DOJINDO同仁CCK-8细胞增殖/细胞毒性检测试剂盒

DOJINDO同仁CCK-8细胞增殖/细胞毒性检测试剂盒

  • 产品型号:  
  • 简单描述
  • DOJINDO同仁CCK-8细胞增殖/细胞毒性检测试剂盒CCK-8用途:药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验CCK-8试剂盒在国内科研院所、重点大学、*医院被广泛应用,认可度高,使用CCK-8发表的中外文献达600多篇,其中截止08年底SCI影响因子IF>10分的论文有37篇,Z高IF38.5分
详细介绍

DOJINDO同仁CCK-8细胞增殖/细胞毒性检测试剂盒

CCK-8法与普通的MTT法相比,具有显著特点:

灵敏度高,数据可靠,重现性好

操作简便,省时省力

水溶性,不需要换液,尤其适合于悬浮细胞

无需放射性同位素和有机溶剂,对细胞毒性低

1瓶溶液,毋需预制,即开即用

适合于高通量药物筛选

DOJINDO同仁CCK-8细胞增殖/细胞毒性检测试剂盒

Cell Counting Kit-8CCK-8试剂盒)是由同仁化学研究所(Dojindo)开发的检测细胞增殖、细胞毒性的试剂盒,为MTT法的替代方法,试剂盒中采用自己开发的水溶性四唑盐-WST-8,在美国,欧洲等国家地区均持有,同仁化学研究所于2006年在中国获得了WST的注册商标。

2015年版中国药典第三部363页收载了新药:尼妥珠单抗(Nimotuzumab)注射液,是*个以表皮生长因子受体(EGFR)为靶点的单抗药物,也是中国*个治疗恶性肿瘤的人源化单克隆抗体。商品名:泰欣生(百泰药业生产)。
该药的生物学活性测定方法采用H292细胞(人肺癌淋巴结转移细胞)增殖抑制法(通则138页),使用了同仁化学研究所(Dojindo Laboratories)研发的CCK-8试剂。这是CCK-8检测方法*被中国药典收载,表明该方法已经获得国家机构认可。

 

CCK-8试剂与MTT等方法灵敏度比较

DOJINDO同仁CCK-8细胞增殖/细胞毒性检测试剂盒

 CCK-8试剂毒性:CCK-8和其他检测方法对比可以得出——CCK-8对细胞几乎无毒性,不伤害细胞,细胞可重复利用

DOJINDO同仁CCK-8细胞增殖/细胞毒性检测试剂盒

DOJINDO同仁CCK-8细胞增殖/细胞毒性检测试剂盒

   CCK-8                         P公司产品                      R公司产品

 (操作说明请参考中英文说明书或来电/在线咨询)

 

Cell Counting Kit-8(CCK-8试剂盒)细胞增殖、毒性检测试剂盒CCK8

Cell Counting Kit-8(CCK-8试剂盒)细胞增殖、毒性检测试剂盒

  • 产品型号:  CCK8
  • 简单描述
  • Cell Counting Kit-8(CCK-8试剂盒)细胞增殖、毒性检测试剂盒是由(Dojindo)开发的检测细胞增殖、细胞毒性的试剂盒,为MTT法的替代方法,试剂盒中采用自己开发的水溶性四唑盐-WST-8,在日本,美国,欧洲等国家地区均持有,Dojindo于2006年在中国获得了WST-8的注册商标。
详细介绍

 

Cell Counting Kit-8(CCK-8试剂盒)细胞增殖、毒性检测试剂盒

CCK-8法与普通的MTT法相比,具有显著特点:

灵敏度高,数据可靠,重现性好

操作简便,省时省力

水溶性,不需要换液,尤其适合于悬浮细胞

无需放射性同位素和有机溶剂,对细胞毒性低

1瓶溶液,毋需预制,即开即用

适合于高通量药物筛选

Cell Counting Kit-8(CCK-8试剂盒)细胞增殖、毒性检测试剂盒:药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验

CCK-8试剂盒在国内科研院所、重点大学、*医院被广泛应用,认可度高,使用CCK-8发表的中外文献达600多篇,其中截止08年底SCI影响因子IF10分的论文有37篇,zui高IF26.5

[Heterozygosity with respect to Zfp148 causes complete loss of fetal germ cells during mouse embryogenesis,Nature Genetics 33, 172 – 176 (01 Feb 2003)]

