020,DOI:10.1002/advs.201902847.
7) 細胞
（PC12)

蛍光顕微鏡(超解像)

Y. Tan, L. Yin, Z. Sun, S. Shao, W. Chen, X. Man,Y. Du and Y. Chen, "Astragalus polysaccharide exerts anti-Parkinson via activating the PI3K/AKT/mTOR pathway to increase cellular autophagy level in vitro.", Int. J. Biol. Macromol., 2020, DOI:10.1016/j.ijbiomac.2020.02.282.
8) 細胞
（Wild type Hepa 1-6)

蛍光顕微鏡

(ImageJで数値化)

Z. Peng, Y. Liao, X. Wang, L. Chen, L. Wang, C. Qin, Z. Wang, M. Cai, J. Hu, D. Li,P. Yao, A. K. Nüssler, L. Liu and W. Yang, "Heme oxygenase-1 regulates autophagy through carbon-oxygen to alleviate deoxynivalenol-induced hepatic damage., Arch. Toxicol., 2020, 94(2), 573.
9) 細胞
（マウス皮膚線維芽細胞)

フローサイトメーター

J. Kim, W.Y.Chee, N. Yabuta, K. Kajiwara, S. Nada and M. Okada, "Atg5-mediated autophagy controls apoptosis/anoikis via p53/Rb pathway in naked mole-rat fibroblasts", Biochem. Biophys. Res. Commun., 2020, 22, DOI:10.1016/j.bbrc.2020.05.083.
10) 細胞
（HeLa)

蛍光顕微鏡(超解像)

Q. Chen, M. Hao, L. Wang, L. Li, Y. Chen, X. Shao, Z. Tian, R. A. Pfuetzner, Q. Zhong, A. T. Brunger, J. Guan and J. Diao, "Prefused lysosomes cluster on autophagosomes regulated by VAMP8", 2021, doi:10.1038/s41419-021-04243-0.

よくある質問

Q

DAPGreen working solutionは、どのくらい安定ですか？

A

DAPGreen working solutionの保存はできません。用時調製してください。

Q

DAPGreenのDMSO stock solutionは、どのくらい安定ですか？

A

DAPGreenのDMSO stock solutionは、調製後、-20℃、遮光下で保存してください。調製後1ヶ月間安定です。
また、使用量に応じて小分けし保存することをお勧めします。

Q

推奨の励起・蛍光フィルターを教えてください。

A

励起フィルター：425～475 nm
蛍光フィルター：500～560 nm

なお、共焦点顕微鏡を用いて488 nm励起により蛍光観察した実績がございます。
弊社HP内の製品ページの実験例を参照ください。

Q

タイムラプスイメージングを行う上で注意点はありますか？

A

測定条件設定のための予備実験を行ってください。
試薬の特性上、染色直後は初期蛍光値が高くなる傾向があるため、以下の手順を参考に予備実験およびタイムラプスイメージングを行ってください。

①予備実験
・コントロール細胞(オートファジーを誘導しない細胞)を用いる。
・取扱説明書に従い、Working soluitonで染色後、培養培地で2回洗浄する。
・通常培地を添加した後、蛍光の時間変化を観察する。
・下図の様に、染色後に細胞内の蛍光が次第に低下した後、蛍光の変化が安定してくる時間(図中 T)を確認する。
※条件は細胞の種類により変わる可能性があります。

（参考）
HeLa細胞の場合、染色後の約60分経過すると蛍光強度が安定することを確認しております（DAPGreen）。

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②タイムラプスイメージング
・細胞を Working solutionで染色後、培養培地中で細胞を37℃でインキュベートする。
　※予備実験で設定した時間でインキュベートする。
　※染色後、直ぐにはオートファジー誘導は行わない。
・インキュベート後にオートファジーの誘導を開始して、タイムラプスイメージングをする。

（参考）
HeLa細胞をDAPGreenで染色し、通常培地中で60分間(予備実験で設定した時間)培養後、オートファジーを誘導しました。

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Q

DAPGreenの最適濃度の検討方法を教えてください。

A

試薬の特性により、試薬の濃度が高すぎたり低すぎたりすると、オートファジー誘導時と
誘導していないコントロールとの差が判りにくい場合があります。
下記の情報を参考に試薬濃度の検討することをお勧めします。

細胞種によりDAPGreenの最適濃度は異なります。
DAPGreenを薄い濃度から(目安0.05 μmol/l）から数点段階的に振って
ご検討ください(濃い濃度は1 μmol/l前後を目安としてください)。

（参考）
小社では、HeLa, HepG2、CHO細胞にて、細胞種毎のDAPGreenの最適濃度の検討を行いました。
DAPGreenを下記濃度で染色し、アミノ酸不含培地にて培養し、オートファジーを誘導しました。
その結果、下記の赤字の濃度条件ではコントロールとの差が見られました。

細胞種 検討濃度
　HeLa　 　0.4 µmol/l,　 　0.2 µmol/l,　 　0.1 µmol/l,　 　0.05 µmol/l　
　HepG2　 　0.4 µmol/l, 　0.2 µmol/l, 　0.1 µmol/l, 　0.05 µmol/l
　CHO　 　0.4 µmol/l, 　0.2 µmol/l, 　0.1 µmol/l, 　0.05 µmol/l

 

【HeLa細胞】

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【HepG2細胞】

オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬 DAPGreen - Autophagy Detection 同仁化学研究所

 

【CHO細胞】

オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬 DAPGreen - Autophagy Detection 同仁化学研究所

Q

プレートリーダーでの定量解析の測定条件を教えてください。

A

HeLa細胞を用いた測定例は下記となります。

DAPGreenで染色後のHeLa細胞を、アミノ酸不含培地にて0、2、4、6時間培養し、プレートリーダーにて検出

<操作>

1) 透明底のブラックプレートに細胞を播種　（HeLa cell, 1.6×10＾4 cells/well, 100 µl/well）

2) 一晩培養（37℃, 5%CO2）

3) 上清を除き培地で調整したWorking solution(DAPGreen：0.1 µmo/l）を100 µl添加

4) 37℃で30分間インキュベート（37℃, 5%CO2）

5) 培地で洗浄(100 µl×2回)

6) 飢餓培地(富士フィルム和光純薬, code:048-33575)を添加(100 µl)

7) 37℃で各時間インキュベート

8) プレートリーダー(TECAN,infinite pro M200)で測定(Ex/Em=450/530nm)
　　 (0minはHBSSに置換して測定)

<結果>

オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬 DAPGreen - Autophagy Detection 同仁化学研究所<検出条件>　波長 ：Ex. 450 nm / Em. 535 nm

飢餓培養を開始してから2時間後には、コントロールより約3.5倍強い蛍光を確認した。

Q

オートファジーにはどのような経路があり、 DAPGreenはどの状態を検出するのですか？

A

オートファジーには、Atg5依存的オートファジー(LC3が変化する)とLC3の変化を伴わない、Atg5非依存的オートファジーがあることが知られております*。

DAPGreenはオートファゴソーム膜に取り込まれ疎水環境下で蛍光を発し、オートファゴソームの状態を検出します。

*参考資料 :　新たなオートファジー機構の発見　清水重臣

▶初めて検出する細胞種や実験系の場合は、よくある問い合わせ【 DAPGreenの最適濃度の検討手順】をご参照ください。

オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬 DAPGreen - Autophagy Detection 同仁化学研究所 オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬 DAPGreen - Autophagy Detection 同仁化学研究所

取扱条件

規格
性状： 本品はメタノール及びジメチルスルホキシドに溶ける。
純度(HPLC)： 90.0％ 以上
取扱条件
保存条件: 冷凍,遮光 , 取扱条件: 窒素置換
SDSダウンロード
オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬 DAPGreen - Autophagy Detection 同仁化学研究所

関連製品

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  • オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬 DAPGreen - Autophagy Detection 同仁化学研究所

    オートファジー（オートリソソーム）の検出試薬

    DALGreen – Autophagy Detection

  • オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬 DAPGreen - Autophagy Detection 同仁化学研究所

    マイトファジー検出キット

    Mitophagy Detection Kit

  • オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬 DAPGreen - Autophagy Detection 同仁化学研究所

    老化細胞検出キット

    Cellular Senescence Detection Kit – SPiDER-βGal

  • オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬 DAPGreen - Autophagy Detection 同仁化学研究所

    細胞毒性測定キット

    Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST

オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬 DAPRed – Autophagy Detection 同仁化学研究所

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬 DAPRed - Autophagy Detection 同仁化学研究所DAPRed – Autophagy Detection

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

DAPRed – Autophagy Detection

オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬 DAPRed - Autophagy Detection 同仁化学研究所

  • 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
  • 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
  • 細胞機能解析
  • オートファジー

オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬

  • 製品コード
    D677　 DAPRed – Autophagy Detection
容　量 メーカー希望
小売価格		 富士フイルム
和光純薬
5 nmol ￥39,800 340-09551

オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬 DAPRed - Autophagy Detection 同仁化学研究所 DAPRedの最適濃度の検討については、
よくある質問の「DAPRedの最適濃度の検討方法を教えてください」
をご覧ください。

  • オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬 DAPRed - Autophagy Detection 同仁化学研究所
試験成績書

SDSダウンロード

  • ご購入方法
  • お問い合わせ

マニュアル

  • 取扱説明書 日本語
    オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬 DAPRed - Autophagy Detection 同仁化学研究所
  • Manual English
    オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬 DAPRed - Autophagy Detection 同仁化学研究所

技術情報

原理

オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬 DAPRed - Autophagy Detection 同仁化学研究所

オートファゴソーム膜が形成される際に、DAPRedは膜内に取り込まれ、脂溶性環境下に応答し蛍光が増大します。なお、オートファジーマーカーのLC3 を指標とした検出法とも高い相関性が得られています。

オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬 DAPRed - Autophagy Detection 同仁化学研究所

技術や使用製品に関する補足

グルタミン代謝とオートファジー

グルタミナーゼの安定化を介してオートファジーとグルタミノリシスを促進するタンパク質に関する報告例を紹介！

その他、疾患と細胞内代謝指標との関連性をマップでわかりやすく紹介しています。

オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬 DAPRed - Autophagy Detection 同仁化学研究所

参考文献

参考文献を表示する

 

文献No. 対象サンプル 装置    引用（リンク）
1) 細胞
（HUVEC）		 蛍光顕微鏡 X. Chen, X. Yan, J. Liu and L. Zhang, " Chaiqi decoction ameliorates vascular endothelial injury in metabolic syndrome by upregulating autophagy.", Am. J. Transl. Res., 2020,12(9), 4902.
2) 細胞
（HeLa）		 蛍光顕微鏡 H. Fang , S. Geng, M. Hao, Q. Chen, M. Liu, C. Liu, Z. Tian, C. Wang, T. Takebe, J-L Guan, Y. Chen, Z. Guo, W. He and J. Diao, "Simultaneous Zn2+ tracking in multiple organelles using super-resolution morphology-correlated organelle identification in living cells ", Nat Commun, 2021, 12(1), 109. 10.1016/j.envpol.2019.07.105.
3) 細胞
（HCT116; HCT8）		 蛍光顕微鏡 H. Sun, R. Wang, Y. Liu, H. Mei and X. Liu , "USP11 induce resistance to 5-Fluorouracil in Colorectal Cancer through activating autophagy by stabilizing VCP", J Cancer , 2021, 12(8), 2317.
4) 細胞
（MEF)		 蛍光顕微鏡 M. Yagi, T. Toshima, R. Amamoto, Y. Do, H. Hirai, D. Setoyama, D. Kang and T. Uchiumi, "Mitochondrial translation deficiency impairs NAD+-mediated lysosomal acidification", EMBO J, 2021, doi:10.15252/embj.2020105268.
5) 細胞
（SH-SY5Y)		 蛍光顕微鏡 Chang-ki Oh, Nima Dolatabadi, Piotr Cieplak, Maria T. Diaz-Meco, Jorge Moscat, John P. Nolan, Tomohiro Nakamura and Stuart A. Lipton, "S-Nitrosylation of p62 Inhibits Autophagic Flux to Promote α-Synuclein Secretion and Spread in Parkinson’s Disease and Lewy Body Dementia", J. Neurosci., 2022, doi:10.1523/JNEUROSCI.1508-21.2022.

よくある質問

Q

DMSO stock solutionは、どのくらい安定ですか？

A

調製後は、-20℃、遮光下で保存してください。調製後1ヶ月間安定です。
また、使用量に応じて小分けし保存することをお勧めします。

Q

Working solutionは、どのくらい安定ですか？

A

Working solutionの保存はできません。用時調製してください。

Q

推奨の励起・蛍光フィルターを教えてください。

A

推奨フィルターは下記の通りです。
　励起フィルター：500～560 nm
　蛍光フィルター：690～750 nm
 

Q

DAPRedの最適濃度の検討方法を教えてください。

A

試薬の特性により、試薬の濃度が高すぎたり低すぎたりすると、オートファジー誘導時と誘導していないコントロールとの差が判りにくい場合があります。
下記の情報を参考に試薬濃度の検討することをお勧めします。

細胞種毎でDAPRedの最適濃度が異なります。
DAPRedを薄い濃度から(目安0.05 μmol/l）から数点段階的に振ってご検討ください(濃い濃度は0.4 μmol/lを目安としてください)。

(参考)
小社では、HeLa, HepG2、CHO細胞にて、DAPRedの最適濃度の検討を行いました。
DAPRedを下記濃度で染色し、アミノ酸不含培地にて培養し、オートファジーを誘導しました。
その結果、下記の赤字の濃度条件ではコントロールとの差が見られました。

細胞種 検討濃度
HeLa 0.4 µmol/l 0.2 µmol/l 0.1 µmol/l 0.05 µmol/l
HepG2 0.4 µmol/l 0.2 µmol/l 0.1 µmol/l 0.05 µmol/l
CHO 0.4 µmol/l 0.2 µmol/l 0.1 µmol/l 0.05 µmol/l

オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬 DAPRed - Autophagy Detection 同仁化学研究所

オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬 DAPRed - Autophagy Detection 同仁化学研究所

オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬 DAPRed - Autophagy Detection 同仁化学研究所

Q

オートファジーにはどのような経路があり、 DAPRedはどの状態を検出するのですか？

A

オートファジーには、Atg5依存的オートファジー(LC3が変化する)とLC3の変化を伴わない、Atg5非依存的オートファジーがあることが知られております*。

DAPRedはオートファゴソーム膜に取り込まれ疎水環境下で蛍光を発し、オートファゴソームの状態を検出します。

*参考資料 :　新たなオートファジー機構の発見　清水重臣

▶初めて検出する細胞種や実験系の場合は、よくある問い合わせ【 DAPRedの最適濃度の検討手順】をご参照ください。

オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬 DAPRed - Autophagy Detection 同仁化学研究所 オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬 DAPRed - Autophagy Detection 同仁化学研究所

取扱条件

規格
性状： 本品は赤褐色固体でメタノール及びジメチルスルホキシドに溶ける。
純度(HPLC)： 93.0％ 以上
取扱条件
保存条件: 冷蔵,遮光
SDSダウンロード
オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬 DAPRed - Autophagy Detection 同仁化学研究所

