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オートファジー（オートリソソーム）の検出試薬 DALGreen – Autophagy Detection 同仁化学研究所

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オートファジー（オートリソソーム）の検出試薬 DALGreen - Autophagy Detection 同仁化学研究所DALGreen – Autophagy Detection

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

DALGreen – Autophagy Detection

オートファジー（オートリソソーム）の検出試薬 DALGreen - Autophagy Detection 同仁化学研究所

  • 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
  • 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
  • 細胞機能解析
  • オートファジー

オートファジー（オートリソソーム）の検出試薬

  • 製品コード
    D675　 DALGreen – Autophagy Detection
容　量 メーカー希望
小売価格		 富士フイルム
和光純薬
20 nmol ￥31,900 344-09191

オートファジー（オートリソソーム）の検出試薬 DALGreen - Autophagy Detection 同仁化学研究所 DALGreenの最適濃度の検討については、
よくある質問の「DALGreenの最適濃度の検討方法を教えてください」
をご覧ください。

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  • プロトコル オートファジー（オートリソソーム）の検出試薬 DALGreen - Autophagy Detection 同仁化学研究所 オートファジーを検出したい
    オートファジー（オートリソソーム）の検出試薬 DALGreen - Autophagy Detection 同仁化学研究所

技術情報

原理

オートファジー（オートリソソーム）の検出試薬 DALGreen - Autophagy Detection 同仁化学研究所
オートファジー（オートリソソーム）の検出試薬 DALGreen - Autophagy Detection 同仁化学研究所 DAPGreen、DAPRedと同様にオートファゴソーム形成時に色素が膜に取り込まれます。その後、リソソームと融合し酸性環境になったときにDALGreenの蛍光が増大します。

技術や使用製品に関する補足

グルタミン代謝とオートファジー

グルタミナーゼの安定化を介してオートファジーとグルタミノリシスを促進するタンパク質に関する報告例を紹介！

その他、疾患と細胞内代謝指標との関連性をマップでわかりやすく紹介しています。

オートファジー（オートリソソーム）の検出試薬 DALGreen - Autophagy Detection 同仁化学研究所

参考文献

参考文献を表示する
文献No. 対象サンプル 装置 引用（リンク）
1) 細胞
（HeLa, MEF）		 蛍光顕微鏡 H. Iwashita, H. T. Sakurai, N. Nagahora, M. Ishiyama, K. Shioji, K. Sasamoto, K. Okuma, S. Shimizu, and Y. Ueno, "Small fluorescent molecules for monitoring autophagic flux.", FEBS Letters., 2018, 592, (4), 559–567.
2) 細胞
（HeLa）		 蛍光顕微鏡 T. Sakata, A. Saito and H. Sugimoto, "In situ measurement of autophagy under nutrient starvation based on interfacial pH sensing.", Scientific Reports., 2018, 8, 8282.
3) 細胞
（HS-MM）		 蛍光顕微鏡 Y. Egawa, C. Saigo, Y. Kito, T. Moriki and T. Takeuchi, "Therapeutic potential of CPI-613 for targeting tumorous mitochondrial energy metabolism and inhibiting autophagy in clear cell sarcoma.", PLoS One., 2018, 13, (6), e0198940.
4) 細胞
（HaCaT)		 蛍光顕微鏡 S. Abe, S. Hirose, M. Nishitani, I. Yoshida, M. Tsukayama, A. Tsuji and K. Yuasa, "Citrus peel polymethoxyflavones, sudachitin and nobiletin, induce distinct cellular responses in human keratinocyte HaCaT cells.", Biosci. Biotechnol. Biochem. ., 2018, 82, (12), 1347.
5) 細胞
（KGN)		 蛍光顕微鏡 W. Yuping, M. Congshun, Z. Huihui, Z. Yuxia, C. Zhenguo and W. Liping, "Alleviation of endoplasmic reticulum stress protects against cisplatin-induced ovarian damage.", Reprod. Biol. Endocrinol., 2018,doi: 10.1186/s12958-018-0404-4.
6) 細胞
（BmN)		 蛍光顕微鏡 S. Xue, F. Mao, D. Hu, H. Yan, J. Lei, E. Obeng, Y. Zhou, Y. Quan, and W. Yu, "Acetylation of BmAtg8 inhibits starvation-induced autophagy initiation.", Mol. Cell Biochem., 2019,doi: 10.1007/s11010-019-03513-y.
7) 細胞
（HeLa)		 蛍光顕微鏡 F. Hongbao, Y. Shankun, C. Qixin, L. Chunyan, C. Yuqi, G. Shanshan, B. Yang, T. Zhiqi, L. Z. Amanda, T. Takanori, C.Yuncong, G. Zijian, H. Weijiang and D. Jiajie, "De Novo-Designed Near-Infrared Nanoaggregates for Super-Resolution Monitoring of Lysosomes in Cells, in Whole Organoids, and in Vivo.", ACS Nano, 2019, 13, (12), 1446.
8) 細胞
（RT-7)		 フローサイトメーター E. Sasabe, A. Tomomura, N. Kitamura and T. Yamamoto, "Metal nanoparticles-induced activation of NLRP3 inflammasome in human oral keratinocytes is a possible mechanism of oral lichenoid lesions.", Toxicol In Vitro., 2020, 62, 104663.
9) 細胞
（骨髄腫)		 蛍光顕微鏡 J. Xia, Y. He, B. Meng, S. Chen, J. Zhang, X. Wu, Y. Zhu, Y. Shen, X. Feng, Y. Guan, C. Kuang, J. Guo, Q. Lei, Y. Wu, G. An, G. Li, L. Qiu, F. Zhan and W. Zhou, "NEK2 induces autophagy-mediated bortezomib resistance by stabilizing Beclin-1 in multiple myeloma.", Mol Oncol, 2020, DOI: 10.1002/1878-0261.12641.
10) 細胞
（Human L2)		 蛍光顕微鏡 Q. Xu, W. Shi, P. Lv, W. Meng, G. Mao, C. Gong, Y. Chen, Y. Wei, X. He, J. Zhao, H. Han, M. Sun and K. Xiao, "Critical role of caveolin-1 in aflatoxin B1-induced hepatotoxicity via the regulation of oxidation and autophagy.", Cell Death Dis., 2020, 11(1), 6.
11) 細胞
（心筋)		 蛍光顕微鏡 L Cui, LP Zhao, JY Ye, L Yang, Y Huang, X.P. Jiang, Q. Zhang, JZ. Jia, DX. Zhang and Y. Huang, "The Lysosomal Membrane Protein Lamp2 Alleviates Lysosomal Cell Death by Promoting Autophagic Flux in Ischemic Cardiomyocytes.", Front Cell Dev Biol, 2020,DOI:10.3389/fcell.2020.00031.
12) 細胞
（IPEC-J2)		 蛍光顕微鏡 Y Yang, J Huang, J Li, H Yang and Y. Yin, "The Effects of Butyric Acid on the Differentiation, Proliferation, Apoptosis, and Autophagy of IPEC-J2 Cells..", Curr. Mol. Med., 2020, 20(4), 307.
13) 細胞 (線維芽細胞、腎臓上皮細胞) 蛍光顕微鏡 M. M. Ivanova, J. Dao, N. Kasaci, B. Adewale, J. Fikry and O. G. Alpan, "Rapid Clathrin-Mediated Uptake of Recombinant α-Gal-A to Lysosome Activates Autophagy", Biomolecules, 2020,  10(6), 837.
14)

細胞 (NHEKs)

 蛍光顕微鏡 S. Ikeoka and A. Kiso, "The Involvement of Mitophagy in the Prevention of UV-B-Induced Damage in Human Epidermal Keratinocytes ", J. Soc. Cosmet. Chem. Jpn., 2020,  54(3), 252.
15) 細胞
（HeLa）		 蛍光顕微鏡(超解像) Q. Chen, M. Hao, L. Wang, L. Li, Y. Chen, X. Shao, Z. Tian, R. A. Pfuetzner, Q. Zhong, A. T. Brunger, J. Guan and J. Diao, "Prefused lysosomes cluster on autophagosomes regulated by VAMP8", Cell Death Dis., 2021, doi:10.1038/s41419-021-04243-0.
16) 細胞
（SH-SY5Y）		 蛍光顕微鏡 Chang-ki Oh, Nima Dolatabadi, Piotr Cieplak, Maria T. Diaz-Meco, Jorge Moscat, John P. Nolan, Tomohiro Nakamura and Stuart A. Lipton, "S-Nitrosylation of p62 Inhibits Autophagic Flux to Promote α-Synuclein Secretion and Spread in Parkinson’s Disease and Lewy Body Dementia", J. Neurosci., 2022, doi:10.1523/JNEUROSCI.1508-21.2022.

よくある質問

Q

DALGreen working solutionは、どのくらい安定ですか？

A

保存できません。用時調製してください。

Q

DMSO stock solutionは、どのくらい安定ですか？

A

調製後は、-20℃で保存してください。調製後1ヶ月間安定です。
また使用量に応じて小分けし保存することをお勧めします。

Q

オートファジーに関連するタンパク質をノックダウンし評価した実績はありますか？

A

 オートファゴソーム膜形成に関与しているULK1及びULK2をノックダウンした細胞と野生株の細胞を飢餓誘導し、DALGreenにて評価した実績がございます。

評価では、ULK1/ULK2ノックダウン細胞に比べ、野生株ではDALGreenの蛍光が増大している結果が得られています。

本評価データは下記論文のSupporting Information（Fig. S5）をご参照ください。

なお、オートファジーのマーカーであるLC3-RFPとDALGreenを共染色し、殆どのPuncta（斑点）が共局在する結果も得られております。本実験データは、下記論文のFig..1をご参照ください。

H. Iwashita, H. T. Sakurai, N. Nagahora, M. Ishiyama, K. Shioji, K. Sasamoto, K. Okuma, S. Shimizu, and Y. Ueno, "Small fluorescent molecules for monitoring autophagic flux", FEBS Letters., 2018, 592, (4), 559–567.
論文へのリンクは製品HPにございます。
製品HP：DALGreen – Autophagy Detection

Q

リソソーム染色試薬との違いはありますか？

A

リソソーム染色試薬は、細胞内のリソソームに局在します。一方、DALGreenはオートファゴソームに
局在した後、オートファゴソームとリソソームが融合した際に蛍光が増大します。

そのため、リソソーム染色試薬とDLGreenで共染色した場合、リソソーム染色試薬由来の蛍光のうち、オート

リソソームの部分がDALGreenの蛍光と重なります。

本評価データは下記論文のSupporting Information（Fig. S5）をご参照ください。

H. Iwashita, H. T. Sakurai, N. Nagahora, M. Ishiyama, K. Shioji, K. Sasamoto, K. Okuma, S. Shimizu, and Y. Ueno, "Small fluorescent molecules for monitoring autophagic flux", FEBS Letters., 2018, 592, (4), 559–567.
論文へのリンクは製品HPにございます。
製品HP：DALGreen – Autophagy Detection

Q

推奨フィルターを教えてください。

A

励起フィルター：350～450 nm
蛍光フィルター：500～560 nm

なお、共焦点顕微鏡を用いて488 nm励起により蛍光観察した実績がございます。
弊社HP内の製品ページの実験例を参照ください。

Q

DALGreenの最適濃度の検討方法を教えてください。

A

試薬の特性により、試薬の濃度が高すぎたり低すぎたりすると、オートファジー誘導時と誘導していないコントロールとの差が判りにくい場合があります。
下記の情報を参考に試薬濃度の検討することをお勧めします。

細胞種によりDALGreenの最適濃度は異なります。
DALGreenを薄い濃度から(目安0.1 μmol/l）から数点段階的に振ってご検討ください。
(濃い濃度は4 μmol/L前後を目安としてください)

（参考）
小社では、HeLa, HepG2、CHO細胞にて、細胞種毎のDALGreenの最適濃度の検討を行いました。
DALGreenを下記濃度で染色し、アミノ酸不含培地にて培養してオートファジーを誘導しました。
その結果、下記の赤字の濃度条件ではコントロールとの誘導時との差が見られました。

細胞種 DALGreen 濃度
HeLa 4 µmol/l 2 µmol/l 1 µmol/l 0.5 µmol/l
HepG2 4 µmol/l 2 µmol/l 1 µmol/l 0.5 µmol/l
CHO 4 µmol/l 2 µmol/l 1 µmol/l 0.5 µmol/l

 

【HeLa細胞】
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【HepG2細胞】

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【CHO細胞】

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Q

タイムラプスイメージングを行う上で注意点はありますか？

A

測定条件設定のための予備実験を行ってください。
試薬の特性上、染色直後は初期蛍光値が高くなる傾向があるため、以下の手順を参考に予備実験およびタイムラプスイメージングを行ってください。

