Small RNA Cloning Kit酶试剂盒Takara

发表于2024年2月25日由whatman中国官网

Small RNA Cloning Kit
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Takara	RR065	Small RNA Cloning Kit	10 Rxns	￥3,655

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■ 制品内容 (10 次量)

□ Package1 (-20℃保存)
RNase Inhibitor (40 U/μl)	50 μl
10X BAP Buffer	200 μl
Alkaline Phosphatase (BAP) (0.4 U/μl)	20 μl
0.1%BSA	60 μl
3’Adaptor^12	10 μl
T4 RNA Ligation Buffer	600 μl
T4 RNA Ligase (40 U/μl)	20 μl
5X T4 PNK Buffer	100 μl
T4 Polynucleotide Kinase (T4 PNK) (10 U/μl)	10 μl
5’Adaptor^*1	10 μl
5X RT Buffer	40 μl
dNTP Mixture (2.5 mM each)	90 μl
PCR-R & RT-Primer (50 pmol/μl)^13	20 μl
RTase (RNaseH free) (200 U/μl)	10 μl
2X PCR Buffer	250 μl
PCR Primer F (50 pmol/μl)^*1	10 μl
TaKaRa Ex Taq HS (5 U/μl)	10 μl
Control RNA (5 pmol/μl)^*4	10 μl
□ Package2 (4℃保存)
3M Sodium Acetate (pH 5.2)	200 μl
Dr.GenTLE Precipitation Carrier^*5	80 μl
2X B/W Buffer	2.7 ml
Magnosphere^™ MS300/Streptavidin	100 μl
RNase free dH2O	10 ml

1 3’Adaptor、5’Adaptor、PCR Primer F及PCR-R、RT-Primer上都带有Sse8387Ⅰ酶切位点，使用Sse8387Ⅰ酶切后的PCR产物可以与Pst* I酶切的载体进行连接克隆。本试剂盒中不备有限制酶和克隆用载体，请另外准备。
*2 3’Adaptor已用生物素标记。
*3 PCR用的Reverse Primer，也可以作为反转录引物使用。
*4 Control RNA是一条21mer、5’端磷酸化的RNA。
*5 Dr. GenTLE Precipitation Carrier (Code No.: 9094)。

■ 制品说明

近几年的研究表明，在细胞内发现的RNA中有许多是非编码RNA，它们有着重要的功能，这些RNA被称为功能性RNA，其中倍受关注的是18-26 个碱基的低分子RNA，这些低分子RNA的功能有：
① mRNA水平抑制基因表达。
② 翻译水平抑制基因表达。
克隆是分析小RNA的有效方法之一。由于小RNA与mRNA不同，它不具有PolyA tail，因此，在克隆时，需在小RNA的5’端和3’端分别加上RNA接头或者RNA/DNA杂合形式的接头，经RT-PCR后进行PCR。
本试剂盒主要用于cDNA的合成和小RNA的克隆。
试剂盒通过简单的磁珠吸附操作即可纯化小RNA反转录得到的cDNA，省去了在接头连接之后切胶回收等复杂操作步骤。扩增得到的cDNA可以直接用于TA克隆，或者利用接头中带有的酶切位点进行克隆。
使用本试剂盒对小RNA (Small RNA) 进行克隆时的操作流程见图1。起始的Small RNA是由总RNA 经过电泳及切胶回收得到的。详细步骤如下：
1. 将Small RNA进行BAP处理，5’端去磷酸化。
2. 将带有生物素标记的RNA/DNA杂合形式的接头与BAP处理后的Small RNA的3’端进行连接。
3. 用标记Streptoavidin的磁珠，回收带有生物素标记接头的Small RNA，然后进行5’端磷酸化反应。
4. 将5’端连接上RNA/DNA嵌合的接头后，使用RT Primer和反转录酶进行反转录反应。
5. 从磁珠上回收合成的cDNA后，进行PCR反应。
6. PCR片段克隆。

■ 各种引物及Control RNA的碱基序列

名称

切点

酶例

PCR-R & RT-Primer

5’-GTCTCTAG

CCTGCAGG

ATCGATG-3’