関連製品

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    脂肪滴測定キット

    Lipid Droplet Assay Kit – Blue

グルコース測定キット Glucose Assay Kit-WST 同仁化学研究所

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

グルコース測定キット Glucose Assay Kit-WST 同仁化学研究所Glucose Assay Kit-WST

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

Glucose Assay Kit-WST

グルコース測定キット Glucose Assay Kit-WST 同仁化学研究所

  • 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
  • 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
  • 細胞機能解析
  • 細胞内代謝

グルコース測定キット

  • 細胞培養上清のグルコースを測定可能
  • マイクロプレートを使った多検体処理が可能
  • 製品コード
    G264　 Glucose Assay Kit-WST
容　量 メーカー希望
小売価格		 富士フイルム
和光純薬
50 tests ￥19,900 342-09413
200 tests ￥41,900 346-09411
キット内容
50 tests ・Dye Mixture
・Glucose Standard
・Enzyme
・Assay Buffer
・Reconstitution Buffer		 ×1
150 μl×1
×1
3.5 ml×1
350 μl×1
200 tests ・Dye Mixture
・Glucose Standard
・Enzyme
・Assay Buffer
・Reconstitution Buffer		 ×1
600 μl×1
×1
14 ml×1
1.4 ml×1

  • グルコース測定キット Glucose Assay Kit-WST 同仁化学研究所
試験成績書

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  • ご購入方法
  • お問い合わせ

マニュアル

  • 取扱説明書 日本語
    グルコース測定キット Glucose Assay Kit-WST 同仁化学研究所
  • Manual English
    グルコース測定キット Glucose Assay Kit-WST 同仁化学研究所

Glucose Assay Kit-WST の使い方

技術情報

グルコースの検出原理

本キットは、グルコース量に応じ発色したWSTホルマザンを吸光度測定することで、細胞培養上清＊のグルコースを検出することができます。またキットにはグルコース標準液が含まれており、標準曲線を作成しサンプル中のグルコース濃度を測定することができます。

グルコース測定キット Glucose Assay Kit-WST 同仁化学研究所
*細胞培養上清以外のサンプルについては、よくある質問　培養上清以外で実績のあるサンプルを教えてください。をご参照ください。

技術や使用製品に関する補足

グルコース測定キット Glucose Assay Kit-WST 同仁化学研究所学会発表ポスター

WSTを用いた細胞の代謝解析

グルコース測定キット Glucose Assay Kit-WST 同仁化学研究所

グルコース及び乳酸の測定例

グルコーストランスポーター阻害剤である Phloretin をJurkat 細胞に加えた際の代謝活性の変化をGlucose Assay Kit-WST 及びLactate Assay Kit-WST にて確認しました。

グルコース測定キット Glucose Assay Kit-WST 同仁化学研究所

技術や使用製品に関する補足

本キット使用時の注意点：細胞数の補正をお勧めします。

マイクロプレートを用いた細胞の解析では、得られる結果がウェル中の細胞数によって変化する場合があります。その際には、細胞数のカウントやトータルタンパク質量の確認により、得られた測定値の補正（ノーマライゼーション）が必要となります。本キットでは、試薬を細胞培養液に添加するだけで、細胞内の核を染色し得られる蛍光強度から、細胞数を簡便に評価することができます。
細胞数ノーマライゼーションキットはこちらから

グルコース測定キット Glucose Assay Kit-WST 同仁化学研究所

参考文献

参考文献を表示する

 

文献No. 対象サンプル 引用（リンク）
1) 血清
（マウス）		 M. Shinohara, Y. Tashiro, M. Shinohara, J. Hirokawa, K. Suzuki, M. O. Takeya, M. Mukouzono, S. Takeda, T. Saito, A. Fukumori, T. C. Saido, R. Morishita and N. Sato, "Increased levels of Aβ42 decrease the lifespan of ob/ob mice with dysregulation of microglia and astrocytes”, FASEB J., 2019,DOI: 10.1096/fj.201901028RR
2) 微生物
（Streptomyces albulus ）		 K. Yamanaka, Y. Hamano and T. Oikawa, "Enhancement of metabolic flux toward ε-poly-l-lysine biosynthesis by targeted inactivation of concomitant polyene macrolide biosynthesis in Streptomyces albulus.”, J. Biosci. Bioeng., 2020,DOI: 10.1016/j.jbiosc.2019.12.002
3) 細胞
（HCT116）

K. Ohshima, S. Nojima, S. Tahara, M. Kurashige, K. Kawasaki, Y. Hori, M. Taniguchi, Y. Umakoshi, D. Okuzaki, N. Wada, J. Ikeda, E. Fukusaki and E. Morii, "Serine racemase enhances growth of colorectal cancer by producing pyruvate from serine”, Nat Metab, 2020, 2(1), 81
4) 細胞
（P388白血病）

T. Matsuo, Y. Konya, E. Hirayama and Y. Sadzuka , "2-Deoxy-D-glucose enhances the anti-cancer effects of idarubicin on idarubicin-resistant P388 leukemia cells”, Oncol Lett , 2020, 20(1), 962-966
5) 細胞
（マウス:精子）

M. Hashimoto, S. Kimura, C. Kanno, Y. Yanagawa, T. Watanabe, J. Okabe, E. Takahashi, M. Nagano and H. Kitamura, "Macrophage ubiquitin‑specific protease 2 contributes to motility, hyperactivation, capacitation, and in vitro fertilization activity of mouse sperm”, Cellular and Molecular Life Sciences, 2020, doi: 10.1007/s00018-020-03683-9
6) 細胞
（マクロファージ）

N. Saeki and Y. Imai, "Reprogramming of synovial macrophage metabolism by synovial fbroblasts under infammatory conditions ”, Cell Commun Signal, 2020, 18, 188

　＊細胞培養上清以外のサンプルについては、よくある質問  細胞培養上清以外で実績のあるサンプルを教えてください。をご確認ください。

よくある質問

Q

測定可能なサンプル数を教えて下さい。

A

検量線の作成およびサンプルの測定をそれぞれn=3で行った場合、下記表に記載のサンプル数を測定頂けます。

グルコース測定キット Glucose Assay Kit-WST 同仁化学研究所
※検量線作成：8点（0, 0.00785, 0.0157, 0.0313, 0.0625, 0.125, 0.25, 0.5 mmol/l）をn=3で評価。

グルコース測定キット Glucose Assay Kit-WST 同仁化学研究所
Glucose standard solutionとサンプルのレイアウト例(n=3)

Q

450 nm以外の吸収フィルターで測定できますか？

A

490 nmのフィルターでも使用できます。
ただし、吸光度の値は450 nmで測定した場合よりも低くなります。

Q

細胞培養上清以外で実績のあるサンプルを教えてください。

A

細胞内のグルコースを測定した実績がございます。
操作の詳細は、よくある質問「細胞内グルコース測定はできますか？」をご参照ください。
その他のサンプルについては実績がございません。

Q

細胞内のグルコース測定はできますか？

A

細胞内グルコース測定は可能です。
「0.1% Triton X-100 水溶液」と「限外ろ過膜フィルター(分画分子量：10K)」が必要です。
下記のサンプル調製手順を参照ください。

(1) 細胞*1を1.5 mlマイクロチューブに回収する。
※測定に必要な細胞数は、細胞種により検討が必要です。HepG2細胞およびJurkat細胞での
    測定実績を下記図に示しておりますので参照ください。
(2) 300 x gで5分間遠心し、上澄みを除去する。
(3) 冷PBS 300 µlを加え、ピペッティングにより懸濁後、300 x gで5分間遠心し、上澄みを除去する。
(4) 細胞溶解液*2(0.1% Triton X-100 水溶液)を250 µlを加え、ピペッティングにより細胞を溶解した後、
12,000 x gで5分間遠心する。
(5) 操作(4)の上清200 µlを限外ろ過膜フィルター(分画分子量：10K)に移し、12,000x gで10分間遠心する。
※測定用サンプルはn=3で測定する場合、合計150 µl以上は必要です(1ウェルあたり50 µl×3ウェル分)。
※遠心後の濾液が150 µl以上ない場合は、遠心時間を延長して下さい。
(6) 操作(5)で得られた濾液を測定サンプルとする。
その後、キット付属の取扱説明書に従い、グルコース濃度を測定する。
※測定試料は、検量線範囲内(0-0.5 mmol/l)に入るように適宜細胞溶解液で希釈し、測定に用いて下さい。

*10.02 mmol/l以上のグルコースを検出するためにはHepG2細胞の場合、1×105 cells以上、
 Jurkat細胞の場合、2×106 cells以上必要。
*2細胞溶解液にSDSを含むと発色を阻害するため、SDSを含むバッファーの使用はできません。

グルコース測定キット Glucose Assay Kit-WST 同仁化学研究所 グルコース測定キット Glucose Assay Kit-WST 同仁化学研究所

Q

2-Deoxy-D-glucoseも検出されますか？

A

本キットでは、2-Deoxy-D-glucoseもグルコースとして検出されます。

Q

L-Glucoseの測定はできますか？

A

本製品はβ-D-Glucose測定用となりますので、L-Glucoseの測定はできません。

Q

Working solutionはどのくらい安定ですか？

A

Working solutionは保存できないので、用時調製して下さい。
Working solutionは光に不安定なため、調製後は遮光して下さい。遮光下室温にて4時間安定です。
（Working solutionを光に暴露させると溶液の色が赤色から橙色に変化し、バックグラウンドが上昇します）

Q

還元物質を含むサンプルは測定できますか？

A

サンプル中に還元性の物質が含まれると、色素（WST）が誤発色して正確なグルコース濃度を測定できません。
還元性を持つ薬剤を培地に添加して実験を行う場合は、バックグラウンドコントロールとして「細胞を含まない培地」＋「薬剤のみ」を同時に評価し、検量線およびサンプルの吸光度から試薬ブランクとして差し引いてください。

Q

発色反応が進まない場合の原因を教えて下さい。

A

測定試料に含まれるグルコース濃度が、0.02 mmol/lより低い可能性があります。
グルコース濃度が0.02 mmol/l以下の測定試料は本キットでは定量できませんので、LC-MSなど他の方法をご検討下さい。
なお、測定試料を希釈している場合は、希釈倍率を下げ、グルコース濃度を定量可能範囲以上に調整してください。

Q

測定試料は保存できますか?

A

保存できます。
細胞培養上清サンプルの場合、冷凍(-20℃)で３週間、細胞ライセートサンプルの場合は、冷凍(-20℃)で1ヶ月保存可能であることを確認しております。
ただし、細胞ライセートサンプルの場合は、除タンパク処理 *を行って下さい。
( *よくある質問「細胞内のグルコース測定はできますか？」操作5)の溶液を保存してください。)

グルコース測定キット Glucose Assay Kit-WST 同仁化学研究所 グルコース測定キット Glucose Assay Kit-WST 同仁化学研究所

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷蔵,遮光 , 取扱条件: 吸湿注意
SDSダウンロード
グルコース測定キット Glucose Assay Kit-WST 同仁化学研究所

関連製品

この製品に関連する研究では、下記の関連製品も使われています。

  • グルコース測定キット Glucose Assay Kit-WST 同仁化学研究所

    細胞数ノーマライゼーションキット

    Cell Count Normalization Kit

  • グルコース測定キット Glucose Assay Kit-WST 同仁化学研究所

    乳酸測定キット

    Lactate Assay Kit-WST

  • グルコース測定キット Glucose Assay Kit-WST 同仁化学研究所

    ミトコンドリア膜電位検出キット

    JC-1 MitoMP Detection Kit

  • グルコース測定キット Glucose Assay Kit-WST 同仁化学研究所

    老化細胞検出キット

    Cellular Senescence Detection Kit – SPiDER-βGal

グルタミン測定キット Glutamine Assay Kit-WST 同仁化学研究所

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

グルタミン測定キット Glutamine Assay Kit-WST 同仁化学研究所Glutamine Assay Kit-WST

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

Glutamine Assay Kit-WST

グルタミン測定キット Glutamine Assay Kit-WST 同仁化学研究所

  • 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
  • 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
  • 細胞機能解析
  • 細胞内代謝

グルタミン測定キット

  • 製品コード
    G268　 Glutamine Assay Kit-WST
容　量 メーカー希望
小売価格		 富士フイルム
和光純薬
100 tests ￥58,900 348-09611
キット内容
100 tests ・Dye Mixture
・Glutamine Standard　
・Enzyme　
・Assay Buffer　　　　　　　　　　
・Reconstitution Buffer　　　　
・lysis Buffer
・Glutaminase　　
・Reaction Buffer　　
・Filtration Tube　　　		 ×1
×1
×1
7.5 ml×1
750 ×l×1
25 ml×1
20 ×l×1
5 ml×1
×12

  • グルタミン測定キット Glutamine Assay Kit-WST 同仁化学研究所
試験成績書

SDSダウンロード

  • ご購入方法
  • お問い合わせ

マニュアル

  • 取扱説明書 日本語
    グルタミン測定キット Glutamine Assay Kit-WST 同仁化学研究所
  • Manual English
    グルタミン測定キット Glutamine Assay Kit-WST 同仁化学研究所
  • パンフレット グルタミン測定キット Glutamine Assay Kit-WST 同仁化学研究所
    グルタミン測定キット Glutamine Assay Kit-WST 同仁化学研究所

技術情報

グルタミンの測定原理

本キットは、グルタミン量に応じ発色したWSTホルマザンを吸光度測定することで、細胞培養液や細胞内のグルタミンを検出することができます。またキットにはグルタミン標準液が含まれており、標準曲線を作成しサンプル中のグルタミン濃度を定量することができます。

グルタミン測定キット Glutamine Assay Kit-WST 同仁化学研究所

技術や使用製品に関する補足

グルタミン測定キット Glutamine Assay Kit-WST 同仁化学研究所学会発表ポスター

WSTを用いた細胞の代謝解析

グルタミン測定キット Glutamine Assay Kit-WST 同仁化学研究所

参考文献

参考文献を表示する
文献No. 対象サンプル 引用(リンク)
1 細胞
(マクロファージ)		 N. Saeki and Y. Imai, "Reprogramming of synovial macrophage metabolism by synovial fibroblasts under inflammatory conditions ”, Cell Commun Signal, 2020, 18, 188.
2 細胞
(去勢抵抗性前立腺がん細胞)		 R. Imamura, S. Kitagawa, T. Kubo, A. Irie, T. Kariu, M. Yoneda, T. Kamba, T. Imamura, "Prostate cancer C5a receptor expression and augmentation of cancer cell proliferation, invasion, and PD‐L1 expression by C5a", Prostate, 2020, doi:10.1002/pros.24090.
3 細胞
(HSC-2; HSC-3; HeLa; HaCaT)		 S. Liu, J. Washio, S. Sato, Y. Abiko, Y. Shinohara, Y. Kobayashi, H. Otani, S. Sasaki, X. Wang and N. Takahashi, "Rewired Cellular Metabolic Profiles in Response to Metformin under Different Oxygen and Nutrient Conditions", 2022, doi:10.1016/j.snb.2021.130554.