①予備実験
・コントロール細胞(オートファジーを誘導しない細胞)を用いる。
・取扱説明書に従い、Working soluitonで染色後、培養培地で2回洗浄する。
・通常培地を添加した後、蛍光の時間変化を観察する。
・下図の様に、染色後に細胞内の蛍光が次第に低下した後、蛍光の変化が安定してくる時間(図中 T)を確認する。
※条件は細胞の種類により変わる可能性があります。

（参考）
HeLa細胞の場合、染色後の約60分経過すると蛍光強度が安定することを確認しております（DALGreen）。

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②タイムラプスイメージング
・細胞を Working solutionで染色後、培養培地中で細胞を37℃でインキュベートする。
　※予備実験で設定した時間でインキュベートする。
　※染色後、直ぐにはオートファジー誘導は行わない。
・インキュベート後にオートファジーの誘導を開始して、タイムラプスイメージングをする。

（参考）
HeLa細胞をDALGreenで染色し、通常培地中で60分間(予備実験で設定した時間)培養後、オートファジーを誘導しました。

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Q

オートファジーにはどのような経路があり、DALGreenはどの状態を検出するのですか？

A

オートファジーには、Atg5依存的オートファジー(LC3が変化する)とLC3の変化を伴わない、Atg5非依存的オートファジーがあることが知られております*。

DALGreenはオートファゴソーム膜に取り込まれ、その後、リソソームと融合し酸性環境下で蛍光が増大します。

そのため、DALGreenはオートリソソームの状態を検出します。

*参考資料 :　新たなオートファジー機構の発見　清水重臣

▶初めて検出する細胞種や実験系の場合は、よくある問い合わせ【 DALGreenの最適濃度の検討手順】をご参照ください。

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取扱条件

規格
性状： 本品は淡黄色固体でメタノール及びジメチルスルホキシドに溶ける。
純度(HPLC)： 90.0％ 以上
取扱条件
保存条件: 冷凍,遮光 , 取扱条件: 窒素置換
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関連製品

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    オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬

    DAPRed – Autophagy Detection

  • オートファジー（オートリソソーム）の検出試薬 DALGreen - Autophagy Detection 同仁化学研究所

    マイトファジー検出キット

    Mitophagy Detection Kit

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    老化細胞検出キット

    Cellular Senescence Detection Kit – SPiDER-βGal

  • オートファジー（オートリソソーム）の検出試薬 DALGreen - Autophagy Detection 同仁化学研究所

    細胞増殖/細胞毒性アッセイキット

    Cell Counting Kit-8

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オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬 DAPGreen - Autophagy Detection 同仁化学研究所DAPGreen – Autophagy Detection

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

DAPGreen – Autophagy Detection

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  • 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
  • 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
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オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬

  • 製品コード
    D676　 DAPGreen – Autophagy Detection
容　量 メーカー希望
小売価格		 富士フイルム
和光純薬
5 nmol ￥40,900 340-09291

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よくある質問の「DAPGreenの最適濃度の検討方法を教えてください」
をご覧ください。

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  • 取扱説明書 オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬 DAPGreen - Autophagy Detection 同仁化学研究所 日本語
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  • 取扱説明書 オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬 DAPGreen - Autophagy Detection 同仁化学研究所 English
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技術情報

技術情報の目次

  • 原理
  • 操作は試薬の添加だけ
  • 検出試薬の概要
  • LC3との高い相関
  • Lamp1との共染色
  • フローサイトでの定量解析
  • プレートリーダーでの定量解析
  • 応用例：蛍光顕微鏡での定量解析
  • DAPGreenの励起、蛍光スペクトル

原理

 

オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬 DAPGreen - Autophagy Detection 同仁化学研究所
オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬 DAPGreen - Autophagy Detection 同仁化学研究所

オートファゴソーム膜が形成される際に、DAPGreenは膜内に取り込まれ、脂溶性環境下に応答し蛍光が増大します。なお、オートファジーマーカーのLC3 を指標とした検出法とも高い相関性が得られています。

技術や使用製品に関する補足

グルタミン代謝とオートファジー

グルタミナーゼの安定化を介してオートファジーとグルタミノリシスを促進するタンパク質に関する報告例を紹介！

その他、疾患と細胞内代謝指標との関連性をマップでわかりやすく紹介しています。

オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬 DAPGreen - Autophagy Detection 同仁化学研究所

参考文献

参考文献を表示する

 

文献No. 対象サンプル 装置    引用（リンク）
1) 細胞
（HeLa, MEF）		 蛍光顕微鏡

H. Iwashita, H. T. Sakurai, N. Nagahora, M. Ishiyama, K. Shioji, K. Sasamoto, K. Okuma, S. Shimizu, and Y. Ueno, "Small fluorescent molecules for monitoring autophagic flux.", FEBS Letters., 2018, 592, (4), 559–567.
2) 細胞
（HepG2; Huh-7）

蛍光顕微鏡;

フローサイトメーター

 L. Hu, T. Zhang, D. Liu, G. Guan, J. Huang, P. Proksch, X. Chen and W. Lin, "Notoamide-type alkaloid induced apoptosis and autophagy via a P38/JNK signaling pathway in hepatocellular carcinoma cells", RSC Adv., 2019, 9, 19855.
3) 細胞
（HepG2）		 蛍光顕微鏡

Q. Chu, S. Zhang, M. Chen, W. Han, R. Jia, W. Chen and X. Zheng, "Cherry Anthocyanins Regulate NAFLD by Promoting Autophagy Pathway", Oxid Med Cell Longev., 2019,DOI:10.1155/2019/4825949.
4) 細胞
（HLMVEC)		 蛍光顕微鏡

K. Koike, E. V. Berdyshev, A. M. Mikosz, I. A. Bronova, A. S. Bronoff, J. P. Jung, E. L. Beatman, K. Ni, D. Cao, A. K. Scruggs, K. A. Serban and I. Petrache, "Role of Glucosylceramide in Lung Endothelial Cell Fate and Emphysema", Am. J. Respir. Crit. Care Med., 2019,DOI:10.1164/rccm.201812-2311OC.
5) 細胞
（HeLa)		 蛍光顕微鏡

F. Hongbao,Y. Shankun, C. Qixin, L. Chunyan, C. Yuqi, G. Shanshan, B. Yang, T. Zhiqi, L. Z. Amanda, T. Takanori, C.Yuncong, G. Zijian, H. Weijiang and D. Jiajie , "De Novo-Designed Near-Infrared Nanoaggregates for Super-Resolution Monitoring of Lysosomes in Cells, in Whole Organoids, and in Vivo.", ACS Nano, 2019, 13, (12), 1446.
6) 細胞
（HeLa; A375)

フローサイトメーター

B. Yang, L. Ding, Y. Chen and J. Shi, "Augmenting Tumor-Starvation Therapy by Cancer Cell Autophagy Inhibition", Adv. Sci., 2020,DOI:10.1002/advs.201902847.
7) 細胞
（PC12)

蛍光顕微鏡(超解像)

Y. Tan, L. Yin, Z. Sun, S. Shao, W. Chen, X. Man,Y. Du and Y. Chen, "Astragalus polysaccharide exerts anti-Parkinson via activating the PI3K/AKT/mTOR pathway to increase cellular autophagy level in vitro.", Int. J. Biol. Macromol., 2020, DOI:10.1016/j.ijbiomac.2020.02.282.
8) 細胞
（Wild type Hepa 1-6)

蛍光顕微鏡

(ImageJで数値化)

Z. Peng, Y. Liao, X. Wang, L. Chen, L. Wang, C. Qin, Z. Wang, M. Cai, J. Hu, D. Li,P. Yao, A. K. Nüssler, L. Liu and W. Yang, "Heme oxygenase-1 regulates autophagy through carbon-oxygen to alleviate deoxynivalenol-induced hepatic damage., Arch. Toxicol., 2020, 94(2), 573.
9) 細胞
（マウス皮膚線維芽細胞)

フローサイトメーター

J. Kim, W.Y.Chee, N. Yabuta, K. Kajiwara, S. Nada and M. Okada, "Atg5-mediated autophagy controls apoptosis/anoikis via p53/Rb pathway in naked mole-rat fibroblasts", Biochem. Biophys. Res. Commun., 2020, 22, DOI:10.1016/j.bbrc.2020.05.083.
10) 細胞
（HeLa)

蛍光顕微鏡(超解像)

Q. Chen, M. Hao, L. Wang, L. Li, Y. Chen, X. Shao, Z. Tian, R. A. Pfuetzner, Q. Zhong, A. T. Brunger, J. Guan and J. Diao, "Prefused lysosomes cluster on autophagosomes regulated by VAMP8", 2021, doi:10.1038/s41419-021-04243-0.

よくある質問

Q

DAPGreen working solutionは、どのくらい安定ですか？

A

DAPGreen working solutionの保存はできません。用時調製してください。

Q

DAPGreenのDMSO stock solutionは、どのくらい安定ですか？

A

DAPGreenのDMSO stock solutionは、調製後、-20℃、遮光下で保存してください。調製後1ヶ月間安定です。
また、使用量に応じて小分けし保存することをお勧めします。

Q

推奨の励起・蛍光フィルターを教えてください。

A

励起フィルター：425～475 nm
蛍光フィルター：500～560 nm

なお、共焦点顕微鏡を用いて488 nm励起により蛍光観察した実績がございます。
弊社HP内の製品ページの実験例を参照ください。

Q

タイムラプスイメージングを行う上で注意点はありますか？

A

測定条件設定のための予備実験を行ってください。
試薬の特性上、染色直後は初期蛍光値が高くなる傾向があるため、以下の手順を参考に予備実験およびタイムラプスイメージングを行ってください。

①予備実験
・コントロール細胞(オートファジーを誘導しない細胞)を用いる。
・取扱説明書に従い、Working soluitonで染色後、培養培地で2回洗浄する。
・通常培地を添加した後、蛍光の時間変化を観察する。
・下図の様に、染色後に細胞内の蛍光が次第に低下した後、蛍光の変化が安定してくる時間(図中 T)を確認する。
※条件は細胞の種類により変わる可能性があります。

（参考）
HeLa細胞の場合、染色後の約60分経過すると蛍光強度が安定することを確認しております（DAPGreen）。

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②タイムラプスイメージング
・細胞を Working solutionで染色後、培養培地中で細胞を37℃でインキュベートする。
　※予備実験で設定した時間でインキュベートする。
　※染色後、直ぐにはオートファジー誘導は行わない。
・インキュベート後にオートファジーの誘導を開始して、タイムラプスイメージングをする。

（参考）
HeLa細胞をDAPGreenで染色し、通常培地中で60分間(予備実験で設定した時間)培養後、オートファジーを誘導しました。

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Q

DAPGreenの最適濃度の検討方法を教えてください。

A

試薬の特性により、試薬の濃度が高すぎたり低すぎたりすると、オートファジー誘導時と
誘導していないコントロールとの差が判りにくい場合があります。
下記の情報を参考に試薬濃度の検討することをお勧めします。

細胞種によりDAPGreenの最適濃度は異なります。
DAPGreenを薄い濃度から(目安0.05 μmol/l）から数点段階的に振って
ご検討ください(濃い濃度は1 μmol/l前後を目安としてください)。

（参考）
小社では、HeLa, HepG2、CHO細胞にて、細胞種毎のDAPGreenの最適濃度の検討を行いました。
DAPGreenを下記濃度で染色し、アミノ酸不含培地にて培養し、オートファジーを誘導しました。
その結果、下記の赤字の濃度条件ではコントロールとの差が見られました。

細胞種 検討濃度
　HeLa　 　0.4 µmol/l,　 　0.2 µmol/l,　 　0.1 µmol/l,　 　0.05 µmol/l　
　HepG2　 　0.4 µmol/l, 　0.2 µmol/l, 　0.1 µmol/l, 　0.05 µmol/l
　CHO　 　0.4 µmol/l, 　0.2 µmol/l, 　0.1 µmol/l, 　0.05 µmol/l

 

【HeLa細胞】

オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬 DAPGreen - Autophagy Detection 同仁化学研究所

【HepG2細胞】

オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬 DAPGreen - Autophagy Detection 同仁化学研究所

 

【CHO細胞】

オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬 DAPGreen - Autophagy Detection 同仁化学研究所

Q

プレートリーダーでの定量解析の測定条件を教えてください。

A

HeLa細胞を用いた測定例は下記となります。

DAPGreenで染色後のHeLa細胞を、アミノ酸不含培地にて0、2、4、6時間培養し、プレートリーダーにて検出

<操作>

1) 透明底のブラックプレートに細胞を播種　（HeLa cell, 1.6×10＾4 cells/well, 100 µl/well）

2) 一晩培養（37℃, 5%CO2）

3) 上清を除き培地で調整したWorking solution(DAPGreen：0.1 µmo/l）を100 µl添加

4) 37℃で30分間インキュベート（37℃, 5%CO2）

5) 培地で洗浄(100 µl×2回)

