细胞死亡M65^® ELISA试剂盒

M65^® ELISA

◆优点・特色

●　只特异性定量检测上皮细胞整体的死亡情况

●　与M30 Apoptosense^® ELISA 配套使用，定量检测细胞凋亡、细胞坏死和细胞死亡。

●　检测更稳定，特异性更高。

●　夹心法ELISA检测，可拆卸的96孔板。试剂即开即用

●　肝脏疾病：检测肝脏疾病患者肝细胞总的死亡情况。可用肝脏疾病检测。

●　肿瘤：监测上皮细胞肿瘤经化疗后肿瘤细胞的死亡情况。

●　毒理学：临床评估不同药物对肝脏细胞的毒性。

◆案例・应用

体内细胞凋亡或者坏死引起肿瘤细胞死亡。细胞死亡的模式取决于细胞毒素刺激的类型和肿瘤的类型。细胞内ATP产生缺失通常会引起细胞凋亡，但有时候也会导致细胞坏死 (Leist et al., 1997)。细胞坏死期间，未经caspase水解的细胞内蛋白将会释放到细胞外。

角蛋白18（K18）是由很多种上皮细胞高表达的细胞内蛋白。大多数K18分子在细胞内是非可溶性的，但也报道有可溶性K18池(Chou et al., 1993)。细胞死亡期间，细胞内K18会释放到细胞外。检测细胞外可溶性的K18可反映上皮细胞的死亡情况 “过程和原因” (由于细胞凋亡和细胞坏死导致) (Kramer et al., 2004).

K18在细胞凋亡期间被caspase催化发生水解， caspase-cleaved片段释放到细胞外。因此细胞外的 caspase-cleaved K18 (ccK18)浓度反映了细胞凋亡的数量。而且M30:M65 比代表了总细胞死亡中细胞凋亡的比例(不同 “M30:M65 比”) (Kramer et al., 2004).

M65 EpiDeath^® ELISA 使用两种IgG型的K18小鼠单抗，评估人血清或则血浆中上皮细胞死亡情况。M30 Apoptosense® ELISA 特异性检测在caspase-cleavage d K18 在Asp396形成的新表位 (K18Asp396-NE 或者M30 neo-epitope) ，反映上皮细胞的凋亡情况(Hägg et al. 2002; Bivén et al. 2003)。两种检测试剂盒的单位根据同一标准校对，可以计算caspase-cleaved 和总K18 (“M30:M65 比例”)。培养细胞诱导细胞凋亡导致caspase-cleaved K18释放，M30:M65 比值较高, 然而如果细胞发生死亡，只有K18的水平是升高的，所以M30:M65 比值较低。

         体内或体外实验中，定量检测总的细胞死亡（凋亡和坏死）。与M30 Apoptosense^® ELISA kit 联用可以检测上皮细胞凋亡在整个细胞死亡中所占的比例。

产品信息

M65^® ELISA kit （CE-Mark） 体内，体外实验中，定量检测总的细胞死亡（凋亡和坏死） 。

M65 EpiDeath^® ELISA 和 M65^® ELISA的区别，请参考相关资料。

 更多运用案例

M65 EpiDeath^® ELISA 和M65^® ELISA的比较

M65 EpiDeath^® ELISA 和M65^® ELISA的运用完全一致。

检测的样品类型一致，检测的目标物一致。

 M65 EpiDeath^® ELISA与 M65^® ELISA使用相同的单抗。为了与 M30 Apoptosense^® ELISA匹配, 使用单抗 M5 作为捕获抗体 (在M65^® ELISA使用单抗M6)。

M65 EpiDeath^® 与 M65^® ELISA相似和区别：

●   M65 EpiDeath^® ELISA可以更好的区分健康人群和病患（患有导致循环角蛋白18（K18）增加的疾病）。这是由于该试剂盒中的抗体有更好的结合特异性，在健康人群中检测到的值更低。
●   M65 EpiDeath^® ELISA 和M65® ELISA 检测含有K18的病患样品，检测值差不多(见图中提供的资料，相关性系数r² = 0,84). 这些检测的主要区别是用M65^® ELISA检测，检测值在200 – 300 U/L范围内的样品用M65 EpiDeath^® ELISA检测，检测值<100 U/L 。
●  由于M65 EpiDeath^® 和M65^® ELISA检测同一样品，检测值不一样，所以如果是特定的实验/项目，只能使用其中一种试剂盒。
●  M65 EpiDeath^® 的检测范围是0~5000U/L， M65^® ELISA的检测范围是125~2000U/L。