CCK-8试剂与MTT等方法灵敏度比较

Cell Counting Kit-8(CCK-8试剂盒)细胞增殖、毒性检测试剂盒CCK8

CCK-8试剂毒性:CCK-8和其他检测方法对比可以得出——CCK-8对细胞几乎无毒性,不伤害细胞,细胞可重复利用

Cell Counting Kit-8(CCK-8试剂盒)细胞增殖、毒性检测试剂盒CCK8

Cell Counting Kit-8

Cell Counting Kit-8(CCK-8试剂盒)细胞增殖、毒性检测试剂盒CCK8

I公司产品

(操作说明请参考中英文说明书或来电/在线咨询)

统计

 

 

日本同仁化学Cell Counting Kit-8细胞增殖毒性检测试剂盒CCK-8(CCK8)货号:CK04

Cell Counting Kit-8细胞增殖毒性检测试剂盒CCK-8(CCK8)货号:CK04细胞增殖-毒性检测试剂盒CCK-8(CCK8)Cell Counting Kit-8商品信息储存条件:0-5度保存运输条件:室温

特点:

● CCK-8为本司DOJINDO最早研发

● 高分文献超10000+篇

● 试剂盒稳定性高。

● 试剂可以与酚红同时使用。下载说明书产品文献SDS下载CCK-8宣传册操作说明集选择数量:选择规格:100 tests500 tests1000 tests3000 tests10000 tests价格:¥360.00现货(会员请登录查看专享价!)订购加入购物车CCK-8为本司DOJINDO最早研发高分文献超10000+篇点击查看更多方法更高灵敏度检测方法CCK-L(点击查看)

相关检测方法性能简介产品特点原理产品概述操作步骤CCK-8使用例CCK-8与LDHWST®-8甲臜染料试剂稳定性比较试剂毒性评价3D培养检测常见问题Q&A参考文献

相关检测方法

产品用途 点击查看产品详情 产品优势
细胞凋亡检测 Annexin V, FITC Apoptosis Detection Kit(手机端点击) 灵敏度高象限区分好性价比高
Annexin V, 633 Apoptosis Detection Kit(手机端点击)
Caspase-3 Assay Kit -Colorimetric-(手机端点击)
细胞毒性检测(检测死细胞数量) Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST(手机端点击) 与CCK-8双重验证细胞毒性CAR-T&ADCC实验可用
活死细胞双染 Calcein-AM/PI细胞双染试剂盒(手机端点击) 荧光结果与CCK-8双重验证高分文献支持操作简便
细胞内亚铁离子检测 FerroOrange(手机端点击) 更多铁死亡检测方法点击查看

性能简介

Cell Counting Kit-8是用于化学药物等对细胞增殖或毒性实验时进行细胞计数的试剂盒。试剂盒中使用高灵敏度的新型水溶性四唑盐WST-8甲臜染料作为显色底物,与传统的细胞计数试剂盒相比,灵敏度大幅度的提高。WST-8被细胞内的脱氢酶还原产生水溶性的甲臜染料。通过直接测量甲臜染料(450 nm)的吸光度,即可测出活细胞的数量。细胞数量与甲臜染料成正比关系。同时试剂盒为配置好的1瓶溶液,易于使用。

产品特点

1)对比[3H]法,无需放射性同位素。

2)使用水溶性四唑盐与水溶性甲臜染料,因此无需DMSO换液操作步骤。(如MTT分析等需要)

3)与其他水溶性四唑盐法(XTT,MTS)相比,灵敏度更高的同时毒性更低。

4)试剂盒为1瓶装,无需提前配置,无需准备其他试剂。

5)试剂盒稳定性高。

6)试剂可以与酚红同时使用。

原理

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Cell Counting Kit-8 (CCK-8) 包含了Dojindo开发的水溶性四唑盐—WST®-8和电子载体(1-Methoxy PMS)。由于WST®-8具有高水溶性,它存在于细胞外而不渗透活细胞膜,通过1-Methoxy PMS接受乳酸脱氢酶的辅酶NADH的电子而被还原,生成水溶性WST®-8甲臜染料(最大吸收波长450nm:详见下方吸收光谱)。