よくある質問

Q

1キットあたり測定可能なサンプル数を教えて下さい。

A

検量線の作成およびサンプルの測定をそれぞれn=3で行った場合、96 wellプレート1枚当たり12サンプル数測定できます(検量線の測定濃度を下表の通り8点で作成した場合)。

Glutamine standard solutionとサンプルのレイアウト例(n=3)

グルタミン測定キット Glutamine Assay Kit-WST 同仁化学研究所

グルタミン測定キット Glutamine Assay Kit-WST 同仁化学研究所

注) Glutamine Assay Kit-WSTを用いてサンプル中グルタミン濃度を定量する場合、1サンプルにつき、[Glutaminase solution処理済有のサンプル(n=3)]および[Glutaminase solution処理無のサンプル(n=3)]の計6well分が必要です。

サンプル中のグルタミン濃度(mmol/l)=(Glutaminase solution処理済有)-(Glutaminase solution処理無)

 

Q

Working solutionは保存できますか？

A

 Working solutionは保存できません。用時調製して下さい。また、光に不安定であるため、調製後は遮光して下さい。

Q

D-Glutamineの定量はできますか。

A

本製品はL-Glutamine定量用となりますので、D-Glutamineの定量はできません。

Q

還元物質を含むサンプルは測定できますか。

A

サンプル中に還元性を持つ物質が含まれていると、色素WSTが誤発色して正確なグルタミン濃度の定量ができません。
培地に、還元性を持つ薬剤等を添加して実験を行う場合、バックグラウンドコントロールとして細胞を含まない培地＋薬剤のみの試薬ブランクを一緒に測定して下さい。
 

Q

測定試料は保存できますか。

A

細胞培養上清サンプルの場合、冷凍(-20℃)で1ヶ月保存可能であることを確認しています。

細胞ライセートサンプルの場合、冷凍(-20℃)で1ヶ月保存可能であることを確認しております。ただし、保存を行う前に、キット付属のFiltration Tubeにて除タンパク処理を行って下さい。

Q

サンプルが発色しません。

A

本キットで定量可能なグルタミン濃度は5 µmol/l以上です。グルタミン濃度が5 µmol/l以下の測定試料は本キットでは定量できません。
また、測定試料を希釈している場合、希釈後の測定試料に含まれているグルタミン量が5 µmol/Lよりも少ない可能性があります。
希釈倍率を下げ、測定試料の濃度を定量可能範囲以上にして下さい。
 

Q

450 nm以外の吸収フィルターで測定できますか。

A

450 nm以外では、490 nmのフィルターで使用可能です。
ただし、吸光度値は450 nmで測定した場合と比較し低くなります。（下図参照）

グルタミン測定キット Glutamine Assay Kit-WST 同仁化学研究所

 

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取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷蔵 , 取扱条件: 吸湿注意
危険・有害
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グルタミン酸測定キット Glutamate Assay Kit-WST 同仁化学研究所

发表于由

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グルタミン酸測定キット Glutamate Assay Kit-WST 同仁化学研究所Glutamate Assay Kit-WST

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

Glutamate Assay Kit-WST

グルタミン酸測定キット Glutamate Assay Kit-WST 同仁化学研究所

  • 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
  • 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
  • 細胞機能解析
  • 細胞内代謝

グルタミン酸測定キット

  • 製品コード
    G269　 Glutamate Assay Kit-WST
容　量 メーカー希望
小売価格		 富士フイルム
和光純薬
100 tests ￥53,500 345-09621
キット内容
100 tests ・Dye Mixture
・Glutamate Standard　
・Enzyme　
・Assay Buffer　　　　　　　　　　
・Reconstitution Buffer　　　　
・lysis Buffer 　
・Filtration Tube		 ×1
300 ×l×1
×1
7.5 ml×1
750 ×l×1
25 ml×1
×24

  • グルタミン酸測定キット Glutamate Assay Kit-WST 同仁化学研究所
試験成績書

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  • ご購入方法
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マニュアル

  • 取扱説明書 日本語
    グルタミン酸測定キット Glutamate Assay Kit-WST 同仁化学研究所
  • Manual English
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  • パンフレット グルタミン酸測定キット Glutamate Assay Kit-WST 同仁化学研究所
    グルタミン酸測定キット Glutamate Assay Kit-WST 同仁化学研究所

技術情報

グルタミン酸の測定原理

本キットは、グルタミン酸量に応じ発色したWSTホルマザンを吸光度測定することで、細胞培養液や細胞内のグルタミン酸を検出することができます。またキットにはグルタミン酸標準液が含まれており、標準曲線を作成しサンプル中のグルタミン酸濃度を定量することができます。

グルタミン酸測定キット Glutamate Assay Kit-WST 同仁化学研究所

技術や使用製品に関する補足

グルタミン酸測定キット Glutamate Assay Kit-WST 同仁化学研究所学会発表ポスター

WSTを用いた細胞の代謝解析

グルタミン酸測定キット Glutamate Assay Kit-WST 同仁化学研究所

フェロトーシス研究におけるグルタミン酸とグルタチオンの測定例

エラスチン処理により、シスチン/ グルタミン酸トランスポーター(xCT) を阻害すると、鉄依存性の細胞死であるフェロトーシスが誘導されることが知られています。エラスチン処理したA549 細胞において、グルタミン酸放出量および細胞内グルタチオン量を確認したところ、エラスチン処理した細胞はグルタミン酸放出量が減少し、シスチンの取り込みが阻害されたことにより、グルタチオン量が減少する結果が得られました。

グルタミン酸測定キット Glutamate Assay Kit-WST 同仁化学研究所グルタミン酸測定キット Glutamate Assay Kit-WST 同仁化学研究所

グルタミン酸測定キット Glutamate Assay Kit-WST 同仁化学研究所

技術や使用製品に関する補足

フェロトーシス研究において、脂質過酸化を蛍光イメージングで検出する試薬「Liperfluo」を使用した論文報告が増えています。

参考文献

参考文献を表示する
文献No. 対象サンプル 引用(リンク)
1 食品
(出汁、味噌汁、醤油、トマトジュース)		 K. Danchana, H. Iwasaki, K. Ochiai, H. Namba, T. Kaneta, "Determination of glutamate using paper-based microfluidic devices with colorimetric detection for food samples", Microchem. J., 2022, doi:10.1016/j.microc.2022.107513.
2 細胞培養上清
(骨髄由来抑制細胞)		 Z. Xie, T. Kawasaki, H. Zhou, D. Okuzaki, N. Okada and M. Tachbana, "Targeting GGT1 Eliminates the Tumor-Promoting Effect and Enhanced Immunosuppressive Function of Myeloid-Derived Suppressor Cells Caused by G-CSF", Front. Pharmacol., 2022, doi:10.3389/fphar.2022.873792.

よくある質問

Q

1キットあたり測定可能なサンプル数を教えて下さい。

A

検量線およびサンプルの測定をそれぞれn=3で行った場合、96ウェルプレートで24サンプルを測定できます。
(検量線の測定濃度を下表の通り、8点で作成した場合)

Glutamate standard solutionとサンプルのレイアウト例(n=3)

グルタミン酸測定キット Glutamate Assay Kit-WST 同仁化学研究所
 

Q

Working solutionは保存できますか？

A

Working solutionは保存できません。用時調製して下さい。また、光に不安定であるため、調製後は遮光して下さい。

※Working solutionは調製後、遮光下であれば室温で4時間安定です。 光に暴露させた場合、溶液の色が褐色味を帯びてきます。

Q

D-Glutamateの定量はできますか。

A

本製品はL-Glutamate定量用のため、D-Glutamateの定量はできません。

Q

還元物質を含むサンプルは測定できますか。

A

サンプル中に還元性を持つ物質が含まれていると、色素WSTが誤発色して正確なグルタミン酸濃度の定量ができません。
培地に、還元性を持つ薬剤等を添加して実験を行う場合、バックグラウンドコントロールとして細胞を含まない培地＋薬剤のみの試薬ブランクを一緒に測定して下さい。
 

Q

測定試料は保存できますか。

A

細胞培養上清サンプルの場合、冷凍(-20℃)で1ヶ月保存可能であることを確認しております。

細胞ライセートサンプルの場合、冷凍(-20℃)で1ヶ月保存可能であることを確認しております。ただし、保存を行う前に、キット付属のFiltration Tubeにて除タンパク処理を行って下さい。

 

Q

サンプルのウェルが発色しません。

A

本キットで定量可能なグルタミン酸濃度は5 µmol/l以上です。グルタミン酸濃度が5 µmol/l以下の測定試料は本キットでは定量できません。
また、測定試料を希釈している場合、希釈後の測定試料に含まれているグルタミン酸量が5 µmol/lよりも少ない可能性があります。
希釈倍率を下げ、測定試料の濃度を定量可能範囲以上にして下さい。
 

Q

450 nm以外の吸収フィルターで測定できますか。

A

450 nm以外では、490 nmのフィルターで使用可能です。
ただし、吸光度値は450 nmで測定した場合と比較し低くなります。（下図参照）

グルタミン酸測定キット Glutamate Assay Kit-WST 同仁化学研究所

グルタミン酸測定キット Glutamate Assay Kit-WST 同仁化学研究所 グルタミン酸測定キット Glutamate Assay Kit-WST 同仁化学研究所

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷蔵 , 取扱条件: 吸湿注意
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関連製品

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NADP/NADPH 測定キット NADP/NADPH Assay Kit-WST 同仁化学研究所

发表于由

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NADP/NADPH 測定キット NADP/NADPH Assay Kit-WST 同仁化学研究所NADP/NADPH Assay Kit-WST

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

NADP/NADPH Assay Kit-WST

NADP/NADPH 測定キット NADP/NADPH Assay Kit-WST 同仁化学研究所

  • 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
  • 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
  • 細胞機能解析
  • 細胞内代謝

NADP/NADPH 測定キット

  • 製品コード
    N510　 NADP/NADPH Assay Kit-WST
容　量 メーカー希望
小売価格		 富士フイルム
和光純薬
100 tests ￥59,700 344-09331
キット内容
100 tests NADP/NADPH Extraction Buffer　　　　　
NADP/NADPH Control Buffer　　　　　　　
Standard Buffer　　　　　　　　　　　　　　
Assay Buffer　　　　　　　　　　　　　　　　
Dye Mixture　　　　　　　　　　　　　　　　 　　
Enzyme
Standard 　　
Filtration Tube		 20 ml ×1
20 ml ×1
10 ml ×1
5.5 ml ×1
×1
110 μl ×1
×1
×12

  • NADP/NADPH 測定キット NADP/NADPH Assay Kit-WST 同仁化学研究所
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  • お問い合わせ

マニュアル

  • 取扱説明書 日本語
    NADP/NADPH 測定キット NADP/NADPH Assay Kit-WST 同仁化学研究所
  • Manual English
    NADP/NADPH 測定キット NADP/NADPH Assay Kit-WST 同仁化学研究所

技術情報

測定原理

NADP/NADPH 測定キット NADP/NADPH Assay Kit-WST 同仁化学研究所

技術や使用製品に関する補足

NADP/NADPH 測定キット NADP/NADPH Assay Kit-WST 同仁化学研究所学会発表ポスター

WSTを用いた細胞の代謝解析

NADP/NADPH 測定キット NADP/NADPH Assay Kit-WST 同仁化学研究所

参考文献

参考文献を表示する

1) C. Henninger and G. Fritz, “Statins in anthracycline-induced cardiotoxicity: Rac and Rho, and the heartbreakers.”, Cell Death Dis. 2017, 8(1), e2564.
2) S. Mandziuk, R. Gieroba, A. Korga, W. Matysiak, B. Jodlowska-Jedrych, F. Burdan, E. Poleszak, M. Kowalczyk, L. Grzycka-Kowalczyk, E. Korobowicz, A. Jozefczyk and J. Dudka, “The differential effects of green tea on dose-dependent doxorubicin toxicity.”, Food Nutr Res., 2015, 59, 29754.
3) M. Nagaya, H. Hara, T. Kamiya and T. Adachi,"Inhibition of NAMPT markedly enhances plasma-activated medium-induced cell death in human breast cancer MDA-MB-231 cells.", Arch. Biochem. Biophys., 2019, 676, 108155.

よくある質問

Q

1キットで測定可能なサンプル数は？

A

全てのサンプルをn:3で測定した際のサンプル数の目安は下記の通りです。

  『NADP+とNADPHの総量』
または『NADPH量』の何れかを測定する場合		 『NADP+とNADPHの総量』
および『NADPH量』の両方を測定する場合
サンプル数 24サンプル 12サンプル

　※標準サンプルを2 μmol/Ⅼから段階希釈し、計8点(n:3)で検量線を1回作成した際に測定可能な実サンプル数を記載。
　　 測定を2回に分けて行う場合は、別途検量線を作成する必要があるため上記サンプル数よりも少なくなります。

Q

Filtration Tube（除タンパク質用）は別途購入できますか？

A

ご不便おかけしますが、Filtration Tubeのみの販売は行っておりません。

小社にて実績のある市販の除タンパク質用チューブをご紹介いたします。

製造メーカー：Pall Corporation

製品名：ナノセップ遠心ろ過デバイス （分画分子量：10K、色：ブルー）

Q

Working solutionはどのくらい安定ですか?

A

Working solutionは保存できません。用時調製して下さい。また、光に対して不安定なため

溶液調製後は遮光して下さい。遮光、室温で4時間安定です。

Q

サンプルが発色しない原因はありますか？

A

 測定試料中に含まれているNAD量が、本キットで定量可能な濃度(10 nmol/L)以下となっている可能性があります。

その場合は細胞数を増やして頂くか、測定試料を希釈している場合は、希釈倍率を下げて測定して下さい。

Q

測定試料は保存できますか?