6) 飢餓培地(富士フィルム和光純薬, code:048-33575)を添加(100 µl)

7) 37℃で各時間インキュベート

8) プレートリーダー(TECAN,infinite pro M200)で測定(Ex/Em=450/530nm)
　　 (0minはHBSSに置換して測定)

<結果>

オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬 DAPGreen - Autophagy Detection 同仁化学研究所<検出条件>　波長 ：Ex. 450 nm / Em. 535 nm

飢餓培養を開始してから2時間後には、コントロールより約3.5倍強い蛍光を確認した。

Q

オートファジーにはどのような経路があり、 DAPGreenはどの状態を検出するのですか？

A

オートファジーには、Atg5依存的オートファジー(LC3が変化する)とLC3の変化を伴わない、Atg5非依存的オートファジーがあることが知られております*。

DAPGreenはオートファゴソーム膜に取り込まれ疎水環境下で蛍光を発し、オートファゴソームの状態を検出します。

*参考資料 :　新たなオートファジー機構の発見　清水重臣

▶初めて検出する細胞種や実験系の場合は、よくある問い合わせ【 DAPGreenの最適濃度の検討手順】をご参照ください。

オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬 DAPGreen - Autophagy Detection 同仁化学研究所 オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬 DAPGreen - Autophagy Detection 同仁化学研究所

取扱条件

規格
性状： 本品はメタノール及びジメチルスルホキシドに溶ける。
純度(HPLC)： 90.0％ 以上
取扱条件
保存条件: 冷凍,遮光 , 取扱条件: 窒素置換
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オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬 DAPGreen - Autophagy Detection 同仁化学研究所

関連製品

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  • オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬 DAPGreen - Autophagy Detection 同仁化学研究所

    オートファジー（オートリソソーム）の検出試薬

    DALGreen – Autophagy Detection

  • オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬 DAPGreen - Autophagy Detection 同仁化学研究所

    マイトファジー検出キット

    Mitophagy Detection Kit

  • オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬 DAPGreen - Autophagy Detection 同仁化学研究所

    老化細胞検出キット

    Cellular Senescence Detection Kit – SPiDER-βGal

  • オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬 DAPGreen - Autophagy Detection 同仁化学研究所

    細胞毒性測定キット

    Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST

オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬 DAPRed – Autophagy Detection 同仁化学研究所

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上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬 DAPRed - Autophagy Detection 同仁化学研究所DAPRed – Autophagy Detection

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

DAPRed – Autophagy Detection

オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬 DAPRed - Autophagy Detection 同仁化学研究所

  • 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
  • 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
  • 細胞機能解析
  • オートファジー

オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬

  • 製品コード
    D677　 DAPRed – Autophagy Detection
容　量 メーカー希望
小売価格		 富士フイルム
和光純薬
5 nmol ￥39,800 340-09551

オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬 DAPRed - Autophagy Detection 同仁化学研究所 DAPRedの最適濃度の検討については、
よくある質問の「DAPRedの最適濃度の検討方法を教えてください」
をご覧ください。

  • オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬 DAPRed - Autophagy Detection 同仁化学研究所
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マニュアル

  • 取扱説明書 日本語
    オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬 DAPRed - Autophagy Detection 同仁化学研究所
  • Manual English
    オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬 DAPRed - Autophagy Detection 同仁化学研究所

技術情報

原理

オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬 DAPRed - Autophagy Detection 同仁化学研究所

オートファゴソーム膜が形成される際に、DAPRedは膜内に取り込まれ、脂溶性環境下に応答し蛍光が増大します。なお、オートファジーマーカーのLC3 を指標とした検出法とも高い相関性が得られています。

オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬 DAPRed - Autophagy Detection 同仁化学研究所

技術や使用製品に関する補足

グルタミン代謝とオートファジー

グルタミナーゼの安定化を介してオートファジーとグルタミノリシスを促進するタンパク質に関する報告例を紹介！

その他、疾患と細胞内代謝指標との関連性をマップでわかりやすく紹介しています。

オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬 DAPRed - Autophagy Detection 同仁化学研究所

参考文献

参考文献を表示する

 

文献No. 対象サンプル 装置    引用（リンク）
1) 細胞
（HUVEC）		 蛍光顕微鏡 X. Chen, X. Yan, J. Liu and L. Zhang, " Chaiqi decoction ameliorates vascular endothelial injury in metabolic syndrome by upregulating autophagy.", Am. J. Transl. Res., 2020,12(9), 4902.
2) 細胞
（HeLa）		 蛍光顕微鏡 H. Fang , S. Geng, M. Hao, Q. Chen, M. Liu, C. Liu, Z. Tian, C. Wang, T. Takebe, J-L Guan, Y. Chen, Z. Guo, W. He and J. Diao, "Simultaneous Zn2+ tracking in multiple organelles using super-resolution morphology-correlated organelle identification in living cells ", Nat Commun, 2021, 12(1), 109. 10.1016/j.envpol.2019.07.105.
3) 細胞
（HCT116; HCT8）		 蛍光顕微鏡 H. Sun, R. Wang, Y. Liu, H. Mei and X. Liu , "USP11 induce resistance to 5-Fluorouracil in Colorectal Cancer through activating autophagy by stabilizing VCP", J Cancer , 2021, 12(8), 2317.
4) 細胞
（MEF)		 蛍光顕微鏡 M. Yagi, T. Toshima, R. Amamoto, Y. Do, H. Hirai, D. Setoyama, D. Kang and T. Uchiumi, "Mitochondrial translation deficiency impairs NAD+-mediated lysosomal acidification", EMBO J, 2021, doi:10.15252/embj.2020105268.
5) 細胞
（SH-SY5Y)		 蛍光顕微鏡 Chang-ki Oh, Nima Dolatabadi, Piotr Cieplak, Maria T. Diaz-Meco, Jorge Moscat, John P. Nolan, Tomohiro Nakamura and Stuart A. Lipton, "S-Nitrosylation of p62 Inhibits Autophagic Flux to Promote α-Synuclein Secretion and Spread in Parkinson’s Disease and Lewy Body Dementia", J. Neurosci., 2022, doi:10.1523/JNEUROSCI.1508-21.2022.

よくある質問

Q

DMSO stock solutionは、どのくらい安定ですか？

A

調製後は、-20℃、遮光下で保存してください。調製後1ヶ月間安定です。
また、使用量に応じて小分けし保存することをお勧めします。

Q

Working solutionは、どのくらい安定ですか？

A

Working solutionの保存はできません。用時調製してください。

Q

推奨の励起・蛍光フィルターを教えてください。

A

推奨フィルターは下記の通りです。
　励起フィルター：500～560 nm
　蛍光フィルター：690～750 nm
 

Q

DAPRedの最適濃度の検討方法を教えてください。

A

試薬の特性により、試薬の濃度が高すぎたり低すぎたりすると、オートファジー誘導時と誘導していないコントロールとの差が判りにくい場合があります。
下記の情報を参考に試薬濃度の検討することをお勧めします。

細胞種毎でDAPRedの最適濃度が異なります。
DAPRedを薄い濃度から(目安0.05 μmol/l）から数点段階的に振ってご検討ください(濃い濃度は0.4 μmol/lを目安としてください)。

(参考)
小社では、HeLa, HepG2、CHO細胞にて、DAPRedの最適濃度の検討を行いました。
DAPRedを下記濃度で染色し、アミノ酸不含培地にて培養し、オートファジーを誘導しました。
その結果、下記の赤字の濃度条件ではコントロールとの差が見られました。

細胞種 検討濃度
HeLa 0.4 µmol/l 0.2 µmol/l 0.1 µmol/l 0.05 µmol/l
HepG2 0.4 µmol/l 0.2 µmol/l 0.1 µmol/l 0.05 µmol/l
CHO 0.4 µmol/l 0.2 µmol/l 0.1 µmol/l 0.05 µmol/l

オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬 DAPRed - Autophagy Detection 同仁化学研究所

オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬 DAPRed - Autophagy Detection 同仁化学研究所

オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬 DAPRed - Autophagy Detection 同仁化学研究所

Q

オートファジーにはどのような経路があり、 DAPRedはどの状態を検出するのですか？

A

オートファジーには、Atg5依存的オートファジー(LC3が変化する)とLC3の変化を伴わない、Atg5非依存的オートファジーがあることが知られております*。

DAPRedはオートファゴソーム膜に取り込まれ疎水環境下で蛍光を発し、オートファゴソームの状態を検出します。

*参考資料 :　新たなオートファジー機構の発見　清水重臣

▶初めて検出する細胞種や実験系の場合は、よくある問い合わせ【 DAPRedの最適濃度の検討手順】をご参照ください。

オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬 DAPRed - Autophagy Detection 同仁化学研究所 オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬 DAPRed - Autophagy Detection 同仁化学研究所

取扱条件

規格
性状： 本品は赤褐色固体でメタノール及びジメチルスルホキシドに溶ける。
純度(HPLC)： 93.0％ 以上
取扱条件
保存条件: 冷蔵,遮光
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オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬 DAPRed - Autophagy Detection 同仁化学研究所

関連製品

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    脂肪滴測定キット

    Lipid Droplet Assay Kit – Blue

タイトル 同仁化学研究所

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

タイトル 同仁化学研究所–SulfoBiotics– Protein Redox State Monitoring Kit Plus

02 酸化ストレス関連試薬

–SulfoBiotics– Protein Redox State Monitoring Kit Plus

タイトル 同仁化学研究所

  • 酸化ストレス関連試薬

生体硫黄解析用キット

  • 製品コード
    SB12　 –SulfoBiotics– Protein Redox State Monitoring Kit Plus
容　量 メーカー希望
小売価格		 富士フイルム
和光純薬
20 samples ￥58,500 346-91743
キット内容
20 samples ・Protein-SHifter Plus
・Reaction Buffer
・Reaction Buffer
・lysis Buffer		 ×20
×4
×4
×4

  • タイトル 同仁化学研究所
試験成績書

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マニュアル

  • 取扱説明書 タイトル 同仁化学研究所 日本語
    タイトル 同仁化学研究所
  • 取扱説明書 タイトル 同仁化学研究所 English
    タイトル 同仁化学研究所
  • プロトコル タイトル 同仁化学研究所 タンパク質の SH 基の数を知りたい
    タイトル 同仁化学研究所

技術情報

チオール数が異なるタンパク質の測定例

タイトル 同仁化学研究所

GAPDH（左：チオール数 3個）、TRX（中央：チオール数 5個）、ETHE1（右：チオール数 9個）
  標識試薬：Protein-SHifter Plus (製品：Protein Redox State Monitoring Kit Plus, Code: SB12)
染色試薬：CBB

ラベル化されたタンパク質の電気泳動のバンドが、チオール数に応じてより高分子側にシフトすることが確認された。
タンパク質中に10個以上のチオールが存在する場合、電気泳動のバンドが複雑になり解析が困難になる可能性があるため、タンパク質中のチオール数として1～9個を目安に使用いただきたい。

参考文献

参考文献を表示する

1) S. Hara, T. Nojima, K. Seio, M. Yoshida and T. Hisabori, "DNA-maleimide: An improved maleimide compound for electrophoresis-based titration of reactive thiols in a specific protein" Biochim. Biophys. Acta, 2013, 1830(4), 3077.
2) S. Hara, Y. Tatenaka, Y. Ohuchi and T. Hisabori, "Direct determination of the redox status of cysteine residues in proteins in vivo", Biochem. Biophys. Res. Commun., 2015, 456, (1), 339. タイトル 同仁化学研究所
3) Y. J. Suzuki, L. Marcocci, T. Shimomura, Y. Tatenaka, Y. Ohuchi and T. I. Brelidze, 'Protein Redox State Monitoring Studies of Thiol Reactivity', antioxidant., 2019, 8, (5), 143.

