GenomONE™ CAb EX 抗体导入试剂

GenomONE™ CAb EX 抗体导入试剂
GenomONE™ CAb EX 1 vial Antibody Delivery Reagents 

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GenomONE™ CAb EX 抗体导入试剂GenomONE™ CAb EX 抗体导入试剂

新一代细胞功能和胞内蛋白研究工具——通过HVJ-E将IgG抗体高效导入活细胞内!


◆原理


GenomONE™ CAb EX 抗体导入试剂


  IgG抗体分子与HVJ-Envelope (HVJ-E) 混合后,形成HVJ-E载体。利用HVJ病毒衣壳蛋白的侵染能力,在融合蛋白(F)的作用下,直接与细胞融合,将分子转入目标细胞或组织。   

  GenomONE-Neo EX从2007年开始商品化销售,试剂盒内的IgG结合增强剂*,促使IgG分子能够更高效的进入到HVJ-E载体内;正是这个特性,GenomONE-Neo EX系统能够更有效的将IgG分子导入到细胞质内。

  * 相关 GenomONE-CAb 研发文献: Kondo Y. et al., J. Immunol. Methods, 332,10-17(2008).


优点、特色


 筛查细胞内的抗原抗体反应。

  通过细胞内抗原抗体反应表现出的中和作用筛选 

 先进的胞内抗体导入技术(不同于现有的敲除法)。

  不同于转录后基因沉默(RNAi干扰等),该方法通过识别蛋白质-蛋白质相互作用或翻译后修饰(添加

  糖链等)方法,达到特异性抑制不产生非特异性反应(RNAi干扰的脱靶效应等)。

  不同于转基因表达的方法,该法可快速简单地将大量抗体高效导入活细胞,适用于各种不同类型的研究

 细胞内功能分析。

  抗体导入活细胞后,检测目标分子的胞内分布情况。

  抗体导入活细胞后,抑制或证明目标分子的作用。

  活细胞成像。

 用于检查、诊断和治疗。

  检查和诊断的新一代试剂,利用抗体捕获活细胞内的分子靶标。

  新一代抗体药,直接作用于细胞内分子靶标。



案例、应用


【Anti-α-tubulin antibody导入Hs68细胞】

【抗体】 

  Monoclonal Anti-α-tubulin, Clone DM1A, Mouse IgG1 (SIGMA, T6199)

【流程】 

  Hs68: 人包皮成纤维细胞(ATCC-CRL-1635), 1×104 cells/well, 

  0.5%FCS/DMEM (8 well-chambered coverglass;Nunc 155411)

 GenomONE- CAb与Anti-α-tubulinmAb (5μg) 混合后加入细胞 

 37℃培养2hr

 清洗细胞 (PBS)

 固定细胞 (4% PFA; for 15min at r.t., 0.2% Triton X-100; for 5 min at r.t.,1%BSA; o/n)

 Alexa Fluor 488-Goat Anti-Mouse IgG, F(ab’)2<Invitrogen A11017>

 清洗细胞 (PBS)

 SYTO 82 (Invitrogen S11363)

 激光扫描共聚焦显微镜下观察

GenomONE™ CAb EX 抗体导入试剂

抗体与微管蛋白细丝特异性结合细胞核用SYTO82染色(红)



【Anti-NPC (核孔蛋白) antibody导入 HeLa S3细胞】

GenomONE™ CAb EX 抗体导入试剂

导入抗体后

  导入anti-NPC antibody 后24hr,观察到的荧光强度和2hr时相比没有明显变化,这表明抗体可在2hr内捕获NPC,并且形成的复合物在24hr内稳定。

【细胞系】 HeLa S3: 人宫颈癌细胞(ATCC CCL 2.2)

【抗体】 Monoclonal Anti-Nuclear Pore Complex Proteins, Clone 414; Mouse IgG1(SIGMA, N8786)

试剂盒组成


Cat.  #

HVJ-E


 (inactivated HVJ)
Freeze-dried
0.26 mL /vial
 (when reconstituted)

