人ES/iPS细胞检测试剂盒

人ES/iPS细胞检测试剂盒
Human ES/iPS Cell Monitoring Kit

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人ES/iPS细胞检测试剂盒人ES/iPS细胞检测试剂盒

可检测未分化细胞数


  rBC2LCN(AiLecS1)来源于Burkholderia cenocepacia,凝集素BC2L-C的N末端域在大肠菌表达的重组蛋白。

  rBC2LCN对人类ES/ iPS细胞表面足糖萼蛋白的粘蛋白O-型糖链-H-3型(Fucα1-2Galβ1-3GalNAc)具有高亲和性,因此rBC2LCN被认为可以检测人类ES/ iPS细胞的未分化标志物。

  通过rBC2LCN把糖蛋白(H-3型聚合足糖萼)从人类ES/iPS细胞表面释放到培养液中。该试剂盒通过rBC2LCN和未分化标记抗体的Sandwich Assay测定法,定量测定从人类ES/iPS细胞表面释放到培养中的糖蛋白数量,进而可推算出人类ES/iPS细胞数。

人ES/iPS细胞检测试剂盒

◆特点


 ● 通过对培养上清的分析,监测未分化细胞数的增减。

 ● 因其测定对象为培养上清,不会在检查过程中消耗细胞数量,且可在此过程中继续进行细胞培养

 ● 少量的培养上清(50μL)即可分析

 ● 采用ELISA测定法,可简单快速的处理多样品


 试剂盒构成


构成品品名

容量×数量

rBC2LCN固相检测板

96 well×1板

HRP标识抗体溶液

400μL×1支

阴性对照品

1mL×1支

阳性对照品

100μL×1支

稀释溶液

15mL×1支

清洗液(10×)

100mL×1支

TMB溶液

10mL×1支

显色停止液

10mL×1支

封板贴

4片



◆原理

人ES/iPS细胞检测试剂盒

 ●标准曲线制作


  该试剂盒中未含有绘制标准曲线用的标准品。因此,请按照下述顺序调制标准品后,再行绘制标准曲线:

   1. 在未分化维持培养条件下进行人ES/ iPS细胞培养,更换培养基的第二天(18至24小时后)回收培养

     上清。

   2. 细胞剥离,测定人S/ iPS细胞数。

   3. 计算出回收到的培养上清中所含的人ES/ iPS细胞数。如:培养基量5mL,测定细胞数为5×106cells

     时,则回收培养上清中的人ES/ iPS细胞数即为1×106cells/mL。

   4. 利用回收的培养上清未分化维持用培养基或已分化培养基,制成已知细胞浓度的稀释系列,以绘制标准

     曲线。



◆分化诱导时的使用案例


   1. 在未分化维持培养时,对人ES/iPS细胞的培养上清进行取样,计算人ES/iPS细胞数。

   2. 在分化用培养基中对第1项的培养上清进行稀释,制成稀释系列,以绘制该试剂盒的标准曲线。

   3. 使用本试剂盒测定可确认人ES/iPS细胞数的培养上清。

   4. 推算分化条件下残存的人ES/iPS细胞数


【细胞株间和培养基间的比较】


  在各个未分化维持用培养基(培养基A、B、C、D)中分别培养人类iPS细胞201B7株和253G4,更换培养基后第二天回收培养上清。计算细胞数量,用各个未分化维持用培养基将各培养上清稀释至2,000cells/mL,进而测定该试剂盒的吸光度。测定结果如下图所示。结果表明,即使细胞株或培养基等培养条件的细胞数量恒定,信号强度也有差异。因此,必须为培养条件绘制标准曲线。

人ES/iPS细胞检测试剂盒

【人类iPS细胞培养上清的测定】


  用StemSure® hPSC培养基培养人类iPS细胞201B7株,更换培养基第二天回收该培养基的培养上清。于此同时,计算细胞数量,阶段性的在StemSure® hPSC培养基中稀释培养上清,并将稀释后的培养上清用试剂盒检测。结果可得到一个极高相关系数的线性公式。根据这个线性公式求出该培养条件下的人类iPS细胞检测下限值为108 cells/mL。

※检测下限值:根据培养基背景吸光度平均值+3.3SD和线性公式计算出来的细胞数量。

人ES/iPS细胞检测试剂盒

【分化细胞培养上清和人类iPS细胞培养上清液混合检测】


  将含有成纤维细胞和人膝关节软骨(NHAC-kn)细胞的血清培养基上清与人类iPS细胞培养上清混合后,确认能否测定添加在其中的未分化细胞标志物。将iPS细胞混合比例0~20%(0~2×104 cells/mL:总细胞数 1×105 cells/mL)的人iPS细胞培养上清,混合到成纤维细胞和人膝关节软骨细胞培养上清中,用试剂盒检测。在血清和成纤维细胞存在的条件下,可在培养上清中测定出人iPS细胞培养上清。