A

保存できます。取扱説明書 [1.測定用サンプルの調製]の操作6)の溶液は、冷凍(-20℃)で２週間保存可能であることを確認しております。

NADP/NADPH 測定キット NADP/NADPH Assay Kit-WST 同仁化学研究所 NADP/NADPH 測定キット NADP/NADPH Assay Kit-WST 同仁化学研究所

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷蔵,遮光 , 取扱条件: 吸湿注意
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NADP/NADPH 測定キット NADP/NADPH Assay Kit-WST 同仁化学研究所

関連製品

この製品に関連する研究では、下記の関連製品も使われています。

  • NADP/NADPH 測定キット NADP/NADPH Assay Kit-WST 同仁化学研究所

    グルタチオン定量キット

    GSSG/GSH Quantification Kit

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whatman WHATMAN 疏水聚碳酸酯膜 PC膜 无PVP 孔径8um 150446150446

发表于由

whatman WHATMAN 疏水聚碳酸酯膜 PC膜 无PVP 孔径8um 150446

简要描述：

whatman WHATMAN 疏水聚碳酸酯膜 PC膜 无PVP 孔径8um 150446产品。滤膜的孔径精确、韧性好，保证了再现性和*性。Whatman滤膜孔径范围很广，从0.2μm-12μm，并有很多选择的膜过滤容器。无菌和消毒包装可用于特殊应用中，也有着色网格类型可供选择。

whatman WHATMAN 疏水聚碳酸酯膜 PC膜 无PVP 孔径8um 150446

应用：

·寄生虫学

·空气分析

·水生微生物

·荧光电子显微镜

·环境分析

·细胞生物学

·EPA检测

·燃料测试

·生物分析

产品特点：
Nuclepore聚碳酸径迹蚀刻膜由高质量的聚碳酸薄膜制成，具有孔径精确、流速快等特点，并且有着*的耐化学性和耐热性，这类膜表面光滑而平整，对提取物几乎没有吸附。这种膜还有黑色膜，背景反差大，用于荧光和其它显微镜法。
Track-Etched Polycarbonate and Polyester Membranes
径迹蚀刻聚碳酸酯膜和聚脂膜
Nuclepore Track-Etched Membranes聚碳酸酯膜
Nuclepore聚碳酸酯径迹蚀刻膜是由高品质的聚碳酸酯薄膜制成，具有孔径精确、流速快等特点。并且有着*的耐化学性和耐热性。这类膜表面光滑而平整，对提取物几乎没有吸附。

特性
不吸附蛋白和提取物，对样品无污染
良好的耐化学性和热稳定性，适用于大多数样品
低灰分、低皮重
膜表面光滑而平整，便于对截留物粒子进行观察
可提供黑色膜，用于荧光和其他纤维镜法，背景反差大

应用
荧光显微镜、生物分析、环境分析、寄生生物学、细胞培养、空气分析、EPA检验、
水体微生物学、燃烧检测。

技术参数-Nuclepore聚碳酸酯膜

产品名

聚碳酸酯

厚度

6-11μm

爆裂强度

>10 psi

净重

0.6-1mg/ cm2

原料比重

1.20g/ cm2

热封范围

230℃-275℃

zui高可耐高温

140℃

易燃性

Slow burn

灰度

0.92μg/ cm2

孔率

<15%

计算孔径

0.05-12.0μm

计算孔密度

10*5-6×10*8pore/ cm2

表面质地

平滑

透明度

半透明

折射率

1.584-1.625（双折射）

疏水

否

纤维释放

否

高温蒸汽灭菌

121℃

whatman WHATMAN 疏水聚碳酸酯膜 PC膜 无PVP 孔径8um 150446

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113516    NUC PC 8X10IN 12.0uM 25/PK

150445    NUC PC 13MM 5.0uM PVPF 100/PK

150446    NUC PC 13MM 8.0uM PVPF 100/PK

155845    NUC PC 25X80MM PVPF 5.0uM 100

170607    NUC PC 25MM GOLD 0.4uM 50/PK

订货信息-Nuclepore聚碳酸酯膜

直径（mm）

孔径（um）

货号

直径（mm）

孔径（um）

货号

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0.05

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13

0.8

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25

0.2

110606

13

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25

0.4

110607

13

3

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25

0.6

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13

5

110413

25

0.8

110609

13

8

110414

25

1

110610

13

10

110415

25

2

110611

13**

8

150446

25

3

110612

13****

0.8

800195***

25

5

110613

*AOX—适用于AOX（Adsorbable Organic Halogens）分析

**不含PVP疏水 ****Good Coated PC *50片/盒

***AERO **25片/盒

***10片/盒

 

ストレスマーカー検出試薬 ARP(Aldehyde Reactive Probe) | CAS 139585-03-8 同仁化学研究所

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ストレスマーカー検出試薬

  • 製品コード
    A305　 ARP(Aldehyde Reactive Probe)
  • CAS番号
    139585-03-8
  • 化学名
    N-(Aminooxyacetyl)-N’-biotinylhydrazine
  • 分子式・分子量
    C12H21N5O4S=331.39
容　量 メーカー希望
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10 mg ￥25,500 340-07611
  • ストレスマーカー検出試薬 ARP(Aldehyde Reactive Probe) | CAS 139585-03-8 同仁化学研究所
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技術情報

注意事項

・本製品を粉末の状態で取り出し使用する場合、性状の性質上、静電気等の要因で容器内に付着し、取り出しにくい場合があります。
・容器内に付着し、取り出せなかった粉末に関しては、使用する溶媒を容器に入れ、溶かし出して使用してください。

参考文献

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参考文献

1) R. Rago, J. Mitchen and G. Wilding, "DNA Fluorometric Assay in 96-well Tissue Culture Plates Using Hoechst 33258 after Cell Lysis by Freezing in Distilled Water", Anal. Biochem., 1990, 191, 31. 
2) K. Kubo, H. Ide, S. S. Wallace and Y. W. Kow, "A Novel, Sensitive, and Specific Assay for Abasic Sites, The Most Commonly Produced DNA Lesion", Biochemistry, 1992, 31, 3703.
3) H. Ide, K. Akamatsu, Y. Kimura, K. Michiue, K. Makino, A. Asaeda, Y. Takamori and K. Kubo, "Synthesis and Damage Specificity of a Novel Probe for the Detection of Abasic Sites in DNA", Biochemistry, 1993, 32, 8276. 
4) M. Yao and Y. W. Kow, "Strand-specific Cleavage of Mismatch-containig DNA by Deoxyinosine 3'-Endonuclease from Escherichia coli", J. Biol. Chem., 1994, 269, 31390. 
5) 岡村忠, "光によるDNAの損傷とその修復", 化学, 1994, 49, 425. 
6) 大塚栄子, "遺伝子の損傷ががんの引き金にDNAの変異と修復のメカニズムを探る", 化学, 1994, 49, 394. 
7) T. Shida, M. Noda and J. Sekiguchi, "The recognition of DNA containning AP-site by E. coli endonuclease IV(exonuclease)", Nucleic Acids Symposium Series, 1995, 34, 87. 
8) H. B. Sun, L. Qian and H. Yokota, "Detection of abasic sites on individual DNA molecules using atomic force microscopy", Anal. Chem., 2001, 73, 2229.
9) J. Nakamura, J. A. Swenberg, "Endogenous Apurinic/apyrimidinic Sites in Genomic DNA of Mammalian Tissues", Cancer Res., 1999, 59, 2522.
10) Y. W. Kow and A. Dare, "Detection of Abasic Sites and Oxidative DNA Base Damage using an ELISA-like Assay", METHODS, 2000, 22, 164.
11) L. Yan, A. Bulgar, Y. Miao, V. Mahajan, J. R. Donze, S. L. Gerson and L. Liu, "Combined Treatment with Temozolomide and Methoxyamine: Blocking Apurininc/Pyrimidinic Site Repair Coupled with Targeting Topoisomerase II", Clin. Cancer Res., 2007, 13, 1532.
12) P. D. Chastain, II, J. Nakamura, J. Swenberg and D. Kaufman, "Nonrandom AP site distribution in highly proliferative cells", FASEB J., 2006, 20(14), 2612.

取扱条件

規格
性状： 本品は、白色粉末で水に溶ける。
純度(HPLC)： 95.0％ 以上
水溶状： 試験適合
IRスペクトル： 試験適合
NMRスペクトル： 試験適合
取扱条件
保存条件: 冷凍
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ストレスマーカー検出試薬 ARP(Aldehyde Reactive Probe) | CAS 139585-03-8 同仁化学研究所

関連製品

DNAダメージ検出抗体 Anti-Nitroguanosine polyclonal antibody 同仁化学研究所

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DNAダメージ検出抗体 Anti-Nitroguanosine polyclonal antibody 同仁化学研究所Anti-Nitroguanosine polyclonal antibody

02 酸化ストレス関連試薬

Anti-Nitroguanosine polyclonal antibody

  • 酸化ストレス関連試薬
  • 酸化ストレス関連試薬

DNAダメージ検出抗体

  • 製品コード
    AB01　 Anti-Nitroguanosine polyclonal antibody
  • 化学名
    Polyclonal anti-nitroguanosine antibody
容　量 メーカー希望
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50 μg ￥66,200 348-90681
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  • プロトコル DNAダメージ検出抗体 Anti-Nitroguanosine polyclonal antibody 同仁化学研究所 ニトログアノシンを検出したい
    DNAダメージ検出抗体 Anti-Nitroguanosine polyclonal antibody 同仁化学研究所

技術情報

検出例

DNAダメージ検出抗体 Anti-Nitroguanosine polyclonal antibody 同仁化学研究所  DNAダメージ検出抗体 Anti-Nitroguanosine polyclonal antibody 同仁化学研究所

インフルエンザウイルス感染マウスの肺上皮組織切片と蛍光（Vector Red)標識抗マウス抗体によって
免疫組織染色した画像。（熊本大学医学部微生物学教室 赤池孝章教授ご提供）

下図はプレートに固相化したNO2-Guanosine結合BSAと各種の物質に対する、本抗体の反応を競合法ELISAで検定したものである。本抗体が反応する物質は濃度に依存した右下がりの曲線を与え抗体が反応していることを示している。抗体が反応しない物質に対しては、競合物質の濃度に関係なく抗体は固相化したNO2-Guanosine結合BSAに反応するためほぼ一定の値を示す。

ポリクローナル抗体の反応性（IC50）
･強く反応する(1 μmol/L)
8-NO2-guanosine, 8-NO2-guanine
･交差反応なし
guanosine, guanine, 8-OH-guanine, 3- NO2-tyrosine

使用濃度
ELISA (5 μg/mL)、免疫組織染色（10 μg/mL)

動物種
ウサギ（日本白色種）

DNAダメージ検出抗体 Anti-Nitroguanosine polyclonal antibody 同仁化学研究所

参考文献

参考文献を表示する

1) T. Akaike, S. Okamoto, T. Sawa, J. Yoshitake, F. Tamura, K. Ichimori, K. Miyazaki, K. Sasamoto and H. Maeda, "8-nitroguanosine formation in viral pneumonia and its implication for pathogenesis", Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2003, 100, 685.
2) J. Yoshitake, T. Akaike, T. Akuta, F. Tamura, T. Ogura, H. Esumi and H. Maeda, "Nitric oxide as an endogenous mutagen for Sendai virus without antiviral activity", J. Virol., 2004, 78, 8709.
3) T. Sawa, M. H. Zaki, T. Okamoto, T. Akuta, Y. Tokutomi, S. Kim-Mitsuyama, H. Ihara, A. Kobayashi, M. Yamamoto, S. Fujii, H. Arimoto and T. Akaike, "Protein S-guanylation by the biological signal 8-nitroguanosine 3',5'-cyclic monophosphate", Nat. Chem. Biol., 2007, 3, 727.
4) M. H. Zaki, S. Fujii, T. Okamoto, S. Islam, S. Khan, K. A. Ahmed, T. Sawa and T. Akaike, "Cytoprotective function of heme oxygenase 1 induced by a nitrated cyclic nucleotide formed during murine salmonellosis", J. Immunol., 2009, 182, 3746.
5) Y. Terasaki, T. Akuta, M. Terasaki, T. Sawa, T. Mori, T. Okamoto, M. Ozaki, M. Takeya and T. Akaike, "Guanine nitration in idiopathic pulmonary fibrosis and its implication for carcinogenesis", Am. J. Respir. Crit. Care. Med., 2006, 174, 665.
6) T. Sawa, M. Tatemichi, T. Akaike, A. Barbin and H. Ohshima, "Analysis of urinary 8-nitroguanine, a marker of nitrative nucleic acid damage, by high-performance liquid chromatography-electrochemical detection coupled with immunoaffinity purification: association with cigarette smoking", Free Radic. Biol. Med., 2006, 40, 711.
7) K. A. Ahmed, T. Sawa and T. Akaike, "Protein cysteine S-guanylation and electrophilic signal transduction by endogeneous nitro-nucleotides", Amino Acids, 2011, 41(1), 123.
8) T. Sawa, H. Arimoto and T. Akaike, "Regulation of redox signaling involving chemical conjugation of protein thiols by nitric oxide and electrophiles", Bioconjugate Chem., 2010, 21(7), 1121.

よくある質問

Q

ニトログアノシンは酸化ストレスの指標として使用されますが、ニトログアノシンの他に酸化ストレスマーカーとなるものはありますか？

A

酸化ストレスマーカーについてまとめた資料を作成しております。
カスタマーサポートの視点から、各酸化ストレスマーカーの特徴・測定サンプルの前処理方法などを記載しておりますので、ご参照ください。

下記URLよりダウンロード可能です。

「はじめての酸化ストレスマーカー測定プロトコル～カスタマーサポートの視点から～」

Q

この抗体を用いることで何がわかりますか？

A

8-Nitroguanosineは、一酸化窒素（NO）と活性酸素（スーパーオキサイドアニオンラジカル）によって生じる過酸化亜硝酸（パーオキシナイトライト）によってRNAがニトロ化された核酸です。
生体組織が炎症を起こすと多量のNOが産生され、多くの過酸化亜硝酸が生じて、グアノシン,デオキシグアノシンをニトロ化することが知られております。
8-Nitroguanosineの局在や量などを調べることにより、8-Nitroguanosine残基の役割や遺伝子傷害、発癌機構の解明に役立つことが期待されます。

＊ポリクローナル抗体で染色された場合、次のような確認を行なうことをお勧めします。
1.標準の8-Nitroguanineと競合させて染色されなくなること
2.Sodium hydrosulfiteなどの還元剤で試料中のニトログアノシン、ニトログアニンをアミノグアノシン、アミノグアニンに還元して染色されなくなること

Q

抗ニトログアノシン抗体はどのくらい保存できますか？

A

有効期間は設けておりませんが、希釈前の段階で冷蔵で1年使用できることを確認しております。

凍結・融解の繰り返しは劣化を早めますので、一旦解凍後は冷蔵にて保管してください。

また、希釈されますと吸着などもあり、期間の保証は出来ません。

DNAダメージ検出抗体 Anti-Nitroguanosine polyclonal antibody 同仁化学研究所 DNAダメージ検出抗体 Anti-Nitroguanosine polyclonal antibody 同仁化学研究所

取扱条件

規格
性状： 本品は、無色～淡黄色微濁液体である。
力値： 試験適合
取扱条件
保存条件: 冷凍
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関連製品

DNAダメージ検出抗体 Anti-Nitroguanosine monoclonal antibody(Clone#NO2G52) 同仁化学研究所

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DNAダメージ検出抗体 Anti-Nitroguanosine monoclonal antibody(Clone#NO2G52) 同仁化学研究所Anti-Nitroguanosine monoclonal antibody(Clone#NO2G52)

02 酸化ストレス関連試薬

Anti-Nitroguanosine monoclonal antibody(Clone#NO2G52)

  • 酸化ストレス関連試薬
  • 酸化ストレス関連試薬

DNAダメージ検出抗体

  • 製品コード
    AB02　 Anti-Nitroguanosine monoclonal antibody(Clone#NO2G52)
  • 化学名
    Monoclonal anti-nitroguanosine antibody
容　量 メーカー希望
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和光純薬
50 μg ￥78,300 341-90671
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  • プロトコル DNAダメージ検出抗体 Anti-Nitroguanosine monoclonal antibody(Clone#NO2G52) 同仁化学研究所 ニトログアノシンを検出したい
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技術情報