反转录反应及PCR反应的Reverse引物，含有Sse8387Ⅰ的识别序列 (阴影部分)。

PCR-Primer F

5’-AAAGAT

CCTGCAGG

TGCGTCA-3’

PCR反应的Forward引物，含有Sse8387Ⅰ的识别序列 (阴影部分)。

Control RNA

5’p-AGAUGACGGCAACUACAAGAC-3’

用于Control反应。

■ small RNA克隆流程图

页面更新：2021-04-19 10:45:43

Mighty TA-cloning Kit酶试剂盒Takara

发表于2024年1月10日由whatman中国官网

Mighty TA-cloning Kit
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Takara	6028	Mighty TA-cloning Kit	20 Rxns	￥801 ￥601

*红字为促销价格，促销时间: 2022年9月1日-2022年10月31日

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■ 制品内容 (20 次量)

pMD20-T vector (50 ng/μl)	1 μg (20 μl)
Ligation Mighty Mix^*1	50 μl × 2
Positive Control Insert^*2	10 μl

1: Ligation Mighty Mix与DNA Ligation Kit<Mighty Mix> (Code No.: 6023) 是同一种试剂。 2: 3’端带有“A”突出端的DNA片段 (约200 bp)。 (以E.coli 基因组DNA为模板，使用TaKaRa Ex Taq 进行PCR反应得到的扩增产物。)(10 ng/μl)

■ 制品说明

使用Taq DNA聚合酶进行PCR反应，扩增获得的PCR产物3’端附有一个“A” 碱基。利用3’端附有“A” 碱基的PCR产物进行克隆时，与含有3’-T末端的载体通过T-A碱基互补配对原则进行克隆，此种方法被称为T-A克隆。
Mighty TA-cloning Kit是在短时间内快速地将PCR产物进行T-A克隆的试剂盒。连接反应使用DNA Ligation Kit<Mighty Mix>，操作简便，可在短时间内高效地进行连接反应。

■ 保存

-20℃。

■ 使用注意事项

1. Ligation Mighty Mix在冰上融解，轻轻混合后再使用。
2. 长片段PCR产物（2 kb以上）进行DNA克隆时，连接反应时间请延长至数小时。
3. 克隆时，根据插入片段的长度和方向，有时即使插入了DNA片段也会有不出现终止密码或读码框不改变的情况发生，在蓝白选择培养基上会形成淡蓝色菌落。出现这种现象时，建议进行菌落PCR确认插入片段。
4. 进行切胶回收纯化DNA片段时要避免UV照射时间过长。长时间照射，DNA会受到损伤，影响克隆效率。
5. PCR用质粒模板与克隆载体 (pMD20-T vector；具有Amp^r) 有同样的选择标记基因时，为防止出现质粒模板自身的转化菌落，将PCR反应液凝胶电泳后回收目的片段，纯化后再进行克隆。

页面更新：2022-07-27 15:04:22

PCR产物纯化-Cloning Enhancer酶试剂盒Takara

发表于2024年1月10日由whatman中国官网

PCR产物纯化-Cloning Enhancer
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Clontech	639615	Cloning Enhancer	200 μl	￥3,883

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Cloning Enhancer用于克隆前PCR产物的纯化，消除背景质粒DNA和PCR体系中杂质。Cloning Enhancer处理可大大增加重组克隆的数量。Cloning Enhancer与PCR反应液在同一tube进行反应，所以可降低胶纯化导致的紫外损伤或切口生成，无需单独的纯化流程，也就降低了纯化时PCR产物的损失。

产品特点

· 无需纯化，方便的PCR产物纯化方式。
· 单管反应，避免样品损失。
· 温和处理流程，不产生DNA损伤或切口。
· 与不纯化插入片段相比，处理后效率可提高5倍。

产品详情请点击：

页面更新：2019-11-05 10:01:08

pBackZero-T Vector Cloning Kit酶试剂盒Takara

发表于2024年1月9日由whatman中国官网

pBackZero-T Vector Cloning Kit
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Takara	3275	pBackZero-T Vector Cloning Kit	20 Rxns	￥631

