LunaScript® 反转录 SuperMix 试剂盒 货 号 E3010LNEB酶试剂 New England Biolabs

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产品资料 – DNA聚合酶与扩增技术 – qPCR & RT-qPCR

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#E3010L
100 rxns
4,259.00

#E3010S
25 rxns
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Luna 通用 qPCR 预混液

Luna 通用探针法 qPCR 预混液

特性

·15 分钟内完成 cDNA 第一链的合成

·与 Luna qPCR 预混液搭配使用,RT-qPCR 效果更优异

 

概述:

  LunaScript SuperMix 反转录试剂盒是经过优化的预混液,用于两步法 RT–qPCR 的第一步 cDNA 第一链合成。该预混液最具特色的是采用了耐热 Luna 反转录酶,可在高温下合成 cDNA。预混液中的小鼠 RNase 抑制剂可保护模板 RNA 不被降解。在预混液中同时含有 6 碱基随机引物和 poly-dT 引物,可覆盖全长目标 RNA。


此外,LunaScript SuperMix 反转录试剂盒含有可视蓝色示踪染料,在两步法 RT–qPCR 实验中起到提示作用。无论起始量是高达 1 μg 的总 RNA,还是低到单拷贝的总 RNA,使用该试剂盒进行反转录,都能获得稳定的、线性的和高灵敏度的检测结果。

LunaScript SuperMix 反转录试剂盒组分

–  LunaScript RT SurperMix

–  无反转录酶对照预混液 
–  无核酸酶水
 

LunaScript® 反转录预混液试剂盒(无引物) 货 号 E3025LNEB酶试剂 New England Biolabs

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产品资料 – DNA聚合酶与扩增技术 – qPCR & RT-qPCR

LunaScript® 反转录预混液试剂盒(无引物)                              收藏

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#E3025L
100 rxn
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#E3025S
25 rxn
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产品特点

LunaScript® 反转录预混液试剂盒(无引物)是经过优化的 5X 预混液,包含除引物外第一链 cDNA 合成所需的所有组分。
·该 5X 预混液提供 Luna 反转录酶、dNTP 和小鼠 RNase 抑制剂。
·不含引物剂型可让用户更灵活的选择引物,以达到 cDNA 合成最佳效果
·15 分钟内即可完成第一链 cDNA 合成
·可用于第一链 cDNA 合成、两步法 RT-qPCR、两步法 RT-PCR以及 RNA-seq
·包含无干扰、可视化蓝色示踪染料,有助于减少加样错误
·提供 No-RT 对照预混液,增加实验可信度

产品说明

LunaScript® 反转录预混液试剂盒(无引物)包含经过优化后的 5X 预混液,以及除引物外第一链 cDNA 合成所需的所有组分。该预混液含有具备热稳定特性的 Luna 反转录酶,可在更高温下合成 cDNA。试剂盒还提供小鼠 RNase 抑制剂(保护模板 RNA 免受降解)和 dNTP。此外,组分中的蓝色示踪染料可为反转录和下游应用提供可视化示踪。
 
该预混液与随机引物、oligo dT 引物以及基因特异性引物兼容,让 cDNA 合成更灵活。LunaScript 反转录预混液试剂盒(无引物)合成的 cDNA 产物可用于多种下游应用。在实时定量 PCR 中,建议使用混有随机引物及 oligo dT 的混合引物合成 cDNA。与 LunaScript SuperMix 反转录试剂盒(NEB #E3010)一样,无论是 1 μg 总 RNA 还是低拷贝 RNA,该预混液均能提供稳健、线性和灵敏的检测。如需合成长片段或全长 cDNA,则建议使用 oligo dT 引物。仅需 55℃ 孵育 10 分钟,LunaScript 反转录预混液试剂盒(无引物)即可合成长达 9 kb 的 cDNA 产物。试剂盒还提供 No-RT 对照预混液,可快速建立对照反应体系。
 
