日本同仁化学线粒体膜电位检测试剂盒货号:MT13- DOJINDO

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线粒体膜电位检测试剂盒货号:MT13
线粒体膜电位检测试剂盒
MT-1 MitoMP Detection Kit
商品信息
运输条件:室温

特点:

● 固定后仍可检测

● 荧光滞留性强

● 灵敏度高

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现货

 
线粒体检测方案

线粒体膜电位检测试剂盒货号:MT13

线粒体膜电位检测试剂盒货号:MT13

产品解说
产品概述
产品特点
与各种试剂的比较
实验例
常见问题Q&A
参考文献

产品解说

 

产品概述

线粒体利用氧气合成ATP,从而产生细胞所需的能量,是重要的细胞器之一。线粒体活性低下和机能障碍与癌症、老化、阿尔茨海默病、帕金森病等神经变性疾病密切相关。因此,线粒体膜电位(MMP)作为线粒体相关疾病的一个有希望的靶点已被广泛研究。

产品特点

解决传统试剂的三个问题

观察线粒体膜电位时,使用JC-1、TMRE、TMRM,但由于PFA不可固定、容易淬灭,数据的再现性等问题。MT-1 MitoMP Detection Kit是克服了这些问题的线粒体膜电位的检测试剂。

并且,通过本试剂盒中包含的Imaging Buffer,可以在抑制了荧光背景和对细胞的损伤的状态下进行观察。

①固定后也可检测

由于微小的细胞状态的变化,也会造成线粒体膜电位发生变化,所以取得数据的重现性需要特别注意。通用的线粒体膜电位检测试剂(JC-1、TMRE)如果对细胞进行固定处理的话会失去荧光,所以需要使用活细胞进行迅速的测定。MT-1即使进行染色后进行PFA固定操作,也能保持荧光,因此可以进行高重复性的实验。

线粒体膜电位检测试剂盒货号:MT13

②可监控

没有进行药物刺激的细胞通过各种试剂染色,确认了荧光强度的变化。结果,JC-1和TMRE在染色后约10分钟左右荧光强度下降,MT-1仍保持了一定的荧光强度

线粒体膜电位检测试剂盒货号:MT13

③高灵敏度

线粒体膜电位的细微变化在JC-1中有难以检测的情况,在这种情况下,使用四甲基罗丹明乙酯(TMRE)监测MMP。MT-1可提供与TMRE同等的检测灵敏度。

线粒体膜电位检测试剂盒货号:MT13

与各种试剂的比较

Features Sensitivity Fixation Monitoring Fluorescence change (upon loss of mitochondrial membrane potential) Detection
(ex/em)
JC-1
(JC-1 MitoMP Detection Kit)
Recomended for starting-up Color change from red to green Green: 450-490 nm / 500-550 nm
Red: 530-560 nm / 570-640 nm 

 

MT-1
(MT-1 MitoMP Detection Kit)
Recommended for more detailed analysis
(High)
Decrease in fluorescence intensity 530-560 nm / 570-640 nm
TMRE Widely used
(High)
Decrease in fluorescence intensity 530-560 nm / 570-640 nm

实验例

1.通过去极化的实验例

通过线粒体去极化剂的cyanide-p-trifluoromethoxyphenylhydrazone (FCCP)处理HeLa细胞,用该试剂观察膜电位的变化。

线粒体膜电位检测试剂盒货号:MT13

结果,确认了FCCP处理的细胞线粒体膜电位下降的情况。

2.凋亡诱导细胞线粒体膜电位的变化

预先在MT-1中染色的HL60细胞中添加Etoposide,诱导凋亡后,与Annexin V、FITC Conjugate一同染色,并通过流式细胞仪检测。

线粒体膜电位检测试剂盒货号:MT13

结果发现Annexin V-FITC产生的荧光强度变化(绿色荧光强度的增加)确认了凋亡的发生,以及从MT-1产生的荧光强度变化(红色荧光强度的降低)发现了线粒体膜电位的变化。

3.同时评估线粒体超氧化物和膜电位

用 HBSS 冲洗 HeLa 细胞后,用 MT-1 线粒体氧化酶检测试剂盒和线粒体超氧化物检测染料((mtSOX Deep Red: MT14)共同染色,同时观察线粒体 ROS 和膜电位的产生情况。因此,线粒体膜电位的降低和线粒体 ROS 的产生是同时观察到的。

线粒体膜电位检测试剂盒货号:MT13

线粒体膜电位检测试剂盒货号:MT13

<成像条件>(共聚焦显微镜)

MT-1: Ex=561, Em=560-600 nm
mtSOX: Ex=633 nm, Em=640-700 nm

Scale bar: 10 μm

线粒体膜电位检测试剂盒货号:MT13

<检测条件>(酶标仪)Tecan,Infinite M200 Pro

MT-1: Ex=540-550 nm, Em=590-610 nm (Gain=200)
mtSOX: Ex=545-555 nm, Em = 665-685 nm

常见问题Q&A

Q1:使用荧光显微镜检测时需要注意什么?
A1:请尽量减少激发光照射时间并提高检测灵敏度。

细胞长期暴露于激发光内可能导致细胞损伤和荧光染料降解,请优化检测时间。

Q2:MT-1检测后可以固定吗?
A2:应使用4%多聚甲醛(PFA)固定,且不能与(Triton X-100、NP-40等)一起使用,因为这可能导致染泄漏。
Q3:固定后可以对细胞染色吗?
A3:由于MT-1在线粒体中的积累取决于线粒体膜电位,因此固定后不适用于染色。
Q4:是否需要做阳性对照?
A4:作为阳性对照,可在技术手册中找到使用FCCP(羰基氰化物-对三氟甲氧基苯腙)的实验例。
 