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■ 制品内容

pBackZero-T Vector (50 ng/μl)	20 μl × 1 支
Control Insert 4 (50 ng/μl)	10 μl × 1 支
Solution I^*1	75 μl × 2 支
Primer Bla M1 (20 μM)^*2	50 μl × 1 支
Primer Bla RV (20 μM)^*2	50 μl × 1 支

1：使用时请于冰中融解。 2：Primer Bla M1：5’- AAG CCC TCC CGT ATC GTA GTT ATC -3’ (24 nt) Primer Bla RV：5’- ACT CAC GTT AAG GGA TTT TGG TCA -3’ (24 nt)

■ 制品说明

pBackZero-T Vector是一种阳性克隆率非常高而背景很低的PCR产物克隆 (TA Cloning) 专用载体。本载体是由pUC19载体改建而成，它消除了pUC19载体上的LacZ基因及多克隆位点，并对β-lactamase (bla) 基因进行了特别的改造，再通过酶切反应，最后在两侧的3’端添加“T”而成。因大部分耐热性DNA聚合酶进行PCR反应时都有在PCR产物的3’末端添加一个“A”的特性，所以使用本制品可以大大提高PCR产物的连接、克隆效率。本载体对β-lactamase基因进行了特别的改造，使用时需在待插入的DNA片段的上、下游Primer的5’端加上TTTAA 5个碱基。如果需要进行定向克隆，只需在一条引物的5’端加上TTTAA 5个碱基，这样可以保障β-lactamase基因具有活性，菌落可以在Amp抗性平板上生长。而那些由于载体自连、插入非目的片段等原因造成的假阳性克隆不具有β-lactamase基因活性，不能在Amp抗性平板 (工作浓度100 μg/ml) 上生长。因此使用这种载体在Amp抗性平板上生长的菌落基本都是阳性克隆，背景降至很低，保证了非常高的阳性克隆率。使用本试剂盒中的Control Insert 4时，阳性克隆率可以达到99%以上。此外，本载体也无需使用IPTG/X-Gal进行蓝白筛选。值得注意的是由于本载体上消除了多克隆酶切位点，当PCR产物使用本载体进行克隆时，将无法使用载体上的限制酶切位点，需要事先在PCR扩增引物上导入合适的酶切位点。本制品中的高效连接液Solution I可以在短时间内(约30分钟)完成连接反应，其连接液可以直接用于细菌转化，大大方便了实验操作。本制品中的Control Insert 4 (500 bp) 可以用于Control反应。

■ 保存
-20℃。

■ 纯度
Control Insert 4经克隆后，有99%以上含有Insert DNA片段。

■ 用途
1. 进行TA克隆，克隆PCR产物。 2. 低背景需求的克隆。 3. 对克隆后的DNA进行测序。 4. 定向克隆。

■ pBackZero-T Vector的结构

■ 使用事项

1. PCR片段扩增用的2条Primer除了含有扩增目的片段用的序列外，还要在其5’端均加入TTTAA 5个碱基。当进行定向克隆时，可以选择其中1条Primer加入TTTAA 5个碱基。
2. Solution I请于冰中融解。
3. 克隆时使用的Insert DNA片段(PCR产物)建议进行切胶回收纯化，否则PCR产物中的短片段DNA(甚至是电泳也无法确认的非特异性小片段)、残存引物等杂质都会影响TA克隆效率。
4. 按照本实验操作进行连接后，直接进行转化时的连接液不要超过20 μl。当要转化的DNA量较大或准备进行电转化时，需对连接液进行乙醇沉淀，纯化DNA后再进行转化。进行乙醇沉淀时使用Dr. GenTLE Precipitation Carrier (Code No. : 9094) 可以提高DNA的回收率。
5. 连接反应请在25℃以下进行，温度升高 (>26℃) 较难形成环状DNA。连接效率偏低时，可适当延长连接反应时间至数小时。
6. 本制品来源于pUC19载体，因此，适合pUC19载体的感受态细胞都可以使用，如：JM109等。
7. 由于本制品是利用β-lactamase缺失进行筛选，所以对筛选平板使用的氨苄青霉素 (Amp) 的质量要求较高，请使用高品质的氨苄青霉素 (Amp) ，工作浓度为100 μg/ml。不要使用配制时间过长的氨苄青霉素 (Amp) 或平板。