検出例

DNAダメージ検出抗体 Anti-Nitroguanosine monoclonal antibody(Clone#NO2G52) 同仁化学研究所

使用濃度
ELISA(1 μg/mL)、免疫染色組織(10 μg/mL)

DNAダメージ検出抗体 Anti-Nitroguanosine monoclonal antibody(Clone#NO2G52) 同仁化学研究所

図1．モノクローナル抗体NO2G52の反応性
プレートに固相化したNO2-Guanosine結合BSAと各種の物質に対する、本抗体の反応を
競合法ELISAで検定したものである。本抗体が反応する物質は濃度に依存した右下がりの
曲線を与え抗体が反応していることを示している。
モノクローナル抗体は、8位がニトロ化されたものを幅広く認識し、正常なヌクレオシド
や核酸塩基には反応しない。抜群の特異性と高力価を有している。

             ＜無刺激＞                    LPS+INF-γ刺激 　　              L-NMMA投与

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図2. RAW264.7細胞(murine macrophage cell line)における内因性のグアニンのニトロ化
蛍光標識したAnti-Nitroguanosine monoclonal antibody(Clone#NO2G52)にて検出。
（データ提供：熊本大学医学部 教授 赤池孝章先生）

DNAダメージ検出抗体 Anti-Nitroguanosine monoclonal antibody(Clone#NO2G52) 同仁化学研究所

参考文献

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1) T. Akaike, S. Okamoto, T. Sawa, J. Yoshitake, F. Tamura, K. Ichimori, K. Miyazaki, K. Sasamoto and H. Maeda, "8-nitroguanosine formation in viral pneumonia and its implication for pathogenesis", Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2003, 100, 685.
2) J. Yoshitake, T. Akaike, T. Akuta, F. Tamura, T. Ogura, H. Esumi and H. Maeda, "Nitric oxide as an endogenous mutagen for Sendai virus without antiviral activity", J. Virol., 2004, 78, 8709.
3) T. Sawa, M. H. Zaki, T. Okamoto, T. Akuta, Y. Tokutomi, S. Kim-Mitsuyama, H. Ihara, A. Kobayashi, M. Yamamoto, S. Fujii, H. Arimoto and T. Akaike, "Protein S-guanylation by the biological signal 8-nitroguanosine 3',5'-cyclic monophosphate", Nat. Chem. Biol., 2007, 3, 727.
4) M. H. Zaki, S. Fujii, T. Okamoto, S. Islam, S. Khan, K. A. Ahmed, T. Sawa and T. Akaike, "Cytoprotective function of heme oxygenase 1 induced by a nitrated cyclic nucleotide formed during murine salmonellosis", J. Immunol., 2009, 182, 3746.
5) Y. Terasaki, T. Akuta, M. Terasaki, T. Sawa, T. Mori, T. Okamoto, M. Ozaki, M. Takeya and T. Akaike, "Guanine nitration in idiopathic pulmonary fibrosis and its implication for carcinogenesis", Am. J. Respir. Crit. Care. Med., 2006, 174, 665.
6) T. Sawa, M. Tatemichi, T. Akaike, A. Barbin and H. Ohshima, " Analysis of urinary 8-nitroguanine, a marker of nitrative nucleic acid damage, by high-performance liquid chromatography-electrochemical detection coupled with immunoaffinity purification: association with cigarette smoking", Free Radic. Biol. Med., 2006, 40, 711.
7) M. Feelisch, "Nitrated cyclic GMP as a new cellular signal", Nat. Chem. Biol., 2007, 3, 687.
8) K. A. Ahmed, T. Sawa and T. Akaike, "Protein cysteine S-guanylation and electrophilic signal transduction by endogeneous nitro-nucleotides", Amino Acids, 2011, 41(1), 123. 
9) T. Sawa, H. Arimoto and T. Akaike, "Regulation of redox signaling involving chemical conjugation of protein thiols by nitric oxide and electrophiles", Bioconjugate Chem., 2010, 21(7), 1121

よくある質問

Q

ニトログアノシンは酸化ストレスの指標として使用されますが、 ニトログアノシンの他に酸化ストレスマーカーとなるものはありますか？

A

酸化ストレスマーカーについてまとめた資料を作成しております。
カスタマーサポートの視点から、各酸化ストレスマーカーの特徴・測定サンプルの前処理方法などを記載しておりますので、ご参照ください。

下記URLよりダウンロード可能です。

「はじめての酸化ストレスマーカー測定プロトコル～カスタマーサポートの視点から～」

Q

この抗体を用いることで何がわかりますか？

A

8-Nitroguanosineは、一酸化窒素（NO）と活性酸素（スーパーオキサイドアニオンラジカル）によって生じる過酸化亜硝酸（パーオキシナイトライト）によってRNAがニトロ化された核酸です。
生体組織が炎症を起こすと多量のNOが産生され、多くの過酸化亜硝酸が生じて、グアノシン,デオキシグアノシンをニトロ化することが知られております。
8-Nitroguanosineの局在や量などを調べることにより、8-Nitroguanosine残基の役割や遺伝子傷害、発癌機構の解明に役立つことが期待されます。

＊ポリクローナル抗体で染色された場合、次のような確認を行なうことをお勧めします。
1.標準の8-Nitroguanineと競合させて染色されなくなること
2.Sodium hydrosulfiteなどの還元剤で試料中のニトログアノシン、ニトログアニンをアミノグアノシン、アミノグアニンに還元して染色されなくなること

Q

抗ニトログアノシン抗体はどのくらい保存できますか？

A

有効期間は設けておりませんが、希釈前の段階で冷蔵で1年
使用できることを確認しております。

凍結・融解の繰り返しは劣化を早めますので、一旦解凍後は冷蔵にて保管してください。

また、希釈されますと吸着などもあり、期間の保証は出来ません。

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取扱条件

規格
性状： 本品は、無色～淡黄色微濁液体である。
力値： 試験適合
取扱条件
保存条件: 冷凍
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関連製品

ストレスマーカー検出試薬 3-Deoxyglucosone | CAS 4084-27-9 同仁化学研究所

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ストレスマーカー検出試薬 3-Deoxyglucosone | CAS 4084-27-9 同仁化学研究所3-Deoxyglucosone

02 酸化ストレス関連試薬

3-Deoxyglucosone

ストレスマーカー検出試薬 3-Deoxyglucosone | CAS 4084-27-9 同仁化学研究所

  • 酸化ストレス関連試薬
  • 酸化ストレス関連試薬

ストレスマーカー検出試薬

  • 製品コード
    D535　 3-Deoxyglucosone
  • CAS番号
    4084-27-9
  • 化学名
    3-Deoxy-D-erythro-hexos-2-ulose
  • 分子式・分子量
    C6H10O5=162.14
容　量 メーカー希望
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和光純薬
1 mg ￥14,500 341-90213
  • ストレスマーカー検出試薬 3-Deoxyglucosone | CAS 4084-27-9 同仁化学研究所
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技術情報

溶解例

60 mg/mL（水）

参考文献

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1) F. Hayase, R. H. Nagaraj, S. Miyata, F. G. Njoroges and V. M. Monnier, "Aging of Proteins: Immunological Detection of a Glucose-derived Pyrrole Formed during Maillard Reaction in Vivo", J. Biol. Chem., 1989, 264, 3758.
2) S. Miyata and V. Monnier, "Immunohistochemical Detection of Advanced Glycosylation End Products in Diabetic Tissue Using Monoclonal Antibody to Pyrraline", J. Clin. Invest., 1992, 89, 1102.
3) S. Taneda and V. M. Monnier, "ELISA of Pentosidine, an Advanced Glycation End Product, in Biological Specimens", Clin. Chem., 1994, 40, 1766.
4) D. G. Dyer, J. A. Blackedge, S. R. Thorpe and J. W. Baynes, "Formation of Pentosidine during Nonenzymatic Browning of Proteins by Glucose", J. Biol. Chem., 1991, 266, 11654.
5) T. Shinoda, F. Hayase and H. Kato, "Suppres
sion of Cell-cycle Progression during the S Phase of Rat Fibroblasts by 3-Deoxyglucosone, a Maillard Reaction Intermediate", Biotechnol. Biochem., 1994, 58, 1936.
6) F. Hayase, Y. Konishi and H. Kato, "Identification of the Modified Structure of Arginine Residue in Proteins with 3-Deoxyglucosone, a Maillard Reaction Intermediate", Biosci. Biotechnol. Biochem., 1995, 59, 1407.
7) T. Niwa, "3-Deoxyglucosone: Metabolism, Analysis, Biological Activity, and Clinical Implication.", J Chromatogr. B. Biomed Sci. Appl., 1999, 731, 23.
8) 宮田哲、"蛋白糖化反応マーカーとしての3-DG",「蛋白の糖化」医学書院（繁田幸男、谷口直之編）, 1997, p.57.
9) D. V. Zyzak, J. M. Richardson, S. R. Thoepe and J. W. Baynes, "Formation of Reactive Intermediates from Amadori Compounds under Physiological Conditions", Arch. Biochem. Biophys., 1995, 316, 547.
10) B. S. Szwergold, F. Kappler and T. R. Brown, "Identification of Fructose 3-Phosphate in the Lens of Diabetic Rats", Science, 1990, 247, 451.

よくある質問

Q

3-Deoxyglucosone(3-DG)は不安定な物質と聞いたことがありますが、保存しておけるのでしょうか？

A

粉末で保存する場合、下記項目に注意していただければ比較的安定です。
　１）吸湿に注意する（特に冷凍から取り出した時）
　２）冷凍保管を行う
　３）アミン（NH2)化合物との接触を避ける
この化合物は分子中に還元性のアルデヒド基を持ち、酸化され易いため注意してください。

水溶液としては、長期の保存は避けて下さい。

Q

3-Deoxyglucosoneは何に溶かせばよいでしょうか？

A

本品は水溶性の化合物ですので、水に溶かしてご使用できます。

またメタノール、DMSOなどにも溶解できます。

水溶液とする場合、超音波をかけて溶かしても支障はありません。 溶解性は60 mg/mL（水）濃度まで確認しております。

なお、本化合物は還元性アルデヒド基を持つため、一級アミンとシッフ塩基を形成したり、酸化剤により酸化されます。 よって、緩衝液や培地を使用する際は、一級アミンを持つアミノ酸や酸化剤を含まないものをご使用下さい。

ストレスマーカー検出試薬 3-Deoxyglucosone | CAS 4084-27-9 同仁化学研究所 ストレスマーカー検出試薬 3-Deoxyglucosone | CAS 4084-27-9 同仁化学研究所

取扱条件

規格
性状： 本品は、白色～淡黄色固体で水に溶ける。
純度(HPLC)： 99.0％ 以上
IRスペクトル： 試験適合
取扱条件
保存条件: 冷凍 , 取扱条件: 窒素置換,吸湿注意
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ストレスマーカー検出試薬 3-Deoxyglucosone | CAS 4084-27-9 同仁化学研究所

関連製品

ストレスマーカー検出試薬 -Nucleostain- DNA Damage Quantification Kit -AP Site Counting- 同仁化学研究所

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

ストレスマーカー検出試薬 -Nucleostain- DNA Damage Quantification Kit -AP Site Counting- 同仁化学研究所–Nucleostain– DNA Damage Quantification Kit -AP Site Counting-

02 酸化ストレス関連試薬

–Nucleostain– DNA Damage Quantification Kit -AP Site Counting-

ストレスマーカー検出試薬 -Nucleostain- DNA Damage Quantification Kit -AP Site Counting- 同仁化学研究所

  • 酸化ストレス関連試薬
  • 酸化ストレス関連試薬

ストレスマーカー検出試薬

  • 製品コード
    DK02　 –Nucleostain– DNA Damage Quantification Kit -AP Site Counting-
容　量 メーカー希望
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和光純薬
20 samples ￥86,700 346-90143
キット内容
20 samples ･ARP-DNA Standard Solution
×(0, 2.5, 5.0, 10, 20, 40 AP sites/100,000 bp)　　
･ARP Solution
･DNA Binding Solution
･Washing Buffer　
･HRP-Streptavidin
･TE Buffer
･Substrate Solution
･Filtration Tube
･96-well Microplate/U Bottom		 各 250 μl × 1

250 μl × 1
10 ml × 1
× 1
25 μl × 1
40 ml × 1
10 ml × 1
20 tubes
× 1

  • ストレスマーカー検出試薬 -Nucleostain- DNA Damage Quantification Kit -AP Site Counting- 同仁化学研究所
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マニュアル

  • 取扱説明書 日本語
    ストレスマーカー検出試薬 -Nucleostain- DNA Damage Quantification Kit -AP Site Counting- 同仁化学研究所
  • Manual English
    ストレスマーカー検出試薬 -Nucleostain- DNA Damage Quantification Kit -AP Site Counting- 同仁化学研究所

技術情報

＜キット以外に必要なもの＞

・10 μl, 200 μl, 1 mlマイクロピペッター(可変式）　・200 μl 8連マイクロピペッター(可変式)　・インキュベーター(37℃)        ・マイクロプレートリーダー　・0.5 ml, 1.5 ml遠心チューブ　・遠心機　・DNA精製キット　　・ペーパータオル

参考文献

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参考文献

1) A. Sancar and G. B. Sancar, "DNA Repair Enzymes", Annu. Rev. Biochem., 1988, 57, 29.
2) T. Lindahl and B. Nyberg, "Rate of Depurination of Native Deoxyribonucleic Acid", Biochemistry, 1972, 11, 3610.
3) M. Liuzzi and M. Talpaert-Borle, "A New Approach to the Study of the Base-excision Repair Pathway Using Methoxyamine", J. Biol. Chem., 1985, 260, 5252.
4) M. Weinfeld, M. Liuzzi and M. C. Paterson, "Response of Phage T4 Polynucleotide Kinase Toward Dinucleotides Containing Apurinic Sites: Design of a 32P-postlabeling Assay for Apurinic Sites in DNA", Biochemistry, 1990, 29, 1737.
5) B. X. Chen, K. Kubo, H. Ide, B. F. Erlanger, S. S. Wallace and Y. W. Kow, "Properties of a Monoclonal Antibody for the Detection of Abasic Sites, a Common DNA Lesion", Mutat. Res., 1992, 273, 253.
6) J. A. Gralnick and D. M. Downs, "The YggX Protein of Salmonella enterica Is Involoved in Fe(II) Trafficking and Minimizes the DNA Damage Cause by Hydroxyl Radicals:Residue CYS-7 is Essential for YggX Function", J. Biol. Chem., 2003, 278, 20708.
7) J. W. Pippin, R. Durvasula, A. Petermann, K. Hiromura, W. G. Couser and S. J. Shankland, "DNA Damage is a Novel Response to Sublytic Complement C5b-9 Induced Injury in Podocytes", J. Clin. Invest., 2003, 111, 877.
8) S. Watanabe, T. Ichimura, N. Fujita, S. Tsuruzono, I. Ohki, M. Shirakawa, M. Kawasuji and M. Nakao, "Methylated DNA-binding Domain 1 and Methylpurine DNA Glycosylase Link Transcriptional Repression and DNA Repair in Chromatin", Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2003, 100, 12859.
9) M. Endres, M. Ahmadi, I. Kruman, D. Biniszkiewicz, A. Meisel and K. Gertz, "Folate Deficiency Increases Postischemic Brain Injury", Stroke, 2005, 36, 321.
10) J.-M. Li, M. Mogi, K. Tsukuda, H. Tomochika, J. Iwanami, L.-J. Min, C. Nahmias, M. Iwai and M. Horiuchi, "Angiotensin II-Induced Neural Differentiation via Angiotensin II Type 2 (AT2) Receptor-MMS2 Cascade Involving Interaction between AT2 Receptor-Interacting Protein and Src Homology 2 Domain-Containing Protein-Tyrosine Phosphatase 1", Mol. Endocrinolo., 2007, 21(2):499.
11) D. R. McNeill and D. M. Wilson III, "A Dominant-Negative Form of the Major Human Abasic Endonuclease Enhances Cellular Sensitivity to Laboratory and Clinical DNA-Damaging Agents", Mol. Cancer Res., 2007, 5(1), 61.