图 1:三种 cDNA 合成试剂的区别:Supermix、预混液、cDNA 合成试剂盒
LunaScript® 反转录预混液试剂盒(无引物)            货   号                  E3025L
图 2:LunaScript 第一链 cDNA 合成时间最短,仅需 13 分钟
 
LunaScript® 反转录预混液试剂盒(无引物)            货   号                  E3025L
比较不同厂家的 cDNA 合成方案。LunaScript SuperMix 反转录试剂盒和 LunaScript 反转录预混液试剂盒(无引物)所需反应时间最短,并可以耐受高温,降低 RNA 复杂二级结构的影响。
 
图 3:LunaScript 反转录预混液试剂盒(无引物)支持多种下游应用
 
LunaScript® 反转录预混液试剂盒(无引物)            货   号                  E3025L
通过使用不同的引物(例如:随机引物混合液、d(T))23VN 引物或随机六聚体引物),LunaScript 反转录预混液试剂盒合成的 cDNA可适于不同下游应用(例如:RT-qPCR、RT-PCR 和 RNA-seq)。
 
 
图 4:在两步法 RT-qPCR 定量中,LunaScript 反转录预混液试剂盒(无引物)功效稳健
 LunaScript® 反转录预混液试剂盒(无引物)            货   号                  E3025L
 A.使用随机引物混合液(NEB #S1330)和 LunaScript 反转录预混液(无引物)对1 µg 至 100 pg RNA 进行反转录,并进行两步法 RT-qPCR 检测,结果显示:与 LunaScript (NEB #E3010)一致,合成 cDNA 产量均展现出良好的线性度。
B.对于常规转录本,使用 d(T)23VN 引物获得的 cDNA 覆盖度与随机引物混合液一致。但对于长转录本(例如:SMG1),随机引物混合液能更好地覆盖靶基因 5´端,右下角图框所示:RT-qPCR 的靶基因位于 SMG1(16 kb)转录本的 5´端;与随机引物混合液(随机六聚体引物和 dT 锚定引物的混合物)相比,单独使用 dT 锚定引物(d(T)23VN)的 Cq 值延迟
 
图 5:在两步法 RT-qPCR 中,LunaScript 反转录预混液试剂盒(无引物)性能更优异
LunaScript® 反转录预混液试剂盒(无引物)            货   号                  E3025L
A.根据各厂商产品说明书,使用几种市售第一链 cDNA 合成试剂盒将 1 μg–100 pg 人总 RNA 反转录成 cDNA,引物为随产品提供的随机引物。通过 8 个靶基因(丰度、长度和 GC 含
量不同)的 qPCR 结果对 cDNA 产物进行评估。使用 Luna 通用探针法 qPCR 预混液(NEB# M3004)对 cDNA 产物进行 qPCR 检测。结果评估了扩增效率和 ΔCq,其中 ΔCq 衡量低起始量检测和缺乏无模板对照(NTC)扩增(ΔCq=NTC 的平均 Cq-最低起始量的平均 Cq)。绿色框表示靶基因扩增表现(效率=90-110%,ΔCq≥3)。关于该可视化分析方法的详细信息,请在NEB 官网搜索“High-Throughput Data Analysis for qPCR”。
B.根据上述 4 个靶基因(两个经典内参基因和两个其它基因)的 Cq 值和上样量绘制曲线,结果显示:与其它商品化试剂盒相比,LunaScript 的 Cq 值最低。
 
 
图 6:在常规 PCR 或高保真 PCR 中,LunaScript 反转录预混液试剂盒(无引物)能够合成不同长度范围 cDNA
 LunaScript® 反转录预混液试剂盒(无引物)            货   号                  E3025L