页面更新：2019-10-12 14:21:24

In-Fusion HD Cloning Plus酶试剂盒Takara

发表于2023年12月31日由whatman中国官网

In-Fusion HD Cloning Plus
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Clontech	638909	In-Fusion HD Cloning Plus	10 Rxns	￥3,788
Clontech	638910	In-Fusion HD Cloning Plus	50 Rxns	￥15,839
Clontech	638911	In-Fusion HD Cloning Plus	100 Rxns	￥27,272
Clontech	638920	In-Fusion HD Cloning Plus	96 Rxns	￥26,029
Clontech	638916	In-Fusion HD Cloning Plus CE	10 Rxns	￥4,232
Clontech	638917	In-Fusion HD Cloning Plus CE	50 Rxns	￥16,630
Clontech	638918	In-Fusion HD Cloning Plus CE	100 Rxns	￥26,058

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In-Fusion克隆选择
制品名称	Code No.	除In-Fusion酶外，试剂盒中附带的制品
		纯化用试剂	纯化用Column	高效感受态	高保真PCR酶
		Cloning Enhancer	NucleoSpin	Stellar Competent Cell	CloneAmp HiFi PCR Premix
In-Fusion^® HD Cloning Kit	639648/49/50	-	-	-	-
In-Fusion^® HD Cloning Kit w/Cloning Enhancer	639633/34/35	√	-	-	-
In-Fusion^® HD Cloning Kit w/NucleoSpin	639639/40/41	-	√	-	-
In-Fusion^® HD Cloning Kit w/Competent Cells	639642/43/44	-	-	√	-
In-Fusion^® HD Cloning Plus	6338909/10/11/20	-	√	√	√
In-Fusion^® HD Cloning Plus CE	638916/17/18/19	√	-	√	√
In-Fusion^® HD Cloning System	639645/46/47/92	-	√	√	-
In-Fusion^® HD Cloning System CE	639636/37/38/93	√	-	√	-

In-Fusion PCR Cloning Kits可以在15分钟反应内，将任一PCR片段或多个片段方向性地、无缝地克隆到任何线性载体上。无需对PCR片段进行其他的处理，例如限制酶切、连接、磷酸化或末端平滑化。 In-Fusion HD Cloning kits的效率可达95%。

In-Fusion PCR Cloning 是如何作用的

利用PCR产物和线性载体末端的15 bp重叠序列，In-Fusion酶可以高效准确地将PCR产物和线性载体融合在一起。可以通过设计引物来扩增得到15 bp重叠序列。该方法无需亚克隆即可将单片段或多片段克隆到单一载体。

In-Fusion HD Cloning Plus组分

所有In-Fusion HD Cloning Plus kits包含 In-Fusion HD enzyme premix和control实验的试剂。 In-Fusion HD Cloning Plus kits 还包括：

·CloneAmp HiFi High Fidelity PCR Premix
  CloneAmp HiFi PCR Premix 是方便的2× master mix，实现准确、高效、快速的DNA扩增。Premix
  中包含了dNTP和优化的buffer，PCR反应可以设置为快速反应，更便利地实现成功的克隆。
·Stellar Competent Cells
  Stellar Competent Cells属于E. coli HST08细胞系，具有大于5 × 10⁸ cfu/μg的高转化效率，
有助于提高In-Fusion HD Cloning Plus kit的效率。
·Cloning Enhancer 或NucleoSpin Gel and PCR Clean-Up
  1.Cloning Enhancer (CE) 是易用型的酶premix，消除背景质粒DNA和PCR残留物，在克隆前无需进
  行PCR产物纯化。 In-Fusion HD Cloning Plus CE kits是PCR生成单一产物时的理想选择。
  2.如果PCR生成多于一条带，可以选择NucleoSpin Gel and PCR Clean-Up用于PCR纯化。

■ 点击图片查看相关资料

In-Fusion 克隆技术指南	克隆产品选择指南	In-Fusion克隆FAQ	In-Fusion克隆Tips	In-Fusion 简易操作流程


In-Fusion 多片段克隆protocol	In-Fusion 引物设计工具