よくある質問

Q

1サンプル当たりの細胞数が5-10×105 cellsを超える場合、どのような問題がありますか？

A

十分にラベル化できない可能性がございます。
また、細胞のペレットをLysis Bufferで溶解後、DNAの影響で溶液がゲル状になることがあります。

推奨範囲を超える場合は、Lysis Bufferで適切な濃度まで希釈してください。

Q

Protein-SHifter Plusは光に不安定だと思いますが、ラベル化、電気泳動は遮光して行う必要がありますか？

A

アルミラミジップから取り出したProtein-SHifter Plusは、蛍光灯下で数時間安定です。

遮光をする必要はありませんが、ラベル化、電気泳動中は直射日光等の強い光は避けてください。

未使用分はアルミラミジップに戻して、口をしっかり閉じてから冷蔵保存してください。

Q

ラベル化したサンプルは保存できますか？

A

精製タンパク質Glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenaseをラベル化したサンプルは、
一晩冷凍保管し、結果に影響が出ないことを確認しております。

サンプルによって安定性は変わる可能性がございます。

Q

ラベル化反応を妨害する物質はありますか？

A

アスコルビン酸等の還元剤は、タンパク質の還元状態に影響を与えるため使用できません。

また、チオールを有する化合物はラベル化反応を妨害します。

Q

検出可能なタンパク質中のチオール数の目安はありますか。

A

小社にて、チオール数が9個のタンパク質(ETHE1: ethylmalonic encephalopathy)に適用した実績があります（写真右）。その他、GAPDH（チオール数3個: 写真左）、およびTRX（チオール数5個: 写真中）の測定例は以下の通りです。タンパク質中に10個以上のチオールが存在する場合、電気泳動のバンドが複雑になることで解析が困難になる可能性があるため、タンパク質中のチオール数として1～9個の範囲を目安に使用することをお勧めします。

標識試薬：Protein-SHifter Plus (製品：Protein Redox State Monitoring Kit Plus, Code: SB12)
染色試薬：CBB

タイトル 同仁化学研究所

Q

検出実績のあるサンプルを教えてください。

A

シロイヌナズナ由来のThioredoxin(14k）、ヒト由来のThioredoxin(14k)、大腸菌由来のThioredoxin(14k）、
Glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase (36k)の精製タンパク質の検出実績がございます。

またHeLa、HL60、K562細胞のライセート中のThioredoxin及びGlyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenaseの検出実績もございます。

Q

光切断に使用可能な機器情報を教えてください。

A

弊社で光切断実績のある機器は下記の2種類です。
実際の光切断は画像を参考ください。

トランスイルミネーター （メーカー：UVP、型番：NTM-15、切断条件：302 nm 15 Wで10分）
ハンディUVランプ （メーカー：アズワン、型番：SLUV-4、切断条件：365 nm 4 Wで30分）

また、254 nmの光照射（ハンディUVランプまたはクリーンベンチの殺菌灯など）では、十分な光切断ができません。

例)光切断時のゲルの置き方
※ゲルが作業中に乾燥しないようガラス板に挟んだ状態で光切断を行ってください。
※光源と直接接触させて切断操作を行ってください。

タイトル 同仁化学研究所 タイトル 同仁化学研究所

          UVトランスイルミネーター                       ハンディUVランプ

Q

使用するサンプルの適切なタンパク質濃度、チオール濃度を教えてください。

A

pH7の緩衝液（100 mmol/L HEPES）中に1%濃度で溶解後、4 ℃で保存した場合、2ヶ月間は安定であることを確認しております。
1) N. Hasegawa, H. Jonotsuka, K. Miki and K. Takeda, "X-ray structure analysis of bacteriorhodopsin at 1.3 A resolution", Scientific Reports., 2018, 8, 13123, DOI:10.1038/s41598-018-31370-0. (膜タンパク質: purple membraneの結晶化, trehalose C16).

100 mg/10 mL（水）

 

タンパク質濃度として0.1～1 mg/mL、チオール濃度として100 μmol/mL以下に合わせてください。

○DTNB(製品コード：D029)を用いたチオール濃度の定量例(96 wellプレート用)は以下をご参考ください。
1. 試薬および溶液調製
・反応用バッファー（100 mmol/L sodium phosphate, pH 8.0, 1 mmol/L EDTA）

・400 μmol/L DTNB溶液
DTNB [5,5'-Dithiobis(2-nitrobenzoic acid), Code: D029] 4 mgを秤量し、反応用バッファー 1 mLで溶解する。（10 mmol/L）
上記溶液を反応用バッファーで25倍希釈する。（400 μmol/L）
※測定に必要なwell数×0.1 mLを調製する。下記の場合は9 wellであるため、約1 mLを調製する。

・ L-Cysteine標準液
L-Cysteine 2.42 mgを反応用バッファー 5 mLで溶解し、4 mmol/L L-Cysteine溶液とする。
この溶液100 μLを反応用バッファー 900 μLで希釈し、400 μmol/L L-Cysteine溶液とする。この溶液を順次2倍希釈して、 L-Cysteine標準液 (200, 100, 50, 25, 12.5, 0 μmol/L）とする。

・測定試料
サンプル（細胞溶解液やタンパク質溶液など）を反応用バッファーで希釈したものを数種類準備する。
（N=3で測定するため、350 μL以上調製する。）

2. 操作
1) 測定試料および L-Cysteine標準液を96 wellマイクロプレートの各ウェルに100 μLずつ添加する（図1)。
2) 400 μmol/L DTNB溶液100 μLを添加し、ピペッティングにより混合する。
3) 室温で15分間静置した後、マイクロプレートリーダーで412 nmにおける吸光度を測定する。
4) L-Cysteineの検量線から測定試料中のチオール濃度を算出する（図2）。
※サンプル希釈倍率からサンプル中のチオール濃度を計算する。

タイトル 同仁化学研究所タイトル 同仁化学研究所

           図1．プレート配置例  　                                                           図2．L-Cysteineの検量線例

タイトル 同仁化学研究所 タイトル 同仁化学研究所

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷蔵 , 取扱条件: 吸湿注意
危険・有害
シンボルマーク 		タイトル 同仁化学研究所タイトル 同仁化学研究所
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タイトル 同仁化学研究所

関連製品

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    生体硫黄解析用試薬

    –SulfoBiotics– PEG-PCMal

  • タイトル 同仁化学研究所

    生体硫黄解析用試薬

    –SulfoBiotics– Biotin-HPDP(WS) solution

遺伝子導入試薬 HilyMax 同仁化学研究所

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

遺伝子導入試薬 HilyMax 同仁化学研究所HilyMax

03 分子生物学関連試薬

HilyMax

  • 分子生物学関連試薬

遺伝子導入試薬

  • 製品コード
    H357　 HilyMax
容　量 メーカー希望
小売価格		 富士フイルム
和光純薬
1 ml ￥23,500 342-91103

内容物が微量のため確認しづらい場合があります。
内容物の確認についてはこちら

キット内容
1 ml ・HilyMax Reagent
・lipoform Buffer		 1 tube
1.0 ml×1

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  • 取扱説明書 遺伝子導入試薬 HilyMax 同仁化学研究所 日本語
    遺伝子導入試薬 HilyMax 同仁化学研究所
  • 取扱説明書 遺伝子導入試薬 HilyMax 同仁化学研究所 English
    遺伝子導入試薬 HilyMax 同仁化学研究所
  • プロトコル 遺伝子導入試薬 HilyMax 同仁化学研究所 遺伝子を導入したい
    遺伝子導入試薬 HilyMax 同仁化学研究所

技術情報

他社品との比較例

遺伝子導入試薬 HilyMax 同仁化学研究所

参考文献

参考文献を表示する

1) S. Mima, H. Ushijima, H.-J. Hwang, S. Tsutsumi, M. Makise, Y. Yamaguchi, T. Tsuchiya, H. Mizushima and T. Mizushima, "Identification of theTP01gene in Yeast, and its Human Orthologue TETRAN, which Cause Resistance to NSAIDs",FEBS Lett.,2007,581, 1457.
2) T. Namba, T. Ishihara, K. Tanaka, T. Hoshino and T. Mizushima, "Transcriptional Activation of ATF6 by Endoplasmic Reticulum Stressors",Biochem. Biophys. Res. Commun.,2007,355, 543.
3)H. Nakajima, W. Amano, A. Fujita, A. Fukuhara, Y. Azuma, F. Hata, T. Inui and T. Takeuchi, "The Active Site Cysteine of the Proapoptotic Protein Glyceraldehyde-3-phosphate Dehydrogenase Is Essential in Oxidative Stress-induced Aggregation and Cell Death",J. Biol. Chem.,2007,282(36), 26562.
4) A. Endo, D. Sumi and Y. Kumagai, "1,2-Naphthoquinone Disrupts the Function of cAMP Response Element-binding Protein through Covalent Modification",Biochem. Biophys. Res. Commun.,2007,36(1), 243.

よくある質問

Q

遺伝子導入後の培地交換は必ず行う必要はありますか？

A

低い細胞毒性と高い導入効率を望まれる場合は、培地交換をお勧めします。
しかし、細胞(例：CHO細胞など)によっては、培地交換が毒性や導入率に影響しないものもありすので、細胞系にあわせて行ってください。

Q

導入効率が悪かった場合、どのような点を検討すれば良いでしょうか？ (DNA量,HilyMax量,複合体形成比,時間など)

A

＜細胞毒性が低い＞

　導入効率が極端に低い場合は、DNA量を増やすか、DNA(μg):HilyMax(μL)=1:5～1:9にしてみてください。

　高い導入効率を示す場合があります。

＜細胞毒性が高い＞

　DNA量またはHilyMax量を減らしてください。

Q

説明書には、保存条件が『冷蔵』と『冷凍』の2つの記載があります。 どのように保存すればよいのでしょうか？ 最初から『冷凍』したり、ずっと『冷蔵』ではダメですか？

A

未開封・未使用の場合には『冷蔵保存』、試薬を緩衝液と混合し溶解した後は『冷凍保存』してください。
未開封の状態で『冷凍保存』いただいても品質には問題はありませが、使用時に凍結した[Lipoform Buffer]を融解していただく必要があります。

また、溶解後に関しては、2～3週間以内に使い切る場合であれば『冷蔵保存』いただいても性能に影響はありません。数週間を越える使用の場合には、必ず『冷凍保存』してください。

遺伝子導入試薬 HilyMax 同仁化学研究所 遺伝子導入試薬 HilyMax 同仁化学研究所

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷蔵
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遺伝子導入試薬 HilyMax 同仁化学研究所

関連製品

ミトコンドリア内鉄イオン検出試薬 Mito-FerroGreen | CAS – 同仁化学研究所

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

ミトコンドリア内鉄イオン検出試薬 Mito-FerroGreen | CAS - 同仁化学研究所Mito-FerroGreen

04 細胞内蛍光プローブ

Mito-FerroGreen

ミトコンドリア内鉄イオン検出試薬 Mito-FerroGreen | CAS - 同仁化学研究所

  • 細胞内蛍光プローブ
  • 細胞機能解析
  • ミトコンドリア関連

ミトコンドリア内鉄イオン検出試薬

  • 製品コード
    M489　 Mito-FerroGreen
  • CAS番号
    –
容　量 メーカー希望
小売価格		 富士フイルム
和光純薬
50 μg x 2 ￥28,400 344-09211
  • ミトコンドリア内鉄イオン検出試薬 Mito-FerroGreen | CAS - 同仁化学研究所
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マニュアル

  • 取扱説明書 日本語
    ミトコンドリア内鉄イオン検出試薬 Mito-FerroGreen | CAS - 同仁化学研究所
  • Manual English
    ミトコンドリア内鉄イオン検出試薬 Mito-FerroGreen | CAS - 同仁化学研究所
  • プロトコル ミトコンドリア内鉄イオン検出試薬 Mito-FerroGreen | CAS - 同仁化学研究所 ミトコンドリアの鉄イオンを検出したい
    ミトコンドリア内鉄イオン検出試薬 Mito-FerroGreen | CAS - 同仁化学研究所

技術情報

測定原理

ミトコンドリア内鉄イオン検出試薬 Mito-FerroGreen | CAS - 同仁化学研究所

参考文献

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参考文献

1) T. Hirayama,  S. Kadota, M. Niwa  and  H. Nagasawa, "A mitochondria-targeted fluorescent probe for selective detection of mitochondrial labile Fe(II)", Metallomics., 2018, DOI: 10.1039/C8MT00049B, ※論文中では「Mito-FerroGreen」を「Ac-MtFluNox」で表記。.
2) T. Issitt, E. Bosseboeuf, N. Winter, N. Dufton, G. Gestri, V. Senatore, A. Chikh, A. Randi, C. Raimondi, "Neuropilin-1 controls endothelial homeostasis by regulating mitochondrial function and iron-dependent oxidative stress via ABCB8", iScience., 2018,DOI: 10.1016/j.isci.2018.12.005 .
3) E. E. Mon, F. Y. Wei, R. N. R. Ahmad, T. Yamamoto, T. Moroishi and K. Tomizawa, "Regulation of mitochondrial iron homeostasis by siderofexin 2 ", J Physiol Sci., 2018,doi:10.1007/s12576-018-0652-2.
4) M. Fujimaki, N. Furuya, S. Saiki, T. Amo, Y. Imamichi and N. Hattori, "Iron supply via NCOA4-mediated ferritin degradation maintains mitochondrial functions", Mol. Cell. Biol.., 2019,doi: 10.1128/MCB.00010-19.
5) K. Tomita, M. Fukumoto, K. Itoh, Y. Kuwahara, K. Igarashi, T. Nagasawa, M. Suzuki, A. Kurimasa and T. Sato, "MiR-7-5p is a key factor that controls radioresistance via intracellular Fe2+ content in clinically relevant radioresistant cells.", Biochem Biophys Res Commun.., 2019,doi: 10.1016/j.bbrc.2019.08.117.
6) Y. Wang and M. Tang, "PM2.5 induces ferroptosis in human endothelial cells through iron overload and redox imbalance", Environ. Pollut., 2019, 264, doi: 10.1016/j.envpol.2019.07.105.
7) KF. Yambire, C. Rostosky, T. Watanabe, D. Pacheu-Grau, S. Torres-Odio,A. Sanchez-Guerrero,O. Senderovich, EG. Meyron-Holtz,I.Milosevic, J. Frahm, AP. West and N. Raimundo, "Impaired lysosomal acidification triggers iron deficiency and inflammation in vivo.", Elife, 2019, 3, (8), doi:10.7554/eLife.51031. 
8) H. Nishizawa, M. Matsumoto, T. Shindo, D. Saigusa, H. Kato, K. Suzuki, M. Sato, Y. Ishii, H. Shimokawa and K. Igarashi, "Ferroptosis is controlled by the coordinated transcriptional regulation of glutathione and labile iron metabolism by the transcription factor BACH1",  J. Biol. Chem.,  2019,doi: 10.1074/jbc.RA119.009548.
9)Y. akashima, A. Hayano and B. Yamanaka, Metabolome analysis reveals excessive glycolysis via PI3K/AKT/mTOR and RAS/MAPK signaling in methotrexate-resistant primary CNS lymphoma-derived cells.", Clin. Cancer Res., 2020, DOI:10.1158/1078-0432.