 使用 LunaScript 反转录预混液试剂盒(无引物)将 1 μg Jurkat 总 RNA 反转录成 cDNA,引物为 d(T))23VN,使用标准反应条件 55℃ 孵育 10 分钟,95℃ 孵育 1 分钟。之后使用不同 PCR 扩增试剂对 cDNA 产物进行检测。对于 5 kb以内的常规应用,建议使用 OneTaq 2X 预混液(NEB #M0482);对于高保真扩增,建议使用 Q5 热启动超保真 2X 预混液(NEB #M0494);对于长片段高产量扩增,建议使用 LongAmp Taq 2X 预混液(NEB #M0287)(数据未显示)

LunaScript® 反转录 SuperMix 预混液 货 号 #M3010ENEB酶试剂 New England Biolabs

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货 号
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#M3010E
2500 rxns
74,369.00

#M3010L
100 rxns
4,249.00

#M3010X
500 rxns
16,999.00

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产品描述

该产品为不含 No-RT 对照和无核酶水的预混液剂型
LunaScript® 反转录 SuperMix 试剂盒 (NEB #E3010) 包含反转录预混液、No-RT 对照、无核酶水
适用于 ARTIC SARS-CoV-2 测序流程,是 NEBNext® ARTIC SARS-CoV-2 试剂盒中的组分之一。
 

特性

· 单管预混液剂型,包含:随机六聚体引物和 oligo-dT 引物、dNTP、小鼠 RNase 抑制剂,以及 Luna 反转录酶。
·15 分钟内即可完成第一链 cDNA 合成,
·新型热稳定型 Luna 反转录酶能够有效改善实验表现
·与 Luna qPCR 预混液 (NEB #M3003,M3004) 联合使用,提升 RT-qPCR 检测功效
·包含无干扰、可视化蓝色示踪染料,有助于减少加样错误
·无引物剂型货号为 NEB #E3025
·该产品为不含无核酶水和 No-RT 对照的预混液剂型
 
1.   Josh Quick 2020. nCoV-2019 sequencing protocol v3 (LoCost).
     https://www.protocols.io/view/ncov-2019-sequencing-protocol-v3-locost-bp2l6n26rgqe/v3

概述

 LunaScript 反转录 SuperMix 为优化的反转录预混液,可用于第一链 cDNA 合成、扩增子测序,以及两步法 RT-qPCR。该预混液含有具备热稳定特性的 Luna 反转录酶,可在更高温下合成 cDNA。试剂盒还提供小鼠 RNase 抑制剂,以保护模板 RNA 免受降解。LunaScript 反转录 SuperMix 预混液含有随机六聚体引物,Oligo-dT 引物,可均匀覆盖整个 RNA 靶标。此外,预混液还包含蓝色染料,可在两步法 RT-qPCR 起到示踪作用。样品起始量从高达 1 µg 到低至单拷贝 RNA,均能得到稳健、线性和灵敏的检测结果。

LunaScript 反转录预混液试剂盒(无引物) (NEB #E3025) 包含除引物外,第一链 cDNA 合成所需的所有组分,适用于 RT-PCR、RNA-seq 及其它应用。该预混液与随机引物、oligo dT 引物以及基因特异性引物兼容,让 cDNA 合成更灵活。更多信息请点击 https://www.neb.cn/products/e3025-lunascript-rt-master-mix-kit-primer-free

与 LunaScript 试剂盒版本 (NEB #E3010) 相比,该 LunaScript 预混液版本不含无核酶水和 No-RT 对照。更多信息如下:

图 1:LunaScript 产品比较

 LunaScript® 反转录 SuperMix 预混液            货   号                  #M3010E

图 2:一步法和两步法 RT-qPCR 产品选择

LunaScript® 反转录 SuperMix 预混液            货   号                  #M3010E

图 3:LunaScript® SuperMix 反转录预混液在两步法 RT-qPCR 实验中展现了出色的灵敏度、线性关系和重复性

LunaScript® 反转录 SuperMix 预混液            货   号                  #M3010E

 

