qiagen205311QuantiTect Rev. Transcription Kit
- 产品型号： qiagen205311
- 简单描述
- qiagen205311QuantiTect Rev. Transcription KitQuantiTect Reverse Transcription Kit方便快速的操作过程可实现高效的逆转录，并有效去除基因组DNA。应用gDNA Wipeout Buffer可高效去除RNA样本中的基因组DNA污染。通过逆转录酶、缓冲夜和*的引物混合物可实现高效的逆转录。合成的cDNA经过优化可用于r
qiagen205311QuantiTect Rev. Transcription Kit
- cDNA合成和gDNA去除仅用20分钟完成
- 有效去除基因组DNA，无需设计RNA特异性引物或探针
- 高特异性，即便是低丰度的转录本也能获得高产量的cDNA
- 转录本的5' 和3' 端区域都可以进行cDNA 合成
For 50 x 20 ul reactions: 100 ul 7x gDNA Wipeout Buffer, 50 ul Quantiscript Reverse Transcriptase, 200 ul 5x Quantiscript RT Buffer, 50 ul RT Primer Mix, 1.9 ml RNase-Free Water
逆转录试剂盒组分确保高效、高灵敏的Real-Time RT-PCR
| 组分 | 优点 |
| gDNA Wipeout Buffer | 仅在real-time RT-PCR 中检测RNA |
| Quantiscript Reverse Transcriptase |
可用于广泛RNA起始量（10 pg to 1 µg RNA），高特异性 |
| Quantiscript RT Buffer | 可通读困难模板 |
| RT Primer Mix | 所有转录本区域合成cDNA, 甚至从5' 端区域 |
qiagen205311QuantiTect Rev. Transcription Kit
原理
为获得准确的real-time RT-PCR基因表达分析结果，很重要的是仅扩增和检测cDNA。基因组DNA的干扰可通过设计横跨外显子/外显子边界的引物或探针避免。尽管如此，在某些特殊情况下（如：cDNA来自一个单外显子基因），起始RNA样品必须无基因组DNA。
使用QuantiTect Reverse Transcription Kit，基因组DNA污染物可使用*的gDNA去除缓冲液迅速有效的去除（见图：“高效去除基因组DNA，确保精确的Real-Time RT-PCR”）。因为纯化RNA样品后无需另外采用DNA酶消化，从而可节省时间和费用。并且也无需设计RNA特异性引物和探针。
低丰度转录本获得更高产量的cDNA
| CT values for IL12A （low expression） |
CT values for IL1RN |
|||
| Input RNA （ng） | QIAGEN | Supplier AII | QIAGEN | Supplier AII |
| 1000 | 30.9 | 32.0 | 23.1 | 24.9 |
| 100 | 34.2 | 35.4 | 26.3 | 26.6 |
| 10 | 37.8 | 46.8 | 29.7 | 30.3 |
| 1 | N.D. | N.D. | 32.4 | 34.5 |
应用Real-time，两步法RT-PCR 分析IL12A 和IL1RN，起始RNA量不同 。应用QuantiTect Reverse Transcription Kit 或来自供应商Supplier AII的试剂盒逆转录总 RNA 。在 ABI PRISM 7900 上应用的QuantiTect Probe PCR Kit 、IL12A或 IL1RN的 QuantiTect Gene Expression Assays 分析合成的。 应用凯杰试剂盒CT值较低，尤其中等丰度的基因IL12A（粗体），cDNA产量更高。N.D.：未检测（Not detected）。
RT Primer Mix包含有特别优化的oligo-dT和随机引物的混合物，使cDNA合成可从RNA转录本的各个区域起始，甚至可从5'区域开始（见图：“高灵敏度检测12.5 kb 转录本5'区域的靶分子”）。相对于其他供应商提供的试剂盒来说，QuantiTect Reverse Transcription Kit为real-time PCR分析提供高产量的cDNA，无需考虑待扩增目标序列位于转录本的哪个区域。同时，QuantiTect Reverse Transcription Kit也确保了real-time RT-PCR结果更好的重复性。
操作流程
使用QuantiTect逆转录试剂盒可在20分钟内去除基因组DNA和合成cDNA（见流程图）。由于两个反应均在同一孵育温度并使用预混液构建反应，因此操作过程快速且方便。相反，供应商I提供的试剂盒操作需更多移液步骤且经常需要调整孵育温度，因此需要更长时间和更多手动操作。
应用
QuantiTect Reverse Transcription Kit可从各种类型的起始样品中合成cDNA以实现高效和高灵敏度的real-time RT-PCR，包括激光显微切割样品和活组织切片样品。与其他供应商提供的试剂相比，QuantiTect Reverse Transcription Kit在检测低丰度基因时具有更高的灵敏度（见图：“Real-Time，两步法RT-PCR精确度更高”）。
为获得高特异性和高灵敏度的real-time RT-PCR结果，又避免耗时的反应步骤优化过程，我们推荐QuantiTect Reverse Transcription Kit和其他QuantiTect产品联合使用。包括经优化的PCR反应预混液和即用型引物，使用SYBR Green染料法或序列特异性探针法进行 real-time RT-PCR。
Images
高效去除基因组DNA，确保精确的Real-Time RT-PCR — A 
高灵敏度检测12.5 kb转录本5'区域的靶分子 
快速方便的cDNA合成 
高灵敏度的Real-Time，两步法RT-PCR
