SCALEVIEW-S

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组织透明化试剂

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组织透明化试剂SCALEVIEW-S

SCALEVIEW®-S


  ScaleS技术由一组主要成分为尿素和山梨糖醇的组织透明化试剂组成。

  开发此技术的理化研究所·脑神经科学研究中心和光量子工学研究中心通过进一步改良,研发出兼备出色透明度和可保留细微结构及荧光信号的新成果。

  FUJIFILM Wako取得理化研究所的许可,把此项成果商品化,推出SCALEVIEW®-S产品。

  SCALEVIEW®-S 不仅可以透明化含有荧光蛋白的生物标本,而且也可以有效应用于抗体或荧光染料标记的厚标本。它将有望成为分析脑组织病理标本的有力工具。

  SCALEVIEW®-S Trial Kit主要由从SCALEVIEW®-S0到SCALEVIEW®-SMt等6种试剂组成,可通过使用各试剂进行透明化的试剂盒。


SCALEVIEW-S

数据提供:

国立研究开发法人理化学研究所

脑神经科学研究中心细胞机能探索研究组/光量子工学研究中心生命光学技术研究组

濱裕先生、星田哲志先生、宮脇敦史先生

合作:olympus株式会社



◆SCALEVIEW®-S 组织透明化实验报告例子


■ 小鼠大脑半球1-2mm厚切片

(※试剂用量标准:透明化处理和固定各5mL。)

SCALEVIEW-S

※在组织透明化实验中,请注意试剂的使用量、处理的时间根据样本大小会有所改变。

此外,请尽可能在灌注固定后取出并重新固定样本。

 

■ 使用SCALEVIEW®-S小鼠大脑透明化例子

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从左依次是小鼠大脑切片(1mm厚)SCALEVIEW®-S处理前后和小鼠大脑半球SCALEVIEW®-S处理前后

 

■ 用双光子激发显微镜观察YFP-H line系小鼠透明化全脑——逐步放大基底神经节区域

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点击查看protocol



◆免疫组织染色:AbScale 实验报告


■ 小鼠大脑半球1-2mm厚切片

(※试剂用量标准为前处理各试剂:10mL、抗体染色:1.5mL、透明化:10mL、固定:10mL。)

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* AbScale Solution : 含0.33 M 尿素、0.1 % (wt/vol) Triton X-100的PBS(-)溶液

 

■ 阿尔茨海默病模型小鼠(17个月)大脑切片(2mm厚)通过AbScale法进行免疫组织染色的图

   像例

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◆荧光染料染色:ChemScale 实验报告


■ 小鼠大脑半球1-2mm厚切片

(试剂用量标准为前处理各试剂:10mL、荧光染料染色:8mL、洗涤:10mL、透明化:10mL)

SCALEVIEW-S


■ 用共聚焦激光扫描显微镜(倒立)观察ChemScale处理(PI染色)后的YFP-H line小鼠大脑半球

     切片(2mm厚)

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◆SCALEVIEW®-S Neurosphere观察示例


■ Neurosphere

(试剂用量标准:前处理及透明化各试剂1.2mL。※抗体染色基于AbScale实验报告)

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■ 从成年大鼠海马体制备的神经干细胞Neurosphere三维免疫染色——使用AbScale法

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组织透明化配套耗材:成像用透明室

SCALEVIEW-S

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透明化试剂方法选择流程.pdf

AbScale发进行直接IHC实验步骤.pdf

组织透明化试剂Q&A ver1.0

Tissue clearing reagent Q&A ver1.0

Q组织透明化的原则

A:组织透明化通常是按下面的步骤进行的:

A:(a)固定 (b)透化 (c)脱色 (d)折射率匹配

 

Q:组织透明化的优势

A:目前大多数可用的透明化技术,都是通过编码荧光报告蛋白或者用荧光标记抗体进行后标记,从而可视化

A:组织中特定的蛋白。组织透明化成为了具有单细胞分辨率的组织3D成像中重要的一环。

 

Q:透明化技术的比较

A:下面是水性的透明化技术。

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A:SeeDB(基于果糖的方法)在一些应用中有一定优势。因为SeeDB不含去垢剂,所以对于透明化DiI(细胞膜

A:红色荧光探针,一种神经示踪剂)标记的样品和使用光电关联显微镜(CLEM)的情况下,SeeDB有着一定优

A:势。另外SeeDB会产生自体荧光,有时候会对辨认未标记的神经元结构(如神经毡)起着一定帮助。

A:SeeDB2是为使用高NA物镜的高分辨率成像而优化的技术;因此,当处理较大的组织时,CLARITY或者CUBIC

A:会是更好的选择。

 

Q:切片厚度的最大值和最小值?