  另外还可从成纤维细胞/人膝关节软骨细胞和iPS细胞的混合试验材料中得出一个线性公式,根据该公式可求出人iPS细胞的检测下限值,分别为:170 cells/mL和96 cells/mL。

人ES/iPS细胞检测试剂盒


 使用注意项


  ● 由于细胞株、培养基种类等培养条件的不同,会导致信号轻度和细胞数的关系产生差异,所以必须绘制细胞

     株、未分化维持培养条件、分化诱导培养基标准曲线。

  ● 不同培养条件下,不能依靠信号强弱来评定未分化性。未分化性的评定一定要在相同培养条件下进行。

  ● 用该试剂盒测算出来的ES/iPS细胞数与实际细胞数未必一致。对未分化维持状态和进行细胞分化的监控,也

     是需要参考的指标之一。



欲了解更多相关资料请点击文字:无损监测具有致瘤性人ES/iPS细胞的技术

人ES/iPS细胞检测试剂盒

人ES/iPS细胞检测试剂盒说明书.pdf

人ES/iPS细胞检测试剂盒

人ES/iPS细胞检测试剂盒人类ES/iPS细胞测定试剂盒单页_1606WAAU01.pdf

●相关产品


 ●荧光标识rBC2LCN
  添加到人类ES/iPS细胞培养液中,可为人类ES/iPS活细胞染色。

产品编号

品名

规格

容量

保存温度·法规

180-02991

rBC2LCN-FITC【AiLecS1-FITC】
Ex.495nm,Em.520nm

细胞染色用

100μl

人ES/iPS细胞检测试剂盒

186-02993

100μl×5

186-03211

rBC2LCN-547【AiLecS1-547】
Ex.551nm,Em.565nm

细胞染色用

100μl

人ES/iPS细胞检测试剂盒

182-03213

100μl×5

185-03161

rBC2LCN-635【AiLecS1-635】
Ex.634nm,Em.654nm

细胞染色用

100μl

人ES/iPS细胞检测试剂盒

181-03163

100μl×5


 ●rBC2LCN-PE23
  仅加入含有人类ES/ iPS细胞的培养液中,可以选择性地杀死人类ES/ iPS细胞。

产品编号

品名

规格

容量

保存温度·法规

180-03231

rBC2LCN-PE23

细胞培养用

100μl

人ES/iPS细胞检测试剂盒

186-03233

100μl×5


 ●rBC2LCN汽提溶液
  可将与人类ES/ iPS细胞表面糖链聚合起来的rBC2LCN从细胞上剥落下来。rBC2LCN剥落后,细胞还可添加其他抗体进行染色、培养。

产品编号

品名

规格

容量

保存温度·法规

182-03171

rBC2LCN Stripping Solution【AiWashS1】

细胞培养用

10ml

人ES/iPS细胞检测试剂盒


 ●BC2LCN凝聚素, 重组体、溶液
  集中未标识的rBC2LCN

生产编号

品名

规格

容 量

保存温度·法规

029-18061

BC2LCN【AiLecS1】Lectin,recombinant, Solution

糖链研究用

1mg

人ES/iPS细胞检测试剂盒

025-18063

1mg×5


 ●StemSure®hPSC培养基Δ
  无饲养层细胞条件下可用于维持培养人类ES/iPS细胞的无血清液态培养基。原料不含动物体成分。

产品编号

品名

规格

容量

保存温度·法规

197-17571

StemSure®hPSC Medium Δ

细胞培养用

100ml

人ES/iPS细胞检测试剂盒

193-17573

100ml×4

064-05381

Fibloblast Growth Factor (basic),Human,   recombinant, Animal-derived-free 【bFGF/FGF2】

细胞生物学用

50μg

人ES/iPS细胞检测试剂盒

068-05384

100μg

060-05383

1mg

160-27051

hPSC Dissociation Solution

人类iPS細胞用单体细胞分散剂。不含酶、动物体来源材料。

细胞培养用

100ml

人ES/iPS细胞检测试剂盒


 ●StemSure®系列
  通过小鼠ES细胞D3株或人类iPS细胞201B7株,进行品质测验。

产品编号

品名

规格

容量

保存温度·法规

197-16275

StemSure® D-MEM with Phenol Red and Sodium   Pyruvate

细胞培养用

500ml

人ES/iPS细胞检测试剂盒

197-16775

StemSure® Serum Replacement

细胞培养用

500ml

人ES/iPS细胞检测试剂盒

198-15781

StemSure® 10mmol/l 2-Mercaptoethanol Solution(×100)