光谱.jpg

产品概述

Cell Counting Kit-8 (CCK-8) 利用了Dojindo开发的水溶性四唑盐—WST®-8 (2- (2-甲氧基-4-硝苯基) -3- (4-硝苯 基) -5- (2,4-二磺基苯) -2H-四唑单钠盐),它在电子载体1-Methoxy PMS存在的情况下能够被还原成水溶性的橙黄色甲臜。 CCK-8溶液可以直接加入到细胞样品中,无需配制。CCK-8法是用于测定细胞增殖或毒性实验中活细胞数目的 一种高灵敏度,无放射性的比色检测法。WST®-8被细胞内脱氢酶氧化还原后生成的橙黄色甲臜能够溶解在培养基中 ,生成的甲臜物的数量与活细胞数量成正比。

操作步骤

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本试剂盒测定方法简单,只需一瓶试剂即可操作,无需二次配制工作液,从而提高实验者的效率。

CCK-8使用例

细胞增殖实验(左)与细胞毒性实验(右)

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CCK-8与LDH

Cell Counting Kit-8 与Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST同时检测细胞毒性

CCK-8与LDH2.jpg

检测药物: Mitomycin C

细胞: HeLa

培养基: MEM, 10% FBS

孵育条件: 37℃, 5% CO2, 48小时

检测波长: Cell Counting Kit-8 (450 nm), Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST® (490 nm)

使用Mitomycin C 检测检测HeLa细胞毒性。通过使用Cell Counting Kit-8和Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST® [货号: CK12]两种方法检测。Cell Counting Kit-8以细胞活性为指标,Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST以游离的LDH为指标,实验证实两种指标检测存在差异性。二者联用,能更全面的表征细胞毒性。

WST®-8甲臜染料

WST®-8甲臜染料吸光度与续细胞数量的关系

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培养基: MEM, 10%FBS(HeLa ) , RPM1640(HL60)

孵育条件:37℃, 5%CO2, 2hr (HeLa、HL60)

检测试剂:Cell Counting Kit-8

(●) 450 nm, XTT (◆) 450 nm, MTS

(▲) 490 nm, MTT(■) 570 nm

将HeLa细胞和HL60细胞以不同的细胞数接种到96孔板中,按孵育条件处理后加入以上每种试剂测定吸光度。根据细胞数量增加吸光度。CCK-8灵敏度、线性范围优于以上其他方法。

试剂稳定性比较

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Cell Counting Kit-8可冷藏保存1年以上,避免试剂浪费!

试剂毒性评价

试剂本身对细胞毒性的比较

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HeLa细胞在96孔板中孵育(5000个/孔)。在CO2培养箱中开始显色反应,每隔3、6、24小时在显微镜下观察细胞形态。Cell Counting Kit-8在24小时后细胞形态没有改变。在使用药物进行细胞毒性试验时,应选择测量试剂本身对细胞毒性影响更小的试剂。