在 20 μl 反应体系中,使用 1 X LunaScript 反转录 SuperMix预混液,在标准反应条件下(25℃/2 分钟,55℃/10 分钟,95℃/1 分钟)将 RNA 反转录为 cDNA。然后使用 1 μl cDNA 作为模板和 Luna 通用 qPCR 预混液(NEB#M3003)进行 qPCR 定量,每种浓度做三个重复。
A. 将梯度稀释的 Jurkat 总 RNA(1 μg–1 pg)反转录为 cDNA,然后对 β-actin 进行 qPCR 定量。
B. ERCC 对照(External RNA Controls Consortium)mix1 RNA 包含 50 – 5×109 拷贝的ERCC00130(10 fg–~10 ng),反转录为 cDNA 后进行 qPCR 进行定量。

图 4:LunaScript 反转录 SuperMix 预混液可覆盖长转录本

LunaScript® 反转录 SuperMix 预混液            货   号                  #M3010E

在标准反应条件(25℃/2 min、55℃/10 min、95℃/1 min)下,20 μl反应体系中,使用 1X LunaScript 反转录 SuperMix 预混液,将 Jurkat 总 RNA (1 μg – 1 ng) 反转录为 cDNA。取 1 μl cDNA 产物做为模板,使用 Luna 通用 qPCR 预混液 (NEB #M3003) 和覆盖 HERC1 整个 15.2 kb 转录本的 8 对引物,对 cDNA 覆盖度进行 qPCR 评估。结果显示:所有扩增靶标在每个上样浓度的重复实验中,均有良好扩增。

 

图 5:LunaScript 反转录 SuperMix 预混液对 RNA 靶标展现了出色的线性检测能力

LunaScript® 反转录 SuperMix 预混液            货   号                  #M3010E

使用市售的 cDNA 合成预混液,根据各厂商产品说明书,将 100 pg–1 μg 人(Jurkat)总 RNA 反转录为 cDNA。然后通过 8 个靶标(丰度、长度和 GC 含量不同)的 qPCR 结果对 cDNA 产物进行评估。使用 Luna 通用 qPCR 预混液(NEB#M3003)或 Luna 通用探针法 qPCR 预混液(NEB#M3004)进行 qPCR 检测。结果评估了扩增效率和 ΔCq,其中 ΔCq 衡量低起始量检测和缺乏无模板对照(NTC)扩增(ΔCq = NTC 的平均 Cq–最低起始量的平均 Cq)。绿色框表示目标扩增表现(效率 = 90-110%,ΔCq≥3)。
了解更多“Dots in Boxes”可视化荧光定量评价方法,请登陆:https://www.neb.cn/tools-and-resources/video-library/dots-in-boxes-visualization-of-qpcr-data

 

图 6:LunaScript 反转录 SuperMix 预混液的第一链 cDNA 合成时间最短,仅需 13 分钟。

LunaScript® 反转录 SuperMix 预混液            货   号                  #M3010E

比较了不同厂家的 cDNA 合成方案。LunaScript 反转录 SuperMix 预混液需要的反应时间最短,并可以耐受高温,避免了 RNA 复杂二级结构的影响。

 

图 7:LunaScript 反转录 SuperMix 预混液在室温条件下稳定性极佳

LunaScript® 反转录 SuperMix 预混液            货   号                  #M3010E

LunaScript 反转录 SuperMix 预混液与其它市售反转录产品在 25℃条件下放置 15 天,之后在说明书推荐反应条件下,以 100 pg–1 μg 人总 RNA (Jurkat) 为模板,反转录成为 cDNA。使用 Luna 通用 qPCR 预混液(NEB#M3003)对 8 个不同丰度、长度和 GC 含量的靶标进行 qPCR 检测。结果评估了扩增效率和 ΔCq,其中 ΔCq 衡量低起始量检测和缺乏无模板对照(NTC)扩增(ΔCq = NTC 的平均 Cq – 最低起始量的平均 Cq)。绿色框表示目标扩增表现(效率 = 90-110%,ΔCq≥3)。