WarmStart® 通用 LAMP/RT-LAMP 2X 预混液(含 UDG) 货 号 #M1708LNEB酶试剂 New England Biolabs

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产品资料 – DNA聚合酶与扩增技术 – 等温扩增和链置换

WarmStart® 通用 LAMP/RT-LAMP 2X 预混液(含 UDG)                              收藏

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#M1708L
500 rxns
12,679.00

#M1708S
100 rxns
3,169.00

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产品特点

 设计 LAMP 引物,请使用 NEB LAMP Primer Design Tool

·为环介导等温扩增(LAMP)提供便捷的一步法解决方案,可用于 DNA 或 RNA(RT-LAMP)样品
·预混液含热敏 UDG 和 dUTP,降低残留污染风险
·预混液具备完全缓冲力,可兼容不同样品类型,适用于多种检测方法
·温启动技术可在室温下抑制酶活性
·如需了解使用 RT-LAMP 进行 COVID-19 快速筛查,请点击 Learn more
 

产品描述

 WarmStart 通用 LAMP/RT-LAMP 2X 预混液(含 UDG)为 LAMP/RT-LAMP 提供了便捷的一步法解决方案,适用于 DNA 或 RNA 样品。LAMP 和 RT-LAMP 是一种常用等温扩增技术,通过使用 LAMP 特异性引物(用户自备)和链置换 DNA 聚合酶进行靶标核酸的快速检测。该预混液是在优化后 LAMP 缓冲液中混入了 Bst 2.0 WarmStart DNA 聚合酶和 WarmStart RTx 反转录酶。Bst 2.0 WarmStart DNA 聚合酶和 WarmStart RTx 反转录酶均经过基因工程改造,提高了在 LAMP 和 RT-LAMP 反应中的性能。WarmStart 通用 LAMP/RT-LAMP 2X 预混液(含 UDG)具备完全缓冲力,可兼容不同样品类型,适用于多种检测方法,包括:浊度检测、实时荧光检测(使用 LAMP 荧光染料时)和终点可视化检测,例如:基于金属离子指示剂的变色检测(羟基萘酚蓝)

 
由于先前扩增的产物会无意中成为后续反应的底物造成污染,因此预混液中的 dUTP 和热敏 UDG 可有效降低残留污染风险。热敏 UDG 在温度>50℃时可完全失活,因此对反应没有影响。
 
图 1:WarmStart 通用 LAMP/RT-LAMP 2X 预混液(含 UDG)适用于多种检测方法
 
 WarmStart® 通用 LAMP/RT-LAMP 2X 预混液(含 UDG)            货   号                  #M1708L
 
使用 WarmStart 通用 LAMP/RT-LAMP 2X 预混液(含 UDG)(NEB #M1708)对 RNA 或 DNA 样品扩增,可通过多种实时(A)和终点(B)检测方法进行结果判定。这些检测方式包括荧光法、不基于 pH 的变色法(例如:羟基萘酚蓝)、浊度法或琼脂糖凝胶电泳。对于实时荧光检测,可使用包含 50X LAMP 荧光染料的试剂盒(NEB #E1708),在常规实时 PCR 仪器的 SYBR®/FAM 通道中进行监测。
 
图 2:LAMP/RT-LAMP 预混液和适用样品类型
 
 WarmStart® 通用 LAMP/RT-LAMP 2X 预混液(含 UDG)            货   号                  #M1708L
NEB 基于 pH 变化的 WarmStart 变色LAMP/RT-LAMP 2X 预混液(含/不含 UDG)(NEB #M1804)(NEB# M1800)缓冲力低,因此可使用 pH 敏感染料进行可视化扩增检测。基于 pH 值改变而产生的颜色变化(如粉红变黄色)所需缓冲力要低,高缓冲力样品或酸性样品可能会影响颜色变化,因此,这种方法限制了检测样品的种类。WarmStart 通用 LAMP/RT-LAMP 2X 预混液(含/不含 UDG)(NEB #M1708,NEB #E1708)(NEB #E1700)是完全缓冲的,可检测所有样品类型,适用于多种检测方法,包括荧光或其它变色染料(例如:羟基萘酚蓝)
 
图 3:WarmStart 通用 LAMP/RT-LAMP 2X 预混液(含 UDG)对人 DNA 和 RNA 靶标进行稳健检测
 

 WarmStart® 通用 LAMP/RT-LAMP 2X 预混液(含 UDG)            货   号                  #M1708L
 

 使用 WarmStart 荧光 LAMP/RT-LAMP 2X 预混液(不含 dUTP/UDG)(NEB #M1700 试剂盒中的组分)和 WarmStart 通用 LAMP/RT-LAMP 2X 预混液(含 UDG)(NEB #M1708)进行 RT-LAMP(RNA 靶标)或 LAMP(DNA 靶标)实验。反应加入 1X LAMP 引物和 1X LAMP 荧光染料后,分别加入三个数量级的 Jurkat RNA 或 Jurkat DNA (10 ng-0.1 ng)和无模板对照(NTC),每个样品做 4 个重复,形成 25 µl 反应体系,置于 96 孔板中 65℃孵育 40 分钟。使用实时热循环仪(Bio-Rad® CFX96)中的 SYBR/FAM 通道进行 15 秒一次的荧光检测。每个点代表荧光信号超过仪器阈值的时间。除了个别说明外,每个样品都检测到所有 4 个重复(注:如果各重复的检测时间相似,则检测点重叠)。总体而言,各样品检测结果显示:NEB #M1700 和 NEB #M1708 性能一致。无模板对照均无扩增。
 
图 4:WarmStart 通用 LAMP/RT-LAMP 2X 预混液(含 UDG)对人 DNA 和 RNA 靶标进行稳健检测
 
WarmStart® 通用 LAMP/RT-LAMP 2X 预混液(含 UDG)            货   号                  #M1708L
通过手动或 TEMPEST® 自动化液体处理工作站(96 孔,25 µl 反应)建立针对于合成 SARS-CoV-2 RNA 样品的 LAMP 检测体系。检测样品为:阳性样品(人总 RNA 混入 5,000、500 或 50 拷贝的合成 SARS-CoV-2 RNA)或无模板对照(NTCs)。经 65℃ 孵育 40 分钟,使用 1X LAMP 荧光染料在实时荧光仪器(Bio-Rad CFX96)中的 SYBR/FAM 通道检测。结果显示:两种体系的检测时间和最低检出限(LOD)结果一致。
 
图 5:WarmStart 通用 LAMP/RT-LAMP 2X 预混液(含 UDG)兼容不基于 pH 的变色法(例如:羟基萘酚蓝)
 
WarmStart® 通用 LAMP/RT-LAMP 2X 预混液(含 UDG)            货   号                  #M1708L
使用 WarmStart 通用 LAMP/RT-LAMP 2X 预混液(含 UDG)和针对 N 和 E 基因的混合引物对合成 SARS-CoV-2 RNA 进行扩增,使用 0.12 mM 羟基萘酚蓝作为变色金属指示剂。检测样品为:阳性样品(人总 RNA 混入 5,000、500 或 50 拷贝的合成 SARS-CoV-2 RNA)、阴性样本(人总 RNA)或无模板对照(NTCs),如图所示。反应体系(25 µl)经 65℃孵育 45 分钟后,进行肉眼检测。

A.所有阳性样品均显示阳性结果,包括在所有仅含 50 拷贝的低起始量样品(n = 20),颜色明显从紫色变为蓝色。

B.所有阴性样品均未出现颜色变化(n = 32)。