3D培养检测

3D培养检测细胞毒性指南,

详见OECD Guidelines for the Testing of Chemicals, Section 4 Test No. 492

常见问题Q&A

Q1:96孔板操作实例外,24孔板,12孔板如何检测?
A1:与培养基1:10的比例加入。
Q2:如何测定空白孔?
A2:空白读值的来源有两部分,还原性物质与细胞本身活性。请确认以下细节。·还原性物质:可在正式实验之前,在培养基中加入CCK-8和待测药物。如果变色,证明药物有还原性。正式实验检测时,请在加入CCK-8前更换培养基。·细胞活性变化:CCK-8检测细胞活性,因此细胞活性变化,即使细胞数量不变,空白也会变化。因此需要确认细胞活性是否存在变化。
Q3:如何终止反应?
A3:有一下几种方法(96孔板):1、 在显色反应后,将培养板放置4℃冰箱内。2、 每孔加10 μl 0.1 M HCL溶液。3、 每孔加10 μl 1%(w/v)的SDS(十二烷基硫酸钠)溶液。注意:反应停止后,应在24小时之内测定。4、使用本公司Stop Solution for CCK-8(货号:CK13).
Q4:我可以使用450 nm以外的滤光片吗?
A4:可使用430-490nm的滤光片,450nm滤光片最优。WST-8甲臜染料吸收光谱:
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Q5:CCK-8运输与保存条件?
A5:试剂在4℃下可稳定保存24个月。如需长期存放可保存-20℃,但不要反复冻融。如更换其他容器,请先进行稳定性实验,确认试剂稳定性。
Q6:一个孔中应接种多少个细胞?
A6:当使用标准96孔板时,贴壁细胞的最小接种量至少为1,000 个/孔 (100 μl 培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低,因此推荐接种量不低于2,500 个/孔 (100 μl 培养基)。如果要使用24孔板或6孔板实验,请先计算每孔相应的接种量,并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK-8溶液。
Q7:能否用384孔板进行试验?
A7:可以。向各孔中加入培养基体积10%的CCK-8溶液,如果加入的CCK-8体积太少,可以先将CCK-8溶液稀释1倍,然后加入培养基体积20%的量
Q8:能否用24孔板进行试验?
A8:可以。向各孔中加入培养基体积10%的CCK-8溶液。
Q9:酚红会影响检测吗?
A9:不会。培养基中酚红的吸光度可以在计算时,通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去,因此不会对检测造成影响。
Q10:CCK-8与胸苷结合检测之间是否有相关性?
A10:有。然而,请注意由于CCK-8使用的检测原理与胸苷检测的不同,因此结果可能不同。
Q11:CCK-8能否检测细菌细胞?
A11:可以检测E.coli,但不能检测酵母细胞。向100 μl E.coli培养液中加入10 μl CCK-8溶液,并培养1-4个小时或过夜。但是更推荐使用我公司货号M439的:细菌活性检测试剂盒。
Q12:如何减少由于CCK-8试剂在枪头上或孔壁上的残留所带来的误差?
A12:可以在加样前用培养基稀释CCK-8试剂并混匀后加样。
Q13:CCK-8是什么颜色?
A13:应该是粉红色。若颜色不一样,有可能会影响测定。
Q14:CCK-8能否对活细胞进行染色?
A14:不能。因为CCK-8的主要成分是一种水溶性的四唑盐 (WST®-8),并通过电子载体1-Methoxy PMS将活细胞中的电子交换到培养基中的WST®-8上。由于生成的甲臜也是高度水溶性的,因此CCK-8不能对细胞进行染色。
Q15:CCK-8检测溶液对细胞是否有毒?
A15:CCK-8溶液自身因为高浓度的1-Methoxy PMS的存在而具有一点毒性。但是,加到培养基中的CCK-8是没有毒性的,因为被稀释了10倍。因此,长时间的培养,如过夜或者培养数天是可以的。同一个细胞培养液在CCK-8检测后还可以用于其他细胞增殖检测,如结晶紫检测,中性红检测或者DNA荧光检测等。由于每种细胞对于CCK-8的耐受力都不同,因此在需要进行长时间培养时,先检测一下细胞在加入CCK-8培养后的活力。
Q16:在做加药实验时,药物对测定是否有影响?如何解决?
A16:有时会有影响。如果药物具有还原性,会和CCK-8发生显色反应,增加吸光度。解决办法:首先要确认药物是否有吸收,在含有药物的培养基中加入CCK-8,测定450 nm的吸光度,如果它的吸光度比不含药物的培养基 (加CCK-8)的吸光度高,则证明药物有影响,可在加CCK-8之前更换培养基,去掉药物的影响。
Q17:每次测定的数值不一样,是什么原因?如何解决?
A17:可能会有以下几个原因: 1. 当在培养箱内培养时,培养板最外一圈的孔最容易干燥挥发,由于体积不准确而增加误差。 一般情况下,最外一圈的孔只加培养基,不作为测定孔用。 2. 有可能会因为CCK8沾在壁上而产生误差,建议在加入CCK-8后,轻轻敲击培养板以帮助混匀。 3. 每孔的细胞数量过多或过少。请预先在1,000-100,000个/孔范围内摸索条件。
Q18:如何设定空白对照?
A18:在不含细胞的培养基中加入CCK-8,培养一定的时间,测定450 nm的吸光度即为空白对照。在做加药实验(细胞毒性实验)时,还应考虑药物的吸收,可在不含细胞,加入药物的培养基中加入CCK-8,培养一定的时间,测定450 nm的吸光度作为空白对照。
Q19:哪些物质会影响CCK-8的测定?
A19:当有还原性物质存在时会影响CCK-8的测定,例如含有维生素C的Glucose等 (一般培养基中的量不多,酚红或血清不影响测定)。在有酚红存在的情况下,会增加空白吸收,但不影响测定,扣除空白吸收即可。
Q20:在实验中吸光度值太高,如果不能减少细胞数量,如何解决?
A20:可以缩短加入CCK-8后的培养时间。例如:可以把加入CCK-8试剂后的培养时间由2小时缩短为1小时。
Q21:设定参比波长的目的是什么?必须设定吗?
A21:不一定要设定。CCK-8试剂在参比波长没有吸光度。设定参比波长的目的是为了取出由于样品混浊所带来的吸收。
Q22:说明书上仅写了96孔板的测定方法,如果使用24孔板货12孔板,应该加多少量的CCK-8试剂?
A22:一般情况下建议加入CCK-8试剂的量是培养基体积的1/10。
Q23:必须预培养细胞吗?
A23:不一定。如果要向保持细胞的最好状态,建议预培养细胞。如果不做细胞预培养,细胞内的脱氢酶可能会不稳定。也有人不做细胞预培养,但在做标准曲线和检测时需要统一检测条件。
Q24:如果加入的药物中含有金属,是否会有影响?
A24:金属对CCK-8显色有影响。当终浓度为1 Mm的氯化亚铅、氯化铁、硫酸铜会抑制5%、15%、90%的显色反应,使灵敏度降级。如果终浓度是10 Mm的话,将会100%抑制。
Q25:预培养后,更换培养基需要细胞计数吗?
A25:一般情况下用胰蛋白酶处理对数增长期的细胞,用血球计数盘计数,制备成一定浓度的细胞悬液即可。如果想要精密计数细胞的话,可以预培养后取培养基用血球计数盘进行计数。
Q26:CCK-8对于不同的细胞,灵敏度是否一样?
A26:不一样,悬浮细胞与贴壁细胞相比较难染色。对于贴壁细胞,一般加入CCK-8培养1-4小时吸光度已经很高,但对于悬浮细胞则可能吸光度较低,可以通过延长CCK-8的加入时间或增加细胞数量来解决。
Q27:悬浮细胞和贴壁细胞在数量上有何区别?
A27:悬浮细胞由于显色比较困难,一般需要增加细胞数量和延长培养时间。贴壁细胞显色比较容易,若细胞数量过大,有时吸光度会超过酶标仪的读数。
Q28:应该每次做标准曲线吗?
A28:建议每次做。虽然细胞是一样的,但是细胞的状态不一定一样,对于状态不一样的细胞,建议每次做标准曲线。如果试剂的批号不一样,灵敏度可能会有轻微的差异,对于不同的批号建议分别做标准曲线。
Q29:有时在药物作用情况下,细胞已经死亡,但是脱氢酶的活性还在,是否能计算细胞数量?
A29:不能。由于CCK-8是通过和细胞内的脱氢酶进行反应间接反映活细胞数量

