Long ssDNA Preparation Kit (LsODN Preparation Kit)

长单链DNA（ssDNA）制备试剂盒

　　本产品使用Nicking切口酶法（正在申请专利的新技术），是制备高纯度且有正确序列的长单链DNA（ssDNA, 1500 base或3000 base）的试剂盒。

　　※本产品不含凝回收试剂盒。
　　※本产品用于研究，不可用于临床实验。

◆关于ssDNA的制备

　　ssDNA运用广泛，但由于制备是有PCR和使用合成DNA的寡聚体，核酸外切酶反应，逆转录酶反应等工序，无法避免内部突变和末端缺失等问题的发生。虽然纯化使用聚丙烯酰胺变性凝胶电泳以及链霉亲和素包被的磁珠等方法，但还是会出现混入大量dsDNA的情况。
　　Long ssDNA Preparation Kit (LsODN Preparation Kit)，通过简单的操作，便可获得含有目的序列的高纯度长链ssDNA。

◆特点

　●　不含有变异或末端缺失，可制备1,500 base或者最长到3,000 base的长链ssDNA。

　●　全程操作与普通的dsDNA片段制备法相同，无需准备特殊的机器以及试剂。

　●　通过附加的Denaturing Gel-loading Buffer（变性凝胶上样缓冲液）进行变性，可以使用琼脂糖凝胶电泳对目的长链ssDNA进行分离纯化。

　●　凝胶电泳配有已染色的RNA作为分子量标记。

◆试剂盒的内容

◆质粒图谱

◆原理和操作方法

◆使用例

　　使用Long ssDNA Preparation Kit (LsODN Preparation Kit)制备的1,500 base和3,000 base的长链ssDNA。

　　将目的dsDNA片段(1,500 bp或者3,000 bp)在pLSODN -1或pLSODN-3的MCS（Nt.BspQI位点与Nb.BsrDI位点之间）克隆后，使用切口酶（Nt.BspQI和Nb.BsrDI）对其处理，在目的片段的两端出现切口。变性后，样品经琼脂糖凝胶电泳分离，从目的条带提取DNA，纯化。将所有的样品通过变性凝胶上样缓冲液进行变性后，再进行电泳。

　　Lane 1：已导入1,500 bp DNA片段的pLSODN-1通过切口酶处理后的样品
　　Lane 2：已纯化的长链ssDNA (1,500 base)
　　Lane 3：已导入3,000 bp DNA片段的pLSODN-1通过切口酶处理后的样品
　　Lane 4:：已纯化的长链ssDNA (3,000 base)

相关资料

详情请点击图片

相关产品

◆Funa凝胶枪和切片凝胶专用吸管

　　通过简单操作能将琼脂糖凝胶电泳后的DNA和蛋白质带部分回收的枪头以及专用短移液器。

详情请看下图：

长单链DNA（ssDNA）制备试剂盒的使用文献

　　ssODN-mediated knock-in with CRISPR-Cas for large genomic regions in zygotes
　　Yoshimi K, Kunihiro Y, Kaneko T, Nagahora H, Voigt B, Mashimo T. Nature Communicatons.Jan;20;7:10431 (2016).

　　使用切口酶法（本产品）制备的长链ssDNA（包含了2Apeptide序列，GFP全域序列，5'端300个碱基同源臂，3'端60个碱基同源臂，全长1,194 base的互补单链DNA）以及附加了poly（A）的Cas9-poly(A)RNA，向导RNA：向大鼠受精卵显微注射Thy1-TGA，在大鼠rThy1基因C末端处高效率地将绿色荧光蛋白基因（GFP基因）全域成功敲入。本论文也是首次表明，使用长链ssDNA的lsODN法（对应ssODN的lsODN）能够提高外源基因全长的敲除效率。

PA tag

亲和纯化标签蛋白！

　　PA tag系统是利用高亲和性&高特异性单抗（NE-1）识别肽标签（GVAMPGAEDDVV）的重组蛋白新型检测系统。PA tag系统中的抗体琼脂糖可通过免疫沉淀法纯化PA tag融合蛋白，并可在洗涤后获得再生。中性pH条件下PA tag肽简单方便地竞争性洗脱PA tag融合蛋白。

　　PA tag系统的亲和性和特异性优于现有标签系统，抗体琼脂糖可 再生60次 极大地降低成本，可用于免疫细胞化学、免疫印迹和流式细胞术，是动物宿主细胞重组蛋白生产的有效工具。

◆原理

◆载体列表

◆优点、特色

◆案例、应用

【使用例子：PA 标签抗体，大鼠单克隆抗体（NZ-1）】

　　NZ-1是特异性识别PA tag（GVAMPGAEDDVV）的单克隆抗体，能用于检测动物细胞表达的PA tag融合蛋白，亲和性很高并能简单地用肽洗脱！已确认不存在交叉反应的物种包括小鼠、大鼠、仓鼠和犬类。

浓度：       标签表示（约1.0 mg/mL）

配方：       1× PBS (pH 7.5) 水溶液

克隆号：    NZ-1

亚型：       IgG2a

应用：　　免疫印迹 0.01 – 1 μg/mL　　

                 免疫沉淀 10 – 50 μg/assay　　

                 流式细胞术 0.1 – 10 μg/mL　　

                 免疫细胞化学 0.1 – 10 μg/mL

保存条件：2–10°C 避免反复冻融

【NZ-1 Fab和PA肽的复合体结构分析】

标记抗PA tag抗体

PA tag-EGFP-6×His tag，重组，溶液

亲和标签比较

本比较表由和光独立完成。样品、检测方法及手法不同有可能产生的特异性有变化，不能保证各种亲和标签的性能。

Target tag系统和Pa tag系统同属Wako亲和标签系统，详情请联系经销商。        

 Wako新一代超亲和性的亲和标签系统“PA Tag System”：http://www.boppard.cn/resources/show/14.html

1.　Fujii, Y. et al., "PA tag: A versatile protein tagging system using a super high affinity antibody against 

　   a dodecapeptide derived from human podoplanin.", Protein Exp. Purif., 95, 240-247(2014).

