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• 在质粒 DNA 上产生替换、插入、缺失突变

– Q5 热启动超保真预混液(2X)
Q5 定点突变试剂盒经过严格的质控检测,确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请
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• 在质粒 DNA 上产生替换、插入、缺失突变

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Q5® 超保真 DNA 聚合酶
Q5 热启动超保真 DNA 聚合酶
Q5 热启动超保真 2X 预混液
Q5 超保真 PCR 试剂盒
Q5 定点突变试剂盒
Q5 定点突变试剂盒(不含感受态细胞)

Q5 超保真 DNA 聚合酶,以其无与伦比的扩增保真性(> Taq 酶的 100 倍)及其超低的错配率,建立了高保真聚合酶的新标准。Q5 DNA 聚合酶是一种新型聚合酶,携带具有持续合成能力的 Sso7d DNA
结合域,能够提高反应速度、保真度和稳定性。
Q5 反应缓冲液系统使扩增范围更广泛,无论模板 GC 含量的高低,Q5 超保真 DNA 聚合酶均以最少的优化,表现出卓越的扩增能力。对于常规或 GC 含量 ≤ 65% 的复杂模板,使用 Q5 反应缓冲液可以进行可靠的、超强的扩增;对于高 GC 含量的模板(> 65%),添加 Q5 High GC Enhancer 确保最大的扩增性能。
与化学修饰或基于抗体结合的热启动机制相比,NEB 的 Q5 采用了独特的核酸适配体修饰的热启动方式。该核酸适配体结构通过非共价键作用与聚合酶结合,在建立反应时可有效封闭聚合酶活性。Q5 热启动聚合酶在常规热循环条件下才能发挥作用,因此可在室温条件下建立反应体系。Q5 热启动 DNA 聚合酶无需额外的高温激活
步骤,从而减少了样品降解的可能性,缩短了反应时间,使操作更为简便。无论 GC 含量高低,Q5 热启动超保真 DNA 聚合酶都能表现出高特异性扩增性能和广泛的模板适应性,是您理想的选择。为了加样方便,Q5 和 Q5 热启动 DNA 聚合酶均有单酶或预混液剂型可供选择。预混液中包含 dNTPs、Mg++ 和所有必需的缓冲液组份。
为了加样方便,Q5 DNA 聚合酶有预混液或试剂盒剂型可供选择。Q5 超保真 PCR 试剂盒包含 Q5 超保真 2X Master Mix、无核酸酶污染的水、Quick-Load 紫色 2-Log DNA Ladder。关于 Q5 定点突变试剂盒(包含或不包含感受态细胞)的详细信息见 104 页。
2,000 units/ml。

Q5 (A) 和 Q5 热启动 (B) 超保真 DNA 聚合酶具有超强扩增能力,可用于任何 GC 含量的扩增。使用 Q5 或 Q5 热启动超保真 DNA 聚合酶扩增从低到高不同 GC 含量的人类基因组 DNA。使用 Q5 热启动的反应在室温下建立,所有的反应均为 30 个循环并用微流控芯片技术(microfluidic LabChip® analysis)检测。

单酶附带反应缓冲液,可以对富含 AT 和常规的模板进行超强扩增。加入 High GC Enhancer 可以对富含 GC 和复杂的模板进行扩增。为了加样方便,预混液可对多种模板进行超强扩增。

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Q5® 超保真 DNA 聚合酶
Q5 超保真 2X 预混液
Q5 热启动超保真 DNA 聚合酶
Q5 超保真 PCR 试剂盒
Q5 定点突变试剂
Q5 定点突变试剂盒(不含感受态细胞)

Q5 超保真 DNA 聚合酶,以其无与伦比的扩增保真性(> Taq 酶的 100 倍)及其超低的错配率,建立了高保真聚合酶的新标准。Q5 DNA 聚合酶是一种新型聚合酶,携带具有持续合成能力的 Sso7d DNA
结合域,能够提高反应速度、保真度和稳定性。
Q5 反应缓冲液系统使扩增范围更广泛,无论模板 GC 含量的高低,Q5 超保真 DNA 聚合酶均以最少的优化,表现出卓越的扩增能力。对于常规或 GC 含量 ≤ 65% 的复杂模板,使用 Q5 反应缓冲液可以进行可靠的、超强的扩增;对于高 GC 含量的模板(> 65%),添加 Q5 High GC Enhancer 确保最大的扩增性能。
与化学修饰或基于抗体结合的热启动机制相比,NEB 的 Q5 采用了独特的核酸适配体修饰的热启动方式。该核酸适配体结构通过非共价键作用与聚合酶结合,在建立反应时可有效封闭聚合酶活性。Q5 热启动聚合酶在常规热循环条件下才能发挥作用,因此可在室温条件下建立反应体系。Q5 热启动 DNA 聚合酶无需额外的高温激活
步骤,从而减少了样品降解的可能性,缩短了反应时间,使操作更为简便。无论 GC 含量高低,Q5 热启动超保真 DNA 聚合酶都能表现出高特异性扩增性能和广泛的模板适应性,是您理想的选择。为了加样方便,Q5 和 Q5 热启动 DNA 聚合酶均有单酶或预混液剂型可供选择。预混液中包含 dNTPs、Mg++ 和所有必需的缓冲液组份。
为了加样方便,Q5 DNA 聚合酶有预混液或试剂盒剂型可供选择。Q5 超保真 PCR 试剂盒包含 Q5 超保真 2X Master Mix、无核酸酶污染的水、Quick-Load 紫色 2-Log DNA Ladder。关于 Q5 定点突变试剂盒(包含或不包含感受态细胞)的详细信息见 104 页。
2,000 units/ml。