细胞培养用

100ml

人ES/iPS细胞检测试剂盒人ES/iPS细胞检测试剂盒

195-15791

StemSure® 50mmol/l Monothioglycerol Solution(×100)
可与2ME同等使用的还原剂。医药用外不适用。

细胞培养用

100ml

人ES/iPS细胞检测试剂盒

190-15805

StemSure® 0.1w/v% Gelatin Solution

 

细胞培养用

500ml

195-16031

StemSure® Freezing Medium

含有BSA的ES细胞・iPS细胞用冻存液

细胞培养用

100ml

人ES/iPS细胞检测试剂盒

197-17831

StemSure® hPSC Freezing Medium, AF

无动物体成分的人类ES·iPS细胞用冻存液

细胞培养用

100ml

人ES/iPS细胞检测试剂盒

199-16051

StemSure® LIF,Mouse,recombinant,Solution

细胞培养用

106units

人ES/iPS细胞检测试剂盒

195-16053

106units×10

 ●Y-27632, MF
  该品最为培养基添加物被登记在原药等登录原簿(MF)中。以自主规格为基础,实现原料管理、制造工程和分析实验的有效检验,创建可以恒常稳定产品品质的体制。
<点击此处>

 ●ES・iPS细胞研究用试剂
  2007年iPS细胞确立发表后,许多与iPS细胞相关的文献纷纷发表。在各种各样的文献中报道出来的与ES细胞・iPS细胞の未分化能维持和分化诱导相关的低分子化合物也逐渐阵容化。
<点击此处>

 ●液态培养基・细胞培养用试剂
  我们有着以液态培养基为首的平衡盐溶液、细胞剥离·分散液、抗生物质溶液、细胞外基质等丰富的产品种类。
<点击此处>

Q: 培养上清中会有糖萼蛋白残留吗?

A: 糖萼蛋白会被释放到培养上清中。培养上清在37℃条件下保存8天,信号都不会减弱,因此作为本试剂盒测试

         对象的糖萼蛋白上的糖链在此期间都能保持其稳定性。如果冷冻保存的情况下,糖链安定性可稳定维持4个

         月。(但切记避免反复冻融。)


Q: 糖萼蛋白可作为标准品使用吗?

A: 该试剂盒是用于检测糖萼上的糖链的。因合成附有糖链的蛋白质很困难,所以生产出试剂盒适用的标准品也不

         易。虽然可能可以制作出不带糖链的糖萼蛋白,但是否能够作为标准品就不得而知了。


Q: 释放的足糖萼蛋白长度是恒定的吗?

A: 足糖萼蛋白是氨基酸配列恒定的,分子量为55kDa的蛋白质,但实际上足糖萼蛋白上还附有O型糖链、N型糖

         链和葡糖胺聚糖,分子量为240kDa以上的大型粘蛋白分子。因是由糖链修饰程度和性质不同的分子群混合起

         来的异质糖蛋白质群,分子量并不是恒定的。电泳分子量>240kDa。


Q: 在三维细胞培养中,足糖萼蛋白也能释放出来吗?

A: 是的,三维培养中也能释放足糖萼蛋白。


Q: 足糖萼蛋白的作用是什么?

A: 足糖萼蛋白在人类iPS细胞中的机能暂时未知,但和未分化细胞的形态、增值性、分化能等有着密切的关系。

         它是发现肾脏肾小球足细胞的主要糖蛋白,在足细胞形态的形成和足细胞机能中起重作用。足糖萼蛋白缺失

         的小鼠,会引起肾脏异常致死。


Q: 回收培养上清时,是否需要进行混匀?

A: 是的。摇晃孔盘/孔板轻轻混匀后,再进行培养上清的回收。


Q: 阳性对照品和阴性对照品的使用目的是什么?

A: 用以确认试剂盒反应系是否正常进行。

Tateno, H., Onuma, Y., Ito, Y., Hiemori, K., Aiki, Y., Shimizu, M., Higuchi, K., Fukuda, M., Warashina, M., Honda, S., Asashima, M. and Hirabayashi, J.: Sci. Rep., 4, 4069 (2014).

产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 产品价格
299-78301 Human ES/iPS Cell Monitoring Kit 96次用 再生医疗研究用