使用M65 EpiDeath^® 和M30 Apoptosense^® ELISA确认细胞死亡形式

M65 EpiDeath^® ELISA和 M30 Apoptosense^® ELISA使用相同的捕获抗体，使用M30 Apoptosense^® 和M65 EpiDeath^® ELISA检测 “M30:M65 比” (见Kramer et al., 2004) 希望反应细胞死亡形式。有些案例中，用M30 Apoptosense^® ELISA检测，样品的值高于用M65 EpiDeath^® ELISA检测, 可能反应了表位如何在复合体中递呈。

注意： “M30:M65 比” 只有在K18含量提升的样品（比如，用M65 EpiDeath^® ELISA 检测，值>300 U/L ）有意义。(见 Linder et al., Expert Reviews in Molecular Diagnostics 10, 353, 2010).

                                          PEVIVA                                        PEVIVA肿瘤及肝病上皮细胞死亡检测试剂盒

相关文章：

　　PEVIVA M30与M65试剂盒联用，判断细胞死亡形式

2-脱氧葡萄糖(2DG)摄入检测试剂盒

◆原理

检测原理：

细胞摄入2DG后，经过细胞内生化酶的催化，通过检测产生的NADPH进行研究。

      所有反应步骤都只需在同一个孔内添加预混试剂，即可实现自动化操作。

●为减少葡萄糖代谢的影响，只需少量2DG加入活细胞中。通过细胞代谢将2DG转化转化为2DG6P。

●2DG6P在被氧化的过程中会产生NADPH，通过检测NADPH的量来测定2DG6P的含量。

本试剂盒与RI法的比较：

◆优点・特色

●检测培养细胞的2DG摄入量
●无需RI，只需使用酶标仪即可进行检测
●不受细胞外2DG的影响。
●使用酶循环法，灵敏度高，可检测至pmol级水平
●适用于96孔细胞培养板
●无需漂洗步骤，可实现自动化

◆案例・应用

【案例1】用已知2DG6P浓度的溶液进行检测。

【案例2】3T3-L1细胞摄入2DG后实验结果。

【案例3】人脂肪细胞摄入2DG后实验结果。

Q：    试剂盒能否用于微生物葡萄糖2-DG摄取检测？是否有微生物实验的例子？
A：    很抱歉，我们没有做过微生物2-Deoxyglucose摄入检测，所以我们没有相关案例。
    
Q：    是否有大肠杆菌葡萄糖摄取的数据？
A：    "很抱歉，我们没有做过大肠杆菌2-Deoxyglucose摄入检测；
          请注意，细菌摄入2-Deoxyglucose以deoxyglucose-6-phosphate前体的形式保留在体内。如果您有相关

          实验的经验或者信息，可以使用该试剂盒检测。"
    
Q：    该试剂盒需要使用何种类型的96孔板？白色板或透明板？
A：    请用透明板。其他没有特殊要求。
    
Q：    如何分析2DG检测数据？标准曲线的单位是mM,但是操作手册中的案例是pM/孔？
A：    2DG6P的总量在试剂盒中使用摩尔浓度表示。如果您需要了解案例的计算及检测，请联系我们。
    
Q：    关于超声波处理这一步，能告诉我相关参数设置吗？
A：    "该试剂盒以细胞内2DG6P的含量来检测细胞葡萄糖摄取量。
          操作说明中P6（9），提到通过超声波破破碎得到细胞裂解液，其具体的参数设置，是根据仪器型号而定

          的。请根据说明书中的建议设置参数。如果您无法确认，请在显微镜下观察细胞的破坏程度。"
    