Q5 (A) 和 Q5 热启动 (B) 超保真 DNA 聚合酶具有超强扩增能力,可用于任何 GC 含量的扩增。使用 Q5 或 Q5 热启动超保真 DNA 聚合酶扩增从低到高不同 GC 含量的人类基因组 DNA。使用 Q5 热启动的反应在室温下建立,所有的反应均为 30 个循环并用微流控芯片技术(microfluidic LabChip® analysis)检测。

单酶附带反应缓冲液,可以对富含 AT 和常规的模板进行超强扩增。加入 High GC Enhancer 可以对富含 GC 和复杂的模板进行扩增。为了加样方便,预混液可对多种模板进行超强扩增。

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· 无需 DNA 纯化,可直接使用人全血细胞或干血斑样品进行扩增
Q5® 血源直扩 2X 预混液可以免除 DNA 纯化步骤,直接使用干血斑或含高达 30% 的全血样品进行各种靶标扩增。该预混液包含 Q5® 热启动超保真 DNA 聚合酶,该酶热稳定性好,具有 3′→ 5′ 外切酶活性,融合了具有增强持续合成能力的 Sso7d DNA 结合域,优化的 dNTP 缓冲液有效提高了对血液中扩增抑制成分、抗凝剂以及滤纸上化学品的耐受度。该产品能够从含有 EDTA 钠盐、EDTA 钾盐、枸橼酸钠和肝素钠的全血细胞以及从保存在普通防腐滤纸上的血样品中扩增长达 7.5 kb 的片段。



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Q5 定点突变试剂盒可以在 2 小时内快速对双链质粒 DNA 进行定点突变,该试剂盒使用稳定的 Q5 热启动超保真 DNA 聚合酶,结合客户自行设计的引物,在各种质粒中引入替换、缺失和插入突变。为保证效率,将产物转入试剂盒提供的高效级 NEB 5-alpha E. coli 感受态细胞,质粒长度可达 14.3 kb。
• 在质粒 DNA 上产生替换、插入、缺失突变

图 1:Q5 定点突变试剂盒流程。该试剂盒可以快速、高效地对双链质粒 DNA 进行替换、缺失或插入突变。第一步是使用 Q5 热启动超保真 DNA 聚合酶进行指数扩增。第二步是包含激酶、连接酶和 DpnI 的特殊混合液处理,快速环化 PCR 产物和去除模板。第三步是高效转入化学感受态细胞。
Q5 定点突变试剂盒经过严格的质控检测,确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。
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• 在质粒 DNA 上产生替换、插入、缺失突变

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学 DOJINDO代理商全线产品,欢迎访问官网了解更多信息
C26H23K4N3O10
693.87
特点:
● 激发波长339nm,发射波长492nm
● 能够轻易的穿过细胞膜