よくある質問

Q

40 AP sites/100,000以上のstandard solutionを作成することは出来ますか？

A

このキットのstandard DNAは0～40AP site/100,000 です。
弊社では、50 AP sites/100,000までのARP-DNAを調製したことは
ありますが、それ以上はありません。

　理論的にはそれ以上のARP-DNAを調製することは可能ですが、
検量線の直線性がどこまで保持されるかは保証できません。
　高いレベルの塩基損傷を検出するには、サンプルDNAを同じ濃度の損傷の無いDNA
つまり、0AP site-DNAで測定レンジに希釈してアッセイを行い、
その後に実際のAP数を換算して求める方が良いと思います。

Q

DNA中の塩基損傷部位であるAP Siteは酸化ストレスの指標として使用されますが、 AP Siteの他に酸化ストレスマーカーとなるものはありますか？

A

酸化ストレスマーカーについてまとめた資料を作成しております。
カスタマーサポートの視点から、各酸化ストレスマーカーの特徴・測定サンプルの前処理方法などを記載しておりますので、ご参照ください。

下記URLよりダウンロード可能です。
 

「はじめての酸化ストレスマーカー測定プロトコル～カスタマーサポートの視点から～」

Q

DNAの純度が吸光度比で1.8以上を推奨されていますが、1.5程度でも測定出来ますか？

A

1.5では確認していませんので、保証は出来ません。
1.6～1.7のDNAでの測定では大きなバラツキは見られません。
推奨として1.8以上としております。

精製度が低いということは、タンパク質の混入が考えられます。
タンパク質はブロッキング作用を持ち、DNAがプレートに吸着するのを
防ぐ可能性がありますので、出来るだけ精度が高いものをご使用ください。

Q

抽出したDNAをARP化せずに保存することは可能でしょうか？

A

溶液状態での保存はAP siteが増えてくるので望ましくありません。（冷蔵・冷凍ともに）
ARP化せずに保存するのであれば、エタノール沈殿を行い、ペレット状にして冷凍保存してください。

　AP部位は確かに切断が起こりやすい部位です。

ただ、catalist freeの状態で保存されていれば3'側に切断があってもARPの検出には支障ありません。

むしろ抽出DNAは凍結状態以外の環境下で保存されていた場合、

自然に起こる脱塩基によって形成されたAP部位の方が重要な問題になります。

この場合、サンプルに同一条件下で保存されていた標準DNAが含まれる場合は

補正が可能になります。

　ARP修飾後のAP部位は安定ですので、抽出後の速やかなAPR処理をお勧めします。

Q

このキットを使用して何を測定することが出来るのでしょうか？

A

DNA中のAP siteの定量が出来ます。
AP siteとは[apurinic/apyrimidinic site]の略で、損傷したDNAに働く
塩基除去修復の過程で現れるものです。

DNAの損傷は複製時のDNA polymeraseのエラーに加えて、環境中の放射線や
紫外線またはアルキル化剤等の化学物質、生体内における活性酸素などの
代謝産物により起こります。

AP siteを測定することによりDNA損傷をみることが出来ます。

Q

このキットで測定できる検体数はどのくらいでしょうか？

A

20 samplesが20検体となります。
それぞれFiltration Tubeが20 samplesで20本入っています。
Filtration Tubeを一つのサンプルに1本使用しますので、このTubeの数が
測定できる検体数となります。

20 samplesも測定用のプレートは1枚です。

Q

96-wellマイクロプレートやフィルトレーションチューブ以外の溶液が余ったのですが、 廃棄方法を教えて下さい。

A

余った溶液は、以下の成分情報をご確認の上、ご所属の機関の廃棄ルールに従って廃棄して下さい。
＜キットコンポーネント成分＞

・ARP-DNA standard solution　（水に希釈後廃棄、有害成分含まず）

・ARP solution　（水に希釈後廃棄、有害成分含まず）

・DNA binding solution　（水に希釈後廃棄、有害成分含まず）

・Washing buffer　（水に希釈後廃棄、有害成分含まず）

・HRP-streptavidin　（水に希釈後廃棄、有害成分含まず）

・TE buffer　（水に可溶、EDTA・2NA 0.1%以下）

・Substrate solution　（水に希釈後廃棄、有害成分含まず）

ストレスマーカー検出試薬 -Nucleostain- DNA Damage Quantification Kit -AP Site Counting- 同仁化学研究所 ストレスマーカー検出試薬 -Nucleostain- DNA Damage Quantification Kit -AP Site Counting- 同仁化学研究所

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷蔵
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    SOD Assay Kit – WST

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    ミトコンドリア一重項酸素検出試薬

    Si-DMA for Mitochondrial Singlet Oxygen Imaging

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    ミトコンドリア内鉄イオン検出試薬

    Mito-FerroGreen

グルタチオン定量キット GSSG/GSH Quantification Kit 同仁化学研究所

发表于由

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グルタチオン定量キット GSSG/GSH Quantification Kit 同仁化学研究所GSSG/GSH Quantification Kit

02 酸化ストレス関連試薬

GSSG/GSH Quantification Kit

グルタチオン定量キット GSSG/GSH Quantification Kit 同仁化学研究所

  • 酸化ストレス関連試薬
  • 酸化ストレス関連試薬
  • 食品機能評価

グルタチオン定量キット

  • 製品コード
    G257　 GSSG/GSH Quantification Kit
容　量 メーカー希望
小売価格		 富士フイルム
和光純薬
200 tests ￥62,300 342-09011
キット内容
200 tests ・ Enzyme Solution
・ Coenzyme
・ Buffer Solution
・ Substrate (DTNB)
・ Standard GSH
・ Standard GSSG
・ Masking Reagent		 50 μl x1
x2
60 ml x1
x4
x1
x1
20 μl x1

  • グルタチオン定量キット GSSG/GSH Quantification Kit 同仁化学研究所
試験成績書

SDSダウンロード

  • ご購入方法
  • お問い合わせ

マニュアル

  • 取扱説明書 日本語
    グルタチオン定量キット GSSG/GSH Quantification Kit 同仁化学研究所
  • Manual English
    グルタチオン定量キット GSSG/GSH Quantification Kit 同仁化学研究所

技術情報

特長

1)酸化型グルタチオン(GSSG)、還元型グルタチオン(GSH)の分別定量が可能である。
2)短時間で簡便に多検体の測定が可能である。

参考文献

参考文献を表示する

1) M. E. Anderson, "Determination of Glutathione and Glutathione Disulfide in Biological Samples", Methods in Enzymol., 1985, 113, 548.
2) M. A. Baker, G. J. Cerniglia and A. Zaman, "Microtiter Plate Assay for the Measurement of Glutathione and Glutathione Disulfide in Large Numbers of Biological Samples", Anal. Biochem., 1990, 190, 360.
3) C. Vandeputte, I. Guizon, I. Genestie-Denis, B. Vannier and G. Lorenzon, "A Micrototer Plate Assay for Total Glutathione and Glutathione Disulfide Contents in Cultured/isolated Cells: Performance Study of a New Miniaturized Protocol", Cell Biol. Toxicol., 1994, 10, 415.
4) S. A. McGrath-Morrow and J. Stahl, "Inhibition of Glutamine Synthetase in A549 Cells During Hyperoxia", Am. J. Respir. Cell Mol. Biol., 2002, 27, 99.
5) T. Sato, K. Seyama, Y. Sato, H. Mori, S. Souma, T. Akiyoshi, Y. Kodama, T. Mori, S. Goto, K. Takahashi, Y. Fukuchi, N. Maruyama and A. Ishigami, "Senescence Marker Protein-30 Protects Mice Lungs from Oxidative Stress, Aging, and Smoking", Am. J. Respir. Crit. Care Med., 2006, 174, 530.
6) M. L. Mulhern, C. J. Madson, A. Danford, K. Ikesugi, P. F. Kador and T. Shinohara, "The Unfolded Protein Response in Lens Epithelial Cells from Galactosemic Rat Lenses", Invest. Ophthalmol. Vis. Sci., 2006, 47(9), 3951.
7) N. Miura, Y. Yanagiba, K. Ohtani, M. Mita, and M. Togawa, "Diurnal Variation of Cadmium-induced Mortality in Mice", J. Toxicol. Sci., 2012, 37(1), 191.
8) K. Okabayashi, T. Narita, Y. Takahashi and H. Sugiya, "Effrct of Oxidative Stress on Secretory Function in Salivary Gland Cells", Oxidative Stress-Environmental Induction and Dietary Antioxidants, V. Lushchak, InTech, 2012, 189.
9) G. Tian, J. Sawashita, H. Kubo, S. Nishio, S. Hashimoto, N. Suzuki, H. Yoshimura, M. Tsuruoka, Y. Wang, Y. Liu, H. Luo, Z. Xu, M. Mori, M. Kitano, K. Hosoe, T. Takeda, S. Usami and K. Higuchi, "Ubiquinol-10 Supplementation Activates Mitochondria Functions to Decelerate Senescence in Senescence-Accelerated Mice", Antioxid. Redox Signal., 2014, 20(16), 2606.
10) H. Nakagawa, A. Umemura, K. Taniguchi, J. Font-Burgada, D. Dhar, H. Ogata, Z. Zhong, M. A. Valasek, E. Seki, J. Hidalgo, K. Koike, R. J. Kaufman and M. Karin, "ER Stress Cooperates with Hypernutrition to Trigger TNF-Dependent Spontaneous HCC Development", Cancer cell, 2014, 26(3), 331.
11) M. Sueyoshi, M. Fukunaga, M. Mei, A. Nakajima, G. Tanaka, T. Murase, Y. Narita, S. Hirata, and D. Kadowaki, "Effects of lactulose on renal function and gut microbiota in adenine-induced chronic kidney disease rats", Clinical and Experimental Nephrology., 2019,doi: 10.1007/s10157-019-01727-4.
12) S. Shiromizu, T. Yamauchi, N. Kusunose, N. Matsunaga, S. Koyanagi and S. Ohdo, Dosing Time-Dependent Changes in the Anti-tumor Effect of xCT Inhibitor Erastin in Human Breast Cancer Xenograft Mice', Biol. Pharm. Bull.., 2019, 42, (11), 1921-1925.
13) K. Ogawa, A. Noda, J. Ueda, T. Ogata, R. Matsuyama, Y. Nishizawa, S. Qiao, S. Iwata, M. Ito, Y. Fujihara, M. Ichihara, K. Adachi, Y. Takaoka and T. Iwamoto, "Forced expression of miR-143 and -145 in cardiomyocytes induces cardiomyopathy with a reductive redox shift", Cell. Mol. Biol. Lett., 2020, doi:10.1186/s11658-020-00232-x.

よくある質問

Q

どのようなサンプルが測れますか？

A

組織、血漿、赤血球、細胞のサンプルが測れます。
但し、血漿の場合はグルタチオン量が少ないため、検体によっては測り分けが困難な場合があります。
 

Q

このKitで何サンプル測定できますか？

A

本キットは200testsです（96wellプレート2枚分）。

n=3とした場合、18サンプルの測り分けが可能です〈サンプルに着色がない場合）。

測り分けない場合（総グルタチオン量のみを測定する場合）は、50サンプル測定できます。

※サンプルに着色がある場合は、サンプルブランクの測定が必要です。

　 サンプルブランクの測定方法は、FAQ 「サンプルに着色がある場合の測定方法」をご参照下さい。

※サンプルのレイアウト例：レーン1～6はGSSG濃度測定、レーン7～12は総グルタチオン濃度測定

グルタチオン定量キット GSSG/GSH Quantification Kit 同仁化学研究所

Q

サンプルに着色がある場合は、どうすればいいですか？

A

 サンプルに着色がある場合、以下の2つの方法のどちらかでサンプルブランクを差し引くことが可能です。
①Kinetic methodで測定を行う。

　　※検量線の傾きで検量線を作成する為、サンプルブランクの影響を受けない。

②グルタチオン濃度算出の際、O.D.blankを引く代わりに、別途、測定したO.D. sample blankを引く。

　　グルタチオン（GSH, GSGG) = (O.D. sample – O.D. sample blank) / 検量線の傾き

　　＜O.D. sample blankの測定方法＞

　　　　　取扱説明書　「4. 測定」に従い、吸光度を測定する。

　　　　　その際、Coenzyme working solution, Enzyme working solutionを添加せず、

　　　　　Buffer solutionと純水を添加する。

グルタチオン定量キット GSSG/GSH Quantification Kit 同仁化学研究所

Q

GSSGとGSHの比率を測定することで、何が分かるのですか？

A

グルタチオンは通常、生体内で還元型（GSH）として存在していますが、
酸化ストレスなどの刺激によって酸化型（GSSG）に変換される為、

GSHとGSSGの比率が酸化ストレスの指標となります。

Q

GSH濃度はどのように求めるのですか？

A

検量線を基に求めた総グルタチオン（GSH＋GSSG)濃度とGSSG濃度より、

下式を用いてGSH濃度を算出します。

　GSH濃度＝総グルタチオン濃度－[GSSG濃度]×2

　※GSSG（酸化型グルタチオン）はGSH（還元型グルタチオン）２分子に相当します。

　　 そのため、GSSG濃度を２倍にすることでGSH濃度に換算しています。

Q

推奨する5-スルホサリチル酸のメーカーやグレードはありますか？

A

特にメーカーの推奨はしておりません。試薬グレードの製品をご利用ください。

Q

Masking reagentは、GSSG由来のGSHもマスキングしないのでしょうか？

A

酵素・補酵素添加後に、GSSGから生じたGSHは、マスキング剤と反応するより先にDTNBと反応してGSSGに戻るため、
GSSGから生じたGSHまでマスキングされることはありません。