A:您应该根据您的物镜的WD(工作距离)来决定切片的厚度。我们建议切片的厚度不要超过3mm。对于十分薄

A:且脆弱的样品,我们建议使用琼脂糖包埋。

A:使用CUBIC,可以让全器官、全身透明化和使用LSFM的快速3D成像具有可重复性。

 

Q:试剂盒成分

A:具体如下:

A:1. SCALEVIEW-S试剂盒(299-79001)适用于20份1-2mm的切片样品

A:A:1) SCALEVIEW-S0——100mL

A:A:2) SCALEVIEW-S1——100mL

A:A:3) SCALEVIEW-S2——100mL

A:A:4) SCALEVIEW-S3——100mL

A:A:5) SCALEVIEW-S4——100mL

A:A:6) SCALEVIEW-SMT——100mL

 

A:2. SCALEVIEW-S试剂盒(290-80801)适用于20-30份1-2mm的切片样品。

A:A:1) SCaleCUBIC-1 Solution——250mL

A:A:2) SCaleCUBIC-2 Solution——250mL

A:A:3) Mounting Solution 1——40mL

A:A:4) Mounting Solution 2——40mL

 

A:3. SeeDB试剂盒(299-79901)适用于20-30份1-2mm的切片样品。

A:A:1) SeeDB:20w/v% Fructose Solution——50mL

A:A:2) SeeDB:40w/v% Fructose Solution——50mL

A:A:3) SeeDB:60w/v% Fructose Solution——50mL

A:A:4) SeeDB:80w/v% Fructose Solution——50mL

A:A:5) SeeDB:100w/v% Fructose Solution——50mL

A:A:6) SeeDB——50mL

 

A:4. SeeDB2试剂盒(294-80701)适用于20-30份1-2mm的切片样品。

A:A:1) Saponin(皂角苷)——5g

A:A:2) SeeDB2G solution——50mL

A:A:3) SeeDB2S solution——50mL

A:A:4) PBS——50mL

 

Q:样品的保存

A:SCALEVIEW-S处理的样品应在室温下保存2至3周。您可以在2至3周内观察SCALEVIEW-S透明化的样品中的

A:荧光信号。

A:CUBIC处理的样品应在室温下保存1周。您可以在1周内观察CUBIC透明化的样品中的荧光信号。

A:SeeDB2G处理的样品应在冰箱中保存1年,而SeeDB2S处理的样品则可在室温下保存1年。您可以在1年内观

A:察SeeDB透明化的样品中的荧光信号。

 

Q:抗体的荧光标记

A:应在进行透明化前就进行抗体的荧光标记。

 

Q:适用于SCALEVIEW-S的显微镜

A:SD-OSR(Olympus)

A:FV-OSR(Olympus)

 

Q:适用于CUBIC的显微镜

A:SD-OSR(Olympus)

A:FV-OSR(Olympus)

A:Zeiss Lightsheet Z.1(Carl Zeiss)

 

Q:适用于SeeDB2的显微镜

A:Confocal(最好使用高NA的油浸镜头)

A:STED(Leica Microsystems)

A:SR-SIM(Carl Zeiss)

A:SD-OSR(Olympus)

A:FV-OSR(Olympus)

A:Airyscan(Carl Zeiss)

A:HyVolution(Leica Microsystems)

A:Two-photon(最好使用复合浸没镜头)

A:Confocal(最好使用高NA的甘油浸镜头)

A:Light-sheet DLS(Leica,最好使用定制镜面的设备)

 

Q:重构

A:对于定量用途,我们建议使用Neurolucida系统(MBF)。我们同样测试了VAST Lite用于成像用途时的表

A:现。重构时也可以使用开源软件。例如,Vaa3d可以处理大量的拼接图像的数据。

 

Q:物镜推荐

SCALEVIEW-S

 

Q:其他物种?其他器官?

A:对于昆虫样品和鱼类样品,建议选择CUBIC。

A:昆虫相关文献:Ohuma.et al.: Fish Pathology, 52(2), 96(2017).

A:鱼类相关文献:Konno and S.Okazaki .: Zoological Letters, 4:13(2018).

   

  对于多细胞球状体,选择SCALEVIEW-S会更好。

  https://www.nature.com/articles/s41598-018-29169-0

 

参考文献

[1]

Hama,H.et al.:ProtocolExchange(2016).doi:10.1038 /protex.2016.019.

[2]

Hama,H.et al.:Nat.Neurosci.,18,1518(2015).

[3]

濱裕、日置寛之、並木香奈、星田哲志、黒川裕、宮脇敦史:生体の科学,68(1),85(2017).

[4]

日置寛之、濱裕、孫在隣、黄晶媛、並木香奈、星田哲志、黒川裕、宮脇敦史:日本薬理学雑誌,

149 (4),173(2017).

产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 产品价格
193-18455 SCALEVIEW-A2
SCALEVIEW® 组织透明化试剂A2
500 mL 组织透明化试剂
196-18521 SCALEVIEW-S0 250 mL 组织透明化试剂
193-18531 SCALEVIEW-S1
SCALEVIEW-S1组织透明化试剂
250 mL 组织透明化试剂
190-18541 SCALEVIEW-S2
SCALEVIEW-S2组织透明化试剂
250 mL 组织透明化试剂
197-18551 SCALEVIEW-S3
SCALEVIEW-S3组织透明化试剂
250 mL 组织透明化试剂
194-18561 SCALEVIEW-S4
SCALEVIEW-S4组织透明化试剂
250 mL 组织透明化试剂
191-18571 SCALEVIEW-SMt
SCALEVIEW-SMt组织透明化试剂
250 mL 组织透明化试剂
041-34425 deScale Solution 500 mL 组织透明化试剂
299-79901 SCALEVIEW-S Trial Kit 1 Kit 组织透明化试剂