よくある質問

Q

推奨フィルターを教えてください。

A

検出時の推奨フィルターは下記の通りです。

励起フィルター: 450～500 nm
蛍光フィルター: 515～550 nm

ミトコンドリア内鉄イオン検出試薬 Mito-FerroGreen | CAS - 同仁化学研究所 ミトコンドリア内鉄イオン検出試薬 Mito-FerroGreen | CAS - 同仁化学研究所

取扱条件

規格
性状： 本品はアセトニトリル、メタノール、ジメチルスルホキシドに溶解する。
純度(HPLC)： 90.0％ 以上
蛍光スペクトル： 試験適合
取扱条件
保存条件: 冷凍,遮光 , 取扱条件: 窒素置換,吸湿注意
SDSダウンロード
ミトコンドリア内鉄イオン検出試薬 Mito-FerroGreen | CAS - 同仁化学研究所

関連製品

この製品に関連する研究では、下記の関連製品も使われています。

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    過酸化脂質検出蛍光試薬

    Liperfluo

  • ミトコンドリア内鉄イオン検出試薬 Mito-FerroGreen | CAS - 同仁化学研究所

    老化細胞検出キット

    Cellular Senescence Detection Kit – SPiDER-βGal

  • ミトコンドリア内鉄イオン検出試薬 Mito-FerroGreen | CAS - 同仁化学研究所

    グルタチオン定量キット

    GSSG/GSH Quantification Kit

  • ミトコンドリア内鉄イオン検出試薬 Mito-FerroGreen | CAS - 同仁化学研究所

    マイトファジー検出キット

    Mitophagy Detection Kit

エンドサイトーシス検出試薬 ECGreen-Endocytosis Detection 同仁化学研究所

发表于由

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エンドサイトーシス検出試薬 ECGreen-Endocytosis Detection 同仁化学研究所ECGreen-Endocytosis Detection

04 細胞内蛍光プローブ

ECGreen-Endocytosis Detection

エンドサイトーシス検出試薬 ECGreen-Endocytosis Detection 同仁化学研究所

  • 細胞内蛍光プローブ

エンドサイトーシス検出試薬

  • より正確にエンドサイトーシスを可視化できる
  • 生細胞でエンドサイトーシスを追跡できる
  • pH変化に対する応答性が高い
  • 製品コード
    E296　 ECGreen-Endocytosis Detection
容　量 メーカー希望
小売価格		 富士フイルム
和光純薬
40 μl ￥48,200 342-09751

＜使用回数の目安＞ 40 μl あたり、35 mm dish 20 枚、μ-Slide 8 well 20 枚

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マニュアル

  • 取扱説明書 日本語
    エンドサイトーシス検出試薬 ECGreen-Endocytosis Detection 同仁化学研究所
  • Manual English
    エンドサイトーシス検出試薬 ECGreen-Endocytosis Detection 同仁化学研究所

技術情報

 

技術情報の目次    

  • 従来法の課題を解決 
  • 直接的にエンドソームを可視化
  • pH変化への応答性が高い
  • 実験例：薬剤を用いた初期エンドソームの観察
  • 実験例：エンドサイトーシス経路を介したエクソソーム取り込みの可視化
  • 実験例：浮遊細胞を用いた温度依存的なエンドサイトーシス変化の観察
  • 応用例：エンドソームの局在の時間変化
  • ECGreenの蛍光特性
  • 関連製品

参考文献

参考文献を表示する

 

文献No. 対象サンプル 装置    引用（リンク）
1) 細胞
（HepG2）		 蛍光顕微鏡 Y. Miyakawa, M. Otsuka, K. Sekiba, K. Funato, K. Koike, "Humanized virus-suppressing factor inhibits hepatitis B virus infection by targeting viral cell entry ",  Heliyon,  2021, doi:10.1016/j.heliyon.2021.e07586.
2) 細胞
（皮膚線維芽細胞）		 蛍光顕微鏡 H. L. Marko, N. C. Hornig, R. C. Betz, P. Holterhus, J. Altmüller, H. Thiele, M. Fabiano, H. Schweikert, D. Braun, Ul Schiweizer, "Genomic variants reducing expression of two endocytic receptors in 46,XY differences of sex development", Hum. Mutat. 2022, doi:10.1002/humu.24325.
3) 細胞
（HeLa）		 蛍光顕微鏡 K. Qiu, R. Seino, G. Han, M. Ishiyama, Y. Ueno, Z. Tian, Y. Sun, J. Diao, "De Novo Design of A Membrane-Anchored Probe for Multidimensional Quantification of Endocytic Dynamics", Adv. Healthcare Mater., 2022, doi:10.1002/adhm.202102185.

 

よくある質問

Q

落射型顕微鏡でも観察できますか。

A

共焦点顕微鏡での観察を推奨しておりますが、落射型顕微鏡でも観察は可能です。

小社ではDAPI filter set (Ex : 360/40 nm, Em : 460/50 nm)で検出した実績があります。

 

エンドサイトーシス検出試薬 ECGreen-Endocytosis Detection 同仁化学研究所

図1. 落射型顕微鏡での観察

Q

血清含有培地で染色できますか？

A

血清含有培地での染色も可能です。
HeLa細胞では血清含有培地で作成したworking solutionを用いて24時間まで細胞毒性なく染色した実績があります。
細胞毒性の評価は小社製品「　Cell Counting Kit-8　」を用いて確認しています。

エンドサイトーシス検出試薬 ECGreen-Endocytosis Detection 同仁化学研究所

図. Cell Counting Kit-8を用いた細胞毒性試験（24時間）
エンドサイトーシス検出試薬 ECGreen-Endocytosis Detection 同仁化学研究所 エンドサイトーシス検出試薬 ECGreen-Endocytosis Detection 同仁化学研究所

取扱条件

規格
性状： 黄緑色液体
含量： 試験適合
取扱条件
保存条件: 冷凍
危険・有害
シンボルマーク 		エンドサイトーシス検出試薬 ECGreen-Endocytosis Detection 同仁化学研究所
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関連製品

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    細胞膜染色試薬 Green

    PlasMem Bright Green

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    エクソソーム 膜蛍光染色キット Deep Red

    ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Deep Red

  • エンドサイトーシス検出試薬 ECGreen-Endocytosis Detection 同仁化学研究所

    ミトコンドリア染色用色素 Red

    MitoBright LT Red

  • エンドサイトーシス検出試薬 ECGreen-Endocytosis Detection 同仁化学研究所

    オートファジー（オートリソソーム）の検出試薬

    DALGreen – Autophagy Detection

  • エンドサイトーシス検出試薬 ECGreen-Endocytosis Detection 同仁化学研究所

    pHセンサーラベル化キット

    AcidSensor Labeling Kit Endocytic Internalization Assay

マイトファジー検出キット Mitophagy Detection Kit 同仁化学研究所

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マイトファジー検出キット Mitophagy Detection Kit 同仁化学研究所Mitophagy Detection Kit

05 細胞染色用色素

Mitophagy Detection Kit

マイトファジー検出キット Mitophagy Detection Kit 同仁化学研究所

  • 細胞染色用色素
  • 細胞機能解析
  • ミトコンドリア関連

マイトファジー検出キット

  • 製品コード
    MD01　 Mitophagy Detection Kit
容　量 メーカー希望
小売価格		 富士フイルム
和光純薬
1 set ￥40,900 344-91901
キット内容
1 set ・Mtphagy Dye
・lyso Dye		 5 μg x 1
30 μg x 1

  • マイトファジー検出キット Mitophagy Detection Kit 同仁化学研究所
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マニュアル

  • 取扱説明書 日本語
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  • プロトコル マイトファジー検出キット Mitophagy Detection Kit 同仁化学研究所 マイトファジ―を検出したい
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技術情報

検出原理

Mtphagy Dyeによるマイトファジー検出機構

マイトファジー検出キット Mitophagy Detection Kit 同仁化学研究所

本製品の測定原理・使用例が記載された論文は、参考文献4)をご覧ください。

マイトファジーのリアルタイム観察

HeLa細胞をCCCP処理し、マイトファジー検出試薬（MtphagyDye）及びミトコンドリア染色試薬（MitoBright LT Green）にて共染色しタイムラプス撮影(6時間)しました。

＜検出条件＞
装置：LSM-700 Laser scanning confocal microscope (LSCM)
　　　(Carl Zeiss, Oberkochen, Germany)
励起波長：MitoBright LT Green 488 nm
　　　　MtphagyDye 555 nm
対物レンズ：63 倍
撮影時間　：6 時間
撮影インターバル：15 秒

技術や使用製品に関する補足

長期滞留性・血清培地中で使用可能

【ミトコンドリア染色試薬】

・MitoBright LT Green

・MitoBright LT Red

・MitoBright LT Deep Red

参考文献

参考文献を表示する

 

文献No. 対象サンプル 装置 引用（リンク）
1)

細胞（HeLa）

 フローサイトメーター J. Koniga, C. Otta, M. Hugoa, T. Junga, A. L. Bulteaub, T. Grunea and A. Hohna, "Mitochondrial contribution to lipofuscin formation", Redox Biology, 2017, 11, 673.
2) 細胞（KB） 蛍光顕微鏡 K. Kameyama, "Induction of mitophagy-mediated antitumor activity with folate-appended methyl-β-cyclodextrin", International Journal of Nanomedicine, 2017, 12, 3433.
3)

細胞（SH-SY5Y, 初代ラット皮質神経細胞）

 蛍光顕微鏡 E. F. Fang, T. B. Waltz, H. Kassahun, Q. Lu, J. S. Kerr, M. Morevati, E. M. Fivenson, B. N. Wollman, K. Marosi, M. A. Wilson, W. B. Iser, D. M. Eckley, Y. Zhang, E. Lehrmann, I. G. Goldberg, M. S. Knudsen, M. P. Mattson, H. Nilsen, V. A. Bohr and K. G. Becker, "Tomatidine enhances lifespan and healthspan in C. elegans through mitophagy induction via the SKN-1/Nrf2 pathway", Scientific Reports, 2017, 7, (46208), DOI: 10.1038/srep46208.
4) 細胞（HeLa、Parkin発現HeLa） 蛍光顕微鏡 H. Iwashita, S. Torii, N. Nagahora, M. Ishiyama, K. Shioji, K. Sasamoto, S. Shimizu and K. Okuma, "Live Cell Imaging of Mitochondrial Autophagy with a Novel Fluorescent Small Molecule", ACS Chem. Biol., 2017, 12, (10), 2546.
5)

細胞（Cardiomyocytes）

 フローサイトメーター Y. Feng, NB. Madungwe, CV. da Cruz Junho and JC. Bopassa, "Activation of G protein-coupled oestrogen receptor 1 at the onset of reperfusion protects the myocardium against ischemia/reperfusion injury by reducing mitochondrial dysfunction and mitophagy.", Br. J. Pharmacol., 2017, 174, (23), 4329.
6)