Q

マスキングの時間（37℃、1時間）が長くなってしまっても問題ありませんか？

A

多少長くなっても構いません。2時間まで測定実績がございます。

 

※マスキングの時間とは、Technical Manual 「測定方法」４．測定 3)にある  「37℃で1時間インキュベートする。」の操作を指します。

Q

Total Glutathione Quantification Kit (同仁品コード：T419) と何が違うのでしょうか？

A

今回のGSSG/GSH Quantification Kit（G257）はTotal Glutathione Quantification Kit(T419)では出来なかったGSSGとGSHの測り分けができます。
酸化ストレスの指標として、GSHとGSSGの比率は注目されています。

Q

サンプル中のグルタチオン量が多いです。 サンプルの希釈はできますか？

A

0.5％スルホサリチル酸（SSA)水溶液で希釈してください。
測定時のサンプル中SSA濃度は.0.5～1%にする必要があります。

SSA濃度が高いと反応時のpHが低くなり、吸光度に影響することが懸念されます。

Q

総グルタチオン量のみ測定する場合、マスキングの時間（37℃、1時間）は省略してよいですか？

A

省略可能です。
尚、本キットはGSSGとGSHの測り分けが可能な設計となっております。
測り分けが必要ない場合は、Total Glutathione Quantification Kit (同仁品コード：T419) もご利用いただけます。

※マスキングの時間とは、Technical Manual 「測定方法」４．測定 3)にある  「37℃で1時間インキュベートする。」の操作を指します。

Q

発色が弱い場合は、どうすればいいですか？

A

以下の3つが要因として考えられます。 

1. 本キットでの測定範囲は 0.5 μmol/l 以上です。測定試料に含まれるグルタチオン量が、それよりも少ない可能性があります。
    測定範囲外の測定試料は、本キットでは測定できませんので、HPLC法など他の方法をご検討下さい。
    可能であれば、前処理の希釈倍率を下げる、サンプル量を増やすなど、測定試料の濃度を測定範囲以上にして下さい。
    ※発色を強める為に、発色の時間を長くすると検量線の直線性が得られなくなりますので、ご注意下さい。

2. 発色を阻害する物質が含まれている可能性があります。例えば、SH基と反応する化合物（マレイミド類）などは測定に影響を及ぼします。
    これらの化合物は前処理等で除くことができませんので、測定試料中に混在させない系で再度測定して下さい。

3.反応時のpHが低く、発色阻害が起こっている可能性があります。
   測定時にSSA濃度が1%以下になってるか、ご確認下さい。SSA濃度が1%以上の場合、発色阻害が起こります。
   他の酸を用いた場合にはトリエタノールアミン等でpH7程度に中和するか、酸濃度が1％程度以下になるように希釈してから測定して下さい。

Q

測定値がマイナスになります。どのような要因がありますか。

A

以下の3つが要因として考えられます。 

１．サンプル中のグルタチオン量が少ない可能性があります。
　　サンプルの量を増やして、ご検討ください。
　　なお、血漿はグルタチオン量が少なく、測定が困難な場合がございます。

2.  サンプルの前処理中にGSHがアミノ基と副反応を起こして減少した可能性があります。
　　GSHは、中性条件で以下のような副反応により減少することが報告されています
    （Methods in Enzymology, 1985, 113, 548）。
　　そのため、サンプルの前処理(5%SSA処理）を素早く行ってください。　　

　　GSH + amino acid ⇔　γ-Glu-amino acid +CysH-Gly (アミノ基転移) 
  　 GSH + H2O → Glu +CysH-Gly    (加水分解)
  　 GSH + GSH ⇔　γ-Glu-GSH +CysH-Gly  (アミノ基転移)

３. サンプルの前処理中にGSHが酸化してGSSGとなった可能性があります。
　　2と同様、サンプルの前処理(5%SSA処理）を素早く行ってください。　

Q

酸化ストレスの指標としてグルタチオンが測定されますが、 他の酸化ストレスマーカーはありますか？

A

酸化ストレスマーカーに関する資料をご参考ください。
カスタマーサポートの視点から、各酸化ストレスマーカーの特徴・測定サンプルの前処理方法などを記載しております。

下記URLよりダウンロード可能です。
「はじめての酸化ストレスマーカー測定プロトコル～カスタマーサポートの視点から～」

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取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷蔵
危険・有害
シンボルマーク 		グルタチオン定量キット GSSG/GSH Quantification Kit 同仁化学研究所グルタチオン定量キット GSSG/GSH Quantification Kit 同仁化学研究所グルタチオン定量キット GSSG/GSH Quantification Kit 同仁化学研究所
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    ATP Assay Kit-Luminescence

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DNAダメージ検出抗体 DNA Damage Detection Kit – γH2AX　- Green 同仁化学研究所

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

DNAダメージ検出抗体 DNA Damage Detection Kit - γH2AX　- Green 同仁化学研究所DNA Damage Detection Kit – γH2AX　- Green

02 酸化ストレス関連試薬

DNA Damage Detection Kit – γH2AX　- Green

DNAダメージ検出抗体 DNA Damage Detection Kit - γH2AX　- Green 同仁化学研究所

  • 酸化ストレス関連試薬
  • 酸化ストレス関連試薬
  • 細胞機能解析
  • 細胞老化

DNAダメージ検出抗体

  • 製品コード
    G265　 DNA Damage Detection Kit – γH2AX　- Green
容　量 メーカー希望
小売価格		 富士フイルム
和光純薬
1 set ￥37,700 343-09421
キット内容
1 set ・Anti γH2AX antibody
・Secondary antibody – Green
・Blocking Solution 		×1
×1
22 ml×1

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試験成績書

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マニュアル

  • 取扱説明書 日本語
    DNAダメージ検出抗体 DNA Damage Detection Kit - γH2AX　- Green 同仁化学研究所
  • Manual English
    DNAダメージ検出抗体 DNA Damage Detection Kit - γH2AX　- Green 同仁化学研究所

技術情報

DNAダメージの検出原理

DNA ダメージにより二重鎖切断が生じると、ヒストンタンパク質の一種であるH2AX が速やか、かつ広範囲にわたってリン酸化されます。リン酸化H2AX(γH2AX) は、DNA ダメージの鋭敏なマーカーであることから、化学物質や活性酸素、紫外線や放射線などの遺伝毒性及び発がん性評価への応用が期待されています。また、γH2AX の検出は近年では細胞老化を評価する指標としても知られています。
本製品はモノクローナル抗体研究所製の抗γH2AX 抗体を使用しています。DNAダメージ検出抗体 DNA Damage Detection Kit - γH2AX　- Green 同仁化学研究所

参考文献

参考文献を表示する
文献No. 対象サンプル 装置 引用(リンク)
1 細胞
(B16 Cell)		 フローサイトメーター J. Takahashi, S. Nagasawa, M. J. Ikemoto, C. Sato, M. Sto and H. Iwahashi, "Verification of 5-Aminolevurinic Radiodynamic Therapy Using a Murine Melanoma Brain Metastasis Model", Int. J. Mol. Sci. ., 2019, 20, (5155), .
2 細胞
(ヒト小気道上皮細胞)		 蛍光顕微鏡 M. Komura, T. Sata, H. Yoshikawa, N. A. Nitta, Y. Suzuki, K KOike, Y. Kodama, K. Seyama and K. Takahashi, "Propylene glycol, a component of electronic cigarette liquid, damages epithelial cells in human small airways", 2022,  Respir. Res., doi:10.1186/s12931-022-02142-2.

よくある質問

Q

Anti γH2AX antibody staining solution及びSecondary antibody staining solutionは保存できますか？

A

保存はできません。その日のうちにご使用ください。

Q

抗体をキット付属のBlocking Solution以外の溶液で希釈してもいいですか？

A

キット付属のBlocking Solutionでの希釈をお勧めします。
他の溶液で希釈をするとバックグラウンドが上昇する可能性があります。

Q

多重染色時の注意点はありますか？

A

本キットではマウス由来の一次抗体を使用しているため、他抗原を同時染色する場合にはマウス由来以外の一次抗体を選択ください。

Q

組織染色時の注意点はありますか？

A

組織染色の際、マウス組織は使用できませんのでご注意ください。
マウス組織を染色すると、抗マウス抗体(蛍光標識二次抗体)がマウス組織中のIgGへ非特異吸着を起こし、バックグラウンドが上昇します。

 

＜キットに含まれる抗体情報＞　　　　　　 　　　　　　　

  由来 交差性
一次抗体 マウス ヒト、マウス
蛍光標識二次抗体 ヤギ マウスIgG
DNAダメージ検出抗体 DNA Damage Detection Kit - γH2AX　- Green 同仁化学研究所 DNAダメージ検出抗体 DNA Damage Detection Kit - γH2AX　- Green 同仁化学研究所

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷蔵 , 取扱条件: 吸湿注意
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DNAダメージ検出抗体 DNA Damage Detection Kit - γH2AX　- Green 同仁化学研究所

関連製品

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    Cellular Senescence Detection Kit – SPiDER-βGal

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    Cellular Senescence Plate Assay Kit – SPiDER-βGal

  • DNAダメージ検出抗体 DNA Damage Detection Kit - γH2AX　- Green 同仁化学研究所

    死細胞染色色素

    –Cellstain®– DAPI solution

LTL凝集素Biotinylated Lotus Tetragonolobus LectinVector B-1325

发表于由

LTL凝集素Biotinylated Lotus Tetragonolobus Lectin

  • 产品型号：  Vector B-1325
  • 简单描述
  • LTL凝集素Biotinylated Lotus Tetragonolobus LectinDetection of Glycoproteins using Lectins in Histochemistry,ELISA, and Western Blot Applications
详细介绍

LTL凝集素Biotinylated Lotus Tetragonolobus Lectin 

isolated from Lotus tetragonolobus seeds

Lotus tetragonolobus lectin is a family of closely related glycoproteins having 2 or 4 subunits of about 28,000 daltons. The isoelectric points differ somewhat but these isolectins probably have similar specificities toward alpha-linked L-fucose containing oligosaccharides. Although many of the binding properties of Lotus lectin are similar to those of Ulex europaeus lectin I, the binding affinities and some specificities for oligosaccharides are markedly different between these fucose-specific lectins.

LTL凝集素Biotinylated Lotus Tetragonolobus Lectin 

This biotinylated lectin conjugate is prepared from affinity-purified lectin and is optimally labeled with biotin. Essentially free of inactive lectin conjugate and containing no free biotin, this biotinylated lectin provides an ideal intermediate for examining glycoconjugates using the Biotin-Avidin System. First the biotin-labeled lectin is added, followed by the VECTASTAIN® ABC Reagent, Avidin D conjugate, or streptavidin derivative. Another possible application is in the isolation of lymphokines and other products of mitogenic stimulation.
Inhibiting/Eluting Sugar: 50 mM – 100 mM L-fucose

 

 

whatman孔径 600纳米0.6umPC膜110608110608 110607

发表于由

whatman孔径 600纳米0.6umPC膜110608

简要描述：

whatman孔径 600纳米0.6umPC膜110608Nuclepore径迹蚀刻膜英国Whatman Nuclepore™经济蚀刻聚碳酸酯膜，由高品质聚碳酸酯薄膜制成，孔径精确、流速快，的抗化学、抗热性能。膜表面光滑平整，几乎没有反吸附。不溶于大多数有机溶剂特点：·低蛋白吸附力，低水平反吸附，确保样品不被污染·高化学抗性和热稳定性，适合多样

whatman孔径 600纳米0.6umPC膜110608

Nuclepore径迹蚀刻膜

英国Whatman Nuclepore™经济蚀刻聚碳酸酯膜，由高品质聚碳酸酯薄膜制成，孔径精确、流速快，的抗化学、抗热性能。膜表面光滑平整，几乎没有反吸附。不溶于大多数有机溶剂
特点：

·低蛋白吸附力，低水平反吸附，确保样品不被污染

·高化学抗性和热稳定性，适合多样样品

·低灰份和皮重

·表面光滑平展，便于观测

whatman孔径 600纳米0.6umPC膜110608

 

应用：

·寄生虫学

·空气分析

·水生微生物

·荧光电子显微镜

·环境分析

·细胞生物学

·EPA检测

·燃料测试

·生物分析

WHATMAN聚碳酸酯（PC）膜0.6微米*25mm

相关产品订购信息：

 

 2008年，英国实验室设备制造商Whatman加入*的通用电气（GE） 公司生命科学部，Whatman公司是一家在享有盛誉的过滤产品和技术提供商，其过滤和膜类产品广泛应用于实验室、研究所、生命科学及医疗技术应用等领域，堪称滤纸行业的“巨无霸”
Whatman为科学家和实验人员提供了种类众多的优质微孔滤膜，微孔滤膜研发和生产居世界领xian水平。 Whatman滤膜的显著特点是孔径精确、韧性好和环境友好，保证了再现性和*性过滤；孔径范围宽，从15纳米到12微米，有无菌包装，以及各种颜色和网格， Whatman还提供兼容的膜过滤系统装置和配件，使之适应了更广泛而更严格的需求。

DNAダメージ検出抗体 DNA Damage Detection Kit – γH2AX　- Deep Red 同仁化学研究所

发表于由

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DNAダメージ検出抗体 DNA Damage Detection Kit - γH2AX　- Deep Red 同仁化学研究所DNA Damage Detection Kit – γH2AX　- Deep Red

02 酸化ストレス関連試薬

DNA Damage Detection Kit – γH2AX　- Deep Red

DNAダメージ検出抗体 DNA Damage Detection Kit - γH2AX　- Deep Red 同仁化学研究所

  • 酸化ストレス関連試薬
  • 酸化ストレス関連試薬
  • 細胞機能解析
  • 細胞老化

DNAダメージ検出抗体

  • 製品コード
    G267　 DNA Damage Detection Kit – γH2AX　- Deep Red
容　量 メーカー希望
小売価格		 富士フイルム
和光純薬
1 set ￥37,700 347-09441
キット内容
1 set ・Anti γH2AX antibody
・Secondary antibody – Deep Red
・Blocking Solution		 ×1
×1
22 ml×1

  • DNAダメージ検出抗体 DNA Damage Detection Kit - γH2AX　- Deep Red 同仁化学研究所
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マニュアル

  • 取扱説明書 日本語
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技術情報

DNAダメージの検出原理

DNA ダメージにより二重鎖切断が生じると、ヒストンタンパク質の一種であるH2AX が速やか、かつ広範囲にわたってリン酸化されます。リン酸化H2AX(γH2AX) は、DNA ダメージの鋭敏なマーカーであることから、化学物質や活性酸素、紫外線や放射線などの遺伝毒性及び発がん性評価への応用が期待されています。また、γH2AX の検出は近年では細胞老化を評価する指標としても知られています。
本製品はモノクローナル抗体研究所製の抗γH2AX 抗体を使用しています。
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よくある質問

Q

Anti γH2AX antibody staining solution及びSecondary antibody staining solutionは保存できますか？

