LunaScript® 反转录预混液试剂盒(无引物) 货 号 E3025LNEB酶试剂 New England Biolabs

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产品资料 – DNA聚合酶与扩增技术 – qPCR & RT-qPCR

LunaScript® 反转录预混液试剂盒(无引物)                              收藏

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#E3025L
100 rxn
3,929.00

#E3025S
25 rxn
1,259.00

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产品特点

LunaScript® 反转录预混液试剂盒(无引物)是经过优化的 5X 预混液,包含除引物外第一链 cDNA 合成所需的所有组分。
·该 5X 预混液提供 Luna 反转录酶、dNTP 和小鼠 RNase 抑制剂。
·不含引物剂型可让用户更灵活的选择引物,以达到 cDNA 合成最佳效果
·15 分钟内即可完成第一链 cDNA 合成
·可用于第一链 cDNA 合成、两步法 RT-qPCR、两步法 RT-PCR以及 RNA-seq
·包含无干扰、可视化蓝色示踪染料,有助于减少加样错误
·提供 No-RT 对照预混液,增加实验可信度

产品说明

LunaScript® 反转录预混液试剂盒(无引物)包含经过优化后的 5X 预混液,以及除引物外第一链 cDNA 合成所需的所有组分。该预混液含有具备热稳定特性的 Luna 反转录酶,可在更高温下合成 cDNA。试剂盒还提供小鼠 RNase 抑制剂(保护模板 RNA 免受降解)和 dNTP。此外,组分中的蓝色示踪染料可为反转录和下游应用提供可视化示踪。
 
该预混液与随机引物、oligo dT 引物以及基因特异性引物兼容,让 cDNA 合成更灵活。LunaScript 反转录预混液试剂盒(无引物)合成的 cDNA 产物可用于多种下游应用。在实时定量 PCR 中,建议使用混有随机引物及 oligo dT 的混合引物合成 cDNA。与 LunaScript SuperMix 反转录试剂盒(NEB #E3010)一样,无论是 1 μg 总 RNA 还是低拷贝 RNA,该预混液均能提供稳健、线性和灵敏的检测。如需合成长片段或全长 cDNA,则建议使用 oligo dT 引物。仅需 55℃ 孵育 10 分钟,LunaScript 反转录预混液试剂盒(无引物)即可合成长达 9 kb 的 cDNA 产物。试剂盒还提供 No-RT 对照预混液,可快速建立对照反应体系。
 
图 1:三种 cDNA 合成试剂的区别:Supermix、预混液、cDNA 合成试剂盒
LunaScript® 反转录预混液试剂盒(无引物)            货   号                  E3025L
图 2:LunaScript 第一链 cDNA 合成时间最短,仅需 13 分钟
 
LunaScript® 反转录预混液试剂盒(无引物)            货   号                  E3025L
比较不同厂家的 cDNA 合成方案。LunaScript SuperMix 反转录试剂盒和 LunaScript 反转录预混液试剂盒(无引物)所需反应时间最短,并可以耐受高温,降低 RNA 复杂二级结构的影响。
 
图 3:LunaScript 反转录预混液试剂盒(无引物)支持多种下游应用
 
LunaScript® 反转录预混液试剂盒(无引物)            货   号                  E3025L
通过使用不同的引物(例如:随机引物混合液、d(T))23VN 引物或随机六聚体引物),LunaScript 反转录预混液试剂盒合成的 cDNA可适于不同下游应用(例如:RT-qPCR、RT-PCR 和 RNA-seq)。
 
 
图 4:在两步法 RT-qPCR 定量中,LunaScript 反转录预混液试剂盒(无引物)功效稳健
 LunaScript® 反转录预混液试剂盒(无引物)            货   号                  E3025L
 A.使用随机引物混合液(NEB #S1330)和 LunaScript 反转录预混液(无引物)对1 µg 至 100 pg RNA 进行反转录,并进行两步法 RT-qPCR 检测,结果显示:与 LunaScript (NEB #E3010)一致,合成 cDNA 产量均展现出良好的线性度。
B.对于常规转录本,使用 d(T)23VN 引物获得的 cDNA 覆盖度与随机引物混合液一致。但对于长转录本(例如:SMG1),随机引物混合液能更好地覆盖靶基因 5´端,右下角图框所示:RT-qPCR 的靶基因位于 SMG1(16 kb)转录本的 5´端;与随机引物混合液(随机六聚体引物和 dT 锚定引物的混合物)相比,单独使用 dT 锚定引物(d(T)23VN)的 Cq 值延迟
 
图 5:在两步法 RT-qPCR 中,LunaScript 反转录预混液试剂盒(无引物)性能更优异
LunaScript® 反转录预混液试剂盒(无引物)            货   号                  E3025L
A.根据各厂商产品说明书,使用几种市售第一链 cDNA 合成试剂盒将 1 μg–100 pg 人总 RNA 反转录成 cDNA,引物为随产品提供的随机引物。通过 8 个靶基因(丰度、长度和 GC 含
量不同)的 qPCR 结果对 cDNA 产物进行评估。使用 Luna 通用探针法 qPCR 预混液(NEB# M3004)对 cDNA 产物进行 qPCR 检测。结果评估了扩增效率和 ΔCq,其中 ΔCq 衡量低起始量检测和缺乏无模板对照(NTC)扩增(ΔCq=NTC 的平均 Cq-最低起始量的平均 Cq)。绿色框表示靶基因扩增表现(效率=90-110%,ΔCq≥3)。关于该可视化分析方法的详细信息,请在NEB 官网搜索“High-Throughput Data Analysis for qPCR”。
B.根据上述 4 个靶基因(两个经典内参基因和两个其它基因)的 Cq 值和上样量绘制曲线,结果显示:与其它商品化试剂盒相比,LunaScript 的 Cq 值最低。
 
 
图 6:在常规 PCR 或高保真 PCR 中,LunaScript 反转录预混液试剂盒(无引物)能够合成不同长度范围 cDNA
 LunaScript® 反转录预混液试剂盒(无引物)            货   号                  E3025L

 使用 LunaScript 反转录预混液试剂盒(无引物)将 1 μg Jurkat 总 RNA 反转录成 cDNA,引物为 d(T))23VN,使用标准反应条件 55℃ 孵育 10 分钟,95℃ 孵育 1 分钟。之后使用不同 PCR 扩增试剂对 cDNA 产物进行检测。对于 5 kb以内的常规应用,建议使用 OneTaq 2X 预混液(NEB #M0482);对于高保真扩增,建议使用 Q5 热启动超保真 2X 预混液(NEB #M0494);对于长片段高产量扩增,建议使用 LongAmp Taq 2X 预混液(NEB #M0287)(数据未显示)