細胞（HCT116）

 蛍光顕微鏡 K. M. Elamin, K. Motoyama, T. Higashi, Y. Yamashita, A. Tokuda and H. Arima, "Dual targeting system by supramolecular complex of folate-conjugated methyl-β-cyclodextrin with adamantane-grafted hyaluronic acid for the treatment of colorectal cancer.", Int. J. Biol. Macromol., 2018, doi: 10.1016/j.ijbiomac.2018.02.149.
7)

細胞（Parkin-HeLa）

 プレートリーダー N. Furuya, S. Kakuta, K. Sumiyoshi, M. Ando, R. Nonaka, A. Suzuki, S. Kazuno, S. Saiki and N. Hattori, "NDP52 interacts with mitochondrial RNA poly(A) polymerase to promote mitophagy.", EMBO Rep. ., 2018, doi: 10.15252/embr.201846363.
8)

細胞（NKT）

 フローサイトメーター L. Zhu, X. Xie, L. Zhang, H. Wang, Z. Jie, X. Zhou, J. Shi, S. Zhao, B. Zhang, X. Cheng and S. Sun, "TBK-binding protein 1 regulates IL-15-induced autophagy and NKT cell survival", Nature Communications., 2018, 9, (1), doi:10.1038/s41467-018-05097-5.
9)

細胞（HeLa）

 フローサイトメーター K. Araki, K. Kawauchi, W. Sugimoto, D. Tsuda, H. Oda, R. Yoshida and K. Ohtani, "Mitochondrial protein E2F3d, a distinctive E2F3 product, mediates hypoxia-induced mitophagy in cancer cells", Commun Biol., 2019, DOI: 10.1038/s42003-018-0246-9.
10)

細胞（Bovine Sertoli）

 蛍光顕微鏡 E. Adegoke, S. Adeniran, Y. Zeng, X. Wang, H. Wang, C. Wang, H. Zhang, P. Zheng and G. Zhang , "Pharmacological inhibition of TLR4/NF-κB with TLR4-IN-C34 attenuated microcystin-leucine arginine toxicity in bovine Sertoli cells.", J Appl Toxicol., 2019,doi: 10.1002/jat.3771.
11)

組織（マウス）

 蛍光顕微鏡  E. F. Fang, Y. Hou, K. Palikaras, B. A. Adriaanse, J. S. Kerr, B. Yang, S. Lautrup, M. M. Hasan-Olive, D. Caponio, X. Dan, P. Rocktaschel, D. L. Croteau, M. Akbari, N. H. Greig, T. Fladby, H. Nilsen, M. Z. Cader, M. P. Mattson, N. Tavernarakis and V. A. Bohr, "Mitophagy inhibits amyloid-β and tau pathology and reverses cognitive deficits in models of Alzheimer's disease.", Nat. Neurosci. ., 2019,DOI:10.1038/s41593-018-0332-9.
12)

細胞（HepG2）

 蛍光顕微鏡 Iwasawa, T. Shinomiya, N. Ota, N. Shibata, K. Nakata, I. Shiina, and Y. Nagahara , "Novel Ridaifen-B Structure Analog Induces Apoptosis and Autophagy Depending on Pyrrolidine Side Chain", Biological and Pharmaceutical Bulletin., 2019, 42, (3), 401-410, doi: 10.1248/bpb.b18-00643.
13)

細胞（U2OS）

 蛍光顕微鏡
プレートリーダー		 T. Namba, "BAP31 regulates mitochondrial function via interaction with Tom40 within ER-mitochondria contact sites ", Sci Adv., 2019, 5, (6), 1386.
14) 細胞（ラット：INS-1） 蛍光顕微鏡 A. Inamura, S. M. Hirayama, and K. Sakurai, Loss of Mitochondrial DNA by Gemcitabine Triggers Mitophagy and Cell Death', Biol. Pharm. Bull.., 2019, 42, 1977.
15)

細胞（HRCEpiC, HRPTEpic）

 プレートリーダー Y. Zhao and M. Sun, Metformin rescues Parkin protein expression and mitophagy in high glucose-challenged human renal epithelial cells by inhibiting NF-κB via PP2A activation., Life Sci.., 2020, DOI:10.1016/j.lfs.2020.117382.
16)

細胞（RAES）

 蛍光顕微鏡 N. Liu, J. Wu, L. Zhang, Z. Gao, Y. Sun, M. Yu, Y. Zhao, S. Dong, F. Lu and W. Zhang , "Hydrogen Sulphide modulating mitochondrial morphology to promote mitophagy in endothelial cells under high‐glucose and high‐palmitate ", J. Cell. Mol. Med., 2017, 21, (12), 3190.
17)

細胞（BAECs）

 蛍光顕微鏡 N. Kajihara, D. Kukidome, K. Sada, H. Motoshima, N. Furukawa, T. Matsumura, T. Nishikawa and E. Araki, "Low glucose induces mitochondrial reactive oxygen species via fatty acid oxidation in bovine aortic endothelial cells", J Diabetes Investig, 2017, 8, (6), 750.
18)

細胞（HT22）

 蛍光顕微鏡 M. Jin, H. Ni and  L. Li, "Leptin Maintained Zinc Homeostasis Against Glutamate-Induced Excitotoxicity by Preventing Mitophagy-Mediated Mitochondrial Activation in HT22 Hippocampal Neuronal Cells.", Front Neurol, 2018, 9, (9), 332.
19)

細胞（BMDMs）

 フローサイトメーター D. Bhatia, K. P. Chung, K. Nakahira, E. Patino, M. C. Rice, L. K. Torres, T. Muthukumar, A. M. Choi, O. M. Akchurin and M. E. Choi , "Mitophagy-dependent macrophage reprogramming protects against kidney fibrosis", JCI Insight, 2019, 4, (23), e132826.
20)

細胞（U2OS）

 蛍光顕微鏡 J. Zheng, D. L. Croteau, V. A.  Bohr and M. Akbari, "Diminished OPA1 expression and impaired mitochondrial morphology and homeostasis in Aprataxin-deficient cells. ", Nucleic Acids Res., 2019, 47, (8), 4086.
21)

細胞（HT22）

 蛍光顕微鏡 D. D. Wang, M. F. Jin, D. J. Zhao and H. Ni, "Reduction of Mitophagy-Related Oxidative Stress and Preservation of Mitochondria Function Using Melatonin Therapy in an HT22 Hippocampal Neuronal Cell Model of Glutamate-Induced Excitotoxicity", Front Endocrinol (Lausanne), 2019, 10, 550.
22)

細胞（CD4+T-cells, HeLa）

 蛍光顕微鏡
フローサイトメーター		 A. Bektas, S. H. Schurman, M. G. Freire, A. Bektas, S. H. Schurman, M. G. Freire, C. A. Dunn, A. K. Singh, F. Macian, A. M. Cuervo, R. Sen and L. Ferrucci, "Age-associated changes in human CD4+ T cells point to mitochondrial dysfunction consequent to impaired autophagy.", Aging (Albany NY)., 2019, 11, (21), 9234-9263.
23)

細胞（ALM）

 フローサイトメーター T. Nechiporuk, S.E. Kurtz, O. Nikolova, T. Liu, C.L. Jones, A. D. Alessandro, R. C. Hill, A. Almeida, S. K. Joshi, M. Rosenberg, C. E. Tognon, A. V. Danilov, B. J. Druker, B. H. Chang, S. K McWeeney and J. W. Tyner, "The TP53 Apoptotic Network Is a Primary Mediator of Resistance to BCL2 Inhibition in AML Cells.", Cancer Discov., 2019, 9, (7), 919.
24)

細胞（PK-15）

 蛍光顕微鏡 Y. Zhang, R. Sun, X. Li  and W. Fang, "Porcine Circovirus 2 Induction of ROS Is Responsible for Mitophagy in PK-15 Cells via Activation of Drp1 Phosphorylation", Viruses., 2020, 12, (3), 289.
25)

細胞（HCE）

 蛍光顕微鏡 Y. Huo, W. Chen, X. Zheng, J. Zhao, Q. Zhang, Y. Hou, Y. Cai, X. Lu and X. Jin , "The protective effect of EGF-activated ROS in human corneal epithelial cells by inducing mitochondrial autophagy via activation TRPM2.", J. Cell. Physiol., 2020, DOI: 10.1002/jcp.29597.
26)

細胞（ラット：心筋細胞）

 蛍光顕微鏡 Y. Sun, F. Lu, X. Yu, B. Wang, J. Chen, F. Lu, S. Peng, X. Sun, M. Yu, H. Chen, Y. Wang, L. Zhang, N. Liu, H. Du, D. Zhao and W. Zhang, "Exogenous H2S Promoted USP8 Sulfhydration to Regulate Mitophagy in the Hearts of db/db Mice.", Aging Dis., 2020, 11, (2), 269.
27)

細胞（HCFs）

 蛍光顕微鏡 R. Tanaka, M. Umemura, M. Narikawa, M. Hikichi, K. Osaw, T. Fujita, U. Yokoyama, T. Ishigami, K. Tamura and Y. Ishikawa, "Reactive fibrosis precedes doxorubicin-induced heart failure through sterile inflammation.", ESC Heart Fail., 2020, 7, (2), 588.
28)

細胞（VSMCs）

 蛍光顕微鏡 C. Duan, L. Kuang, X. Xiang, J. Zhang, Y. Zhu, Y. Wu, Q. Yan, L. Liu and T. Li, "Drp1 regulates mitochondrial dysfunction and dysregulated metabolism in ischemic injury via Clec16a-, BAX-, and GSH- pathways ", Cell Death Dis., 2020, 11, 251.
29)

細胞（Bovine Sertoli）

 蛍光顕微鏡 E. O. Adegoke, W. Xue, N. S. Machebe, S. O. Adeniran, W. Hao, W. Chen, Z. Han, Z. Guixue and Z. Peng, "Sodium Selenite inhibits mitophagy, downregulation and mislocalization of blood-testis barrier proteins of bovine Sertoli cell exposed to microcystin-leucine arginine (MC-LR) via TLR4/NF-kB and mitochondrial signaling pathways blockage.", Ecotoxicol. Environ. Saf., 2018, 116, 165.
30)

細胞（HeLa）

 蛍光顕微鏡 D. Takahashi, J. Moriyama, T. Nakamura, E. Miki, E. Takahashi, A. Sato, T. Akaike, K. I. Nakama and H. Arimoto, "AUTACs: Cargo-Specific Degraders Using Selective Autophagy. ", Mol. Cell, 2019, 76, (5), 797.
31)

細胞（primary hepatocyte）

 蛍光顕微鏡 H. Kim, J. H. Lee and J. W. Park, "IDH2 deficiency exacerbates acetaminophen hepatotoxicity in mice via mitochondrial dysfunction-induced apoptosis.", Biochim Biophys Acta Mol Basis Dis, 2019, 1865, (9), 2333.
32)

細胞（C3H10T1/2s）

 蛍光顕微鏡 M. S.  Rahman and Y. S.  Kim, "PINK1-PRKN mitophagy suppression by Mangiferin promotes a brown-fat-phenotype via PKA-p38 MAPK signalling in murine C3H10T1/2", Metabolism, 2020, 101, 154228.
33)

細胞（NHEKs）

 蛍光顕微鏡 S. Ikeoka and A. Kiso  , "The Involvement of Mitophagy in the Prevention of UV-B-Induced Damage in Human Epidermal Keratinocytes ", J. Soc. Cosmet. Chem. Jpn., 2020,  54(3), 252.
34) 細胞（MIN6-M9） 蛍光顕微鏡 R. Inoe, T. Tsuno, Y. Togashi, T. Okuyama, A. Sato, K. Nishiyama, M. Kyohara, J. Li, S. Fukushima, T. Kin, D. Miyashita, Y. Shiba, Y. Atobe, H. Kiyonari, K. Bando, A. S. Shapiro, K. Funakoshi, R. N. Kulkarni, Y. Terauchi, and J. Shirakawa, "Uncoupling protein 2 and aldolase B impact insulin release by modulating mitochondrial function and Ca2+ release from the ER", 2022, iScience,  doi:10.1016/j.isci.2022.104603.