2.　Fujii, Y. et al. 新規アフィニティータグシステム“PAタグ”の利用法～蛋白質の精製および検出～蛋白質科学

　   会アーカイブ, 7, e075 (2014)

3.　Kitago,Y et al.“ Structural basis for amyloidogenic peptide recognition by sorLA.”

　   Nat Struct Mol Biol., 22(3):199-206(2015)

N-氧化

◆优点

●　胺类和mCPBA之类的氧化剂反应可得到N-oxide基

●　 甲基三氧化铼（VII）UHP可用于杂环胺的氧化

反应例子^【b】

N-oxide化合物

ε-葡萄素标准品

ε-Viniferin Standard

ε-葡萄素是存在于葡萄芽和嫩藤中的一种白藜芦醇二聚体物质；

纯度: ≥98.0% (HPLC)
外观: 白色~浅灰棕色晶体性粉末；

化学名 : 5-[(2R,3R)-2,3-Dihydro-6-hydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)- 4-[(1E)-2-(4-hydroxyphenyl)ethenyl]-3-benzofuranyl]-1,3-benzenediol

　　只需添加蒸馏水，就能简单、便捷地调制出无机盐原液。根据培养目的加入糖、氨基酸、维他命类和生长调整物质等，可应用于植物组织培养。

1. 　Murashige & Skoog 基础盐混合物

　Murashige and Skoog培养基（1962年）处方被广泛应用于植物组织培养基中，是基本型的无机盐类混合粉末培养基。

组分：

1L用（4.6 g）的本品，含有下列成分（mg/L）：

2. 　Gamborg's B5植物培养用混合培养基

　　Gamborg's B5培养基（1968年）处方被广泛应用于植物组织培养用培养基中，是基本型的无机盐类混合粉末培养基。

组分：

1L用（3.3 g）的本品，含有下列成分（mg/L）：

3.　 Chu (N6) Medium Salt Mixture

　　根据Chu.C.C设计得出来的，N6处方主要作为水稻药培养基处方，是基本型的无机盐类混合粉末培养基。

组分：

1L用（4.1 g）的本品，含有下列成分（mg/L）：

抗Siaα2-3，单克隆抗体（HYB4）

Anti Siaα2-3, Monoclonal Antibody (HYB4)

（流感研究抗体）

　　本产品可识别GM3、GM4、α2-3nLc4Cer等非还原末端含NeuAcα2-3 Gal结构糖链的单克隆抗体。应用于流感病毒与生物体内唾液酸糖链分子相互作用的研究。

◆特点

●　检测α2-3结合型唾液酸糖链

●　带有IgG3，应用广泛

●　应用于流感病毒糖链受体研究

◆使用浓度

请在使用本抗体时，根据检测条件，样本，研究最适宜浓度和稀释倍数。

上述浓度仅供参考。

◆产品概述

【蛋白质浓度】请看标签。

【组成】含50%甘油的1×PBS (pH=7.2)溶液。

【克隆号】HYB4

【物种交叉反应性】GM3, GM4,α2-3nLc4Cer

【抗体亚类】IgG3・κ

【抗原】IV3NeuAcnLc4Cer

【保存条件】-20℃（请避免冻融）

◆应用

1、HYB4抗体 免疫染色

HYB4/DAPI	IgG3/DAPI

<利用HYB4对A549细胞进行染色>

HYB4对Siaα2-3结合型糖链的检测：

二抗为FITC标签的抗小鼠IgG抗体。（绿色）

用DAPI对细胞核进行染色。（蓝色）

2、HYB4抗体 通过免疫学方法检测糖脂质

利用HYB4抗体检测含α2-3结合型唾液酸的糖脂质； 利用TLC免疫染色法分析与糖脂质的结合性。 平板A：苔黑酚显色 平板B：HYB4抗体免疫染色 泳道1：IV3NeuAcnLc4Cer 泳道2：IV6NeuAcnLc4Cer 展开剂：CHCl3/CH3OH/12 mM MgCl2 (50:40:10) 数据提供：会津大学短期大学 左、静冈县立大学大学院 药学研究科生化学领域 山口、铃木。

3、HYB4抗体 糖链识别性

< HYB4抗体 糖链识别结构>

NeuAcα2-3Galβ1-4Glc(GlcNAc)β1-R

数据提供：会津大学短期大学 左、静冈县立大学大学院 药学研究科 生化学领域 山口、铃木。

注：旧产品编号为：013-23791。

[1]　和光纯药时报, 80(1), 2-4(2012) .

[2]　Hidari, K. et al., "Influenza virus utilizes N-linked sialoglycans as receptors in A549 cells.", BBRC, 436, 394-399(2013).