A

保存はできません。その日のうちにご使用ください。

Q

抗体をキット付属のBlocking Solution以外の溶液で希釈してもいいですか？

A

キット付属のBlocking Solutionでの希釈をお勧めします。
他の溶液で希釈をするとバックグラウンドが上昇する可能性があります。

Q

多重染色時の注意点はありますか？

A

本キットではマウス由来の一次抗体を使用しているため、他抗原を同時染色する場合にはマウス由来以外の一次抗体を選択ください。

Q

組織染色時の注意点はありますか

A

組織染色の際、マウス組織は使用できませんのでご注意ください。
マウス組織を染色すると、抗マウス抗体(蛍光標識二次抗体)がマウス組織中のIgGへ非特異吸着を起こし、バックグラウンドが上昇します。

 

＜キットに含まれる抗体情報＞　　　　　　 　　　　　　　

  由来 交差性
一次抗体 マウス ヒト、マウス
蛍光標識二次抗体 ヤギ マウスIgG
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取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷蔵 , 取扱条件: 吸湿注意
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    Cellular Senescence Plate Assay Kit – SPiDER-βGal

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    死細胞染色色素

    –Cellstain®– DAPI solution

過酸化脂質検出蛍光試薬 Liperfluo | CAS 1448846-35-2 同仁化学研究所

发表于由

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02 酸化ストレス関連試薬

Liperfluo

過酸化脂質検出蛍光試薬 Liperfluo | CAS 1448846-35-2 同仁化学研究所

  • 酸化ストレス関連試薬
  • 酸化ストレス関連試薬

過酸化脂質検出蛍光試薬

  • 製品コード
    L248　 Liperfluo
  • CAS番号
    1448846-35-2
  • 化学名
    N-(4-Diphenylphosphinophenyl)-N‘-(3,6,9,12-tetraoxatridecyl)perylene-3,4,9,10-tetracarboxydiimide
  • 分子式・分子量
    C51H41N2O8P=840.85
容　量 メーカー希望
小売価格		 富士フイルム
和光純薬
1 set (50 μg x 5) ￥24,200 345-91551

＜使用回数の目安＞ 50 µgあたり、5-50回（保存不可)

【本製品に関する重要なお知らせ】

2024年3月1日以降の製品出荷分に関して、性状変更に伴う製品取扱方法の変更がございます。

・下記製品写真を参考に、シール添付および同梱カードが入っている場合には、
必ず「Type 2」の取扱説明書をご利用ください。

・シール添付等が無い製品は「Type 1」の取扱説明書をご利用ください。

「Type 2」の外装シールと同梱カード
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「Type 1」の外装
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  • Type 2　 取扱説明書 外装シール・カード添付：日本語
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  • Type 2　Manual Included Notice card : English
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  • Type 1　取扱説明書 日本語
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  • Type 1　Manual English
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  • プロトコル 過酸化脂質検出蛍光試薬 Liperfluo | CAS 1448846-35-2 同仁化学研究所 生細胞の過酸化脂質を蛍光検出したい
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技術情報

特長

1) 長波長励起のため、細胞への光ダメージや自家蛍光の影響を軽減できる。
過酸化脂質検出蛍光試薬 Liperfluo | CAS 1448846-35-2 同仁化学研究所

図1 過酸化脂質によるLiperfluoの励起および蛍光スペクトル変化（エタノール溶媒中）

2) 過酸化脂質特異性が高い
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図2 Liperfluoの活性酸素種に対する反応選択性

3) 細胞の過酸化脂質のイメージングができる。
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図3 HeLa細胞における過酸化脂質のイメージング

参考文献

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Liperfluoが使用された細胞種別の参考文献（細胞名：英数順）

文献No. 対象サンプル 測定機器 引用(リンク)
1 3T3-L1 adipocytes Microscope Osteocalcin triggers Fas/FasL-mediated necroptosis in adipocytes via activation of p300
2 4T1 Microscope Boosting the Ferroptotic Antitumor Efficacy via Site-Specific Amplification of Tailored Lipid Peroxidation
3 4T1, HT1080 Microscope WO3/Pt nanoparticles promote light-induced lipid peroxidation and lysosomal instability within tumor cells
4 B16, HT-1080 FCM CD8+ T cells regulate tumour ferroptosis during cancer immunotherapy
5 B16-F10 FCM Chemically Programmed Vaccines: Iron Catalysis in Nanoparticles Enhances Combination Immunotherapy and Immunotherapy-Promoted Tumor Ferroptosis
6 BeWo Microscope PLA2G6 guards placental trophoblasts against ferroptotic injury
7 BMDM FCM SiO2 and TiO2 nanoparticles synergistically trigger macrophage inflammatory responses
8 Brain slices from　LN229TAZ(4SA) Microscope Neutrophil-induced ferroptosis promotes tumor necrosis in glioblastoma progression
9 Burkitt's Lymphoma FCM Artesunate activates the ATF4-CHOP-CHAC1 pathway and affects ferroptosis in Burkitt's Lymphoma
10 BV2 Microglial Microscope Induction of ferroptosis in response to graphene quantum dots through mitochondrial oxidative stress in microglia
11 Hacat Microscope Blue light-induced oxidative stress in live skin
12 HBE Microscope Pseudomonas aeruginosa utilizes host polyunsaturated phosphatidylethanolamines to trigger theft-ferroptosis in bronchial epithelium
13 HEI-OC1 Microscope Inhibition of ferroptosis protects House Ear Institute-Organ of Corti 1 cells and cochlear hair cells from cisplatin-induced ototoxicity
14 HEI-OC1 Microscope Liproxstatin-1 Protects Hair Cell-Like HEI-OC1 Cells and Cochlear Hair Cells against Neomycin Ototoxicity
15 HeLa Microscope Golgi stress mediates redox imbalance and ferroptosis in human cells
16 HeLa FCM Membrane Damage during Ferroptosis Is Caused by Oxidation of Phospholipids Catalyzed by the Oxidoreductases POR and CYB5R1
17 HeLa, SAS Microscope
FCM		 Mitochondrial dysfunction promotes aquaporin expression that controls hydrogen peroxide permeability and ferroptosis
18 HepG2 Microscope Novel Fluorescence-Based Method To Characterize the Antioxidative Effects of Food Metabolites on Lipid Droplets in Cultured Hepatocytes
19 HL-60 Microscope Oxygenated phosphatidylethanolamine navigates phagocytosis of ferroptotic cells by interacting with TLR2
20 Horse breed stallions FCM Effects of media and promoters on different lipid peroxidation assays in stallion sperm
21 Human hair Microscope Mechanism of Cuticle Hole Development in Human Hair Due to UV-Radiation Exposure
22 MEF Microscope Oxidized arachidonic and adrenic PEs navigate cells to ferroptosis
23 Murine T cells FCM Murine T Cell Maturation Entails Protection from MBL2, but Complement Proteins Do Not Drive Clearance of Cells That Fail Maturation in the Absence of NKAP
24 NCI-ADR/Res (NAR)  Microscope Triggered ferroptotic polymer micelles for reversing multidrug resistance to chemotherapy
25 OEC-M1 Microscope Assessment of zero-valent iron-based nanotherapeutics for ferroptosis induction and resensitization strategy in cancer cells
26 PMVECs Microscope Genetic inactivation of the phospholipase A2 activity of peroxiredoxin 6 in mice protects against LPS-induced acute lung injury
27 RAW 264.7 Microscope Redox lipid reprogramming commands susceptibility of macrophages and microglia to ferroptotic death
28 RAW 264.7 FCM Nano-decocted ferrous polysulfide coordinates ferroptosis-like death in bacteria for anti-infection therapy
29 SH-SY5Y FCM New aspects of 24(S)-hydroxycholesterol in modulating neuronal cell death
30 SH-SY5Y Microscope
FCM		 A novel fluorescent probe with high sensitivity and selective detection of lipid hydroperoxides in cells
31 SH-SY5Y Microscope Activation of p62-Keap1-Nrf2 Pathway Protects 6-Hydroxydopamine-Induced Ferroptosis in Dopaminergic Cells
32 THP-1 FCM Molecular hydrogen suppresses free radical-induced cell death by mitigating fatty acid peroxidation and mitochondrial dysfunction
33 THP-1 FCM Molecular hydrogen regulates gene expression by modifying the free radical chain reactiondependent generation of oxidized phospholipid mediators
34 H9C2 Microscope A non-canonical vitamin K cycle is a potent ferroptosis suppressor
35 HeLa Microscope Multifunctional nanolocks with GSH as the key for synergistic ferroptosis and anti-chemotherapeutic resistance

 

 

よくある質問

Q

S343 Spy-LHPとの違いは何ですか？

A

DMSOへの溶解性が増し、生細胞の過酸化脂質の染色が容易になりました。
溶解例：1 mmol/l (50 µg/60 µl DMSO)
※製品コード:S343、製品名：Spy-LHPは販売を中止させていただきました。

Q

蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーで観察する際、どの励起フィルター、レーザーが使用可能でしょうか？

A

蛍光顕微鏡の場合、GFPフィルター（励起：450-490 nm, 蛍光:500-545 nm）やFITCフィルター（励起：467-498 nm, 蛍光:513-556 nm）が使用可能です。

フローサイトメトリーの場合は、488nmで励起可能です。

Q

培地中のフェノールレッドや血清の影響はありますか？
また、バックグランドが高い場合や、蛍光が弱い(probeが光らない)場合に改善する点はありますか？

A

フェノールレッドや血清入り培地でも使用可能です。
ただし、バックグランドが高い場合はPBSに置換して下さい。
　　
また、バックグランドが高い場合、Liperfluoが光により自然酸化されている可能性があります。
インキュベーション時もなるべく遮光するようにしてください。
（溶解後は必ずアルミ箔などで遮光してください。）

蛍光強度が弱い場合、反応時間を長くしてもバックグランドも高くなってしまうためお勧めできません。
そのため、装置の測定（蛍光観察）の条件を調整してください。
→励起光の強度を強くする。
→露光時間を長くする。

Q

浮遊細胞と付着細胞のどちらでも使用可能でしょうか？
また、固定化した細胞を染色することはできますか？

A

浮遊細胞、付着細胞、どちらでも使用可能です。
HL-60細胞（浮遊細胞）、CHO細胞・SH-SY5Y細胞（付着細胞）で実績があります。
固定化した細胞では染色することはできません。

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取扱条件

規格
性状： 本品は、暗赤色結晶性粉末又は固体である。
純度(HPLC)： 90.0％ 以上
NMRスペクトル： 試験適合
取扱条件
保存条件: 冷蔵,遮光 , 取扱条件: 窒素置換
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    マロンジアルデヒド測定キット

    MDA Assay Kit

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脂質過酸化検出試薬 Lipid Peroxidation Probe -BDP 581/591 C11- 同仁化学研究所

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脂質過酸化検出試薬 Lipid Peroxidation Probe -BDP 581/591 C11- 同仁化学研究所Lipid Peroxidation Probe -BDP 581/591 C11-

02 酸化ストレス関連試薬

Lipid Peroxidation Probe -BDP 581/591 C11-

脂質過酸化検出試薬 Lipid Peroxidation Probe -BDP 581/591 C11- 同仁化学研究所

  • 酸化ストレス関連試薬
  • 酸化ストレス関連試薬
  • 蛍光色素
  • 顕微鏡
  • FCM

脂質過酸化検出試薬

  • 脂質過酸化を高感度に検出できる
  • 顕微鏡、プレートリーダー、フローサイトメーターで検出可能
  • 製品コード
    L267　 Lipid Peroxidation Probe -BDP 581/591 C11-
容　量 メーカー希望
小売価格		 富士フイルム
和光純薬
200 tests ￥29,800 344-10061
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技術情報

Lipid Peroxidation Probeの性質

　Lipid Peroxidation Probe -BDP 581/591 C11- は脂質過酸化を検出することができる蛍光色素です。本蛍光色素は過酸化脂質とは応答しませんが、脂質が過酸化される際に発生する脂質ラジカルなどと反応するため、結果的に過酸化脂質の発生を検出することができます。未反応の本色素は赤色の蛍光を発しますが、脂質周辺のラジカルと応答後は、その蛍光特性を赤色から緑色の蛍光に変化させます。このように、赤色と緑色の蛍光強度比で検出するため、高感度に脂質過酸化を検出することが可能となります。

脂質過酸化検出試薬 Lipid Peroxidation Probe -BDP 581/591 C11- 同仁化学研究所
Lipid Peroxidation Probe -BDP 581/591 C11-の励起蛍光スペクトル

脂質過酸化検出試薬 Lipid Peroxidation Probe -BDP 581/591 C11- 同仁化学研究所

参考文献

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文献No. 対象サンプル 装置    引用（リンク）
1) 細胞
（HTR-8/Svneo）		 蛍光顕微鏡 H. Yang, X. Zhang, Y. Ding, H. Xiong, S. Xiang, Y. Wang, H. Li, Z. Liu, J. He, Y. Tao, H. Yang, H. Qi, "Elabela: Negative Regulation of Ferroptosis in Trophoblasts via the Ferritinophagy Pathway Implicated in the Pathogenesis of Preeclampsia", cells, 2023, doi:10.3390/cells12010099.
2) 細胞
（HLE-B3）		 蛍光顕微鏡 D. Ma, J. Liu, L. Wang, Z. Zhi, L. Luo, J. Zhao, Y. Qin, "GSK-3β-dependent Nrf2 antioxidant response modulates ferroptosis of lens epithelial cells in age-related cataract", 2023, doi:10.1016/j.freeradbiomed.2023.04.022.

よくある質問

Q

測定可能なサンプル数を教えてください。

A

測定可能なサンプル数は以下をご参考ください。
・96-well plate: 2枚
・ibidi 8-well plate: 12枚
・35 mm dish: 10枚
・6-well plate: 10ウェル

 

Q

ポジティブコントロールになる実験例はありますか？

A

取扱説明書にtert-butyl hydroperoxide (t-BHP)処理もしくはcumene hydroperoxide処理をしたHepG2細胞による検出例を掲載しております。実験例1もしくは実験例2の項目の操作1-5をご参考ください。 

Q

working solutionは培養培地以外でも調製できますか？

A

培養培地以外での調製は、お勧めしません。BDP 581/591 C11は脂溶性が高いため、無血清培地やバッファーで調製すると試薬が容器に沈着する可能性があります。調製には血清入り培地をご使用ください。

Q

フローサイトメーターで使用する際、細胞を剥がす操作はどの段階で行えば良いですか？

A

取扱説明書操作6の後(薬剤処理しHBSSで洗浄した後)に、細胞を剥がす操作(トリプシン処理)を行ってください。

Q

染色後の細胞洗浄に使用するBufferはHBSS以外でも使用できますか？

A

PBS、 Hanks’ HEPES buffer、 培地でも洗浄できます。

脂質過酸化検出試薬 Lipid Peroxidation Probe -BDP 581/591 C11- 同仁化学研究所 脂質過酸化検出試薬 Lipid Peroxidation Probe -BDP 581/591 C11- 同仁化学研究所

取扱条件

規格
性状： 紫色～赤紫色固体
純度(HPLC)： 90.0% 以上
取扱条件
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