 

よくある質問

Q

既存法に対する利点を教えてください。

A

pHセンサーKeimaタンパク質を用いた検出方法と比較して、本キットは低分子蛍光試薬を用いるため、蛍光タンパク質を発現させる必要がありません。また、一般的なライブセルイメージング用の蛍光試薬と同様の操作方法で染色、観察することができます。

Q

DMSO stock solutionは、どのくらい安定ですか？

A

Mtphagy Dye、Lyso Dyeともに、調製後、-20℃で保存してください。調製後1か月間安定です。使用量に応じて小分けして保存することをお勧めします。

Q

Working solutionは、どのくらい安定ですか？

A

保存できません。用時調製してください。

Q

培地中のフェノールレッドは測定に影響しますか？

A

観察する際、共焦点レーザー顕微鏡をご使用であれば殆どフェノールレッドの影響はありませんが、落射型蛍光顕微鏡をご使用の場合はフェノールレッドによるバックグラウンドが観察されます。（下記観察データを参照）そのため落射型蛍光顕微鏡をご使用になる際は、Working solutionまたは染色時にはフェノールレッド不含の培地またはHBSSをご使用ください。

マイトファジー検出キット Mitophagy Detection Kit 同仁化学研究所

Q

蛍光顕微鏡の推奨フィルターを教えてください。

A

各試薬に応じて以下のフィルターを推奨します。

　Mtphagy Dye：　励起（500～560 nm）、蛍光（670～730 nm）
　Lyso Dye： 　　　励起（350～450 nm）、蛍光（500～560 nm）

取扱説明書の「励起/蛍光スペクトル」及び「蛍光顕微鏡による測定例」もご参考ください。

Q

多重染色時の注意点を教えてください。

A

Mtphagy Dyeは一般的なRed系の蛍光色素に比べストークスシフトが長いため、Deep Redの蛍光色素と共染色する時には特に注意が必要です。
つまりMtphagy Dyeは500–560 nmで励起し、670-730 nmで蛍光を検出するため、Deep Redの蛍光検出波長と重なります。そのため、Deep Redの色素が励起されない波長でMtphagy Dyeを励起し、一方でMtphagy Dyeが励起されない波長でDeep Redの色素を励起する必要があります。

［漏れ込みの事例］
① MitoBright Deep Redのみを添加した細胞（Mtphagy Dyeは添加していない条件）を用意した。
② MitoBright Deep Redの励起・蛍光波長で観察し、蛍光が観察されるかを確認した（下右図）。
③ Mtphagy Dyeの励起・蛍光波長で観察し、蛍光が観察されるかを確認した（下左図）。
④ ③にてMitoBright Deep Red由来の蛍光が観察された（下左図）。マイトファジー検出キット Mitophagy Detection Kit 同仁化学研究所

※上記の様に蛍光の漏れ込みが確認された場合、下記をご参照ください。

[漏れ込み時の対処法]

○励起フィルター変更による対処
　上記の確認例にある通りEx 561 nmではMitoBright Deep Redも励起されていることから、Mtphagy Dyeの励起波長をより500 nmに近いレーザーまたはフィルターに変更しMitoBright Deep Redが励起されない条件に設定する。

○励起強度および蛍光検出感度の調整による対処
　MitoBright Deep Redの蛍光がMtphagy Dyeの観察波長に漏れ込んでいる場合、蛍光が観察されないレベルまで励起強度または観察時の感度を下げる。
その後、変更したそれぞれの観察条件でMtphagy Dyeの蛍光が検出できることを確認する。

[漏れ込みの確認方法]
Mtphagy Dye、Lyso Dye（リソソーム染色試薬）、MitoBright Deep Red（ミトコンドリア染色試薬）を用いた三重染色時の確認

1. 細胞を3つのdishまたはwellに準備する。
　（Mtphagy Dye、Lyso Dye、MitoBright Deep Redは、それぞれ異なるdishまたはwell中の細胞に加え染色する）
2. Mtphagy DyeおよびMitoBright Deep Redをそれぞれの細胞に添加する。（血清不含培地中）
3. 37℃で30分間培養する。
4. マイトファジー誘導条件（飢餓培養など）にて培養する。
5. Lyso Dyeを上記2.で使用していない細胞へ添加する。（血清不含培地中）
6. 37℃で30分間培養する。
7. それぞれの試薬に滴した励起波長、蛍光波長で観察する。
8. 使用している試薬以外の観察波長で、蛍光の漏れ込みがないことを確認する。

［観察条件］
　Lyso Dye：Ex 350-450 nm、Em 500-560 nm
　Mtphagy Dye： Ex 500-560 nm、Em 670-730 nm
　MitoBright Deep Red： Ex 640 nm、Em 656-700 nm

マイトファジー検出キット Mitophagy Detection Kit 同仁化学研究所 マイトファジー検出キット Mitophagy Detection Kit 同仁化学研究所

取扱条件／SDS

規格
性状：
Mtphagy Dye： 試験適合
Lyso Dye： 試験適合

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷蔵,遮光 , 取扱条件: 窒素置換,吸湿注意
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マイトファジー検出試薬 Mtphagy Dye 同仁化学研究所

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マイトファジー検出試薬 Mtphagy Dye 同仁化学研究所Mtphagy Dye

05 細胞染色用色素

Mtphagy Dye

マイトファジー検出試薬 Mtphagy Dye 同仁化学研究所

  • 細胞染色用色素
  • 細胞機能解析
  • ミトコンドリア関連

マイトファジー検出試薬

  • 製品コード
    MT02　 Mtphagy Dye
容　量 メーカー希望
小売価格		 富士フイルム
和光純薬
5 μg x 3 ￥88,400 349-92051

マイトファジー検出キット Mitophagy Detection Kitのご確認

初めてMtphagy Dye をご使用の際は、リソソーム染色試薬(Lyso Dye) が同梱された上記製品にて、リソソームとの共染色によりマイトファジーを検出することをお勧めします。

「動画で見る」 マイトファジー

マイトファジーのタイムラプス観察動画を公開しました！
ミトコンドリア染色：本製品、マイトファジー染色：Mtphagy Dye
クリックでマイトファジー検出キット製品ページに移動します。

 

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マニュアル

  • 取扱説明書 日本語
    マイトファジー検出試薬 Mtphagy Dye 同仁化学研究所
  • Manual English
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技術情報

検出原理

Mtphagy Dyeによるマイトファジー検出機構

マイトファジー検出試薬 Mtphagy Dye 同仁化学研究所

Mtphagy Dyeを用いた実験データは、コチラ[Mitophagy Detection Kit(品コード：MD01)]のページをご覧ください。

参考文献

参考文献を表示する

1) J. Koniga, C. Otta, M. Hugoa, T. Junga, A. L. Bulteaub, T. Grunea and A. Hohna, "Mitochondrial contribution to lipofuscin formation", Redox Biology, 2017, 11, 673.
2) K. Kameyama, "Induction of mitophagy-mediated antitumor activity with folate-appended methyl-β-cyclodextrin", International Journal of Nanomedicine, 2017, 12, 3433.
3) E. F. Fang, T. B. Waltz, H. Kassahun, Q. Lu, J. S. Kerr, M. Morevati, E. M. Fivenson, B. N. Wollman, K. Marosi, M. A. Wilson, W. B. Iser, D. M. Eckley, Y. Zhang, E. Lehrmann, I. G. Goldberg, M. S. Knudsen, M. P. Mattson, H. Nilsen, V. A. Bohr and K. G. Becker, "Tomatidine enhances lifespan and healthspan in C. elegans through mitophagy induction via the SKN-1/Nrf2 pathway", Scientific Reports, 2017, 7, (46208), DOI: 10.1038/srep46208.
4) H. Iwashita, S. Torii, N. Nagahora, M. Ishiyama, K. Shioji, K. Sasamoto, S. Shimizu and K. Okuma, "Live Cell Imaging of Mitochondrial Autophagy with a Novel Fluorescent Small Molecule", ACS Chem. Biol., 2017, 12, (10), 2546.
5) Y. Feng, NB. Madungwe, CV. da Cruz Junho and JC. Bopassa, "Activation of G protein-coupled oestrogen receptor 1 at the onset of reperfusion protects the myocardium against ischemia/reperfusion injury by reducing mitochondrial dysfunction and mitophagy.", Br. J. Pharmacol., 2017, 174, (23), 4329.
6) K. M. Elamin, K. Motoyama, T. Higashi, Y. Yamashita, A. Tokuda and H. Arima, "Dual targeting system by supramolecular complex of folate-conjugated methyl-β-cyclodextrin with adamantane-grafted hyaluronic acid for the treatment of colorectal cancer.", Int. J. Biol. Macromol., 2018, doi: 10.1016/j.ijbiomac.2018.02.149.
7)S. Ikeoka and A. Kiso  , "The Involvement of Mitophagy in the Prevention of UV-B-Induced Damage in Human Epidermal Keratinocytes ", J. Soc. Cosmet. Chem. Jpn., 2020,  54(3), 252.

 

取扱条件

規格
性状： 本品は紫色～赤紫色固体である。
NMRスペクトル： 試験適合
取扱条件
保存条件: 冷蔵,遮光 , 取扱条件: 窒素置換,吸湿注意
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マイトファジー検出試薬 Mtphagy Dye 同仁化学研究所

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キレート標識試薬 Isothiocyanobenzyl-NTA 同仁化学研究所

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キレート標識試薬 Isothiocyanobenzyl-NTA 同仁化学研究所Isothiocyanobenzyl-NTA

09 二価性試薬

Isothiocyanobenzyl-NTA

キレート標識試薬 Isothiocyanobenzyl-NTA 同仁化学研究所

  • 二価性試薬

キレート標識試薬

  • 製品コード
    I279　 Isothiocyanobenzyl-NTA
  • 化学名
    N-[5-(4-Isothiocyanatobenzyl)amido-1-carboxypentyl]iminodiacetic acid
  • 分子式・分子量
    C19H23N3O7S=437.47
容　量 メーカー希望
小売価格		 富士フイルム
和光純薬
10 mg ￥22,200 347-91371
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マニュアル

  • 取扱説明書 キレート標識試薬 Isothiocyanobenzyl-NTA 同仁化学研究所 日本語
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技術情報

注意事項

・本製品を粉末の状態で取り出し使用する場合、性状の性質上、静電気等の要因で容器内に付着し、取り出しにくい場合があります。
・容器内に付着し、取り出せなかった粉末に関しては、使用する溶媒を容器に入れ、溶かし出して使用してください。

取扱条件

規格
性状： 本品は、白色～微黄色粉末でありジメチルスルホキシドに溶ける。
純度(HPLC)： 90.0％ 以上
IRスペクトル： 試験適合
NMRスペクトル： 試験適合
取扱条件
保存条件: 冷凍
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キレート標識試薬 Isothiocyanobenzyl-NTA 同仁化学研究所

関連製品

キレート試薬 TTHA 同仁化学研究所

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キレート試薬 TTHA 同仁化学研究所TTHA

14 キレート試薬

TTHA

キレート試薬 TTHA 同仁化学研究所

  • キレート試薬

キレート試薬

  • 製品コード
    T031　 TTHA
容　量 メーカー希望
小売価格		 富士フイルム
和光純薬
5 g ￥11,000 340-02873

キレート試薬 TTHA 同仁化学研究所

  • キレート試薬 TTHA 同仁化学研究所
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技術情報

溶解例

1 g/10 mL(1 mol/L-NaOH)→50 mL（水）

取扱条件

規格
性状： 本品は、白色結晶性粉末で水には溶けにくく、アルカリ水溶液にはよく溶ける。
純度(滴定)： 98.0％ 以上
アルカリ溶状： 試験適合
強熱残分(硫酸塩)： 0.20％ 以下
重金属(Pbとして)： 0.001％ 以下
鉄(Fe)： 0.001％ 以下
取扱条件
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キレート試薬 TTHA 同仁化学研究所

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キレート試薬 0.02M 滴定液 同仁化学研究所

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キレート試薬 0.02M 滴定液 同仁化学研究所0.02M 滴定液

14 キレート試薬

0.02M 滴定液

  • キレート試薬

キレート試薬

  • 製品コード
    E024　 0.02M 滴定液
  • 化学名
    EDTA･2Na solution(0.02mol/l)
容　量 メーカー希望
小売価格		 富士フイルム
和光純薬
500 ml ￥5,900 345-06505

キレート試薬 0.02M 滴定液 同仁化学研究所

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取扱条件

規格
性状： 本品は、無色液体である。
ファクター(滴定)： 1.000～1.001
取扱条件
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キレート試薬 0.02M 滴定液 同仁化学研究所

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キレート試薬 緩衝液 pH10 同仁化学研究所

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キレート試薬 緩衝液 pH10 同仁化学研究所緩衝液 pH10

14 キレート試薬

緩衝液 pH10

  • キレート試薬

キレート試薬

  • 製品コード
    K004　 緩衝液 pH10
容　量 メーカー希望
小売価格		 富士フイルム
和光純薬
500 ml ￥6,400 343-01545

キレート試薬 緩衝液 pH10 同仁化学研究所

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取扱条件

規格
性状： 本品は、無色液体である。
pH(2％水溶液，25℃)： 9.9～10.5
金属ブランク： 試験適合
取扱条件
危険・有害
シンボルマーク 		キレート試薬 緩衝液 pH10 同仁化学研究所
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キレート試薬 緩衝液 pH10 同仁化学研究所

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キレート試薬 硬度滴定液（B） 同仁化学研究所

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キレート試薬 硬度滴定液（B） 同仁化学研究所硬度滴定液（B）