Q：    是否有进行过肿瘤细胞和肿瘤的检测？
A：    我们没有进行相关测试。
    
Q：    是否进行过动物体内肿瘤2DG摄取检测？我想要移植肿瘤，并观察他们葡萄糖摄取情况。
A：    "很抱歉，我们没有进行过体内肿瘤的葡萄糖摄取实验。我们目前正在积极开发此类体内实验用的试剂盒。
          据报道，有些客户调整了实验方法，如添加己糖激酶用于体内实验。但我们并未建立标准的体内操作手册，

          需要您根据情况优化条件。"
    
Q：    "关于2DG摄入检测试剂盒，使用时能够将试剂量减半吗？（如说明书中每样200 uL改为100 uL）
          这样会对实验结果产生什么影响？"
A：    "我们不能保证试剂量减半后，实验结果的准确性，因为反应程度和仪器都会对此产生影响。
          为了保证检查结果的稳定性，我们建议您按照说明书操作。"
    
Q：    能否提供2DG摄入试剂盒内的 1 mM 2DG6的溶剂？
A：    我们无法告知您这些特殊组分，但是1 mM 2DG是溶于蒸馏水中的。
    
Q：    A溶液的组分是什么？
A：    很抱歉，我们无法告知您试剂的组成。
    
Q：    操作要求用使用超声波裂解细胞，但是我们实验室没有这台仪器。请问可以使用其他替代法吗？
A：    "如果没有超声仪，可用跟其他方法裂解细胞。
          用少量TritonX-100 （1％），进行10-20稀释。使用该稀释液处理样品。可能您觉得稀释比例过高，这是

          因为溶解后由于表面活性剂的关系体积会减少1~2 mL，标准的超声波处理是3 mL。因此样品的终浓度和超

          声处理是相同的。
          请不要使用SDS作为表面活性剂，会抑制系统反应。"
    
Q：    关于细胞裂解缓冲液的问题：缓冲液成分除了的Tris-HCl和Triton100-X外，能够含有氯化钠和螯合剂吗？

          还是需要将这些成分去除？
A：    我们不建议您添加氯化钠和螯合剂，因为当这些试剂的浓度增加时，会对体系反应产生负面影响。
    
Q：    2-DG试剂盒检测能够用于成熟脂肪细胞吗？悬浮细胞有影响吗？
A：    "该试剂盒可用于检测成熟脂肪细胞检测；由于该细胞非常容易从培养板上剥离，所以保持细胞的自然状态

          即可。用该试剂盒检测成熟脂肪细胞时，细胞是否悬浮对检测没有影响。
          但是，成熟脂肪细胞不容易离心，如果强力离心会对细胞造成损失。所以小心处理。如果您担心离心会对

          细胞造成损伤，可选择如下方法：将培养板包被I型胶原或者纤连蛋白，增强成熟脂肪细胞的粘附性。"

末梢型肌肉松弛药成分

◆五水合氯化筒箭毒碱（D-Tubocurarine   Chloride Pentahydrate）

C37H41ClN2O6・HCl・5H2O=771.72 纯度:97.0 ～ 103.0％（Titration） （无水物换算） 可溶性溶剂:乙醇 用途（作用）:对神经肌突触筋接合部的乙酰胆碱受体有阻断作用

◆维库溴铵（Vecuronium   Bromide）

CAS No. 50700-72-6 C34H57BrN2O4=637.73 纯度:98.0+％（HPLC） 可溶性溶剂:稀盐酸 用途（作用）:阻断通过神经肌突触的乙酰胆碱从神经传达到肌肉的兴奋信号

◆泮库溴铵（Pancuronium   Bromide）

CAS No. 15500-66-0 C35H60Br2N2O4=732.68 纯度:99+％ 可溶性溶剂:水、DMSO 用途（作用）:对乙酰胆碱受体有阻断作用

◆硝苯呋海因钠（Dantrolene Sodium）

CAS No. 14663-23-1 C14H9N4NaO5=336.23 纯度:97.0+％ 用途（作用）:对内质网的钙游离有抑制作用

相关资料详情请查看：http://www.boppard.cn/pdf/show/80.html