Q5:优化染色条件时,应使用何种浓度的MT-1染料

 

A5:MT-1染料的浓度建议稀释1000倍。但在优化染色条件时,请参考以下内容。

<荧光强度弱>

请优化以下浓度:稀释500-1000倍。

<观察到非特异性吸附>

请优化以下浓度:稀释1000至2000倍。

Q6:我可以使用缓冲液来制备MT-1工作溶液吗?
A6:可以使用Hanks的HEPES和HBSS。也可以使用MEM、RPMI和含10%FBS的MEM制备。
Q7:添加MT-1工作液后,可以不清洗直接上机检测吗?
A7:染色后,无需清洗即可观察样品。但我们不建议在不清洗的情况下长期观察它们,因为它们可能具有细胞毒性。

我们建议去除上清液并用培养基替换。

Q8:MT-1染色后,是否可以用PBS代替HBSS来清洗?
A8:我们建议使用HBSS来减少细胞损伤。如果您没有HBSS,我们建议使用培养基来代替清洗。

参考文献

No. Sample Instrument Reference
1 STHdh Cells Microscope N. Okada, T. Yako, S. Nakamura, M. Shimazawa, H. Hara, “Reduced mitochondrial complex II activity enhances cell death via intracellular reactive oxygen species in STHdhQ111 striatal neurons Q1 with mutant huntingtin”, J. Pharmacol. Sci.2021, doi:10.1016/j.jphs.2021.09.001.
2 Panc-1 Cells Microscope N. Okuni, Y. Honma, T. Urano, K. Tamura, “Romidepsin and tamoxifen cooperatively induce senescence of pancreatic cancer cells through downregulation of FOXM1 expression and induction of reactive oxygen species/lipid peroxidation”, Mol. Biol. Rep.2022, doi:10.1007/s11033-022-07192-9.
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5 HBME Cells Microscope Y. Sakai, M. Taguchi, Y. Morikawa, H. Miyazono, K. Suenami, Y. Ochiai, E. Yanase, T. Takayama, A. Ikari, T. Matsunaga, “Apoptotic mechanism in human brain microvascular endothelial cells triggered by 40-iodo-α-pyrrolidinononanophenone: Contribution of decrease in antioxidant properties”, Toxicol. Lett.2022, doi:10.1016/j.toxlet.2021.11.018.
6 MIN6-M9 Cells Microscope R. Inoe, T. Tsuno, Y. Togashi, T. Okuyama, A. Sato, K. Nishiyama, M. Kyohara, J. Li, S. Fukushima, T. Kin, D. Miyashita, Y. Shiba, Y. Atobe, H. Kiyonari, K. Bando, A. S. Shapiro, K. Funakoshi, R. N. Kulkarni, Y. Terauchi, and J. Shirakawa, “Uncoupling protein 2 and aldolase B impact insulin release by modulating mitochondrial function and Ca2+ release from the ER”, 2022iScience,  doi:10.1016/j.isci.2022.104603.
7 SH-SY5Y Cells Flow Cytometer M. Hashimoto, M. Fujimoto, K. Konno, M. L. Lee, Y. Yamada, K. Yamashita, C. Toda, M. Tomura, M. Watanabe, O. Inanami and H. Kitamura, “Ubiquitin-Specific Protease 2 in the Ventromedial Hypothalamus Modifies Blood Glucose Levels by Controlling Sympathetic Nervous Activation”, J. Neurosci.2022, doi:10.1523/JNEUROSCI.2504-21.2022.
8 Fibroblasts, ciBAs Microscope Y. Takeda and P. Dai, “Chronic Fatty Acid Depletion Induces Uncoupling Protein 1 (UCP1) Expression to Coordinate Mitochondrial Inducible Proton Leak in a Human-Brown-Adipocyte Model”, 2022, doi:10.3390/cells11132038.
9 Sperm cells from C. osakensis queens Microscope A. Gotoh, M. Takeshima and K Mizutani, “Near-anoxia induces immobilization and sustains viability of sperm stored in ant queens”, Sci. Rep.2023, doi:10.1038/s41598-023-29705-7.
10 Nucleus Pulposus Cells Microscope K. Suyama, D. Sakai, S. Hayashi, N. Qu, H. Terayama, D. Kiyoshima, K. Nagahori and M. Watanabe, “Bag-1 Protects Nucleus Pulposus Cells from Oxidative Stress by Interacting with HSP70”, Biomedicines2023, doi:10.3390/biomedicines11030863.
11 HL60 Cells, KG1a Cells Flow Cytometer K. Kamachi, H. Ureshino, T. Watanabe, N. Y. Sakai, Y. F. Kurahashi, K. Kawasoe, T. Hoshiko, Y. Yamamoto, Y. Kurahashi, and S. Kimura , “Combination of a New Oral Demethylating Agent, OR2100, and Venetoclax for Treatment of Acute Myeloid Leukemia”, Cancer Res Commun., 2023, doi:10.1158/2767-9764.CRC-22-0259.
12 RAW264 Cells Microscope H. Gu, Y. Zhu, J. Yang, R. Jiang, Y. Deng, A. Li, Y. Fang, Q. Wu, H. Tu, H. Chang, J. Wen and X. Jiang, “Liver-Inspired Polyetherketoneketone Scaffolds Simulate Regenerative Signals and Mobilize Anti-Inflammatory Reserves to Reprogram Macrophage Metabolism for Boosted Osteoporotic Osseointegration”, Adv sci, 2023, doi:10.1002/advs.202302136.

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