14 キレート試薬

硬度滴定液（B）

  • キレート試薬

キレート試薬

  • 製品コード
    K006　 硬度滴定液（B）
容　量 メーカー希望
小売価格		 富士フイルム
和光純薬
500 ml ￥4,600 347-01565

キレート試薬 硬度滴定液（B） 同仁化学研究所

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よくある質問

Q

水溶液中の硬度(Ca,Mg)を測定したいのですが、『硬度滴定液(B)』だけで 測定することが出来るのでしょうか？ その場合は、どのように操作すればよいのでしょうか？

A

 水溶液中の硬度測定は『硬度滴定液(B)』だけでは出来ません。
他に指示薬として『BT』。pH調整として『緩衝液pH10』が必要となります。

『硬度滴定液(B)』は滴定液として使用されるもので、指示薬で水に色をつけておき
変色点までの使用量で硬度を算出することが出来るものとなっております。
【試薬】硬度滴定液(B)
　　　　BT指示薬溶液
　　　　緩衝液（pH10)

【操作】①試料溶液(Ca濃度1 %以下)は必要であればHClまたはNaOHにて中和する。
　　　　②溶液100 mlにつき緩衝液2 ml，指示薬溶液2～4滴を加え、
　　　　　硬度滴定液(B)にて滴定する。
　　　　③終点の変色は赤→青。赤味の完全に無くなった点を終点とする。

　　　　硬度滴定液(B) 1 ml =1.0 mg CaCO3

キレート試薬 硬度滴定液（B） 同仁化学研究所 キレート試薬 硬度滴定液（B） 同仁化学研究所

取扱条件

規格
性状： 本品は、無色液体である。
ファクター(滴定)： 0.9989～0.9993
取扱条件
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キレート試薬 硬度滴定液（B） 同仁化学研究所

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  • キレート試薬

    0.02 mol/L エチレンジアミン四酢酸二水素二ナトリウム液

  • キレート試薬 硬度滴定液（B） 同仁化学研究所

    比色試薬／金属指示薬

    BT

キレート試薬 0.01M 滴定液 同仁化学研究所

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キレート試薬 0.01M 滴定液 同仁化学研究所0.01M 滴定液

14 キレート試薬

0.01M 滴定液

  • キレート試薬

キレート試薬

  • 製品コード
    T013　 0.01M 滴定液
  • 化学名
    EDTA･2Na solution(0.01mol/l)
容　量 メーカー希望
小売価格		 富士フイルム
和光純薬
500 ml ￥4,200 342-02615

キレート試薬 0.01M 滴定液 同仁化学研究所

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取扱条件

規格
性状： 本品は、無色液体である。
ファクター(滴定)： 1.000～1.001
取扱条件
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キレート試薬 0.01M 滴定液 同仁化学研究所

関連製品

キレート試薬 0.05M 滴定液 同仁化学研究所

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キレート試薬 0.05M 滴定液 同仁化学研究所0.05M 滴定液

14 キレート試薬

0.05M 滴定液

  • キレート試薬

キレート試薬

  • 製品コード
    T014　 0.05M 滴定液
  • 化学名
    EDTA･2Na solution(0.05mol/l)
容　量 メーカー希望
小売価格		 富士フイルム
和光純薬
500 ml ￥4,200 349-02625

キレート試薬 0.05M 滴定液 同仁化学研究所

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取扱条件

規格
性状： 本品は、無色液体である。
ファクター(滴定)： 1.000～1.001
取扱条件
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キレート試薬 0.05M 滴定液 同仁化学研究所

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    0.05 mol/L エチレンジアミン四酢酸二水素二ナトリウム液

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    0.1M 滴定液

  • キレート試薬 0.05M 滴定液 同仁化学研究所

    キレート試薬

    2NA(EDTA・2Na)

  • 比色試薬／金属指示薬

    MX

キレート試薬 0.1M 滴定液 同仁化学研究所

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キレート試薬 0.1M 滴定液 同仁化学研究所0.1M 滴定液

14 キレート試薬

0.1M 滴定液

  • キレート試薬

キレート試薬

  • 製品コード
    T015　 0.1M 滴定液
  • 化学名
    EDTA･2Na solution(0.1mol/l)
容　量 メーカー希望
小売価格		 富士フイルム
和光純薬
500 ml ￥4,200 346-02635

キレート試薬 0.1M 滴定液 同仁化学研究所

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取扱条件

規格
性状： 本品は、無色液体である。
ファクター(滴定)： 1.000～1.001
取扱条件
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キレート試薬 0.1M 滴定液 同仁化学研究所

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    0.1 mol/L エチレンジアミン四酢酸二水素二ナトリウム液

  • キレート試薬

    0.01M 滴定液

  • キレート試薬 0.1M 滴定液 同仁化学研究所

    キレート試薬

    2NA(EDTA・2Na)

  • 比色試薬／金属指示薬

    MX

比色試薬／金属指示薬 MX 同仁化学研究所

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比色試薬／金属指示薬 MX 同仁化学研究所MX

15 比色試薬／金属指示薬

MX

  • 比色試薬／金属指示薬

比色試薬／金属指示薬

  • 製品コード
    M012　 MX
  • 化学名
    Composite preparation of ammonium purpurate and potassium sulfate
容　量 メーカー希望
小売価格		 富士フイルム
和光純薬
25 g ￥3,100 347-01842
100 g ￥10,300 349-01841

比色試薬／金属指示薬 MX 同仁化学研究所

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技術情報

溶解例

1 g/1,000 mL（水）

よくある質問

Q

Coの滴定方法を教えてください。

A

ここでは、MXを指示薬とする直接滴定に関し記載します。

滴定の際の液性は中性～弱アルカリ性になりますので、酸性で行われたい方は「Cu-PAN」の項目をご覧下さい。

【試薬】0.01 mol/L EDTA標準液
　　　　MX指示薬希釈粉末
　　　　約1 mol/L アンモニア水

【操作】①試料溶液のCo2+の濃度は100 mL中25 mg以下にする。
　　　　②溶液が酸性の場合にはアンモニア水で中和しておく。
　　　　③MX指示薬希釈粉末約0.2 gを加えると溶液は橙黄色を呈するので、さらにアンモニアを徐々に滴下して
　　　　　黄色になったところで止める(pH≒8になっている）
　　　　④この溶液をEDTA標準液で滴定する。
　　　　　終点の変色は　黄→紫

　　　　　　0.01 mol/L EDTA 1 mL = 0.5893 mg Co

【備考】
　　・滴定時の溶液の緩衝能力が小さいため、滴定の途中でpHが下がり、溶液が橙黄色になることがある。
　　　この場合には、さらにアンモニア水を追加、液を再び黄色にして滴定を続ける。
　　・過剰のアンモニアが存在すると、Co-色素錯体よりCo(NH3)62+の方が安定なため、Co-色素錯体が分解する。
　　　上記の操作による時にはNH3の濃度を最小限にとどめているので、EDTAに結合していないCo2+は
　　　ほとんど遊離の水和イオンとして溶液中に存在するものと考えられる。
　　・重金属イオンは妨害する。このうちPb2+,Cu2+,Zn2+,Co2+などはチオグリコール酸で、Al3+はNH4Fでマスクできる。
　　　少量のMg2+,Ba2+,Sr2+は共存しても差し支えないが、Ca2+は一部滴定にかかってくる。
　　　一般にCoを適当な方法で分離・抽出したのちにこの方法を滴定するほうがよい。

＊「キレート滴定」上野景平著（南江堂出版）より

Q

MX指示薬を使ってNiを滴定で測りたいと思います。 方法を教えてください。

A

下記方法を参考にして下さい。
＜試薬＞
・0.01 M EDTA標準液
・MX指示薬希釈粉末
・緩衝液（約１M NH4Cl溶液、および濃アンモニア水）

＜操作＞
・試料溶液中のNi濃度は100 mL中15 mL以下にする。
酸性溶液はまず中和し、指示薬粉末約0.2 gと、要すればマスク剤を加える。
ほぼ中性の溶液にNH4Cl溶液10 mLを加え、液がなおpH7以下であれば溶液は橙黄色を
呈するから、アンモニア水をゆっくり滴下して黄色にする（pH7くらい）
次にEDTA標準溶液で滴定するが、滴定の途中でH(+)が遊離するためにpHが低くなって
再び橙黄色になった場合は、アンモニア水を追加してpHを調整する。
終点に近くなってから濃アンモニア水10 mLを加えて強アンモニアアルカリ性とし、
滴定を続けると、終点において黄→青紫の明瞭な変色が認められる。

　0.01 M EDTA 1 mL = 0.5869 mg Ni

＜備考＞
・MX指示薬による終点の変色は、pH7～12の領域で十分明瞭であるが、
　pH10～12において最も鋭敏に変色する。しかしながら滴定初期において
　溶液のpHをこのようなアルカリ性領域にまであげると水酸化物の沈殿を
　生じるので、大部分のNiがEDTAと結合した後、上述の操作に従って強アルカリ性にする。
　ただ、アンモニアの濃度はCu,Coの滴定におけるほど厳密に調整する必要は無い。
・MX指示薬はNiに対して金属指示薬と同時にpH指示薬としての役にもたっている。
　すなわちNi-MXキレートはpH7を中心に橙⇔黄と変色するため、滴定に先立って
　溶液のpHを7前後に調整するのに利用されている。
・滴定のpHは10～12であるから、二価以上の金属のほとんど全てが一緒に滴定される。
　このうちAl(3+),Ca(2+)および希土類金属イオンはNH4Fで、また少量のAl(3+),Mn(3+),Fe(3+)
　はトリエタノールアミンでマスクできる。また、Ni(2+)の5倍量までのFe(3+)は
　10％ピロリン酸ナトリウム溶液50 mLを添加することによりマスクされる。
　Cu(2+)はまた、アスコルビン酸にてCu(+)に還元し、窒素気流中で滴定すればその妨害を
　避けることも出来る。
　Hg(2+)はKIによってHgI4(2-)としてマスクされる。
・この滴定法は種々の金属イオンと共存するNi(2+)を有機試薬で沈殿分離したのち、
　その沈殿中のNiを定量するとき便利である。たとえば、合金中のNiを定量するのに
　試料を溶解した後、ジメチルグリオキシムでNiを沈殿させ、沈殿を濃塩酸で分解・蒸発乾固
　したのちこの滴定法を応用する。
　あるいは、沈殿を塩酸に溶かし、過剰のEDTA標準液を加え、アンモニアアルカリ性(pH9～10)に
　して、Zn標準液で逆滴定する。

＊「キレート滴定法」上野景平著（南江堂出版）より

比色試薬／金属指示薬 MX 同仁化学研究所 比色試薬／金属指示薬 MX 同仁化学研究所

取扱条件

規格
性状： 本品は、桃色～赤紫色粉末で水に溶ける。
水溶状： 試験適合 0.150～0.200(525 nm)
鋭敏度： 試験適合
取扱条件
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比色試薬／金属指示薬 MX 同仁化学研究所

関連製品

水質分析用試薬―残留塩素 色素液 同仁化学研究所

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水質分析用試薬―残留塩素 色素液 同仁化学研究所色素液

16 水質分析用

色素液

  • 水質分析用

水質分析用試薬―残留塩素

  • 製品コード
    ZK01-70　 色素液
容　量 メーカー希望
小売価格		 富士フイルム
和光純薬
100 ml ￥10,600 341-90791

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100 ml 色素液 100 ml x 1

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参考文献

1) R. Sakamoto, D. Horiguchi, T. Ikegami, M. Ishiyama, M. Shiga, K. Sasamoto and Y. Katayama, "A New Water-solujble Chromogenic Indicator: An Application to the Determination of Chlorine in Aqueous Solution", Analytical Sciences, 2003,19, 1445.

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水質分析用試薬―残留塩素 検水調整液 同仁化学研究所

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水質分析用試薬―残留塩素 検水調整液 同仁化学研究所検水調整液

16 水質分析用

検水調整液

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  • 水質分析用

水質分析用試薬―残留塩素

  • 製品コード
    ZK01-80　 検水調整液
容　量 メーカー希望
小売価格		 富士フイルム
和光純薬
200 ml ￥5,900 344-90801

・ヤマト運輸の代金引換サービスで購入できます。お申し込みはこちらから

・本製品は試験成績書のダウンロードができません。お問合せフォームよりご依頼をお願い致します。

キット内容
200 ml ・検水調整液 200 ml × 1

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  • プロトコル 水質分析用試薬―残留塩素 検水調整液 同仁化学研究所 残留塩素を測定したい
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1) R. Sakamoto, D. Horiguchi, T. Ikegami, M. Ishiyama, M. Shiga, K. Sasamoto and Y. Katayama, "A New Water-solujble Chromogenic Indicator: An Application to the Determination of Chlorine in Aqueous Solution", Analytical Sciences, 2003,19, 1445.

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