产品性状
规格
性状 : 本产品为淡黄色粉末,可溶于水
纯度(HPLC): 95%以上
摩尔吸光系数 : 34,000 以上(240 nm附近)
水溶性: 符合要求
处理条件
保存方法 : 避光,常温
产品概述
Quin 2能够和钙(logKCaY=7.1)形成稳定的荧光螯合物,但和镁却不行(logMgY=2.7)。这种螯合物在525 nm的发射波长处有着很高的量子产量(0.14),Quin 2的激发波长为339 nm,发射波长为492 nm。Quin 2-AM是Quin 2的乙酰甲酯衍生物,能够轻易地穿过细胞膜。进入细胞后,酯结构立刻被水解,形成Quin 2。
原理
Quin 2能够和钙(logKCaY=7.1)形成稳定的荧光螯合物,但和镁却不行(logMgY=2.7)。这种螯合物在525 nm的发射波长处有着很高的量子产量(0.14),Quin 2的激发波长为339 nm,发射波长为492 nm。Quin 2-AM是Quin 2的乙酰甲酯衍生物,能够轻易地穿过细胞膜。进入细胞后,酯结构立刻被水解,形成Quin 2。
激发发射波长
E x :339 nm
Em: 492 nm
溶解比例
溶解比例:84 mg/100 mL(水)
注意事项
1、试剂容易吸潮,从冰箱取出后,请确认在干燥的环境放至室温后再开封。由于试剂极其微量,开封前,请轻弹管壁几次,以保证粉末落入管底。
2、第一次使用时, 建议母液即配即用。试剂溶解后尽可能在短时间内使用,以保证实验效果。
3、溶解液 DMSO 需要保证新鲜无水,否则将会导致 AM 体水解,使荧光染料无法进入细胞,影响实验效果。
4、母液遇水极易分解,如果不能一次用完建议分装保存,例如分装成 5 μl/管,用封口膜封口,并用铝箔纸包裹,放在一个密闭性能好的塑料袋中,并放入一包干燥剂,在≤-20℃密封避光保存。
5、建议您在正式实验前先摸索一下细胞量、钙离子荧光探针的终浓度、培养时间等,找到最佳实验条件
文献
1) R. Y. Tsien, “New Calcium Indicators and Buffers with High Selectivity against Magnesium and Protons: Design, Synthesis, and Properties of Prototype Structures”, Biochemistry, 1980, 19 (11), 2396.
2) R. Y. Tsien, T. Pozzan and T. J. Rink, “Calcium Homeostasis in Intact Lymphocytes: Cytoplasmic Free Calcium Monitored with a New, Intracellularly Trapped Fluorescent Indicator”, J. Cell Biol., 1982, 94, 325.
3) M. B. Feinstein, J. J. Egan, R. I. Sha’afi and J. White, “The Cytoplasmic Concentration of Free Calcium Inplatelets Is Controlled by Stimulators of Cyclic AMP Production (PGD2, PGE1, FORSKOLIN)”, Biochem. Biophys. Res. Commun., 1983, 113, 598.
4) N. Miyoshi, K. Hara, S. Kimura, K. Nakanishi and M. Fukuda, “A New Method of Determining Intracellular Free Ca2+ Concentration Using Quin 2-fluorescence”, Photochem. Photobiol., 1991, 53 (3), 415.
Q&A
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Q1: 细胞内检测钙离子的试剂种类都有什么,选择什么样的比较好呢? |
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A1: 根据检测仪器和检测波长有很多的选择,产品后面标有AM的试剂是可以通过细胞膜的 有很多种相似的试剂,其特点如下: 【Fura 2】 •双波长激发 激发(λex= Ca:340 nm, Ca free:380 nm)、发射:λem=500 nm •解离常数:224 nmol/L •因为是荧光强度的比值、可以有效的减小误差 =>細胞内Ca浓度计算。 •该试剂被使用的最多 •必须要更换过滤片、会耽误一些时间。 【Fluo 3】 •单波长激发 激发:λex=508 nm、发射:λem=527 nm •解离常数:400 nmol/L •因为激发光在长波段,所以对细胞的损伤比较小 (不会受到NADH、NADPH的影响) •可以使用Ar激光激发装置。 •不适合切片中钙离子的检测 •【Fluo 4】 •单波长激发 •激发:λex=495 nm、发射:λem=518 nm •解离常数:360 nmol/L •与Fluo3相比对荧光强度更高。 •因为激发光在长波段,所以对细胞的损伤比较小 •(不会受到NADH、NADPH的影响) •可以使用Ar激光激发装置。 •与Fluo3相比对細胞的毒性低 •【Indo 1】 •单波长激发 •激发:λex= 330 nm、发射(λem= Ca:410 nm, Ca free:485 nm) •解离常数:250 nmol/L •由于不需要更换滤光片,可以很快地检测细胞内钙离子浓度变化以及像心肌细胞运动中钙离子的变化 •(需要两台检测仪器) •【Rhod 2】 •单波长激发 •激发:λex=553 nm、发射:λem=576 nm •解离常数:1.0 μmol/L •因为激发光在长波段,所以对细胞的损伤比较小 •(不会受到NADH、NADPH的影响) •可以使用Ar激光激发装置。 •【Quin 2】 •单波长激发 •激发:λex=339 nm、发射:λem=492 nm •解离常数:110 nmol/L •最早开发的产品 |
Invitrogen Qubit 检测管 测定管
Invitrogen Qubit 检测管 测定管
Qubit 检测管为 500 µL 薄壁聚丙烯管,与 Qubit 荧光计配合使用。每包 500 个管。
注:为获得理想性能,用户应使用同一批次的管进行实验。
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