参考文献

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Epigenetic therapy inhibits metastases by disrupting premetastatic niches.Nature,2020,doi.org/10.1038/s41586-020-2054-x

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PU.1 controls fibroblast polarization and tissue fibrosis.Nature,2019,566,344–349

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6.The sonic hedgehog factor GLI1 imparts drug resistance through inducible glucuronidation.Nature,2014,511(7507),90-93

7.The sonic hedgehog factor GLI1 imparts drug resistance through inducible glucuronidation.Nature,2014,511(7507),90-93

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10.Embryonic lethal phenotype reveals a function of TDG in maintaining epigenetic stability.Nature,2011,470(7334),419-423

11.Intravenous delivery of a multi-mechanistic cancer-targeted oncolytic poxvirus in humans.Nature,2011,477(7362),99-102

12.Frequent inactivation of A20 in B-cell lymphomas.Nature,2009,459(7247),712-716

13.Modulation of microRNA processing by p53.Nature,2009,460(7254),529-33

14.Oncogenic mutations of ALK kinase in neuroblastoma.Nature,2008,455(7215),971-4

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22.Fusobacterium nucleatum Promotes Chemoresistance to Colorectal Cancer by Modulating Autophagy

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23.Methyltransferase SETD2-Mediated Methylation of STAT1 Is Critical for Interferon Antiviral Activity

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31.Chemical modification of PS-ASO therapeutics reduces cellular protein-binding and improves the therap…

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37.Mesenchymal stem cell–based tissue regeneration is governed by recipient T lymphocytes via IFN-γ an….Nature Medicine, 2011,17(12), 1594-1601

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39.Identification of tendon stem/progenitor cells and the role of the extracellular matrix in their nich….Nature Medicine, 2007, 13(10), 1219-1227