ReagentⅠ

 (antibody incorporation  enhancer)
 Freeze-dried
0.26 mL/vial
(when  reconstituted)

ReagentⅡ
       (incorporation
  reagent)
0.3 mL/vial

ReagentⅢ
       (introduction
 enhancer)
1 mL/vial

Buffer

(for suspension
 and dilution)
6.5 mL/vial

ISK-AB001-EX  1  vial  1  vial  1  vial  1  vial  1  vial
ISK-AB004-EX  4  vials  4  vials  1  vial  4  vials  1  vial



*1  vial HVJ-E 最多可转52块8孔细胞培养板

相关资料


◆试剂适用的抗体类型


  同类型IgG抗体导入到HS-68细胞(人包皮成纤维细胞;   ATCC CRL-1635)的结果

物种 IgG 亚型*1 抗体进入 HVJ-E的效率*2 抗体导入 HS-68细胞的效率*3
小鼠 pAb
IgG1
IgG2a
IgG2b
IgG3
大鼠 pAb
IgG1
IgG2a
IgG2b
IgG2c
IgG1
IgG2
IgG3
IgG4
兔子 pAb
山羊 pAb

*1:pAb:多克隆抗体,其它:单克隆抗体(对照IgG)
*2:抗体进入   HVJ-E的效率:
  ◎:40%以上,○;20-40%,△;小于20%
*3:抗体导入   HS-68细胞的效率:
  ◎:高效导入,○;可以导入,△;可能导入,但效率低

◆运用GenomONE-CAb导入IgG抗体的细胞类型

物种 细胞系 细胞来源 抗体类型
肿瘤、贴壁细胞
HeLa   S3 宫颈癌上皮 小鼠   lgG pAB
小鼠 lgG 1mAB
A549 肺癌 小鼠   lgG 1mAB
SAS 舌癌 小鼠   lgG pAB
HT1080 纤维肉瘤 小鼠   lgG pAB
MCF-7 乳腺癌 小鼠   lgG2a mAB
小鼠 P19 胚胎癌 小鼠   lgG pAB
小鼠 Raw264.7 单核细胞白血病 小鼠   lgG pAB
肿瘤、非贴壁细胞
Jurkat T细胞白血病 小鼠   lgG1 mAB
小鼠 P3-X63-Ag8.653 骨髓瘤 小鼠   lgG1 mAB
正常、贴壁细胞
WI-38 肺成纤维细胞 小鼠   lgG1 mAB
Hs68 皮肤成纤维细胞 小鼠   lgG1 mAB
小鼠 3T3-L1 胚胎成纤维细胞未分化 小鼠   lgG1 mAB
小鼠 3T3-L1,   adipocyte 胚胎成纤维细胞分化 小鼠   lgG1 mAB
小鼠 BNL   CL2 胚胎肝细胞 小鼠   IgG1 mAb
仓鼠 BHK-21 肾成纤维细胞 小鼠   lgG1 mAB
正常、原代细胞
HAEC 主动脉内皮 小鼠   lgG1 mAB
pAb:   多克隆抗体, mAb: 单克隆抗体

◆同系列相关产品


 产品编号  产品名称  规格  应用
 ISK-GN-001-EX   GenomONE™-Neo EX HVJ-E 1 vial Transfection  Reagents  1 set  DNA、siRNA、ODN及蛋白转染(体内体外适用)
  ISK-CF-001-EX  GenomONE™ -CF EX SeV-E(HVJ-E)1 vail Cell Fusion Reagents  1 set  细胞融合试剂

产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 产品价格
ISK-AB-001-EX GenomONE™-CAb EX 1 vial Antibody Delivery Reagents
 GenomONETM CAb EX 抗体导入试剂
1 set
ISK-AB-004-EX GenomONE™-CAb EX 1 vial Antibody Delivery Reagents
 GenomONETM CAb EX 抗体导入试剂
1 set